專利名稱：一種用于固相實驗的u型板的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于固相實驗的u型板。
背景技術：
抗人球蛋白實驗在紅細胞系統中是檢査紅細胞不規則抗體的一種有用的檢測方法。本 實驗分為直接和間接兩種。直接實驗主要檢查紅細胞上是否有不規則抗體，而間接實驗是 檢查血清中有無游離的不規則抗體。
不規則抗體指不符合ABO血型系統Landsteiner法則的血型抗體，即抗A抗B以外的 血型抗體， 一般因為輸血、妊娠等發生同種免疫而產生，多屬于IgG類抗體。它是一種 7S球蛋白，分子量小，分子長度只250A 與紅細胞相應抗原結合后，在鹽水介質中只能 與紅細胞結合而不出現肉眼可見的凝集反應，因而也被稱為不完全抗體。此類抗體必須通 過特殊的方法如抗人球蛋白法、聚凝胺法、酶法，才能使致敏細胞發生凝集反應，從而檢 出此類抗體。
如果受血者體內存在有臨床意義的抗體，就會破壞輸入的含有相應抗原的紅細胞，發 生溶血性輸血反應，影響紅細胞輸注的療效，重者危及患者生命。孕婦體內如含有不規則 抗體，則會引起新生兒溶血病，產生核黃疸等其他嚴重影響新生兒發育的綜合癥，給家庭 和社會帶來沉重的負擔，甚至引起新生兒死亡。因此，開展不規則抗體篩查是十分必要的。
進行交叉配血時，只進行鹽水介質交叉配血會漏檢不完全抗體，這將嚴重威脅輸血安全。
歐美等許多發達國家已將不規則抗體篩査作為常規檢測，在我國，衛生行政部門還沒 有相關的要求。臨床上，醫院及血站僅是對少數患者進行抗體篩檢。對獻血者的抗體篩檢 更是空白，存在極大的安全隱患。
現在血型血清學上廣泛應用的抗人球蛋白試驗為試管法。此方法屬于血凝試驗，包括三個步驟-
1. 致敏抗體與檢測細胞一起孵育，抗體Fab段與檢測細胞上的相應表位發生免疫 反應，抗體結合檢測細胞，但不出現凝集。
2. 洗滌以除去反應體系中的未結合抗體。 一般采用離心法。如果洗滌不徹底，殘 留的游離抗體會消耗后一步加入的抗人球蛋白，減弱檢出效果。
3. 加入抗人球蛋白試劑，離心。觀察凝集強度。 現有抗人球蛋白試驗方法存在下列不足
1. 使用新鮮紅細胞，而新鮮紅細胞的最大缺點是保存期短，常常因為產品過期造成 浪費。
2. 操作過程繁瑣，每次只能檢測少量的標本，很難開展大量樣本的檢測。
3. 技術要求高， 一般由實驗室高年資技術人員操作或示范，技術普及難度大。
4. 結果判讀存在主觀性，不同操作人員可能會判讀出不同的結果，難以標準化。
5. 觀察結果時間短，實驗結果無法保存， 一旦出現醫療糾紛難以判定責任。
6. 實驗過程為手工操作，難以自動化。
現在應用的固相法紅細胞抗體檢測試劑一般采用普通96孔U型板，通常為U型底， 在進行檢測時，將待檢血清與固定在板底部的紅細胞孵育，經過洗滌以除去游離抗體，然 后加入指示紅細胞(抗人IgG包被的紅細胞)，離心后觀察結果。此處洗滌的過程非常關 鍵，既要洗滌除去游離抗體，又不能破壞板底所鋪的紅細胞單層，因此只能手工洗滌或采 用專用洗板機。因此，現有的固相微孔板方法依然存在操作繁瑣，效率低下并易出現假陰 性檢測結果的缺點。
發明內容
本發明的目的是克服上述試管法及固相微孔板法的缺點，提供一種高通量、操作簡便、 檢測精度高的用于固相實驗U型板。
