電泳芯片和電泳裝置的制作方法

專利名稱：電泳芯片和電泳裝置的制作方法
技術領域：
本發明涉及電泳芯片和電泳裝置。
背景技術：
作為指示生物體狀態的指標，對各種蛋白質的糖化率進行
分析。其中，血細胞中的血紅蛋白(Hb)的糖化率尤其是HbAlc 反映著生物體內血糖值以前的歷程，因此成為糖尿病的診斷和 治療等中的重要指標。HbAlc是HbA ( a2(32 )的卩鏈N末端的纈 氨酸糖化后的產物。
HbAlc可通過例如免疫法、酶法、高效液相色i普(HPLC) 法、親和法等進行分析。 一般來說，免疫法和酶法用于對大量 試樣進行處理、分析時，在判斷并發癥的風險方面精度低。另 一方面，HPLC法處理能力不如免疫法和酶法，^旦在并發癥的風 險判斷中有用。但是，HPLC法中，分析裝置在結構上非常龐大 并且價格昂貴。此外，親和法還能測定卩鏈N末端已糖化的 HbAlc以夕卜的糖化Hb。
進而，嘗試了使用毛細管電泳法進行HbAlc的分析(參照 非專利文獻l )。但是，該方法中，使用對靈敏度不利、內徑25jim 的熔融二氧化石圭毛細管，HbAlc的分析中也需要約4分鐘的分析 時間。此外，該方法中需要使用大型的電泳裝置。進而，通過 前述任意的現有方法進行的POC (Point Of Care,及時現場護 理)檢查沒有達到管理并發癥的風險那樣的精度，而是停留在 篩查這樣的4全查上。這些問題是以H b A1 c為首的糖化血紅蛋白 整體上的問題。
非專利文獻l: Clinical Chemistry 43: 4,644-648 ( 1997 )

發明內容
因此，本發明目的在于提供一種能夠分析糖化血紅蛋白的 電泳芯片，在通過毛細管電泳法進行的糖化血紅蛋白分析中， 能夠使裝置小型化和縮短分析時間，且為高精度。
為了實現前述目的，本發明的電泳芯片，其特征在于，其 為用于糖化血紅蛋白分析的電泳芯片，
包括基—反、多個液槽、以及毛細管流^各， 前述多個液槽包括第1導入槽和第1回收槽， 前述毛細管流^各包含試樣分析用毛細管流^各， 前述基板上形成有前述第1導入槽和前述第1回收槽， 前述第1導入槽和前述第1回收槽通過前述試樣分析用毛 細管流路被連通。
本發明的電泳裝置，其特征在于，其為包括電泳芯片和分 析部的電泳裝置，前述電泳芯片為前述本發明的電泳芯片。
本發明的電泳芯片是基板上形成有第l導入槽和第l回收槽 且前述第l導入槽和前述第l回收槽通過試樣分析用毛細管流路 被連通的芯片。因此，根據本發明，在利用毛細管電泳法進行 的糖化血紅蛋白分析中，能夠使裝置小型化，伴隨該小型化能 夠使分析時間縮短。進而，根據本發明的電泳芯片，能以高精 度分析糖化血紅蛋白。因此，根據本發明的電泳芯片，能夠在
例如POC檢查中進行糖化血紅蛋白的精密分析，并發癥的風險
管理也成為可能。


圖l是表示本發明的電泳芯片的一例的構成的圖。
圖2是表示本發明的電泳芯片的制造工序的一例的工序圖。圖3是表示本發明的電泳芯片的制造工序的其它例的工序圖。
圖4是表示本發明的電泳芯片其它例的構成的圖。
圖5是表示本發明的電泳裝置的一例的構成的圖。 圖6是表示本發明的電泳裝置的其它例的構成的圖。 圖7是表示本發明的電泳芯片另 一個例子的構成的圖。 圖8是表示本發明的電泳芯片另一個例子的構成的圖。 圖9是表示本發明的電泳芯片另 一個例子的構成的圖。 圖IO是表示本發明的電泳芯片另一個例子的構成的圖。 圖11是表示本發明的電泳裝置另 一個例子的構成的圖。 圖12是表示本發明的電泳芯片另一個例子的構成的圖。 圖13是表示本發明的實施例中的泳動距離和吸光度的關系 的圖表。
