一種定量檢測葡萄球菌腸毒素b的蛋白質懸浮芯片及其制備方法

專利名稱：一種定量檢測葡萄球菌腸毒素b的蛋白質懸浮芯片及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種定量檢測葡萄球菌腸毒素B的蛋白質懸浮芯片及其制備方法。
背景技術：
金黃色葡萄球菌腸毒素B (staphylococcal enterotoxin B, SEB )是引起食物中毒的主要致病因素。食物中毒發病較急，通常在進食含毒素食品l-6小時內發作，平均2-3小時。
SEB常規實驗室診斷方法有1 )免疫擴散0udin單向擴散技術可用于葡萄球菌腸毒素的準確定量測定，易重復，不受溫度、抗血清稀釋度及作用時間等影響。檢測各型葡萄球菌腸毒素的敏感度在10-20pg/mL左右。2)放射免疫法(RIA):檢測食品中的腸毒素A及B，較免疫擴散法敏感100倍。3)反向被動血凝試驗(RPHA):可將毒素分型，且有較高的特異性和敏感性。用改良的RPHA法測定葡萄球菌腸毒素時，食物中純化葡萄球菌腸毒素的最低檢出濃度為l-5ng/mL。本法優點為簡便、快速，且對食品中低濃度毒素不需濃縮即可檢出。4)被動血凝抑制試驗(RPIA ):用戊二醛為結合劑，以凍干致每文紅細胞作凈皮動血凝抑制試驗測定葡萄球菌腸毒素B。可測出0. Olng葡萄球菌腸毒素，但如食品浸出液不純，常可干擾檢查結果。SEB的檢測研究在平時和戰時都有重要意義。本發明選擇SEB作為葡萄球菌腸毒素的代表建立檢測模型。
懸浮芯片(suspension array)也稱液相芯片(1 iquid array, liquidchip),是20世紀70年代美國Luminex公司研制出的新一代生物芯片技術，利用帶編碼的微球體作為載體，流式細胞儀作為檢測平臺，對核酸、蛋白質等生物分子進行大規模測定。最早的報道是19"年Horan將該技術用于免疫學檢測，至今，該技術已廣泛應用于免疫分析、核S吏研究、酶學分析、抗體篩選及受體與配體的識別分析等領域。懸浮芯片的基本原理是利用聚苯乙烯(polystyrene)所制作的微球，包覆不同比例的紅光及紅外光發色劑，而產生ioo種不同比例顏色，作為IOO種獨特的色彩編號，每顆微球大小約5. 5jim，可依不同研究目的如免疫分析、核酸研究、酶分析、受體和配體識別分析等，并根據不同研究目的而標定特定抗體、核酸探針及各種受體探針。標記探針的微球與待測物在96孔板中進行反應。反應后，利用機器自動將反應液吸起并通過一微細管檢測通道，每次僅允許一個微球通過檢測通道。檢測通道中設有兩道激光，一道為紅色，激發微球基質中的顏色，識別微球分類編碼以確定檢測項目；一道為綠色，激發報告分子的顏色，記錄信號強弱以檢測待測物的含量。當待測樣本與特定微球的探針吸附在一起時，兩道激光所激發的光都可
被檢測到。而若樣本中不含該標的物，則僅有微球中的激發光可被檢測到。再通過機器與計算機自動統計分析兩道激光所激發的微球種類與數量，從而判定待測樣本中有幾種測試目標物在其中，得知測試樣本中有無待測病原存在，或同時存在有幾種至數十種病原。
本研究選擇金黃色葡萄球菌腸毒素B作為病原體和生物威脅因子，制備相應的蛋白質懸浮芯片并且用于對實際生活領域中如奶粉、面粉、淀粉、果珍等粉末樣品中的快速檢測，分析懸浮芯片方法在白色粉末模擬樣品檢測中的應用情況，包括敏感性、特異性、穩定性以及針對不同樣品、具有雜菌干擾下檢測方法的適用性。

發明內容
本發明涉及一種定量檢測葡萄球菌腸毒素，特別是金黃色葡萄球菌腸毒素B的蛋白懸浮芯片及其制備方法，還涉及本發明的蛋白質懸浮芯片在定量、快速、直接檢測葡萄球菌腸毒素、尤其是金黃色葡萄球菌腸毒素B中的應用和4企測方法。
