專利名稱：：一種食品中非法添加工業染料-酸性橙Ⅱ含量的測定方法
技術領域：
：本發明涉及一種食品中非法添加工業染料-酸性橙ii含量的測定方法，特別是涉及一種運用串聯液相質譜儀測定食品中非法添加工業染料-酸性橙ii的含量的方法
背景技術：
：酸性橙n是一種偶氮類酸性工業染料，又名酸性金黃n、金橙n或酸性艷橙gr,俗名金黃粉，。溶于水、乙醇。主要用于蠶絲、羊毛的染色。也可染皮革、紙張、錦綸。能印花。還可用作指示劑。拔染性、勾染性好，染色牢度較差，適用于色澤鮮艷度高的絨線染色。染色時遇銅離子趨向紅暗，遇鐵離子色澤淺暗。非食用色素酸性橙n又名金橙n、二號橙、桔黃橙、酸性金黃n或酸性艷橙gr，俗名金黃粉，化學名為2-萘酚偶氮對苯磺酸鈉，是酸堿指示劑。醫學上用于組織切片染色，在紡織上用作著色劑、皮革制品、塑料及木制品的染色。酸性橙n為中等毒性致癌合物，禁止在食品中使用。酸性橙ii屬非食用色素，食品中不允許加入。但是由于酸性橙n色澤鮮艷、著色穩定、價廉等特點，一些不法商販為了牟取暴利將其用于食品生產與加工，嚴重危害了消費者身體健康。因此，及時準確判斷食品中是否存在該非食用色素，建立一套快速、準確的食品中非食用色素酸性橙n的測定方法具有重要意義。
發明內容本發明提供的是一種食品中非法添加工業染料-酸性橙ii含量的測定方法。i原理試樣中的目標化合物用曱醇-乙酸銨溶液提取，經弱陰離子交換固相萃取柱凈化后，液相色譜-串聯質譜測定，基質加標工作曲線外標法定量。2試劑與材料除另有規定外，所有試劑均為分析純，實驗用水為超純水。2.1甲醇液相色語純2.2乙酸銨2.3甲酸2.4氨水2.5提取溶液稱取3.9克乙酸銨用水溶解，加入IO.OmL曱酸，用水定容到500mL后，用曱醇定容到1000mL。2.6固相萃取柱平衡溶液稱取3.9克乙酸銨用水溶解，力卩IO.OmL甲酸，用水疋容到500mL。2.7淋洗溶液稱取3.9克乙酸銨用水溶解，力。10.OmL甲酸和25.OmL甲醇，用水定容到500mL。2.8洗脫溶液取5mL氨水用曱醇定容至100mL。2.9樣品稀釋液稱取0.39克乙酸銨用水溶解，力。0.50mL甲酸，用水定容到250mL后，用水定容到500mL。2.10流動相A:稱取0.39克乙酸銨用水溶解，力cr0.50mL曱酸，用水定容到500mL。2.11流動相B:乙腈，液相色:^普純。2.12弱陰離子交換固相萃取柱WAX,60mg/3mL，使用前依次用3mL甲醇、3mL水以及3mL固相萃取柱平4軒溶液(2.5)活化。2.13標準品酸性沖登II。2.14標準儲備液(1.Omg/mL):準確稱取0.0100克酸性橙II標準品，用50°/。曱醇水溶液定容至10.OmL。2.15標準系列配制酸性橙n標準系列，酸性橙II濃度為25、50、100、200、400ng/mLo3儀器和設備3.1液相色譜-串聯質譜儀配有電噴霧(ESI)離子源。3.2離心機。3.3超聲波水浴。3.4固相萃取裝置。3.5氮吹儀。4樣品及基質加標工作曲線的制備4.1樣品的制備a)提取稱取l.0克試樣于50mL離心管中，加入IO.0mL提取溶液，超聲提取30分鐘，10000r/min離心10分鐘，上清液轉移至另一50mL離心管中；殘渣中加入10.OmL提取溶液再次提取，合并兩次提取溶液。b)凈化取5.OmL樣品提取液，用固相萃取柱平衡溶液(2.5)稀釋定容至50.OmL,過已活化好的弱陰離子固相萃取柱，用2mL淋洗液、2mL水淋洗，5mL洗脫液洗脫，收集洗脫液，用氮氣吹至近干，用樣品稀釋液定容至1.OmL,過0.22nm濾膜后液相色i普-串聯質語測定。4.2基質加標工作曲線的制備稱取1.0克空白樣品基質于50mL離心管中，稱取6份，分別加入標準系列溶液(2.15)IOOiuL,按4.1進行操作，制備基質加標工作曲線，酸性橙II為25、50、100、200、400ng/mL。。5測定5.1液相色譜-串聯質譜參考條件色i普柱BHT1.7mmx100mm流動相0.1°/。甲酸的5mmol/L乙酸銨水溶+乙腈9(1+9)。進樣量5pL。柱溫40°C。離子源酸性橙II電噴霧ESI,負離子。