專利名稱：用于治療結核病的有效的新藥物靶標的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于鑒定治療結核病之新藥物的篩選方法，以及鑒定對這些新藥物具 有抗性之臨床菌株的診斷方法。
背景技術：
結核病(tuberculosis，TB)仍是由單一感染性病原體結核分枝桿菌 (Mycobacterium tuberculosis)引起的首要死因。該病原體已潛伏性感染了三分之一的世 界人口。目前，結核病化學療法由一線和二線藥物的混合劑構成。實際的結核病治療需要 6 9個月，導致嚴重的毒性和抗藥性。從引入抗結核病藥物時開始便不斷出現抗藥性結核 分枝桿菌菌株。事實上，由于具有不尋常的細胞壁，分枝桿菌天然地對大多數常用抗生素具 有抗性。此外，認為遺傳學改變也使其獲得抗藥性。由于結核分枝桿菌菌株對越來越多的 用于治療多重抗藥性結核病(multidrug-resistanttuberculosis，MDR-TB)的二線藥物產 生抗性，因此其已成為世界范圍公共健康的威脅(1)。因而，急需治療結核病的新藥物。特 別地，我們需要具有新作用機制的對抗藥菌株具有活性的新藥物。相應地，還存在鑒定新藥 物靶標的迫切需求(2)。
發明內容
本發明基于以下發現，即來自結核分枝桿菌的蛋白質Rv3790(編碼該蛋白質的 DNA 序列可以從 http://genolist. pasteur. fr/TubercuList (TubercuList 萬維網服務器； Rv3790基因坐標從4162306到4163718)獲得)是苯并噻嗪酮藥物的靶標,苯并噻嗪酮 藥物是一類新的對于治療結核病很有前景的分子(“New thiazinone derivatives, their preparations andtheir use as antibacterials", # ^lJ Φ it ^ PCT/EP2006/004942, 申請人:Leibniz Institute for Natural Product Research and Infection Biology e. V. Hans- Knoll -Institute (HKI))。已顯示Rv3790和Rv3791蛋白質協同作用并且參與阿拉伯半乳聚糖生物合成(3)。 阿拉伯半乳聚糖是分枝桿菌細胞壁的基本組分，其使分枝菌酸外層與肽聚糖共價結合。特 別是，Rv3790和Rv3791兩者對于將十聚異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸阿拉 伯糖都很重要(3)。該發現提示，苯并噻嗪酮藥物干擾分枝桿菌細胞壁的生物合成。值得注 意的是，通過H37Rv菌株中基于Himarl的轉座子誘變發現rv3790_rv3791兩種基因必不可 少⑷。我們發現Rv3790蛋白C端的突變及其過表達賦予結核分枝桿菌、牛分枝桿菌 (Mycobacterium bovis) BCG 和恥垢分枝桿菌(Mycobacteriumsmegmetis)對苯并噻嗪酮衍 生藥物的高度抗性。rv3790野生型和突變基因以及rv3791已被克隆并在大腸桿菌中過表 達。對苯并噻嗪酮衍生物敏感的Rv3790直向同源物已在下列屬中發現諾卡氏菌屬 (Nocardia)、紅球菌屬(Rhodococcus)禾口棒狀桿菌屬(Corynebacterium)0
可以假定實驗室評價苯并噻嗪酮衍生物得到的好結果與已發現的Rv3790抑制性 作用相關。這一證據能夠促使針對Rv3790蛋白作用之藥物的新研究。因此，Rv3790蛋白 和相關的同源物尤其是直向同源物不僅是苯并噻嗪酮類藥物的最佳靶標，而且是發現可用 于對抗由結核分枝桿菌、麻風分枝桿菌(Mycobacterium 1印rae)、諾卡氏菌、紅球菌和棒狀 桿菌引起之感染的新藥物的有前景靶標。因此，本發明的一個目的是提供通過干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成來治療結核病 之候選藥物的篩選方法，所述方法包括如下步驟將過表達使十聚異戊二烯磷酸核糖轉化 為十聚異戊二烯磷酸阿拉伯糖之蛋白質的結核分枝桿菌細胞培養物與候選藥物相接觸，所 述蛋白質可由rv3790基因或其同源物或者其基因產物與Rv3790蛋白相同或同源之任意 人工開放讀碼框所編碼，然后評價在測定試驗中由候選藥物所引起的相比于對照(僅用 PS0DIT-2載體轉化的結核分枝桿菌)的抑制百分數。