本發明人通過大量和深入的研究，開創性開發出本發明的葡萄球菌腸毒素檢測蛋白質懸浮芯片及其檢測方法具有以下優點制備的蛋白質懸浮芯片能夠更快速、定量檢測所述病原體，特異性強；蛋白質懸浮芯片檢測方法比ELISA方法檢測敏感度高，并且動態范圍更寬；為所述病原體的定量檢測建立技術模型，例如蓖麻毒素，而且還可以進一步獎所述蛋白懸浮芯片應用于其他植物毒素等。
本發明提供一種定量檢測葡萄球菌腸毒素的蛋白質懸浮芯片，該懸
5浮芯片由編碼微球包被抗體、生物素化抗體、鏈親和素-藻紅蛋白(SA-PE )及緩沖溶液構成，該微球用抗葡萄球菌腸毒素B ( SEB )的特異性抗體包被，生物素標記的抗體為SEB特異性抗體。
本發明還提供一種制備所述蛋白質懸浮芯片的方法，該方法包括下列步驟(1)用捕獲抗體包被編碼微球，(2)生物素標記檢測抗體，(3)樣品4金測方法。
本發明還提供一種定量檢測葡萄^求菌腸毒素的方法，該方法包括下列步驟(1 )用抗葡萄球菌腸毒素抗體包被編碼微球，(2)生物素標記檢測抗葡萄球菌腸毒素抗體，(3)樣品檢測方法。
在芯片和方法的開發過程中，本發明對所述蛋白質懸浮芯片及其制備方法和檢測方法條件進行了大量和復雜的摸索和研究，并且取得了以下多個方面的改進
1、 抗體包被量的改進
抗體的包被量需要以檢測效果進行優化，本研究中各抗體的包被量自9-12pg始，以2倍、4倍的梯度測試，選擇在10-12pg即可。
2、 生物素標記的改進
標記抗體所用的生物素是過量的，過量的值試劑盒中有參考的計算公式。理論上講，在檢測過程中，過量的生物素因未標記上抗體而不一皮微球上結合捕獲抗體的抗原連接，清洗時被抽濾掉，不會與隨后加入的SA-PE反應，不影響檢測。但在實際檢測過程中，偶爾遇到過檢測信號可能降低的現象，因此建議生物素標記抗體后，盡量去除多余的生物素。3 、 檢測的靈敏度及動態范圍
本發明的懸浮芯片方法與經典的免疫學^f全測方法-一ELISA相比，結果有著很好的吻合性，但懸浮芯片方法比ELISA靈敏度高，動態檢測范圍更寬。懸浮芯片方法靈壽丈度高于免疫學方法的經典標準-ELISA方法，也從對多份樣品的檢測結果得到印證。
在本發明制備蛋白質懸浮芯片中，抗原可以選自天然提純、經蛋白層析系統(Sapherose 4B,蛋白質G柱)純化的SEB。捕獲抗體為SEB單抗，也可為兔抗SEB。檢測抗體為Bio-兔抗SEB,也可為Bio-SEB單抗。通過檢測SEB的對比試驗，本發明的懸浮芯片和ELISA方法有很好的一致性(W為0. 9785 )，但是ELISA檢測SEB的最低檢測濃度為60ng/mL,
6線性范圍為100-800ng/mL。本發明的懸浮芯片在才企測中比ELISA法靈敏度高300倍，動態范圍更寬。
經與對應ELISE方法對比研究，和人工污染樣品;險測、實4全室標準測試、盲樣測試等初步評價和考核，本研究建立的懸浮芯片多病原體定量檢測方法比ELISA方法具有更高的敏感性和更寬的動態4企測范圍，實現病原體的定量檢測，對目標分析物的檢測不受其它病原體存在等背景干擾的影響，可用于"白色粉末"等環境和食品樣品的檢測，檢測的靈敏度和動態范圍受不同樣品基質的影響而有所改變。懸浮芯片檢測方法的建立對于蓖麻毒素的快速檢測，對可疑環境樣品中生物恐怖因子的檢測具有非常重要的意義。
我們發展了編碼微球懸浮芯片可實現蓖麻毒素的同時定量檢測。考察了方法的靈敏度、特異性、多重檢測能力、檢測粉末樣品的適用性等，并與ELISA方法進行對比，懸浮芯片方法的靈壽t度分別高于對應的ELISA方法。對人工污染樣品和盲樣的測試結果也證明了編碼孩O求懸浮芯片定量檢測方法的實用性。
本研究建立的懸浮芯片多病原體定量檢測模型，為進一步解決檢測技術達到準確、快速、簡便、多功能、多指標、高通量、標準化的要求奠定了基礎。