掃描方式多反應監測MRM。監測離子對<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>5.2定性測定各檢測目標化合物以保留時間和兩對離子的(特征離子對/定量離子對)所對應的LC-MS/MS色i普峰面積相對豐度進行定性。要求被測試樣中目標化合物的保留時間與標準溶液中目標化合物的保留時間一致(一致的條件是偏差小于20%)，同時要求被測試樣中目標化合物的兩對離子對應LC-MS/MS色i瞽峰面積比與標準溶液中目標化合物的面積比一致，相對豐度>50%、20-50%、10-20%、<10%時,容許偏差分別為20%、25°/"30%和50%。5.3定量測定按照5.1液相色語-串聯質譜條件測定樣品及基質加標標準溶液，以標準溶液濃度對定量離子峰面積繪制標準曲線，外標法定量。6結果計算樣品中酸性橙n的含量(/ig/kg)=^-m式中M！——樣品峰面積；M2——標準峰面積C——標準溶液濃度，ng/mLV——定容體積，mL;m--稱樣量，g。附圖為標準曲線。具體實施例方式實施例a)稱取l.0克試樣于50mL離心管中，加入IO.OmL提取溶液，超聲提取30分鐘，10000r/min離心10分鐘，上清液轉移至另一50mL離心管中；殘渣中加入10.OmL提取溶液再次提取，合并兩次提取溶液。b)凈化取5.OmL樣品提取液，用固相萃取柱平衡溶液(2.5灘釋定容至50.OmL,過已活化好的弱陰離子固相萃取柱，用2mL淋洗液、2mL水淋洗，5mL洗脫液洗脫，收集洗脫液，用氮氣吹至近干，用樣品稀釋液定容至1.OmL,過0.22jum濾膜后液相色鐠-串聯質譜測定。c)基質加標工作曲線的制備稱取1.0克空白樣品基質于50mL離心管中，稱取6份，分別加入標準系列溶液(2.15)IOOjjL，按4.1進行操作，制備基質加標工作曲線，酸性橙II為25、50、100、200、400ng/mL。d)測定(見附圖的標準曲線)濃度(ng/mL)2550100200400峰面積82719804012768714730樣品精密度的測定:檢測值(x)ng/mL檢測酸性平均RSD回收力口標力口標力口標力口標力口標力口標樣品樣品率％橙n值(%)12345612(X)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>試樣中酸性橙n含量按公式(i)進行計算。顯而易見，本領域的普通技術人員，可以用本發明通過液相色譜-串聯質譜對食品中酸性橙n的測定方法，構成對酸性橙n含量的測定方法。上述實施例僅供說明本發明之用，而并非是對本發明的限制，有關
技術領域：
的普通技術人員，在不脫離本發明范圍的情況下，還可以做出各種變化和變型，因此所有等同的技術方案也應屬于本發明的范疇，本發明的專利保護范圍應由各權利要求限定。權利要求1.一種食品中非法添加工業染料-酸性橙II含量的測定方法，其特征在于，所述測定方法包括如下步驟稱取樣品經離心，超聲提取，運用固相萃取技術，提取液柱過0.22μm濾膜后液相色譜-串聯質譜測定。2.根據權利要求1所述的一種食品中非法添加工業染料-酸性橙n含量的測定方法，其特征在于應用固相萃取和相色譜-串聯質譜測定技術可以定量測定食品中牛磺酸的含量。全文摘要本發明涉及一種運用串聯液相質譜儀測定食品中非法添加工業染料-酸性橙II含量的方法。通過對樣品離心及超聲提取，取上清液采用固相萃取凈化，過0.22μm濾膜后注入液相色譜-串聯質譜，通過對目標化合物以保留時間和兩對離子的(特征離子對/定量離子對)所對應的LC-MS/MS色譜峰面積相對豐度進行定性。要求被測試樣中目標化合物的保留時間與標準溶液中目標化合物的保留時間一致，偏差小于20％，同時要求被測試樣中目標化合物的兩對離子對應LC-MS/MS色譜峰面積比與標準溶液中目標化合物的面積比一致，定量測定。文檔編號G01N30/00GK101598711SQ200910086860公開日2009年12月9日申請日期2009年6月10日優先權日2009年6月10日發明者薇宋申請人:譜尼測試科技(北京)有限公司