專利名稱：：降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測方法
技術領域：
：本發明涉及一種中成藥中非法添加化學藥物的檢測方法，更具體地說，本發明涉及一種降糖中成藥中非法添加降糖化學藥物的檢測方法。
背景技術：
：降糖中成藥一般含人參、黃芪等中藥而不含降糖西藥，但有的降糖中成藥中非法添加了磺酰脲類西藥，如格列齊特，患者在不知情之下服用了添加有降糖西藥的降糖中成藥后，增大了副作用和風險性。目前，降糖中成藥中所含的降糖西藥通常采用薄層色譜法或高效液相色譜法進行檢測，但這些方法需要額外的儀器設備，而且耗時長(薄層色譜法需時12小時，高效液相色譜法需時34小時)，因此在現場監督檢查時并不適用。為此，建立一種快速、簡單、靈敏、可靠、特異性強的降糖中成藥中非法添加降糖化學藥物的檢測方法，具有十分重要的社會意義。本發明利用磺酰脲類降糖西藥——格列齊特的理化性質，建立了一種全新的降糖中成藥中所含格列齊特的檢測方法，具有快速、簡單以及特異性強等優點，克服了上述色譜法的各種缺陷。
發明內容本發明的目的在于提供一種降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測方法。本發明是通過以下技術方案實現的一種降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測方法，包括以下步驟1)待測樣品的處理；2)經處理的待測樣品用有機溶劑進行提取，得到待測樣品的提取液；3)所得到的提取液中加入堿溶液進行萃取，取堿溶液層萃取液作為供試品溶液；4)取部分供試品溶液，滴入三硝基苯酚飽和水溶液，進行化學反應I;5)另取部分供試品溶液，滴入碘化汞鉀試液，進行化學反應II;6)檢測結果的判斷化學反應I和n均產生沉淀或渾濁，則判斷為待測樣品中含有格列齊特。步驟1)所得到的經處理的待測樣品用有機溶劑進行提取前，先滴入少量堿溶液。3本發明所述的有機溶劑為與水不相互溶并且對格列齊特具有良好溶解性的有機溶劑，包括三氯甲垸、二氯甲烷、環己烷等，其中優選的是三氯甲烷。本發明所述的堿溶液選自NaOH溶液或KOH溶液。所述堿溶液的濃度為0.14mol/L0.18mol/L，其中優選的是0.15mol/L。步驟1)所述的待測樣品的處理包括以下方法-片劑壓碎，取粉末；丸劑搗碎，取粉末；膠囊劑直接取內容物；顆粒劑研細，取粉末。步驟2)所得到的提取液在加入堿溶液進行萃取前，先用孔徑為0.45pm的有機系微孔濾膜進行過濾。在步驟3)中加入堿溶液進行萃取時，堿溶液與有機溶劑的體積比為l:1。步驟3)所得到的供試品溶液在進行步驟4)和步驟5)所述的化學反應前，先用孔徑為0.45pm的有機系微孔濾膜進行過濾。在步驟4)中，供試品溶液與三硝基苯酚飽和水溶液的體積比為l:1.251:3，其中優選的是l:21:3。在步驟5)中，供試品溶液與碘化汞鉀試液的體積比為l:0.31:1，其中優選的是l:0.6。由于中成藥中含有大量色素，其成分多為水溶或醇溶，用水提、醇提均有色素干擾，而本發明優選三氯甲垸進行提取，既能有效地提取出格列齊特，又能除去大量色素的干擾。此外，由于多數降糖中成藥都含有地黃等粘性成分，直接用三氯甲烷進行提取，提取液難以與藥粉分離，但滴入少量堿溶液可使提取液易于與藥粉分離。磺酰脲類降糖西藥，如格列齊特、格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等，由于分子中含有脲的結構，可與三硝基苯酚反應，形成黃色混濁或沉淀，而其它非磺酰脲類降糖西藥，如鹽酸二甲雙胍、鹽酸苯乙雙胍、鹽酸吡格列酮、鹽酸羅格列酮、瑞格列奈、羅格列酮、馬來酸羅格列酮等，并不能與三硝基苯酚試劑反應形成混濁或沉淀。因此，當步驟4)所述的化學反應I產生黃色沉淀或渾濁時，即可判斷待測樣品中含有磺酰脲類降糖西藥。再者，由于格列齊特為含N雜環化合物，可與碘化汞鉀反應，產生白色混濁或沉淀，而其它常見的磺酰脲類降糖西藥，如格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等，均不能與碘化汞鉀反應形成混濁或沉淀。因此，當步驟5)所述的化學反應II產生白色沉淀或渾濁時，即可進一步判斷待測樣品中含有格列齊特。本發明所述的降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測方法既能有效地提取出格列齊特，又能除去大量色素的干擾；既形成了有顏色的沉淀反應，又可在短時間內完成，符合"快檢法"的要求，可作為現場監督檢査時使用。此外，本發明采用了兩個特異性強的化學反應作為檢測手段，具有靈敏、可靠等優點。另外，《中國藥典》2005年版第二部第595頁"格列齊特"項下的鑒別方法是將格列齊特溶解于吡啶中，再滴加CuS04試液，使形成絡合物產生藍紫色。