圖1:用43號微球包被SEB抗體檢測示意圖；圖2:編碼微球懸浮芯片檢測SEB的標準曲線圖；圖3: ELISA方法;^測SEB標準曲線圖；圖4:微J求芯片與ELISA方法4全測SEB的吻合性；圖5:奶^分樣品中SEB劑量-反應動態曲線。
具體實施例方式
本發明涉及的定量檢測葡萄球菌腸毒素的蛋白質懸浮芯片及其制備方法將以下列具體實施方式
對本發明作進一步說明，但本發明不以任何方式受該實施例的限制。一、材料
7本發明采用下列緩沖液來制備懸浮芯片并進行目標物的檢測
(1) 0. 03M PB緩沖液(pH7. 2 ): 2. 83g Na2HP04， 1. 36g ,04定容至1L。
(2) PB: 0. OIM磷酸鹽緩沖液，pH7. 2。用0. 03M PB緩沖液稀釋而成。
(3) PBS(pH7. 4 ): NaCl 137mmol/L; KC1 2. 7mmol/L; Na2HP0410mmol/L;KH2P04 2誦ol/L。用800mL蒸餾水溶解8gNaCl， 0. 2gKCl， 1. 44g Na2HP04和0. 24g KH2P04。用HC1調節溶液的pH值至7. 4,加水至1L。分裝后在15psi (1.05kg/cm2)高壓蒸汽2Qmin，或過濾除菌，保存于室溫。
(4) 微球清洗液PBS (pH7. 4), 0.05% TWEEN-20。
(5 )微球活化緩沖液100 mM NaH2P04: 3g NaH2P04， 5N NaOH 1. 5 mL,定容于250mL， pH 6. 2。
(6 )微球包被緩沖液0. 05 MMES， pH 5. 0: 2.44gMES， 5NNaOH0.15mL,定容于250mL。
(7 M鼓J泉寸呆存液PBS-TBN: PBS， 0. 1%BSA， 0. 02% TWEEN, 0. 05°/。Azide，pH7.4。
(8) 微球封閉液PBS-BN: PBS, 1°歸,0. 05%Azide, pH7. 4。
(9) 檢測緩沖液PBS， 1%BSA， pH7. 4。
(10 )抗體稀釋液0. 01 mmol/L PB ( pH7. 2 )。
(11) 微球稀釋液PBS， 1°/。BSA， pH7.4。
(12) 樣品稀釋液:0. OIMPB， pH7. 2。
(13 )生物素化抗體稀釋液:PBS-TBN(PBS， 0.鹿A, 0. 02% TWEEN-20,
0. 05%NaN3， pH7. 4)。
(14) SA-PE稀釋液:PBS(pH7.4)，簡A。二、待測樣品的制備
1、 樣品的制備
目標檢測物樣品為葡萄球菌腸毒素B ( SEB )。干擾樣品或作為方法特異性測試的樣品是目標檢測物外的其它細菌或其它蛋白質，包括BONT、重組HIV P24抗原、BSA、酪蛋白、胰蛋白胨、禽流感病毒HA蛋白、NH蛋白等。將上述待分析樣品均溶在樣品稀釋液PB ( 0. 01M, pHL 2 )溶液中，4。C保存。SEB的儲備液濃度均為lmg/mL。毒素和重組蛋白質樣品在臨用前稀釋。SEB的濃度范圍為10pg/mL-5jug/mL。比較實驗中，同樣的樣品 用于ELISA和懸浮芯片的檢測。
待分析的細菌用PB稀釋成IO倍不同梯度，葡萄球菌腸毒素用PB稀 釋成4倍不同梯度，以繪制樣品檢測劑量-反應的標準曲線，其中幾個樣 品濃度低于檢測的敏感度，高濃度樣品應使編碼微球的結合位點處于飽 和狀態。
2、模擬添加樣品的制備
分別將0. 5g奶粉、玉米淀粉、小麥面粉、速溶果珍等粉末加入到5mL 樣品稀釋液(PB緩沖液)中，將不同濃度的炭疽芽孢、鼠疫菌、SARS-CoV N蛋白、蓖麻毒素和SEB的其中 一種或幾種，摻入到粉末樣品中，經V0TEX 充分混勻，靜置2h以上，使目標分析物與模擬白色粉末充分吸附。再 用脫脂棉、薄濾紙、厚濾紙、0. 45，濾膜濾紙過濾或低速離心(1000rpm, 2min )后，上清液作為待檢樣品進行懸浮芯片方法的檢測。 三、抗原抗體