優選地，所述測定試驗是抗細菌活性的體外測定試驗或酶促試驗。本發明的另一目的是結核分枝桿菌突變株(第387位的氨基酸半胱氨酸被絲氨酸 或甘氨酸替換)的細胞培養制備物，其用作本發明方法中的對照工具。本發明的另一目的是制備用于酶活性測定和鑒定新藥物之篩選方法的野生型和 突變型重組RV3790蛋白。突變基因編碼的Rv3790型蛋白對干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成之藥物(例如苯 并噻嗪酮藥物)具有抗性這一發現，對于診斷和治療抗藥性分枝桿菌菌株具有重要的啟
7J\ ο因此，本發明的另一目的是提供抗藥性分枝桿菌菌株的快速診斷方法，其包括通 過聚合酶鏈式反應(5)擴增從結核病患者中分離的結核分枝桿菌菌株rv3790基因的內部 區域(其覆蓋第387位密碼子)，以及分析DNA序列中是否存在對干擾阿拉伯半乳聚糖生物 合成之藥物(如苯并噻嗪酮)具有抗性的經鑒定突變。在本發明的上下文中，術語“干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成的藥物”是指通過阻斷 或沉默使十聚異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸阿拉伯糖的蛋白質來阻止十聚 異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸阿拉伯糖的分子，所述蛋白質可由rv3790基 因或其同源物或者其基因產物與Rv3790蛋白相同或同源之任意人工開放讀碼框所編碼。本發明的另一目的是通過本發明篩選方法獲得的Rv3790蛋白的抑制劑，以及通 過使用這樣的抑制劑治療結核病的方法，其中這樣的抑制劑優選地選自苯并噻嗪酮(或代 謝產生苯并噻嗪酮的其它分子)、抗Rv3790的單克隆抗體、反義RNA序列或疫苗。
圖1顯示來自放線菌若干屬的Rv3790直向同源物的多序列比對分析；圖2顯示rv3790基因的DNA序列。發明詳述本發明的第一目的是篩選通過干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成來治療結核病之候 選藥物的方法，所述方法包括將過表達使十聚異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸 阿拉伯糖之蛋白質的結核分枝桿菌細胞培養物(用pS0DIT-2/Rv3790轉化)與候選藥物相 接觸，所述蛋白質可由rv3790基因或其同源物或者其基因產物與Rv3790蛋白相同或同源之任意人工開放讀碼框所編碼，然后評價在測定試驗中由候選藥物所引起的相比于對照的 抑制百分數。優選地，所述測定試驗是抗細菌活性的體外試驗或酶促試驗。在抗細菌試驗中，抑制百分數的評價優選通過測定最低抑制濃度(Minimum Inhibitory Concentration, MIC)來進行。MIC定義為經適當孵育后抑制微生物可見生長 的抗微生物劑的最低濃度。還利用僅轉化pS0DIT-2載體的結核分枝桿菌細胞培養物來測試每種候選藥物。作為對照，可使用異煙胼，其是治療結核病的參照藥物。