具體實施例方式
本發明的電泳芯片中，前述多個液槽還包含第2導入槽和第 2回收槽，
前述毛細管流路還包含試樣導入用毛細管流^各， 前述基^反上形成有前述第2導入槽和前述第2回收槽， 前述第2導入槽和前述第2回收槽通過前述試樣導入用毛
細管流路纟皮連通，
前述試樣分析用毛細管流路和前述試樣導入用毛細管流路
交叉，
前述試樣分析用毛細管流^各和前述試樣導入用毛細管流3各 通過前述交叉部分,皮連通。
本發明的電泳芯片中，從前述試樣分析用毛細管流路的一 部分分支出第l分支流路，前述第1分支流路與前述第2導入槽連通，
從位于前述第1分支流^各下游側的前述試樣分析用毛細管
流路的一部分分支出第2分支流if各，
前迷第2分支流路與前述第2回收槽連通，
通過前述第1分支流路、前述第2分支流^各、將它們連接
的前述試樣分析用毛細管流;咯的 一部分而形成前述試樣導入用
毛細管流:路。
本發明的電泳芯片中，芯片整體的最大長度在例如10
100mm的范圍，優選30 ~ 70mm的范圍，芯片整體的最大寬度在 例如IO ~ 60mm的范圍，芯片整體的最大厚度在例如0.3 ~ 5mm 的范圍。予以說明，前述芯片整體的最大長度是指前述芯片的 長度方向的最長部的長度，前述芯片整體的最大寬度是指前述 芯片的與前述長度方向垂直的方向(寬度方向)的最長部的長
度，前述芯片整體的最大厚度是指前述芯片的與前述長度方向 和前述寬度方向的兩者垂直的方向(厚度方向)的最長部的長度。
本發明的電泳芯片是如下的電泳芯片，即在前述糖化血紅
蛋白的分析中，將用電泳液稀釋含有前述糖化血紅蛋白的試樣 而得的稀釋試樣導入前述多個液槽中的至少一個槽中，前述試
樣前述電泳液(體積比)優選在l: 4~1: 99的范圍。前述試 樣前述電泳液(體積比)更優選在l: 9~1: 59的范圍，進一 步優選在l: 19~ 1: 29的范圍。
本發明的電泳芯片中，優選前述毛細管流^各中填充有電泳液。
本發明的電泳芯片中，前述毛細管流路的最大直徑在例如 10 ~ 200lim的范圍，優選在25 ~ 100pm的范圍，其最大長度在 例如0.5~ 15cm的范圍。予以i兌明，前述毛細管流^各的最大直徑是指在前述毛細管流路的截面形狀為非圓形的情況下，面積
與截面積最大的部分的截面積相同的圓的直徑。
本發明的電泳芯片中，可以通過含有陽^ l性基團的化合物 覆蓋前述毛細管流3各的內壁。前述含有陽才及性基團的化合物例 如為含有前述陽極性基團和反應基的化合物。前述陽極性基團 優選氨基、銨基。作為前述含有陽極性基團的化合物，優選的 是具有氨基和銨基中的至少一方的甲硅烷基化劑。前述氨基可 以是伯氨基、仲氨基、叔氨基中的任意一種。
前述甲硅烷基化劑可舉出N- ( 2-二氨基乙基)-3-丙基三甲 氧基硅烷、氨基苯氧基二甲基乙烯基硅烷、3-氨基丙基二異丙 基乙氧基硅烷、3-氨基丙基曱基雙(三曱基硅氧基)硅烷、3-氨基丙基五曱基二硅氧烷、3-氨基丙基硅烷三醇、雙(對氨基 苯氧基)二甲基硅烷、1,3-雙(3-氨基丙基)四甲基二硅氧烷、 雙(二甲基氨基)二甲基硅烷、雙(二甲基氨基)乙烯基甲基 硅烷、雙(2-羥基乙基)-3-氨基丙基三乙氧基硅烷、3-氰基丙 基(二異丙基)二甲基氨基硅烷、(氨基乙基氨基甲基)苯乙 基三甲氧基硅烷、N-甲基氨基丙基三乙氧基硅烷、四(二乙基 氨基)硅烷、三(二曱基氨基)氯硅烷、三(二甲基氨基)硅 烷等。