天然提純、經蛋白層析系統(Sapherose 4B, Protein G柱)純化的 SEB、 Bio-兔抗SEB經正辛酸-飽和碌u酸銨提純法純化抗體IgG。
實施例l、捕獲抗體包4皮編碼孩i球
兔抗SEB經正辛酸-飽和碌u酸4妄l是純法純化。任選一種編碼的孩t球(如 043 )標記捕獲SEB的抗體(SEB抗體)。
A、 編碼微球的活化
取100|aL編碼微球到1.5mL離心管中，14000g離心，小心吸出并棄 去上清液。加入lOO(iL的微球清洗緩沖液懸浮，震蕩并超聲后14000 g 離心，小心吸出并棄去上清液。加入lOOiaL的微球活化緩沖液，接著先 加入10 |i L新鮮配置的EDC ( 50mg/mL )，緊接著加入10 |i L新鮮配置的 Sulfo-NHS ( 50mg/mL ),在室溫震搖20min。加入150 (a L的PBS ( pH7. 4 ), 震蕩后，14000 g離心，小心吸出并棄去上清液。加入100 (a L的PBS( pH7. 4 ) 懸浮編碼微球。
B、 用抗體包被編碼微球
取相應的抗體5-50 |a g加入到活化后的編碼樣i球中，用PBS ( pH7. 4 ) 定容至500juL，室溫震搖2小時。14000 g離心，小心吸出并棄去上清液。用500 pL的PBS (pH7. 4)洗一次，14000 g離心，小心吸出并棄去 上清液。加入250|uL的封閉緩沖液懸浮編碼微球，在室溫震搖30min, 14000g離心，小心吸出并棄去上清液。加入500juL的微球保存液洗滌編 碼微球，16000g離心，小心吸出并棄去上清液。最后用150fiL的微球保 存液懸浮編碼微球，于4'C避光保存備用。 C、包被微球的計數
吸取適量微球，稀釋后，用血球計數板(O. 10mm; 1/400mm2)在普通顯 微鏡下計數。根據公式(每個大格數x 104 x稀釋倍數x體積(mL ))計算 微球數量。
實施例2、檢測抗體的生物素標記
待標記的抗體包括兔抗SEB抗體、羊抗SEB抗體、SEB單抗，針對每 種分析物標記生物素的檢測抗體至少有兩種備選。分別配制好濃度為 10mM生物素溶液和2mg/mL的待標記抗體溶液，將計算好體積的生物素加 入到待標記抗體溶液中，在室溫震搖30min (或水上2小時)，過柱脫鹽 后分裝，-20。C凍存備用。
實施例3、懸浮芯片的檢測
采用雙抗體夾心免疫學檢測模式，檢測過程中全部反應均在96孔濾 板上進行。
1) 每孔加入50juL含相應編碼微球的工作溶液，洗液洗滌并用真空 泵抽濾；
2) 加入50 laL沖企測樣品，混勻后室溫避光震搖30min,洗液洗滌并 抽濾；
3) 加入50 juL適當濃度的用抗體稀釋液稀釋后的生物素化抗體，混 勻后室溫避光震搖3Omin,洗液洗滌并真空泵抽濾；
4) 加入50 )LiL的SA-PE，混勻后室溫避光震搖10min。洗液洗滌并真 空泵抽濾；
5) 加入125jaL的;f僉測緩沖液，經VOTEX重懸混勻；
6) 用懸浮芯片系統讀取FMI數值并分析數據。 上述一企測過程可在30分鐘完成96個樣品中目標物的4企測。實施例4、葡萄球菌腸毒素B的懸浮芯片檢測法
優化的懸浮芯片檢測系統可成功用于SEB檢測。包被SEB抗體的043 號微球均落在其正確檢測區域內，見圖1所示。方法優化后選擇的抗體 對組合為微球包被SEB的單抗(抗體包被量為10pg /1. 25 x l(f個編碼 微球)，檢測抗體為1: 50的Bio-兔抗SEB (標記濃度為lmg/mL)。
實施例5、懸浮芯片方法檢測SEB的標準曲線
編碼微球懸浮芯片檢測SEB的標準曲線包含6個數量級的點(圖2)。 檢測seb從7. 5 m g/mL開始4倍系列稀釋至10pg/mL。檢測動態范圍為