但該鑒別方法存在兩個缺點1、吡啶有特殊的嗅氣，污染實驗室空間使實驗人員難以承受；2、篩選性不強，格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等也可與CuS04試液產生藍紫色。本發明所述的檢測方法同樣可以用于格列齊特的常規鑒別將格列齊特溶解于0.15mol/LNaOH溶液中，分別滴入三硝基苯酚飽和水溶液和碘化汞鉀試液，兩者均產生沉淀或渾濁即可鑒別為格列齊特。這一方法能夠克服目前的鑒別方法的缺陷，有利于完善《中國藥典》載錄的鑒別方法。具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。試驗~":取下述表1中樣品編號為112的降糖西藥各一片，壓成粉末后分別置10m該ij度試管中，各加入2ml0.15mol/L的NaOH溶液。振搖或超聲處理10分鐘，然后靜置5分鐘，必要時可進行離心。分別用注射器吸取上清液，然后用0.45pm的有機系微孔濾膜進行過濾。各取0.8ml濾液，分別滴入lml三硝基苯酚飽和水溶液，進行化學反應I。試驗結果顯示表1中樣品編號為16的藥品均產生明顯的黃色沉淀，樣品編號為712的藥品均未產生任何沉淀。這是因為表2中樣品編號為16的藥品屬于磺酰脲類藥物，可與三硝基苯酚反應形成黃色沉淀，而樣品編號為712的藥品均不屬于磺酰脲類藥物，所以不會產生任何沉淀。取0.15mol/LNaOH溶液2ml，置試管中，然后滴入lml三硝基苯酚飽和水溶液，未產生任何沉淀，說明試劑本身對試驗無干擾。試驗二取下述表1中樣品編號為16的降糖西藥各一片，壓成粉末后分別置10m該lj度試管中，各加入2ml0.15mol/L的NaOH溶液。振搖或超聲處理10分鐘，然后靜置5分鐘，必要時可進行離心。分別用注射器吸取上清液，然后用0.45tim的有機系微孔濾膜進行過濾。各取0.8ml濾液，分別滴入0.4ml碘化汞鉀試液，進行化學反應II。試驗結果顯示表l中樣品編號為l的藥品(格列齊特片)產生明顯的白色沉淀，樣品編號為26的藥品均未產生任何沉淀。這是因為格列齊特是含N雜環化合物，可與碘化汞鉀反應形成白色沉淀。取0.15mol/LNaOH溶液2ml，置試管中，然后滴入0.4ml碘化汞鉀試液，未產生任何沉淀，說明試劑本身對試驗無干擾。表1降糖西藥樣品<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>試驗三分別取下述表2中樣品編號為116的降糖中成藥，按以下方法進行處理片劑取l片(0.3g0.5g)，除去包衣，壓碎，取粉末；丸劑取0.5g，搗碎，取粉末；膠囊劑取l粒(0.3g0.5g)，除去囊殼，直接取內容物；顆粒劑取0.5g，研細，取粉末；將經過處理的待測樣品分別置于10ml具塞刻度試管中，各滴入l滴0.15mol/L的NaOH溶液，再加入6ml三氯甲烷。塞緊試管塞，用力振搖或超聲處理10分鐘，然后靜置35分鐘。分別用注射器吸取4ml提取液，經0.45pm的有機系微孔濾膜過濾后，分別置于另一支10ml具塞刻度試管中，各加入4ml0.15mol/L的NaOH溶液，振搖35次，靜置5分鐘。分別用注射器吸取上層的NaOH溶液層萃取液，然后用0.45Mm的有機系微孔濾膜進行過濾，所得濾液作為供試品溶液。分別取上述的供試品溶液1.6ml，平均分置于兩支試管中，每支試管0.8ml。在其中一支試管中滴入1.5ml2ml三硝基苯酚飽和水溶液，進行化學反應I。若未產生渾濁或沉淀，則可判斷樣品中不含磺酰脲類降糖西藥；若產生明顯的黃色渾濁或沉淀，則可判斷樣品中含有磺酰脲類降糖西藥。在另一支試管中滴入0.5ml碘化汞鉀試液，進行化學反應II，滴入過程和滴完后不能振搖試管。若未產生渾濁或沉淀，則可判斷樣品中不含格列齊特；若產生明顯的白色渾濁或沉淀，則可判斷樣品中含有格列齊特。試驗結果顯示表2中樣品編號為116的藥品在化學反應I和II中均未產生任何沉淀，說明陰性反應均呈陰性，無假陰性。試驗四分別取下述表2中樣品編號為116的降糖中成藥，人為添加40mg的格列齊特片(北京京豐制藥有限公司生產，規程為80mg/片，批號為080302)，然后按照試驗三所述的方法對樣品進行處理。將經過處理的待測樣品分別置于10ml具塞刻度試管中，各滴入l滴0.15mol/L的NaOH溶液，再加入6ml三氯甲烷。塞緊試管塞，用力振搖或超聲處理10分鐘，然后靜置35分鐘。分別用注射器吸取4ml提取液，經0.45pm的有機系微孔濾膜過濾后，分別置于另一支10ml具塞刻度試管中，各加入4ml0.15mol/L的NaOH溶液，振搖35次，靜置5分鐘。分別用注射器吸取上層的NaOH溶液層萃取液，然后用0.45pm的有機系微孔濾膜進行過濾，所得濾液作為供試品溶液。分別取上述的供試品溶液1.6ml，平均分置于兩支試管中，每支試管0.8ml。在其中一支試管中滴入1.5ml2ml三硝基苯酚飽和水溶液，進行化學反應I。若未產生渾濁或沉淀，則可判斷樣品中不含磺酰脲類降糖西藥；若產生明顯的黃色渾濁或沉淀，則可判斷樣品中含有磺酰脲類降糖西藥。在另一支試管中滴入0.5ml碘化汞鉀試液，進行化學反應II,滴入過程和滴完后不能振搖試管。