專利名稱：魚體中硝基苯類物質的色譜檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種有機物質的檢測方法，具體地講是一種魚體中硝 基苯類物質的色譜;險測方法。
背景技術：
硝基苯類物質是重要的化工原料，據統計，全球每年排放到環境 中的硝基苯類化合物約為3萬噸，而且隨著現代化學工業的發展，硝 基苯的全球需求量正以每年3. 1%的速率增長。因此，通過各種途徑 進入到環境，尤其水中的硝基苯的數量也越來越多，而由于水的污染 引起的水產品硝基苯污染現象也越來越嚴重。硝基苯類污染物屬于生 物難降解的物質，不能直接用生化方法處理，此外硝基苯類物質容易 在生物體內積累，能夠致癌、致畸、致突變，對人和動物的毒性很大。 因此水產品，尤其魚類中硝基苯類物質的提取和檢測就顯得尤為重 要。
目前，魚類中硝基苯類物質的檢測一般采用索氏提取、離心分離， 然后用色譜檢測，但是索氏提取的方法存在花費時間長、溶劑用量大、 效率不高的缺點。因此需要一種更加簡單有效的方法來進行魚類中硝 基苯類物質的提取和檢測來更加方便快捷的檢測水中硝基苯類物質 的污染對水生生物魚的污染情況。本方法也可以用于其他類似物質中 硝基苯類物質的檢測。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種魚體中硝基苯類物質檢測方法，以在短時間內用較少的有機溶劑快速獲得較好的提 取和4企測步支果。
本發明是通過以下技術方案實現的 一種魚體中硝基苯類物質的檢測方法，包括以下步驟
1) 將魚肉樣品勻漿后置于有機溶劑提取劑中提取以獲得硝基苯 類物質粗提物；
2) 用分離柱分離所得的硝基苯類物質粗提物以獲得純提取物；
3) 將步驟2)中所得的純提取物濃縮得到濃縮液；
4) 采用色譜檢測所述濃縮液中硝基苯類物質的濃度并計算出魚 體中硝基苯類物質的含量。
其中，在所述步驟l)的提取步驟中先后在電,茲攪拌和超聲震蕩 條件下進行；所述電磁攪拌的轉速優選為30-500 rpm，時間優選為 10-120 min,可以為單次或多次攪拌；所述超聲震蕩的時間可為1-30 min;所述提取液可以為二氯曱烷、正己烷或石油醚等有才幾溶劑；所 述提取液的體積可以為5-100 ml;
步驟2)中所述的分離柱中依次裝填有0. 2-5cm無水硫酸鈉、 2-20 cm中性分離硅膠、0. 2-5 cm無水硫酸鈉；所述分離柱上方可覆 蓋有定量濾紙；
步驟3)通過先用無水硫酸鈉干燥，然后用氮吹氣儀或液體濃縮 器濃縮來進行；
所述色i普檢測采用常規色譜儀分析狀態，釆用中等極性的石英毛 細管色譜柱；所述色譜柱的柱長、內徑、液膜厚度分別為20-60m、0. 25-0. 4m、 0. 25-0. 35 jum;柱溫i殳定如下60-8(TC停留2-6 min, 以7-18。C/tnin升溫至120-16(TC并停留2-6 min,再以8-15。C/min 升溫至210-240。C并停留l-5min;分流比為1-15;進樣口溫度為 240-270°C;檢測器溫度為270-320°C;進樣量為ljal;所述色謙檢 測儀中所用的檢測器為FID或ECD檢測器。。
本發明采用電^ 茲攪拌和超聲破碎提取來代替傳統的索氏提取，可
果，檢測限>0. 01 mg/kg，線性驗證結果表明該方法適于硝基苯的含
量測定。該方法克服了傳統提取方法耗時長、有機溶劑用量大的缺點，
能夠更加快速有效地檢測水中硝基苯類物質的污染對水生生物魚的
污染情況。
圖1是本發明色譜^r測方法驗證結果示意圖，其顯示該方法所得 的峰面積與硝基苯濃度之間的線性關系。
具體實施例方式