作為替代或另外地，可以進行不同的對照實驗，其中不使用任何候選藥物進行治 療，從而得到0%的抑制。評價候選藥物相對于這種對照的抑制百分數。所述將結核分枝桿菌細胞培養物與候選藥物相接觸的步驟可以通過將細胞制備 物置于適當培養基中具有不同藥物濃度的一種或多種候選藥物溶液上來進行。候選藥物通常以能夠使其與細胞培養物良好接觸的形式進行測試。優選地，候選 藥物以溶液或混懸液使用。候選藥物的使用量或濃度取決于若干因素，包括該物質的分子 量、其溶解度等。優選地，使用藥物的兩種或更多種濃度，以便于計算每種候選物的MIC(最低抑制 濃度)。優選地，合適的培養基是Middlebrook 7H11固體培養基(Difco提供)。更優選 地，此培養基補充有油酸、牛血清白蛋白、右旋糖和過氧化氫酶(OADC)。此培養基是針對分 枝桿菌菌株的典型培養基。本發明的另一目的是從大腸桿菌細胞制備用于酶活性測定的野生型和突變型重 組Rv3790蛋白(根據參考文獻3描述的方法)，以及用于鑒定新藥物的篩選方法。酶促 篩選試驗可通過在含有FAD、NAD+、NADPH和經放射性標記的十聚異戊二烯磷酸核糖(DPR) (其通過酶促反應轉化為十聚異戊二烯磷酸-D-阿拉伯糖(DPA))的反應混合物中使用重組 Rv3790酶來進行。此乃對照實驗。在候選藥物存在下重復上述步驟來進行另一實驗。檢測 如此形成的DPA的量，并計算由該候選藥物所引起的酶促反應的抑制百分數。DPA的形成可 根據本領域技術人員所熟知的標準方法進行監測，例如參考文獻(3)中所描述的方法。本發明的篩選方法還可包括對通過體外篩選步驟的候選藥物進行體內活性 評價。此體內評價可按照下述進行，特別是通過對具有血源播散型(hematogenously disseminated)結核病菌株的小鼠施用預定給藥方案、并與對照藥物和安慰劑進行比較來 實施。對照藥物優選是異煙胼。優選地，使用BALB/c小鼠品系。優選地，結核病菌株是結核分枝桿菌H37Rv的毒性培養物，更優選地采用鹽水緩 沖液中5 X IO6CFU (菌落形成單位)的劑量。取決于若干因素，候選藥物的篩選劑量可在寬的劑量范圍內變化，例如從上述體 外測試結果計算出的MIC，或者可針對該化合物確定的LD5tlt5通常，在本發明的體內篩選方 法中所使用的候選藥物劑量低于其LD5tlt5優選地，藥物作為適當緩沖液中的混懸物經口攝入。
優選地，治療按天施用，每周6次。為了確定每種治療方案的效力，記錄小鼠實質器官肉眼可見的變化、來自病原材 料的分枝桿菌在固體培養基上的生長以及器官損傷的細菌鏡檢指數。還進行肝、脾和肺的 肉眼可見變化的定性和定量分析，并計算損傷指數(用四分量表)。本發明的另一目的是提供抗藥分枝桿菌菌株的診斷方法。該診斷方法包括通過聚 合酶鏈式反應(5)擴增從結核病患者中分離的結核分枝桿菌菌株rv3790基因，并且分析 DNA序列中是否存在經鑒定的突變。 優選地，所述方法包括通過聚合酶鏈式反應(5)擴增從結核病患者中分離的結核 分枝桿菌菌株rv3790基因中覆蓋第387位密碼子的內部區域，并且分析DNA序列中是否存 在對干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成的藥物(如苯并噻嗪酮)具有抗性的經鑒定突變(半胱 氨酸對甘氨酸，或半胱氨酸對絲氨酸)。本發明的另一目的是可通過本發明篩選方法獲得的Rv3790蛋白的抑制劑，以及 使用這樣抑制劑治療結核病的方法，其中這些抑制劑優選地選自苯并噻嗪酮(或代謝產生 苯并噻嗪酮的分子)、抗Rv3790的單克隆抗體、反義RNA序列或疫苗。干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成的藥物可通過本發明篩選方法獲得的藥物優選地選自抗Rv3790蛋白的單克隆抗體和 rv3790基因的mRNA反義序列，這些藥物在體外篩選試驗中表現出大于50%的抑制百分數， 和/或在本發明體內抗細菌試驗中表現出大于50%的抑制百分數。在本發明的一個優選實施方案中，所述藥物是抗Rv3790蛋白的單克隆抗體。這樣 的抗體可根據文獻(6，7)中詳細記載的常規方法來獲得。在本發明的另一實施方案中，所述藥物是rv3790基因反義序列。本發明提供了反義寡聚物，其具有有效抑制或阻斷rv3790編碼基因或mRNA序列 表達的序列。使用特異性寡核苷酸來抑制靶基因產物表達的反義技術正發展成為人類疾病 治療的模式(modality)。