結合附圖，說明如下
一種用于固相實驗的U型板，包括作為分離腔的一個U型腔體1，它還包括一個反應腔，所說的反應腔為底部設有數個微孔3的能封閉套裝在U型腔體1上的U型腔體2。 所述的U型腔體1的底部包被有抗人球蛋白，在包被好的U型腔體1內置有高密度
介質隔離液，高密度介質隔離液的界面低于所述U型腔體2的底端。
所述的高密度介質隔離液為pH7.2， 0.01M磷酸鹽緩配方沖液配制的25%蔗糖與10%
泛影葡胺等體積混合液，高密度介質隔離液的密度介于紅細胞密度與血漿密度之間。 本發明的工作原理是
作為分離腔的U型腔體1底部包被有抗人球蛋白。如果紅細胞上結合有不完全抗體， 就會被包被在反應板底部的抗人球蛋白捕獲，形成鋪層結構。未結合不完全抗體的紅細胞， 則會在離心力的作用下聚集在U型板的尖底部，形成紅細胞扣。
作為分離腔的U型腔體1內填充高密度介質隔離液。所填充的高密度介質隔離液的密 度介于紅細胞密度與血漿密度之間。在離心力的作用下，紅細胞可以穿過隔離液到達結合 區，而血漿則分布于隔離液之上，不會進入隔離液，也不會與板底部結合區包被的抗人球 蛋白結合。
由聚丙乙烯或聚苯乙烯制成的底部帶有數個微孔的U型腔體2作為反應腔。紅細胞與 血漿加入此腔中并在此腔中孵育反應，從而與其下方的分離腔隔離。反應完畢，在離心力 作用下，紅細胞穿過小孔進入分離腔，血漿仍停留在反應腔或在隔離液上方。
本發明的有益效果采用本發明U型板，具有操作簡便、檢測精度高、便于實現自動 化批量實驗。
具體實施例方式
圖1為一種用于固相實驗的U型板的結構圖2為一種用于固相實驗的U型板的俯視圖。
1.作為分離腔的U型腔體2.作為反應腔的U型腔體 3.微孔 下面結合附圖及實施例對本發明作進一步詳細闡述。
一種用于固相實驗的U型板，包括作為分離腔的一個U型腔體1，它還包括一個反 應腔，所說的反應腔為底部設有數個微孔3的能封閉套裝在U型腔體1上的U型腔體2。所述的U型腔體2的底部設有5~9個微孔3，孔徑為0.3~0.5mm。 所述的U型腔體1的內徑6.8mm、外徑8.0mm、高12mm。 所述的U型腔體2的內徑5.7mm、外徑7.7mm、高12mm。 所述的U型腔體1的底部包被有抗人球蛋白，在包被好的U型腔體1內置有高密度
介質隔離液，高密度介質隔離液的界面低于所述U型腔體2的底端。
所述的高密度介質隔離液為pH7.2， 0.01M磷酸鹽緩配方沖液配制的25%蔗糖與10%
泛影葡胺等體積混合液，高密度介質隔離液的密度介于紅細胞密度與血漿密度之間。 用于檢測紅細胞抗體的U型板制備方法如下
1. 在作為分離腔的U型腔體1的底部包被抗人球蛋白。
用pH9.6， 0.05M碳酸鹽緩沖液將純化的抗人球蛋白配制成10ug/ml濃度，加入到U 型腔體l中，置4'C冰箱中包被過夜，次日取出，用含有0.05%吐溫的pH7.2， O.OIM磷酸 鹽緩沖液洗滌4次，扣干，置-20'C備用。
2. 隔離液的填充。
在包被好的U型腔體1中加入隔離液pH7.2， 0.01M磷酸鹽緩配方沖液配制的25% 蔗糖與10%泛影葡胺等體積混合液。
3. 安裝作為反應腔的底部設有數個微孔的U型腔體2。 將U型腔體2緊密卡在U型腔體1上端，然后用熱合封口機封口。 本發明可用于紅細胞、血小板、白細胞等血液細胞抗體的檢測及細菌、病毒病原微生