0、 02-1653. 4ng/mL， LOD為203pg/mL。
實施例6、本發明懸浮芯片與ELISA法檢測SEB的比較
將SEB用樣品稀釋緩沖液稀釋成不同濃度梯度，用懸浮芯片及ELISA 方法平行檢測，比較懸浮芯片與ELISA方法的符合情況和方法的敏感性。 取三次ELISA檢測的平均值作為檢測值繪制標準曲線，見圖3。零含量檢 測樣品的檢測值為空白值。ELISA方法的LOD值耳又OD值與空白值之比為 2. 1時的檢測濃度。懸浮芯片與ELISA方法檢測結果吻合性比較見圖4, 圖中實線代表兩種方法分別對相同樣品檢測值的連接線，虛線為添加的 趨勢線。兩種檢測方法L0D值的比較結果見表1。
1、 ELISA方法
在建立的ELISA方法中，每種檢測物所用捕獲抗體和;險測抗體的配對 組合盡可能與對應的懸浮芯片方法所用抗體對一致。不同檢測物的捕獲 抗體分別用PB緩沖液稀釋后，ELISA板每孔包被量200ng-l jug。檢測樣 品分別對應于懸浮芯片單因子分析物檢測樣品。
其余檢測過程同第 一部分相應內容。
2、 懸浮芯片的定量檢測
SEB儲備液中稀釋檢測樣品，檢測后在對應的標準曲線上讀取其含 量；樣品三次檢測，取檢測信號平均值并計算其標準差、變異系數，考 核檢測的重復性。
3、 懸浮芯片與ELISA方法檢測SEB敏感度和檢測范圍比較表1:懸浮芯片方法與ELISA方法檢測性能比較
X-MAPELISA相關
檢測對象靈敏度動態范圍靈敏度線性范圍系數
SEB203pg/mL0. 02-1653. 4ng60ng/mL100-8000. 92
/mLng/mL69
通過檢SEB，比較懸浮芯片和ELISA方法的檢測性能，可以得出結論， 檢測同類樣品，在一定濃度范圍內，懸浮芯片方法與ELISA方法有很好 的相關性。懸浮芯片比ELISA方法具有更高的檢測靈敏度和更寬的動態 范圍，但是對不同的檢測物，性能優越程度不同，具體見表l。本發明的 懸浮芯片和ELISA方法有很好的一致性(W為0. 9785 )。 ELISA沖全測SEB 的最低檢測濃度為60ng/mL,線性范圍為100-800ng/mL。懸浮芯片方法 比ELISA法靈每丈度高300倍，動態范圍更寬。
實施例7、懸浮芯片方法的特異性
1、 懸浮芯片方法對不同菌和蛋白質的檢測
通過懸浮芯片方法特異性測試，結果顯示，蓖麻毒素、SARS-CoV N 蛋白、大腸埃希氏菌、變形桿菌、禽流感病毒HA蛋白、禽流感病毒NH 蛋白、酪蛋白、BSA、 B0NT、胰蛋白胨等MFI值與空白對照的MFI值沒有 顯著性的差異，說明以上細菌、病毒、毒素及其它蛋白質均不與目標檢 測物發生交叉反應或非特異性反應。
2、 懸浮芯片定量檢測SEB
依次準備不同濃度的SEB樣品，用懸浮芯片方法檢測后，套用劑量-反應標準曲線，得出樣品中SEB的定量檢測濃度。每個樣品檢測3次，取 其焚光檢測信號的平均值(MFI)，進行對應檢測濃度及標準差的計算， 結果見表2。樣品中SEB從0. 46 ng/mL到468. 75ng/mL五個濃度水平， 均可定量檢出，平均變異系數6. 788%。
_表2:懸浮芯片定量檢測SEB結果
編理論值檢測值MFI 標準差變異系 號ng/mL ng/mL 數
121 0.46 0.50 22.3 1.06 5.98
2 1.83 1.77 81. 8 13. 08 16.93
3 29.30 28.54 1278.3 80.26 6.30
4 117.19 131.21 2486.8 85.21 3.43
5 468.75 329.08 2638.8 0.98 1.30
實施例8、本發明懸浮芯片檢測樣本中的SEB 奶粉人工污染樣品中SEB定量檢測