本發明所用術語"硝基苯類物質"是指苯環上的氫原子經或未經 取代基取代的硝基苯，其中所述取代基包括氫、羥基、烴基、卣素等。 舉例來說，本文的硝基苯類物質包括硝基苯；鄰、間、對硝基曱苯； 鄰、間、對硝基苯酚等。 '
本發明所述的硝基苯類物質的檢測方法，包括以下步驟 1)在分析天平(分度值< 0. lmg )上準確稱取表面用蒸餾水洗 凈的不含鱗、骨、內臟的新鮮塊狀魚肉樣品0. 2_20g (可才艮據實際需要增加)；將樣品在含有適量(優選1-50 ml)生理鹽水的研缽或勻 漿器中研磨至樣品基本勻漿，通常研磨時間為2-20 min,研缽或勻 漿器優選由金屬、陶瓷或玻璃等材料制成；然后轉移至燒杯中，通常 選用10-250 ml或更大容積的燒杯；加入^是取劑，通常為二氯曱烷、 正己烷或石油醚等有機溶劑，放入由金屬陶瓷或聚四氟乙烯材料制成 的轉子，用鋁箔封口，以30-500 rpm的轉速在磁力攪拌器上攪拌 10-120 min，然后置于超聲波液體清洗器上超聲破碎l-30min,然后 即可獲得粗提物；
2 )將1 )中所得的粗提物通過分離柱并收集在10-250 ml燒杯 中，再用10-100ml提取劑沖洗分離柱并將其收集同一燒杯中獲得純 提取物，其中所述分離柱為玻璃分離柱，優選5-100cm,其內依次裝 填有0. 2-5cm無水硫酸鈉、2-20 cm中性分離硅膠、0.2-5 cm無水 硫酸鈉，所述分離柱上方還可覆蓋有定量濾紙，在粗提物通過分離柱 之前可以先用10-lOOml提取劑沖洗分離柱，用抽濾器快速抽濾后棄 去沖洗液；
3) 在2)中所得的純提取物中添加少量無水硫酸鈉干燥至溶液 澄清透明，然后用氮吹儀或液體濃縮器進行濃縮獲得濃縮液，所述濃 縮液的體積通常為小于1-2 ml，加入提取劑(無水二氯曱烷或正己 烷)將其樣品瓶中定容至1-2 ml。
4) 采用色譜檢測所得濃縮液中硝基苯類物質的濃度并計算魚體 中硝基苯類物質的含量，使用常規氣相色譜儀來分析狀態，檢測中所 用的色譜柱為適合用于檢測半揮發性有機物的中等極性石英毛細管色譜柱，所述石英毛細管色譜柱的柱長、內徑、液膜厚度分別為 20-60m、 0. 25-0. 4mm、 0. 35 ju m;柱溫程序設定如下60-80。C停留 2-6min，以7-18°C/min升溫至120-160。C并4亭留2-6 min，再以8-15 。C/min升溫至210-240。C并停留l-5min;分流比為1-15;進樣口溫 度為240-270。C;;險測器溫度為270-320°C;進樣量為1 ]u 1;載氣和 尾氣采用高純氮，所述高純氮純度> 99. 999%;燃氣采用高純氫，所 述高純氮純度> 99. 999%;所述檢測器為FID檢測器或ECD檢測器。 由于ECD對富電子物質的選擇性較強，使用ECD可不用氫火焰燃燒氣 體，但對操作條件的選擇要求較嚴格且線性范圍很窄，提取劑不適合 選用含氯有機溶劑，如二氯曱烷；FID檢測器結構簡單、穩定好且線 性范圍寬，但其對富含電子的硝基苯類物質的選擇性可能不如ECD敏 感。
魚體肌肉中硝基苯類物質含量通過下式來計算
其中，Cs代表標準溶液中硝基苯類物質含量，其單位為毫克每 升(mg/1 ) ; As代表標準溶液中的峰面積，其單位為微伏秒；Ax為樣 品中硝基苯的峰面積，其單位為微伏秒；V為樣品濃縮后的體積，其 單位為毫升(ml); W為魚肉樣品重量，其單位為克(g); R"/。為方法 的總回收率，通常為50-85%,其通過使用常規方法采用在空白溶液 中添加標準溶液來4企測。依據現有色譜;險測技術，采用不同的標準液 可以獲得不同的物質含量。另外，本領域技術人員依據現有技術，還 可以理解到本方法不僅可以檢測魚體內的硝基苯類物質含量，還可以檢測其他類似物質內的硝基苯類物質含量，并且通過選擇適當的有機 溶劑，還可以提取和檢測其他成分的含量。