也可以使用前述甲硅烷基化劑中的硅原子被替換成鈦或鋯 的物質。前述甲石圭烷基化劑可單獨使用一種，也可以同時使用 兩種以上。
使用前述甲硅烷基化劑覆蓋前述毛細管流路的內壁，例如 可以如下述那樣實施。首先，將曱硅烷基化劑溶解或分散于有 機溶劑中來制備處理液。前述處理液的制備中所-使用的前述有 機溶劑可使用例如二氯曱烷、曱苯等。前述處理液中的甲硅烷 基化劑的濃度沒有特別限制。將該處理液通入前述毛細管流路，加熱。通過該加熱，前述甲硅烷基化劑通過共價鍵結合到前述 毛細管流路的內壁，結果陽極性基團被配置到前述毛細管流路 的內壁。然后，用有機溶劑(二氯曱烷、甲醇、丙酮等)、酸 性溶液(磷酸等)、 >喊性溶液和表面活性劑溶液中的至少一種 進行洗滌(后處理)。予以說明，該洗滌是任意的，但優選實 施該洗滌。此外，如后所述，當作為除前述基斧反外的另一部件 的毛細管作為前述毛細管流^路的情況下，可以4吏用通過市售的 前述甲硅烷基化劑來進行內壁被前述含有陽極性基團的化合物 覆蓋的毛細管。
優選在被前述含有陽極性基團的化合物覆蓋的前述毛細管 流路的內壁再層疊由含有陰極性基團的化合物形成的陰極性 層。由此，能夠防止后述試樣中的血紅蛋白等吸附在前述毛細 管流路的內壁上。此外，由于前述試樣和前述含有陰極性基團 的化合物形成復合體并進行電泳，因此，與試樣單獨電泳相比， 分離效率提高。這樣，能夠以更短時間更高精度地實施糖化血 紅蛋白等的分析。作為與前述試樣形成復合體的前述含有陰極 性基的化合物優選為含有陰極性基團的多糖類。作為前述含有 陰極性基團的多糖類，有例如硫酸化多糖類、羧酸化多糖類、 磺酸化多糖類和磷酸化多糖類，其中，優選硫酸化多糖類和羧 酸化多糖類。前述疏酸化多糖類優選硫酸軟骨素、肝素等，更 優選硫酸軟骨素。前述羧酸化多糖類優選藻酸或其鹽(例如藻
酸鈉)。硫酸軟骨素有A、 B、 C、 D、 E、 H、 K七種，任意一 種都可以1"吏用。前述陰;玟性層可如下述這樣形成，即，例如1吏 含有前述含有陰極性基團的化合物的液體與被前述含有陽極性 基團的化合物覆蓋的前述毛細管流路的內壁接觸而形成。這種 情況下，用于形成陰極性層的液體可以另外制備，但從操作效 率方面出發，優選制備包含含有陰極性基團的化合物的電泳液，將其通入到內壁被前述含有陽極性基團的化合物覆蓋的前述毛細管流路。
前述電泳液沒有特別限制，優選為〗吏用有才幾酸的電泳液。前述有^/L酸有例如馬來酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、鄰苯二曱酸、丙二酸、蘋果酸等。此外，前述電泳液優選為含有弱堿的電泳液。前述弱-威有例如精氨酸、賴氨酸、組氨酸、三羥甲
基氨基甲烷(Tris)等。前述電泳液的pH在例如pH4.5 ~ 6的范圍。前述電泳液中，前述含有陰極性基團的化合物的濃度在例如O.OOl ~ 10重量％的范圍。
本發明的電泳芯片還包括用于使含前述糖化血紅蛋白的試樣溶血且將其稀釋的前處理槽，前述前處理槽可與前述多個液槽中的至少一個槽連通。前述前處理槽優選與前述第l導入槽和前述第2導入槽中的至少一個槽連通，更優選僅與任意一個槽連通。
通過本發明的電泳芯片進行分析的前述糖化血紅蛋白沒有特別限制，可列舉例如HbAlc、不穩定型HbAlc、 GHbLys等，特別優選HbAlc。