存在可用于優化反義寡核苷酸拮抗劑的若干選擇標準。例如，選 擇具有50%或更多GC含量的序列是可取的。優選的序列跨越靶蛋白質的AUG起始密碼子， 但是編碼區和5’ UTR區的位點可表現得同樣好。這樣的序列一般長約18 30個核苷酸。 常發現更長的寡聚物在更大程度上抑制靶標，這表明選作反義試劑的第一個寡核苷酸優選 長度約為25聚體。通常，根據這些標準選出3個寡核苷酸序列，并與對照寡核苷酸序列(例 如“反向”寡核苷酸或者反義序列中每隔三個堿基即第四個堿基被隨機化的序列)的拮抗 活性進行比較。因此，制備rv3790的反義寡聚物序列的優選序列是源自rv3790mRNA序列 的一條25聚體序列AUG UUG AGC GUG GGA GCU ACCACU A。rv3790基因的全長序列存放 在 http://Renolist. pasteur. fr/TubercuList/ 中基因名 rv3790 下。完整的 rv3790DNA 序列見圖2。這樣優選的有義序列用于構建在體外比較中作為Rv3790蛋白抑制劑的反義寡 核苷酸劑(以及合適的對照)。在另一實施方案中，還可提供由Rv3790蛋白序列構成的或包括Rv3790蛋白序列 的疫苗。治療方法本發明進一步包括患結核病之患者的治療方法，該方法包括向所述患者施用抗細 菌有效量的藥物，該藥物通過阻斷或沉默使十聚異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸阿拉伯糖的蛋白質來干擾阿拉伯半乳聚糖的生物合成。優選地，所述藥物是苯并噻嗪酮分子或抗Rv3790蛋白的單克隆抗體或rv3790基 因的mRNA反義序列。優選地，所述治療方法還包括施用具有不同于例如異煙胼之作用機制的抗結核分 枝桿菌的抗細菌藥物。取決于抑制劑的活性、疾病嚴重程度、患者的狀況、體重和年齡以及施用途徑，所 述干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成之藥物的施用劑量可在寬的劑量范圍內變化，這將由臨床 醫師來確定。一般地，所述藥物可以每千克體重0. OOlmg 50mg、每天1 4次的劑量施用。還要求保護如上定義的干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成的藥物用于制備治療結核 病之藥物中的用途。
實驗部分確定候選藥物抗分枝桿菌的體外最低抑制活性(MIC)使用結核分枝桿菌菌株的單菌落來接種添加有10% OADC和0. 05 % Tween 80 (Difco)的Middlebrook 7H9。該培養基是針對分枝桿菌菌株的典型培養基。將培養物于37°C孵育，直至指數生長期(0D_nm = 1 — 108CFU/ml)。制備該培 養物的稀釋物并以 IO5CFU鋪板。利用固體培養基評價MIC通過添加量漸增的藥物制備含有10% OADC的Middlebrook 7H11(Difco)瓊脂平 板。優選地，使用藥物的若干濃度，從而計算出每種候選物的MIC。將培養物的稀釋物鋪板 于培養基上，并將平板在37°C下孵育21天。通過目測評價生長抑制情況。在鼠結核病模型中確定候選藥物抗結核分枝桿菌的體內抑制活性為了確定化學療法的效力，可使用患有實驗性血源播散型結核病的BALB/c小鼠。用結核分枝桿菌H37Rv的2周毒性培養物感染小鼠，其通過將0. 5ml鹽水中 5X IO6CFU(菌落形成單位)劑量的分枝桿菌懸浮物經靜脈內注射(入尾靜脈)來實現。根 據所使用的治療方案，將所有實驗動物分組。治療于感染后的次日開始。藥物作為含有少量PEG400的羧甲基纖維素/水中的 懸浮液經口攝入。化學治療按天施用，每周6次。繼而將動物處死。為了確定每種治療方案的效力，記錄小鼠實質器官肉眼可見的 變化、來自病原材料的分枝桿菌在固體培養基上的生長以及器官損傷的細菌鏡檢指數。還 進行肝、脾和肺的肉眼可見變化的定性和定量分析，并計算損傷指數(使用四分量表)。