圖l是以硝基苯含量測定為例，采用常規方法進行該方法的線性 檢測，對測得的硝基苯的峰面積對濃度作圖(參見圖1)，所得方程
為y=526. 65x+54. 145， R2=0. 9984，結果表明，硝基苯物質的濃度與 峰面積之間存在線性關系，該方法適用于硝基苯的含量測定。采用常 用的方法檢測該方法的檢測限，對于FID和ECD檢測器，檢測限均> 0. 01 mg/kg。
權利要求
1、一種魚體中硝基苯類物質的色譜檢測方法，其特征在于包括以下步驟1)將魚肉樣品勻漿后置于有機溶劑提取劑中提取以獲得硝基苯類物質粗提物；2)用分離柱分離所得的硝基苯類物質粗提物以獲得純提取物；3)將步驟2)中所得的純提取物濃縮得到濃縮液；4)采用色譜檢測所述濃縮液中硝基苯類物質的濃度并計算出魚體中硝基苯類物質的含量。
2、 根據權利要求1所述的方法，其特征在于在所述步驟l) 的提取步驟中先后在電磁攪拌和超聲震蕩條件下進行。
3、 根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述電》茲攪拌在 30-500 rpm轉速下進4亍，攪拌時間為10-120 min,所述電》茲攪拌分 一次或多次進行。
4、 根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述超聲震蕩的 時間為1-30 min。
5、 根據權利要求l、 2、 3或4所述的方法，其特征在于所述 有機溶劑提取劑為二氯曱烷、正己烷或石油醚。
6、根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述分離柱中依 次裝填有0. 2-5cm無水硫酸鈉、2-20 cm中性分離硅膠、0.2-5 cm 無水》危酸鈉。
7、根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述分離柱上方覆蓋有定量濾紙。 .
8、 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述色i普檢測采 用常規色譜儀分析狀態，采用中等極性的石英毛細管色譜柱，所述色 譜柱的柱長、內徑、液膜厚度分別為20-60m、 0. 25-0. 4m、 0. 25-0. 35 M m。
9、 根據權利要求8所述的方法，其特征在于柱溫設定如下 60-80。C停留2-6 min,以7-18。C/min升溫至120-160。C并停留2-6 min，再以8-15。C/min升溫至210-240。C并停留l-5min，分流比為 1-15;進樣口溫度為240-27(TC;檢測器溫度為270-32(TC;進樣量 為lial。
10、 根據權利要求9所述的方法，其特征在于所述色譜檢測儀 中所用的檢測器為FID或ECD檢測器。
全文摘要
本發明涉及一種魚體中硝基苯類物質的色譜檢測方法，所述方法包括四個步驟(1)將魚肉樣品勻漿后置于有機溶劑中提取以獲得硝基苯類物質粗提物；(2)用分離柱分離所得的硝基苯類物質粗提物以獲得純提取物；(3)將所得的純溶液濃縮得到濃縮液；(4)采用色譜檢測方式檢測所得濃縮液中的硝基苯濃度并計算魚體中硝基苯類物質的含量，其中所述硝基苯類物質粗提物的提取步驟中采用電磁攪拌提取和超聲波超聲提取，以在短時間內使用較少的有機溶劑快速獲得較好的提取和檢測效果。本方法可以快速、方便、有效地檢測魚體中硝基苯類物質，檢測限≥0.01mg/kg，也可以用于其他類似物質中硝基苯類物質的檢測。
文檔編號G01N30/00GK101576541SQ20091007954
公開日2009年11月11日 申請日期2009年3月6日 優先權日2009年3月6日
發明者紅 倪, 劉征濤 申請人:劉征濤