專利名稱：一種用于鈾污染檢測的差異表達蛋白標準及運用的制作方法
技術領域：
本發明涉及分子生物學方法檢測環境污染的技術領域，特別是涉及一種用于 鈾污染檢測的差異表達蛋白標準及運用。
背景技術：
傳統的鈾污染及環境中放射性物質的檢測通常采用放射性檢測儀檢測，采用
的是ci、 e、 x、 Y多功能射線檢測儀探頭來檢測放射劑量，這種傳統檢測方法
的缺點是(1)雖然能夠檢測一定劑量的放射源，但是很難區分究竟是哪種放射 性物質；(2)其靈敏度具有一定局限性；(3)檢測時必須近距離接近污染環境， 對檢測人員的身體健康造成威脅。
美洲商陸(尸/ yto/"caj！丄.戶fewm0，又名垂序商陸、十潔商陸。 在中國某地的鈾尾礦上生長著大量的美洲商陸，這表明美洲商陸對重金屬鈾有著 某種耐受機制。生長于鈾尾礦區和對照區中的商陸因處于不同的生長環境，其基 因表達的產物蛋白質必定存在著某些差異。利用這種差異來進行對鈾污染的檢 測，可以很好的解決傳統檢測方法的不足。目前，這種采用分子生物學方法，即 通過分析生物蛋白質來鑒定環境受到鈾污染的方法，是目前研究的重要方向。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是安全、準確檢測鈾污染，提供了用于鈾污染檢 測的差異表達蛋白標準，還提供了一種蛋白質水平上的檢測鈾污染的方法。
本發明采用的技術方案 一種用于鈾污染檢測的差異表達蛋白標準，為5 個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標準蛋白斑點質譜圖，如圖4一圖8所示。
所述的5個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標準蛋白斑點質譜圖的獲取方法
為
(l)選取鈾尾礦區的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的根部作為材料，
在-196。C液氮冷藏鈾尾礦區的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的根部組織；(2) 采用飽和酚-醋酸銨/甲醇沉淀法制備全蛋白；
(3) 采用2D電泳方法展示全蛋白；
(4) 通過對2種2D電泳圖譜比對分析；
(5) 篩選差異表達蛋白斑點對差異表達蛋白斑點進行膠內酶解、抽提酶 解肽段、質譜分析，最后得到5個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標準蛋白斑點質譜圖。
所述的用于鈾污染檢測的差異表達蛋白標準在鈾污染檢測中的運用。
作為優選的檢測方法是
U)選取待檢測環境中的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的根部組織 作為材料，在-196'C液氮冷藏鈾尾礦區的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的 根部組織；
(2) 采用飽和酚-醋酸銨/甲醇沉淀法制備全蛋白；
(3) 采用2D電泳方法展示全蛋白，以考馬斯亮藍方法染色，如圖1、圖2;
(4) 通過對2種2D電泳圖譜比對分析；
(5) 篩選差異表達蛋白斑點(圖3)，對差異表達蛋白斑點進行膠內酶解 (Trypsin, 20個小時)、抽提酶解肽段、質譜分析，最后得到待檢測環境中美洲
商陸的差異表達的蛋白斑點質譜圖，然后與5個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標 準蛋白斑點質譜圖進行相似性比對；
(6) 作出結論準確鑒定環境是否遭到鈾污染。
本發明的有益效果以5個植物美洲商陸鈾誘導下差異表達標準蛋白斑點 質譜圖作為檢測鈾污染的標準，可以準確的檢測環境中的鈾污染，并且可以遠離 污染環境進行安全檢測，靈敏度高，解決了污染區周邊環境鈾污染難以準確檢測 的問題。
下面結合附圖和具體實施例進本發明作進一步說明。
圖1為環境中的美洲商陸2D電泳圖譜；
圖2為非污染對照區美洲商陸2D電泳圖譜；
圖3為環境中的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸差異2D電泳圖譜；