每種治療方案的肉眼可見的評價表示為“效力指數”，其通過以下公式計算效力指數=100% -研究組損傷指數/對照組損傷指數X 100微生物學檢查包括培養以測定實質器官的CFU。為此目的，將右肺和脾分別與6% 硫酸一起勻漿，離心，用水和鹽水清洗。用l.OmL鹽水稀釋產物(約0.5mL)并勻漿。將此 所測試器官的懸浮液(0. 5mL)用鹽水稀釋100和1000倍，并涂布到固體Firm-2培養基上。 該培養物在37°C下培養一個月，并從第10天起每周讀數。28天后對CFU計數。制備重組Rv379O為了在大腸桿菌中獲得蛋白質表達，在含有或不含異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)(濃度為0. 125mM ImM)作為誘導劑時，測試若干生長條件。所有的培養物都在 37°C下培養2小時，在27°C下培養2和4小時，并在20°C下培養2和20小時。通過離心收 集細胞，并通過進行SDS-PAGE分析獲得的蛋白質提取物。根據供應商(Qiagen)的說明純
化重組蛋白。確定了 Rv3790作為苯并噻嗪酮的靶標 為了鑒定苯并噻嗪酮的分子靶標，采用了兩種不同的科學/技術方法a)將恥垢分枝桿菌的粘粒文庫轉化入恥垢分枝桿菌，并針對苯并噻嗪酮的抗性進 行選擇；b)常規誘變通過在含有苯并噻嗪酮的培養基上進行分枝桿菌培養物鋪板來搜 尋自發突變。通過上述方法在補充有油酸、牛血清白蛋白、右旋糖和過氧化氫酶(OADC)的固體 Middlebrook 7H11培養基上測定不同苯并噻嗪酮對恥垢分枝桿菌mc2155、牛分枝桿菌BCG 和結核分枝桿菌H37Rv的最低抑制濃度(MIC)。觀察到活性最大的苯并噻嗪酮10526038。還對作為對照化合物的異煙胼的MIC 進行測定。10526038和異煙胼的MIC值示于表1。表1. 10526038和異煙胼對不同分枝桿菌菌種的MIC
權利要求
體外篩選通過干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成來治療結核病之候選藥物的方法，所述方法包括將過表達使十聚異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸阿拉伯糖之蛋白質的結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)細胞培養物與候選藥物相接觸，所述蛋白質可由rv3790基因或其同源物或者其基因產物與Rv3790蛋白相同或同源之任意人工開放讀碼框所編碼，然后評價在測定試驗中由所述候選藥物所引起的相比于對照的抑制百分數。
2.根據權利要求1的篩選方法，其中所述測定試驗是體外抗細菌試驗或酶促試驗。
3.根據權利要求1或2的篩選方法，其中所述過表達Rv3790的結核分枝桿菌細胞培養 物通過用pS0DIT-2/Rv3790轉化結核分枝桿菌細胞培養物而獲得。
4.根據權利要求1至3中任一項的篩選方法，其中抑制百分數的評價通過測定所述候 選藥物的最低抑制濃度(MIC)來進行。
5.根據權利要求4的篩選方法，其中使用兩種或更多種藥物濃度以便計算每種候選藥 物的所述MIC。
6.根據權利要求1至5中任一項的篩選方法，其中還利用僅轉化pS0DIT-2載體的結核 分枝桿菌細胞培養物來測試每種候選藥物。
7.根據權利要求1至6中任一項的篩選方法，其中所述對照是異煙胼。
8.根據權利要求1至7中任一項的篩選方法，其中還進行另一對照實驗，其中不用候選 藥物進行處理，從而得到0%的抑制，并且其中相對于所述另一對照來評價利用所述候選藥 物得到的抑制百分數。
9.根據權利要求1至8中任一項的篩選方法，其中所述將過表達Rv3790的結核分枝桿 菌細胞培養物與候選藥物相接觸的步驟可通過將所述細胞制備物鋪板于包含不同濃度所 述候選藥物的合適培養基上來實施。
10.根據權利要求9的篩選方法，其中所述培養基是Middlebr00k7Hll固體培養基 (Difco 提供)。
11.根據權利要求10的篩選方法，其中所述培養基添加有油酸、牛血清白蛋白、右旋糖 和過氧化氫酶(OADC)。