物和可深性蛋白抗原抗體的檢測。 實施例1
本發明用于固相實驗的U型板的應用。 一.不完全抗體交叉配血
向主側反應孔中加入受者血漿或血清一滴(50ul)，再加入供者紅細胞一滴(50ul)。 向次側反應孔中加入供者血漿或血清一滴(50iU)，再加入受者紅細胞一滴(50lU)。 37'C孵育20分鐘，然后離心觀察結果，紅細胞平鋪在反應板的底部為陽性，聚集在反應孔的底部形成一個小點為陰性。介于二者之間的為弱陽性。 實施例2
二.紅細胞抗體篩檢，鑒定及證明。
向反應腔中加入待檢血槳或血清一滴(50yl)，再加入試劑紅細胞一滴(50ul), 37 'C孵育20分鐘，然后離心觀察結果，試劑紅細胞平鋪在反應板的底部為陽性，聚集在反 應孔的底部形成一個小點為陰性。介于二者之間的為弱陽性。
碳酸鹽緩沖液配方稱取Na2C03 4.59g NaHC03 2.93g用注射用水將其溶解并定容至1升。
磷酸鹽緩沖液配方稱取NaH2P04 2H20 1.56g、 Na2HP04 3.58g、 NaC L9g用注射用 水將其溶解并定容至l升。
權利要求
1.一種用于固相實驗的U型板，包括作為分離腔的一個U型腔體(1)，其特征在于它還包括一個反應腔，所說的反應腔為底部設有數個微孔(3)的能封閉套裝在U型腔體(1)上的U型腔體(2)。
2. 根據權利要求1所述的一種用于固相實驗的U型板，其特征在于所述的U型腔體(2) 的底部設有5 9個微孔(3)，孔徑為0.3~0.5mm。
3. 根據權利要求1所述的一種用于固相實驗的U型板，其特征在于所述的U型腔體(l) 的內徑6.8mm、外徑8.0mm、高12mm。
4. 根據權利要求1所述的一種用于固相實驗的U型板，其特征在于所述的U型腔體(2)的 內徑5.7mm、夕卜徑7.7mm、高12mm。
5. 根據以上任一權利要求所述的一種用于固相實驗的U型板，其特征在于所述的U型腔 體(l)的底部包被有抗人球蛋白，在包被好的U型腔體(1)內置有高密度介質隔離液，高 密度介質隔離液的界面低于所述U型腔體(2)的底端。
6. 根據權利要求5所述的一種用于固相實驗的U型板，其特征在于所述的高密度介質隔 離液為pH7.2， 0.01M磷酸鹽緩配方沖液配制的25%蔗糖與10%泛影葡胺等體積混合 液，高密度介質隔離液的密度介于紅細胞密度與血漿密度之間。
全文摘要
本發明涉及一種用于固相實驗的U型板，包括作為分離腔的一個U型腔體(1)，它還包括一個反應腔，所說的反應腔為底部設有數個微孔(3)的能封閉套裝在U型腔體(1)上的U型腔體(2)，所述的U型腔體(1)的底部包被有抗人球蛋白，在包被好的U型腔體(1)內置有介于紅細胞密度與血漿密度之間的高密度介質隔離液，高密度介質隔離液的界面低于所述U型腔體(2)的底端。采用本發明U型板，具有操作簡便、檢測精度高、便于實現自動化批量實驗。
文檔編號G01N33/80GK101493470SQ200910066489
公開日2009年7月29日 申請日期2009年1月23日 優先權日2009年1月23日
發明者孔維臣, 孫育昌, 東 李, 勇 李, 李劍波, 王文學, 軍 童, 蔡紅霞, 高大松 申請人:勇 李