專利名稱：中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及中藥的檢測方法，尤其是一種中藥制劑四紅丹的 質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
四紅丹由當(dāng)歸、大黃、地榆(炭)、槐花(炭)、當(dāng)歸(炭)、大黃(炭)組成，制備 方法以上六味，粉碎成細(xì)粉。過篩，混勻。每IOOg粉末加煉蜜140 160g制成大蜜丸，即 得，主要功能清熱止血，適用于吐血，衄血，便血，婦女崩漏下血。目前國際上雖然尚無植物類中藥的國際標(biāo)準(zhǔn)，但是美國、歐盟、我國及傳統(tǒng)出口中 藥的東南亞地區(qū)均有提高中藥標(biāo)準(zhǔn)的趨勢，在此情況下，需要提出適合我國產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo) 準(zhǔn)以適應(yīng)國際標(biāo)準(zhǔn)，我國有數(shù)千年的中藥使用歷史，世界各國在制訂相應(yīng)的植物藥產(chǎn)品質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)中多參考我國的中藥標(biāo)準(zhǔn)，所以完善、提高中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更已經(jīng)迫在眉睫。據(jù)檢索，目前沒有關(guān)于四紅丹的質(zhì)量控制方法的相關(guān)專利，現(xiàn)有專利主要集中在 四紅丹的重要配方和方法上。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種能夠定性、定量檢測藥物 成分的中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法，本方法具有檢測手段簡單、檢測結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的—種中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法，步驟是(1)顯微鑒別；(2)以當(dāng)歸為對照藥材，薄層色譜法鑒別四紅丹處方中是否含有當(dāng)歸成分；(3)以大黃酚和大黃素為對照品，薄層色譜法鑒別四紅丹處方中是否含有大黃成 分；而且，所述顯微鑒別的步驟為取四紅丹樣品，置顯微鏡下觀察描述為薄壁細(xì)胞 紡錘形，壁略厚，有極微細(xì)的斜向交錯(cuò)紋理，草酸鈣簇晶大，直徑80 μ m 140 μ m。而且，所述薄層色譜法鑒別四紅丹處方中的當(dāng)歸成分的步驟為①供試品溶液制備取本品5g，剪碎，置于具塞錐形瓶中，加乙醚20ml密塞，振搖， 浸泡過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液；②對照藥材溶液的制備取當(dāng)歸對照藥材0.5g，研細(xì)，置于具塞錐形瓶中，加乙醚 20ml密塞，振搖，浸泡過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶 液；③薄層條件及結(jié)果薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 4μ 1，分別點(diǎn)于同 一含羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以正己烷乙酸乙酯=4 1為展開劑，展 開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，檢測供試品色譜中在與對照藥材色譜相應(yīng)的位 置上，是否顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，進(jìn)而確定樣品中是否含有當(dāng)歸成分。
而且，所述薄層色譜法鑒別四紅丹處方中大黃成分的方法為①供試品溶液制備取本品5g，剪碎，置于具塞錐形瓶中，加乙醚20ml密塞，振搖， 浸泡過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液；②對照品溶液的制備分別取大黃酚和大黃素對照品，加乙酸乙酯適量制成每 Iml各含Img的混合溶液，作為對照品溶液；③對照藥材溶液的制備取大黃對照藥材0. 2g，加乙醚20ml密塞，振搖，浸泡過 夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶液；④薄層條件及結(jié)果薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4 μ 1，分別點(diǎn)于同一 含羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 5 1上層 溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材 和對照品薄層色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，進(jìn)而確定樣品中是否含有大黃 成分。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是本發(fā)明的檢測方法在《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第三冊原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增 加了處方中當(dāng)歸、大黃的顯微及薄層鑒別方法，修訂后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法，提高了四紅丹 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，進(jìn)一步確保產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量和療效，對促進(jìn)產(chǎn)品銷售、增加產(chǎn)品的市場競 爭力、保證患者用藥安全意義重大。
圖1為本發(fā)明供試樣品中當(dāng)歸的薄層色譜圖在紫外光燈(365nm)檢視圖，從左 至右依次為陰性樣品，樣品(批號200601)，當(dāng)歸對照藥材(中檢所)，樣品(批號 20060 ，樣品(批號=200603)；圖2為本發(fā)明供試樣品中大黃檢測中的薄層色譜圖，從左至右依次為陰性樣品， 樣品(批號200601)，樣品(批號20060 ，大黃酚和大黃素對照品(中檢所)，大黃對照 藥材(中檢所)，樣品(批號200603)；圖3為本發(fā)明供試樣品中大黃檢測中的薄層色譜圖(均為水解提取)，從左至右依 次為陰性樣品，樣品(批號200601)、樣品(批號200602)、樣品(批號200602)均為直 接提取，大黃酚和大黃素對照品(中檢所)，大黃對照藥材(中檢所)，樣品(批號200601)、 樣品(批號200602)、樣品(批號=200602)；圖4為本發(fā)明大黃含量測定中大黃素、大黃酚對照品色譜圖；圖5為本發(fā)明大黃含量測定中供試品溶液I的液相色譜圖；圖6為本發(fā)明大黃含量測定中供試品溶液II的液相色譜圖；圖7為本發(fā)明大黃含量測定中供試品溶液III的液相色譜圖；圖8為本發(fā)明大黃含量測定中供試品溶液IV的液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)一步說明，下述實(shí)施例是說明性的，不是限定性的， 不能以下述實(shí)施例來限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法，其方法的步驟是
