專利名稱：：高效液相色譜法分離測定地西他濱有關物質及其對應異構體的方法
技術領域：
：本發明涉及一種高效液相色譜方法，特別是一種地西他濱有關物質及其對映異構體的高效液相色"i普分離測定方法。
背景技術：
：地西他濱是一類低曱基化試劑，具有獨特的作用機制。地西他濱經磷酸化后，直接摻入至DNA甲基轉移酶中，使DNA曱基化，導致細胞分化或凋亡，從而發揮抗腫瘤作用。MGIPharma公司于2006年4月和5月由歐洲EMEA和美國FDA批準上市，用于治療骨髓增生異常綜合征的治療，適合于包括所有法國-美國-英國(FAB)分型的已接受治療和未接受治療的、新發病的和繼發性的MDS患者，以及按IPSS系統分為高危險、中度2級危險、中度1級危險的MDS患者。分子式為C8H12N404,化學結構式為地西他濱的主要雜質為a型構型地西他濱，在合成過程中產生，并且由于地西他濱在水溶液中極不穩定，水溶液環境中的水分對其5-雜氮胞嘧啶環進行親核攻擊，使得5-雜氮胞嘧啶環發生斷裂，降解為其a型無活性同分異構體。因此，地西他濱的質量控制顯得極為重要。普通的反相C18色譜柱上檢測地西他濱有關物質存在雜質分離度不夠或檢測不出的問題，使用HILIC色譜柱實現了雜質的良好分離。采用含有氫氧化鈉和磷酸二氫鉀的溶液作為溶解地西他濱的溶劑，既保證了地西他濱的良好溶解又增加了其穩定性，從而保證了地西他濱的質量可控性。本發明的目的在于提供一種用高效液相色語法分離測定地西他濱有關物質及其對映異構體的方法，可用于地西他濱的質量控制。1^^人o
發明內容本發明提供一種用高效液相色譜法分離測定地西他濱有關物質及其對映異構體的方法，選用HILIC色譜柱。本發明提供一種用高效液相色譜法分離測定地西他濱有關物質及其對映異構體的方法，選用的流動相為乙腈-水，乙腈與水的體積比可為80:2099:1。本發明提供一種用高效液相色語法分離測定地西他濱有關物質及其對映異構體的方法，溶解地西他濱的溶劑為含有氬氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氪鈉或氫氧化鉀和磷酸二氫鉀的溶液，此溶劑中氫氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氫鈉或氫氧化鉀的百分比(w/v)可為0.02°/。~0.2%,磷酸二氫鉀的百分比(w/v)可為0.2%~2.0%。本發明提供一種用高效液相色譜法分離測定地西他濱有關物質及其對映異構體的方法，樣品溶液的制備其特征在于取地西他濱550mg，用含有氫氧化鈉或石炭酸鈉或》灰酸氫鈉或氫氧化鉀和磷酸二氫鉀的溶劑l~5mL溶解，用乙腈稀釋至50~100mL。本發明提供一種用高效液相色譜法分離測定地西他濱有關物質及其對映異構體的方法，可按以下方法實現取地西他濱550mg，用溶劑溶解并用乙腈稀釋定容，選用HILIC色譜柱，乙腈-水為流動相，流速為1.OmL/min，檢測波長為244nm,室溫。取樣品溶液20juL,注入液相色譜儀，完成地西他濱有關物質及其對映異構體的分離測定。圖l流動相為乙腈水=(85:15)的HPLC圖。圖1中10號峰為地西他濱的色譜峰(|3-型)，9號峰為地西他濱對映異構體(oc-型)的色譜峰。圖2流動相為乙腈水=(90:10)的HPLC圖。圖2中io號峰為地西他濱的色譜峰(e-型)，9號峰為地西他濱對映異構體(a-型)的色譜峰。圖3流動相為乙腈水=(96:4)的HPLC圖。圖3中10號峰為地西他濱的色譜峰((3-型)，9號峰為地西他濱對映異構體(a-型)的色譜峰。具體實施例方式以下為本發明的具體實施例，但不限于本實施的范圍。采用不同比例流動相分離測定地西他濱有關物質及其對映異構體的具體實施例實施例1儀器與條件高效液相色語儀島津LC-10ATvp色譜柱VenusilHILIC(丙基酰胺4建合硅月交)柱(4.6x150咖，5um)流動相乙腈水=(85:15)紫外檢測波長244nm流速1.OmL/min進樣量20|aL實驗步驟溶劑的制備耳又氫氧化鈉58mg，磷酸二氫鉀540mg，用水稀釋至100mL，即得。取地西他濱約5mg，置于50mL量瓶中，加5mL溶劑溶解并用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，按上述色譜條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結果見圖1。圖1中10號峰為地西他濱的色譜峰(P-型)，9號峰為地西他濱對映異構體(a-型)的色譜峰。實施例2儀器與條件高效液相色譜儀島津LC-10ATvp色譜柱VenusilHILIC(丙基酰胺鍵合硅膠)柱(4.6x150mm，5ym)流動相乙腈水=(90:10)紫外檢測波長244nm流速1.OmL/min進樣量20jaL實驗步驟溶劑的制備耳又氫氧化鈉58mg,磷酸二氫鉀540mg，用水稀釋至100mL，即得。取地西他濱約5mg，置于50mL量瓶中，力。5mL溶劑溶解并用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，按上述色譜條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結果見圖1。圖2中10號峰為地西他濱的色譜峰(P-型)，9號峰為地西他濱對映異構體(a-型)的色譜峰。實施例3儀器與條件高效液相色鐠儀島津LC-10ATvp色譜柱VenusilHILIC(丙基酰胺4建合硅膠)柱(4.6x150mm，5jum)流動相乙腈水=(96:4)紫外4全測波長244nm流速1.OmL/min進樣量20|iL實驗步驟溶劑的制備取氫氧化鈉58mg，磷酸二氫4甲540mg，用水稀釋至100mL，即得。