將SEB定量添加到奶粉樣品中，以4. 25 x 1(Tcfu/mL始4倍梯度進行系 列稀釋，繪制劑量-反應曲線(圖5)。奶粉樣品中SEB的動態檢測范圍約為 1-62500 ng/mL。對奶4分中添加SEB樣品進行定量沖全測，以;險測值與添加 值之比計算檢測效率，見表3。
表3:模擬奶粉樣品添加SEB的纟企測效率
理論值檢測值檢測效
ng/mLng/mL率 * 100
16. 3415. 26107
48. 9561. 0480
901. 79244. 14369
1499. 55976. 56154
結論
經與對應ELISE方法對比研究，和人工污染樣品檢測、實-險室標準 測試、盲樣測試等初步評價和考核，本研究建立的懸浮芯片多病原體定 量檢測方法比ELISA方法具有更高的敏感性和更寬的動態檢測范圍，實 現病原體的定量檢測，對目標分析物的檢測不受其它病原體存在等背景 千擾的影響，可用于"白色粉末"等環境和食品樣品的檢測，檢測的靈 敏度和動態范圍受不同樣品基質的影響而有所改變。在奶粉中懸浮芯片 方法檢測SEB的靈敏度分別為2. 2 ng/mL，并分別在1-62500 ng/mL濃度 范圍內有很好的劑量-反應關系。
懸浮芯片檢測方法的建立對于SEB的快速檢測，對可疑環境樣品中生物恐怖因子的^r測具有非常重要的意義。
本研究建立的懸浮芯片多病原體定量檢測模型，為進一步解決檢測 技術達到準確、快速、簡便、多功能、多指標、高通量、標準化的要求
奠定了J^5出
權利要求
1、一種定量檢測葡萄球菌腸毒素B的蛋白懸浮芯片，其特征在于，所述懸浮芯片由帶熒光素內標的聚苯乙烯編碼微球構成，該微球用可以捕獲相應目標分子的抗體包被，生物素標記所述的抗體，親和素化的熒光藻紅蛋白。
2、 如權利要求l所述的蛋白質懸浮芯片，其特征在于，所述的包被微J泉的抗體可為單抗，也可為多抗。
3、 如權利要求1所述的蛋白質懸浮芯片，其特征在于，懸浮芯片所需的抗體包被量為每孔20-40ng/2500-5000個微球/測試。
4、 如權利要求2所述的蛋白質懸浮芯片，其特征在于，所述生物素化的檢測抗體選自生物素化的兔抗SEB單抗或多抗中的一種或多種。
5、 如權利要求2所述的蛋白質懸浮芯片，其特征在于，選定微球標記的SEB抗體為捕獲抗體，選自生物素標記的SEB抗體作為^r測抗體，用于雙抗體夾心模式的懸浮芯片檢測葡萄球菌腸毒素。
6、 一種所述的蛋白質懸浮芯片的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟(l)活化編碼微球，(2)用捕獲抗體包被編碼微球并計數，(3)用生物素標記檢測抗體，(4)清洗液洗滌。
7、 如權利要求6所述的制備方法，其中所述的包被纟敬球的抗體選自兔抗SEB、 SEB單抗、羊抗SEB中的一種或多種。
8、 如權利要求6所述的制備方法，其中所述生物素化的檢測抗體及其用量可以選自6pg-40]ig兔抗SEB、 SEB單抗、羊抗SEB中的一種或多種。
9、 如權利要求6所述的制備方法，其中所述方法中的生物素為羧基活性2的生物素。
10、 一種定量檢測葡萄球菌腸毒素的方法，其特征在于，該方法包括下列步驟(1)用抗葡萄球菌腸毒素抗體包被編碼微球，(2)生物素標記檢測抗葡萄球菌腸毒素抗體，(3)樣品檢測的，其中所述所述的包被微球的抗體選自兔抗SEB、 SEB單抗、羊抗SEB中的一種或多種。
全文摘要
本發明的目的在于可定量檢測細菌毒素的蛋白質懸浮芯片及其制備方法，尤其是適合定量檢測和分析葡萄球菌腸毒素的蛋白質懸浮芯片。本發明的方法靈敏度高、特異性強、建立了新的檢測模式化平臺、檢測能力好、動態范圍寬。
文檔編號G01N33/569GK101498720SQ200910078818
公開日2009年8月5日 申請日期2009年3月4日 優先權日2009年3月4日
發明者姜永強, 孫肖紅, 宇 楊, 靜 王, 胡孔新, 謝士嘉 申請人:中國檢驗檢疫科學研究院