本發明的電泳芯片中，前述基板含有上基板和下基板，
前述上基板形成有多個通孔，
前述下基板上形成有槽，
前述上基板層疊在前述下基板上，
前述上基板上所形成的多個通孔的底部被前述下基板封閉而形成空間，該空間即作為前述多個液槽，
前述下基板上所形成的槽的上部被前述上基板封閉而形成空間，該空間即作為前述毛細管流路。
本發明的電泳芯片中，在前述基板上形成有多個凹部和槽，
前述基牙反表面^皮在相應于前述多個凹部的位置開有孔的密封材料密封，
前述基斧反上所形成的多個凹部即作為前述多個液槽，前述基板上所形成的槽的上部被前述密封材料封閉而形成空間，該空間即作為前述毛細管流^^。
本發明的電泳芯片還可以包括密封材^K前述基板形成有多個通孔，前述基板的底面形成有槽，前述基板的底面被前述密封材料密封，
前述基板上所形成的多個通孔的底部被前述密封材料封閉而形成空間，該空間即作為前述多個液槽，
前述基板的底面上所形成的槽的下部被前述密封材料封閉而形成空間，該空間即作為前述毛細管流;洛。
本發明的電泳芯片中，前述多個液槽通過作為除前述基板外的另 一部件的毛細管一皮連通，前述毛細管即作為前述毛細管流路。
本發明的電泳芯片中，前述多個液槽的容積沒有特別限制，
例如分別在l ~ 1000mm3的范圍，優選在50~ 100mm3的范圍。本發明的電泳芯片還具有多個電^f及，
前述多個電才及分別#1配置為其一端位于前述多個液槽內。下面舉例對本發明的電泳芯片進行說明。但本發明不受下述例子的限制。
(實施方式l )
圖1示出本發明的電泳芯片的 一例。圖1的(A)是該例的電泳芯片的平面圖，圖1的(B )是圖1的(A )的I-I處的截面圖，圖1的(C )是圖1的(A )的II-II處的截面圖。此外，為了便于理解，該圖中各構成要素的大小、比率等與實際不同。如圖所示，該電泳芯片，在下基板1上層疊上基板4而構成。前述上基^反4形成有多個(該例中為4個)通孔。前述 上基板4上所形成的4個通孔的底部被前述下基板1封閉，從 而形成4個液槽2a~ d。前述下基一反1上形成有十字狀的槽。 前述下基板1上所形成的十字狀的槽的上部被前述上基板4封 閉，從而形成試樣分析用毛細管流路3x和試樣導入用毛細管流 路3y。前述4個液槽2a~ d包括第1導入槽2a、第1回收槽 2b、第2導入槽2c和第2回收槽2d。前述第1導入槽2a和前 述第1回收槽2b通過前述試樣分析用毛細管流3各3x一皮連通。 前述第1導入槽2c和前述第2回收槽2d通過前述試樣導入用 毛細管流路3y一皮連通。前述試樣分析用毛細管流路3x和前述 試樣導入用毛細管流;洛3y交叉。前述試才羊分析用毛細管流路 3x和前述試樣導入用毛細管流路3y通過前述交叉部分被連通。 予以說明，該例的電泳芯片為長方體狀。但本發明并不限定于 此。本發明的電泳芯片只要不對電泳測定帶來影響就可以是任 意形狀。此外，該例的電泳芯片的平面形狀是長方形。但本發 明并不限定于此。本發明的電泳芯片的平面形狀可以是例如正 方形、其它形狀。并且該例的電泳芯片中，前述試樣分析用毛 細管流路3x和前述試樣導入用毛細管流^各3y的最大長度不同。 但本發明并不限定于此。本發明的電泳芯片中，前述試樣分析 用毛細管流路3x和前述試樣導入用毛細管流^各3y的最大長度 也可以相同。進而，該例的電泳芯片包含2才艮毛細 管流路(3x、 3y)。但本發明的電泳芯片并不限定于此。本發明的電泳芯片 也可以例如僅含有前述試樣分析用毛細管流3各3x。這種情況 下，前述下基4反1上^f又形成前述第1導入槽2a和前述第1回收 槽2b,前述第1導入槽2a和前述第1回收槽2b通過前述試樣 分析用毛細管流^各3x連通。進而，該例的電泳芯片包含2個基 板(上基板4和下基板1 )。但本發明的電泳芯片并不限定于此。本發明的電泳芯片也可以例如如后面所述由1個基板構成。 接著說明該例的電泳芯片的制造方法。^f旦是前述電泳芯片