(1)顯微鑒別取本品，置顯微鏡下觀察薄壁細(xì)胞紡錘形，壁略厚，有極微細(xì)的斜向交錯(cuò)紋理。草 酸鈣簇晶大，直徑80 μ m 140 μ m。(2)采用薄層色譜法，以當(dāng)歸為對照藥材，鑒別四紅丹處方中的當(dāng)歸成分。①供試品溶液制備取本品5g，剪碎，置于具塞錐形瓶中。加乙醚20ml密塞，振搖， 浸泡過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。②對照藥材溶液的制備取當(dāng)歸對照藥材0. 5g，研細(xì)，置于具塞錐形瓶中。加乙醚 20ml密塞，振搖，浸泡過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶 液。③陰性樣品溶液的制備按處方配比，取除當(dāng)歸的其他五味，按原藥的制備工藝制 成丸劑，再按本步驟①的供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。④薄層條件及結(jié)果照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)， 吸取上述三種溶液各2 4μ 1，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以 正己烷乙酸乙酯=4 1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試 品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾，結(jié) 果見圖1。(3)采用薄層色譜法，以大黃酚和大黃素為對照品，鑒別四紅丹處方中大黃成分。①供試品溶液制備取本品5g，剪碎，置于具塞錐形瓶中。加乙醚20ml密塞，振搖， 浸泡過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。②對照品溶液的制備分別取大黃酚和大黃素對照品，加乙酸乙酯適量制成每 Iml各含Img的混合溶液，作為對照品溶液。③對照藥材溶液的制備取大黃對照藥材0. 2g，加乙醚20ml密塞，振搖，浸泡過 夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶液。④陰性樣品溶液的制備按處方配比，取除大黃的其他五味，按原藥的制備的工藝 制成丸劑，再按本步驟①中供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。⑤薄層條件及結(jié)果照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)， 吸取上述四種溶液各4μ1，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以石 油醚(30 60°C)甲酸乙酯甲酸=15 5 1上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干， 置紫外光燈OMnm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品薄層色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品溶液無干擾，結(jié)果見圖2，(直接提取)。⑥另采用水解方式供試品溶液制備取本品5g，剪碎，置于具塞錐形瓶中。加甲 醇30ml，振搖，浸泡過夜，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加鹽酸 Iml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次15ml，合并取乙醚液，揮干，殘 渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作為供試品溶液。其他均使用直接提取的對照藥材、對照品、陰 性樣品溶液及薄層條件，結(jié)果見圖3，由圖3顯示，兩種供試品溶液制備方法結(jié)果相當(dāng)，鑒 于采用乙醚直接提取方法簡單，易操作，且可用鑒別當(dāng)歸用供試品溶液，故未采用水解的方 法。本質(zhì)量控制試驗(yàn)中，申請人還做了以下實(shí)驗(yàn)，但是由于精度和雜質(zhì)的干擾性較大， 沒有納入本質(zhì)量控制方法。
含量測定如下對照品大黃酚和大黃素〔購自中國藥品生物制品檢定所，均供含量測定用(批 號796-200204 大黃酚)，(批號110756-222110)〕，樣品四紅丹(批號200601，200602， 200603，由天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠提供)。①色譜條件色譜柱SCIEN-H0MEC18(250X4. 6mm, 5 μ m)；流動(dòng)相甲 醇0. 01mol/L磷酸=85 15 ；柱溫40°C ；流速1ml/分鐘；檢測波長2Mnm，理論板數(shù) 按大黃素峰計(jì)算不低于3000。②對照品溶液的制備分別取大黃素對照品及大黃酚對照品適量，精密稱定，加甲 醇制成每Iml各含大黃素25. 6 μ g及大黃酚31. 68 μ g的混合溶液，即得，結(jié)果見圖4。③提取方法的考察供試品溶液的制備采用以下方法進(jìn)行了考察。a、取本品1丸，剪碎，精密稱取約5g，精密加入甲醇50ml，稱定重量，搖勻，放置過 夜，超聲處理4小時(shí)，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸 干，殘?jiān)芗?0%乙醇鹽酸=10 125ml，稱定重量，水浴加熱回流4小時(shí)，冷卻，用 30%乙醇鹽酸=10 1補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精取續(xù)濾液10ml，移至分液漏斗中， 加乙醚提取4次00，10，10，5ml)，合并乙醚液，用水20ml洗滌，乙醚液以無水硫酸鈉脫水， 蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇乙酸乙酯=2 1混合液適量使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中并稀釋 至刻度，作為供試品溶液I，結(jié)果見圖5。