4圖4為已鑒定的鈾污染差異表達蛋白斑點1191的質譜圖； 圖5為已鑒定的鈾污染差異表達蛋白斑點964的質譜圖； 圖6為已鑒定的鈾污染差異表達蛋白斑點974的質譜圖； 圖7為已鑒定的鈾污染差異表達蛋白斑點784的質譜圖； 圖8為已鑒定的鈾污染差異表達蛋白斑點1163的質譜圖。 具體的實施方式 實施例l
鈾污染檢測差異表達蛋白標準的制作
(1) 采集鈾尾礦區的美洲商陸和非污染對照區美洲商陸的根，在-196'C液氮 冷藏鈾尾礦區的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的根部組織；
(2) 采用飽和酚-醋酸銨/甲醇沉淀法制備全蛋白；
(3) 采用等電聚焦和聚丙烯酰胺相結合的2D電泳方法展示全蛋白，以考馬斯 亮藍方法染色；
(4) 染色后的膠塊以UMAX Power Look 2100型凝膠圖像掃描儀以600 dpi 進行掃描，所得圖像以PDQuest軟件進行圖像分析；
(5) 篩選差異表達蛋白斑點，對差異表達蛋白斑點進行膠內酶解(Trypsin, 20 個小時)、抽提酶解肽段、質譜分析，最后得到5個美洲商陸鈾誘導差異表達的 標準蛋白斑點質譜圖，如圖4一圖8所示。
實施例2
對待檢測環境的植物美洲商陸鈾污染的檢測方法
采集待檢測環境中的美洲商陸和非污染對照區美洲商陸的根，在-196'C液氮 冷藏待檢測環境中的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的根部組織；其它步驟 同施例1，最后將得到的差異表達蛋白斑點質譜圖與己鑒定過的5個鈾誘導差異 表達的標準蛋白斑點質譜圖進行相似性比對，從而準確鑒定環境是否遭到鈾污
權利要求
1、一種用于鈾污染檢測的差異表達蛋白標準，為5個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標準蛋白斑點質譜圖，如圖4、圖5、圖6、圖7、圖8所示。
2、 權利要求1所述的5個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標準蛋白斑點質譜 圖的獲取方法為(1) 選取鈾尾礦區的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的根部作為材料， 在-196t:液氮冷藏鈾尾礦區的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的根部組織；(2) 采用飽和酚-醋酸銨/甲醇沉淀法制備全蛋白；(3) 采用2D電泳方法展示全蛋白；(4) 通過對2種2D電泳圖譜比對分析；(5) 篩選差異表達蛋白斑點對差異表達蛋白斑點進行膠內酶解、抽提酶 解肽段、質譜分析，最后得到5個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標準蛋白斑點質譜圖。
3、 權利要求1或2所述的用于鈾污染檢測的差異表達蛋白標準在鈾污染檢 測中的運用。
4、 根據權利要求3所述的用于鈾污染檢測的差異表達蛋白標準在鈾污染檢 測的運用，其方法是(1) 選取待檢測環境中的美洲商陸和非污染對照區域美洲商陸的根部組織作為材料，在-196'C液氮冷藏待檢測環境中的美洲商陸和非污染對照區域美洲商 陸的根部組織；(2) 采用飽和酚-醋酸銨/甲醇沉淀法制備全蛋白；(3) 采用2D電泳方法展示全蛋白；(4) 通過對2種2D電泳圖譜比對分析；(5) 篩選差異表達蛋白斑點對差異表達蛋白斑點進行膠內酶解 (Trypsin, 20個小時)、抽提酶解肽段、質譜分析，最后得到待檢測環境中美洲 商陸的差異表達的蛋白斑點質譜圖，然后與5個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標 準蛋白斑點質譜圖進行相似性比對，從而準確鑒定環境是否遭到鈾污染。
全文摘要
本發明公開的用于鈾污染檢測的差異表達蛋白標準，為5個美洲商陸鈾誘導下差異表達的標準蛋白斑點質譜圖，以該5個植物美洲商陸鈾誘導下差異表達的標準蛋白斑點質譜圖為檢測鈾污染的標準，可以準確的檢測環境中的鈾污染，并且可以遠離污染環境進行安全檢測，靈敏度高，解決了污染區周邊環境鈾污染難以準確檢測的問題。
文檔編號G01N27/62GK101661017SQ200910044390
公開日2010年3月3日 申請日期2009年9月22日 優先權日2009年9月22日
發明者濤 馮, 璐 肖, 高利臣 申請人:湖南科技大學