12.根據權利要求2的篩選方法，所述測定試驗是酶促試驗，其包括將候選藥物與包含 FAD、NAD+、NADPH和經放射性標記的十聚異戊二烯磷酸核糖(DPR)的反應混合物中的重組 Rv3790酶相接觸的步驟，然后評價相對于對照來說由所述候選藥物所引起的對產生十聚異 戊二烯磷酸-D-阿拉伯糖(DPA)之酶促反應的抑制百分數。
13.根據權利要求1至12中任一項的篩選方法，其還包括對通過體外試驗的候選藥物 的體內篩選評價，所述體內評價包括向具有血源播散型結核病菌株的小鼠施用預選給藥方 案，并與對照藥物和安慰劑進行比較。
14.根據權利要求13的篩選方法，其中所述對照藥物是異煙胼。
15.根據權利要求13或14的篩選方法，其中使用BALB/C小鼠。
16.根據權利要求13至15中任一項的篩選方法，其中所述結核病菌株是結核分枝桿菌 H37Rv的毒性培養物。
17.鑒定患者中抗藥性分枝桿菌菌株的診斷方法，該方法包括通過聚合酶鏈式反應擴 增從結核病患者中分離的結核分枝桿菌菌株rv3790基因，并分析該DNA序列中是否存在造成對苯并噻嗪酮之抗性的經鑒定突變。
18.根據權利要求17的診斷方法，其中所述經鑒定突變是第387密碼子處的半胱氨酸 突變為甘氨酸、或半胱氨酸突變為絲氨酸。
19.能通過本發明篩選方法獲得的Rv3790蛋白的抑制劑，其中這樣的抑制劑選自苯并 噻嗪酮或代謝產生苯并噻嗪酮的分子、抗Rv3790蛋白質的單克隆抗體、rv3790基因的反義 RNA序列或包含Rv3790蛋白的疫苗。
20.根據權利要求19的抑制劑，所述抑制劑是能由rv3790mRNA序列的25聚體序列獲 得的反義RNA序列。
21.根據權利要求20的抑制劑，其中所述序列是SEQID NO. 1 =AUGUUG AGC GUG GGA GCU ACC ACU A。
22.第387位的氨基酸半胱氨酸被絲氨酸或甘氨酸替換的結核分枝桿菌突變株的細胞 培養制備物，其作為對照工具。
23.患結核病之患者的治療方法，該方法包括向所述患者施用抗細菌有效量的藥物，該 藥物通過阻斷或沉默使十聚異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸阿拉伯糖的蛋白 質來干擾阿拉伯半乳聚糖的生物合成。
24.根據權利要求23的治療方法，其中所述藥物是苯并噻嗪酮分子或抗Rv3790蛋白的 單克隆抗體或rv3790基因的mRNA反義序列。
25.根據權利要求23或24的治療方法，其還包括施用作用機制不同的抗結核分枝桿菌 的抗細菌藥物，例如異煙胼。
26.通過阻斷或沉默使十聚異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸阿拉伯糖的蛋 白質來干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成的藥物在制備治療結核病之藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及用于鑒定治療結核病之新藥物的篩選方法，以及用于鑒定對這些新藥物具有抗性之臨床菌株的診斷方法。特別地，本發明涉及體外篩選通過干擾阿拉伯半乳聚糖生物合成來治療結核病的候選藥物的方法，所述方法包括如下步驟將過表達使十聚異戊二烯磷酸核糖轉化為十聚異戊二烯磷酸阿拉伯糖之蛋白質的結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)細胞培養物與候選藥物相接觸，所述蛋白質可由rv3790基因或其同源物或者其基因產物與Rv3790蛋白相同或同源之任意人工開放讀碼框所編碼，然后評價在測定試驗(例如抗菌試驗或酶促試驗)中由候選藥物所引起的相比于對照的抑制百分數。
文檔編號G01N33/569GK101971031SQ200880128001
公開日2011年2月9日 申請日期2008年2月13日 優先權日2008年2月13日
發明者朱莉婭·馬尼納, 焦萬納·里卡爾迪, 瑪麗亞·羅薩莉婭·帕斯卡 申請人:森迪奈爾Ch有限責任公司