b、取本品1丸，剪碎，精密稱取約5g，精密加入30%乙醇鹽酸=10 150ml，稱 定重量，放置過夜，水浴加熱回流4小時(shí)，冷卻，用30%乙醇鹽酸=10 1補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，分別精取續(xù)濾液10ml，兩份，移至分液漏斗中，分別加入三氯甲烷及乙醚加 提取4次00，10，10，5ml)，分取三氯甲烷及乙醚提取液，各用水20ml洗滌，分取三氯甲烷及 乙醚液，均用無水硫酸鈉脫水，分別蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇乙酸乙酯=2 1混合液適量 使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中并稀釋至刻度，作為供試品溶液II (三氯甲烷)，結(jié)果見圖6 ；供 試品溶液III (乙醚液)結(jié)果見圖7。C、取本品1丸，剪碎，精密稱取約2. 5g，加2. 5mol/L硫酸溶液25ml，加熱回流1小 時(shí)，冷卻，加三氯甲烷30ml，加熱回流1小時(shí)，冷卻，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌 容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲 烷液，以無水硫酸鈉脫水，三氯甲烷液回收溶劑至干，殘?jiān)訜o水乙醇乙酸乙酯=2 1 混合液適量使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中并稀釋至刻度，作為供試品溶液IV，結(jié)果見圖8。上述提取方法的色譜圖顯示結(jié)果相差較大，可能與處方中四味藥材炮制有關(guān)，本 品是由六位藥材組成，其中四味藥材采用“炭”法炮制，經(jīng)炮制后的藥材量占總處方用量的 61.9%。上述供試品溶液制備方法顯示，初提取液分別采用甲醇、27%酸性乙醇、酸水溶液 提取。圖5、圖6、圖7顯示，使用甲醇、27%酸性乙醇所需成分未能被提出。圖8顯示，酸 水溶液提取后的供試品溶液，在與大黃酚和大黃素對照品色譜保留時(shí)間相一致的位置上， 雖然有色譜峰出現(xiàn)，但含量測定結(jié)果的重現(xiàn)性較差(同批樣品大黃酚和大黃素之和分別為 1. 10mg/g,0. 79mg/g)，可能與“炭”吸附強(qiáng)度有關(guān)。另供試品溶液制備過程中，乳化現(xiàn)象較 為嚴(yán)重。鑒于上述結(jié)果，故未將大黃含量測定結(jié)果列入正文中。
權(quán)利要求
1.一種中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于其方法的步驟是(1)顯微鑒別；(2)以當(dāng)歸為對照藥材，薄層色譜法鑒別四紅丹處方中是否含有當(dāng)歸成分；(3)以大黃酚和大黃素為對照品，薄層色譜法鑒別四紅丹處方中是否含有大黃成分；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述顯微鑒 別的步驟為取四紅丹樣品，置顯微鏡下觀察描述為薄壁細(xì)胞紡錘形，壁略厚，有極微細(xì) 的斜向交錯(cuò)紋理，草酸鈣簇晶大，直徑80 μ m 140 μ m。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述薄層色 譜法鑒別四紅丹處方中的當(dāng)歸成分的步驟為①供試品溶液制備取本品5g，剪碎，置于具塞錐形瓶中，加乙醚20ml密塞，振搖，浸泡 過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液；②對照藥材溶液的制備取當(dāng)歸對照藥材0.5g，研細(xì)，置于具塞錐形瓶中，加乙醚20ml 密塞，振搖，浸泡過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶液；③薄層條件及結(jié)果薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 4μ1，分別點(diǎn)于同一含 羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以正己烷乙酸乙酯=4 1為展開劑，展開，取 出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，檢測供試品色譜中在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上， 是否顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，進(jìn)而確定樣品中是否含有當(dāng)歸成分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述薄層色 譜法鑒別四紅丹處方中大黃成分的方法為①供試品溶液制備取本品5g，剪碎，置于具塞錐形瓶中，加乙醚20ml密塞，振搖，浸泡 過夜，傾取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液；②對照品溶液的制備分別取大黃酚和大黃素對照品，加乙酸乙酯適量制成每Iml各 含Img的混合溶液，作為對照品溶液；③對照藥材溶液的制備取大黃對照藥材0.2g，加乙醚20ml密塞，振搖，浸泡過夜，傾 取乙醚液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶液；④薄層條件及結(jié)果薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μ1，分別點(diǎn)于同一含羧 甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 ·5 1上層溶液 為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對 照品薄層色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，進(jìn)而確定樣品中是否含有大黃成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥制劑四紅丹的質(zhì)量控制方法，步驟是首先進(jìn)行顯微鑒別；其次采用薄層色譜法，鑒別四紅丹處方中是否含有當(dāng)歸、大黃成分。本發(fā)明的檢測方法在《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第三冊原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了處方中當(dāng)歸、大黃的顯微及薄層鑒別方法，修訂后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法，提高了四紅丹質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，進(jìn)一步確保產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量和療效，對促進(jìn)產(chǎn)品銷售、增加產(chǎn)品的市場競爭力、保證患者用藥安全意義重大。
文檔編號G01N30/90GK102038779SQ20091007096
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日
發(fā)明者宋立平, 朱小蘭, 江永萍, 金兆祥 申請人:天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