若未產生渾濁或沉淀，則可判斷樣品中不含格列齊特；若產生明顯的白色渾濁或沉淀，則可判斷樣品中含有格列齊特。試驗結果顯示表2中樣品編號為116的藥品在化學反應I中均產生明顯的黃色沉淀，而且在化學反應II中均產生明顯的白色沉淀，說明陽性反應均呈陽性，無假陽性。7表2降糖中成藥樣品<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>試驗結果的統計對上述試驗一至四的試驗結果進行統計，如下表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>靈敏度(Se):Se=A/(A+C)X100%=16+16X100%=100%特異度(Sp):Sp=D/(B+D)X100%=16+16X100%=100%漏檢率(OT):OT=C/(A+C)X100°/。=0+16X100°/o=0誤檢率(MT):MT=B/(B+D)X100%=0+16X100%=0正確率(AR):AR=(A+D)/(A+B+C+D)X100%=32+32X100%=100%正確指數(AI):AI=l—MT-OT=1—0-0=1最低檢測限取表2中的任一樣品，分別添加2mg、4mg、6mg、8mg和10mg的格列齊特(素片)，按照試驗四所述的方法進行試驗。結果顯示格列齊特的添加量為6mg時，化學反應I和化學反應II剛好能產生渾濁。因此，本發明所述檢測方法的最低檢測限為每毫升的堿溶液含0.80mg格列齊特。權利要求1、一種降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測方法，包括以下步驟1)待測樣品的處理；2)經處理的待測樣品用有機溶劑進行提取，得到待測樣品的提取液；3)所得到的提取液中加入堿溶液進行萃取，取堿溶液層萃取液作為供試品溶液；4)取部分供試品溶液，滴入三硝基苯酚飽和水溶液，進行化學反應I；5)另取部分供試品溶液，滴入碘化汞鉀試液，進行化學反應II；6)檢測結果的判斷化學反應I和II均產生沉淀或渾濁，則判斷為待測樣品中含有格列齊特。2、根據權利要求l所述的檢測方法，其特征在于步驟1)所得到的經處理的待測樣品用有機溶劑進行提取前，先滴入堿溶液。3、根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于所述的有機溶劑為與水不相互溶并且對格列齊特具有良好溶解性的有機溶劑。4、根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于所述的有機溶劑選自三氯甲垸、二氯甲烷或環己烷。5、根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于所述的堿溶液選自NaOH溶液或KOH溶液。6、根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于所述堿溶液的濃度為0.14mol/L0.18mol/L。7、根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于步驟2)所得到的提取液在加入堿溶液進行萃取前，先用孔徑為0.45pm的有機系微孔濾膜進行過濾；在步驟3)中加入堿溶液進行萃取時，堿溶液與有機溶劑的體積比為l:1。8、根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于步驟3)所得到的供試品溶液在進行步驟4)和步驟5)所述的化學反應前，先用孔徑為0.45pm的有機系微孔濾膜進行過濾。9、根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于在步驟4)中，供試品溶液與三硝基苯酚飽和水溶液的體積比為l:1.251:3。10、根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于在步驟5)中，供試品溶液與碘化汞鉀試液的體積比為l:0.31:1。全文摘要本發明公開了一種降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測方法，該方法包括以下步驟1)待測樣品的處理；2)經處理的待測樣品用有機溶劑進行提取，得到待測樣品的提取液；3)所得到的提取液中加入堿溶液進行萃取，取堿溶液層萃取液作為供試品溶液；4)取部分供試品溶液，滴入三硝基苯酚飽和水溶液，進行化學反應I；5)另取部分供試品溶液，滴入碘化汞鉀試液，進行化學反應II；6)檢測結果的判斷化學反應I和II均產生沉淀或渾濁，則判斷為待測樣品中含有格列齊特。該方法具有快速、簡單、靈敏、可靠以及特異性強等優點，可作為現場監督檢查時使用。文檔編號G01N31/02GK101581710SQ20091004012公開日2009年11月18日申請日期2009年6月10日優先權日2009年6月10日發明者黃文峰申請人:黃文峰