取地西他濱約5mg,置于50mL量瓶中，力口5mL溶劑溶解并用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，按上述色譜條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結果見圖1。圖3中10號峰為地西他濱的色譜峰(型)，9號峰為地西他濱對映異構體(a-型)的色譜峰。地西他濱有關物質及其對映異構體穩定性試驗的具體實施例實施例1儀器與條件高效液相色譜儀島津LC-lOATvp色鐠柱VenusilHILIC(丙基酰胺鍵合硅膠)柱(4.6x150mm,5Him)流動相乙腈水=(96:4)紫外纟企測波長244nm流速1.OmL/min進樣量20實驗步驟溶劑的制備取^暖酸鈉20mg,磷酸二氫鉀2.Og,用水稀釋至100mL,即得。取地西他濱約5mg,置于50mL量瓶中，力almL溶劑溶解并用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，按上述色鐠條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，地西他濱在8h內的穩定性測定結果見表1。表1以碳酸鈉和磷酸二氪鉀溶液為溶劑時地西他濱的穩定性<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例2儀器與條件高效液相色鐠儀島津LC-10ATvp色譜柱VenusilHILIC(丙基酰胺鍵合硅膠)柱(4.6x150mm，5pim)流動相乙腈水=(96:4)紫外檢測波長244nm流速1.OmL/min進樣量20jaL實驗步驟溶劑的制備取碳酸氫鈉100mg,磷酸二氫鉀1.Og，用水稀釋至IO(ML,即得。取地西他濱約20mg,置于50mL量瓶中，力卩5mL溶劑溶解并用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，按上述色譜條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，地西他濱在8h內的穩定性測定結果見表2。表2以碳酸氬鈉和磷酸二氫鉀溶液為溶劑時地西他濱的穩定性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例3儀器與條件高效液相色譜儀島津LC-10ATvp色譜柱VenusilHILIC(丙基酰胺鍵合硅膠)柱(4.6x150mm,5|um)流動相乙腈水=(96:4)紫外檢測波長244nm流速1.OmL/min進樣量20實驗步驟溶劑的制備取氫氧化鉀20Omg,磷酸二氫鉀50Omg，用水稀釋至10OmL,即得。取地西他濱約40mg,置于lOOmL量瓶中，力卩5mL溶劑溶解并用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，按上述色譜條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，地西他濱在8h內的穩定性測定結果見表3。表3以氫氧化鉀和磷酸二氫鉀溶液為溶劑時地西他濱的穩定性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權利要求1.一種用高效液相色譜法分離測定地西他濱有關物質及其對映異構體的方法，其特征在于選用HILIC色譜柱，以乙腈-水溶液作為流動相，以含有氫氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氫鈉或氫氧化鉀和磷酸二氫鉀的溶液為溶劑制備樣品溶液。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于選用HILIC色譜柱。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于選用的流動相為乙腈-水，乙腈與水的體積比可為80:20~99:1。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于溶解地西他濱的溶劑為含有氫氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氬鈉或氫氧化鉀和磷酸二氬鉀的溶液，此溶劑中氫氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氫鈉或氫氧化鉀的百分比(w/v)可為0.02M.2%，磷酸二氬鉀的百分比(w/v)可為0.2%~2.0%。5.根據權利要求1所述的方法，樣品溶液的制備其特征在于取地西他濱550mg，用含有氫氧化鈉或^友酸鈉或,友酸氫鈉或氬氧化鐘和磷酸二氫鉀的溶劑l5mL溶解，用乙腈稀釋至50100mL。6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于取地西他濱550mg,，用溶劑溶解并用乙腈稀釋定容，選用HILIC色語柱，乙腈-水為流動相，流速為1.OmL/min，4全測波長為244mn，室溫。耳又沖羊品〉容液20(aL,注入液相色譜4義，完成地西他濱有關物質及其對映異構體的分離測定。全文摘要本發明公開了一種高效液相色譜法分離測定地西他濱有關物質及其對應異構體的方法。本發明采用高效液相色譜法，采用親水鍵合硅膠柱，以乙腈-水為流動相，以含有氫氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氫鈉或氫氧化鉀和磷酸二氫鉀的溶液為溶劑，既保證了地西他濱的溶解性，又增加了地西他濱的穩定性，可用于地西他濱和含有地西他濱的藥物組合物的質量控制。文檔編號G01N30/02GK101614710SQ20091008957公開日2009年12月30日申請日期2009年7月24日優先權日2009年7月24日發明者方劉,劉丹梅,星李,娟汪,蕾王申請人:北京滿格醫藥科技有限公司