也可以通過下述制造方法以外的方法制造。
該例的電泳芯片中，作為前述下基才反l可以-使用例如由玻
璃、聚合物材料等形成的基板。前述玻璃材料可舉出例如合成
石英玻璃、硼硅酸鹽玻璃等。前述聚合物材料可舉出例如聚曱
基丙烯酸甲酯(PMMA)、環烯烴聚合物(COP)、聚碳酸酯 (PC)、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚苯乙烯(PS)、聚乳酸等。
該例的電泳芯片中，前述下基板l的長度和寬度成為前述芯 片整體的最大長度和最大寬度。所以，前述下基板l的長度和寬 度與前述芯片整體的最大長度和最大寬度同樣即可。該例的電 泳芯片中的前述下基板l的厚度在例如O.l ~ 3mm的范圍，優選 在O.l ~ lmm的范圍。
前述上基板4的材質只要對后述的吸光度測定沒有影響就 沒有特別限制。前述上基板4可以使用由例如與前述下基板l同 樣材質形成的基板。
前述上基板4的長度和寬度與前述下基板1的長度和寬度同 樣。前述上基板4的厚度可根據前述多個液槽2a d的容積等適 當決定，但在例如O.l ~ 3mm的范圍，優選l 2mm的范圍。
前述十字狀的槽(前述試樣分析用毛細管流^各3x和前述試 樣導入用毛細管流路3y )的寬度和深度可由前述毛細管流路的 最大直徑適當確定，例如其寬度在25 ~ 200jim的范圍，其深度 在25 ~ 200pm的范圍，優選其寬度在40 ~ lOO)im的范圍，其深 度在40~ 100(im的范圍。前述試樣分析用毛細管流路3x和前述 試樣導入用毛細管流路3 y的最大長度如前所述。
前述多個液槽2a ~ d的容積如前所述。圖1中，前述多個液槽2a ~ d的形狀為圓柱狀。但本發明的電泳芯片并不限于該例。 本發明的電泳芯片中，前述多個液槽的形狀只要不影響后述的 試樣的導入和回收就沒有特別限制，例如可以是四棱柱狀、四 棱錐狀、圓錐狀、將它們組合而成的形狀等任意形狀。此外， 前述多個液槽的容積和形狀可以全部相同，也可以各自不同。
該例的電泳芯片中，前述芯片整體的最大厚度為前述下基 板1和前述上基板4的厚度的合計。前述芯片整體的最大厚度如 前所述。
例如前述下基板1的材質為前述玻璃的情況下，前述電泳芯 片可例如下面這樣來進行制造。
首先，如圖2的(A)所示，將玻璃板20表面用鉻和金的合 金21遮蔽。然后，將前述合金21的表面涂上光致抗蝕劑22。
接著，如圖2的(B)所示，使設有前述試樣分析用毛細管 流路3 x和前述試樣導入用毛細管流路3 y的設計圖案的感光薄膜 緊密貼合在前述光致抗蝕劑22表面，來制作光掩模23。接著， 從前述光掩模23的上方照射紫外線24,由此進行曝光。
如圖2的(C)所示，通過前述曝光而使曝光部分的前述光 致抗蝕劑22增溶，在前述合金21上形成(轉印)前述設計圖案。
接著，如圖2的(D)所示，通過王水除去露出的前述合金21。
接著，如圖2的(E)所示，通過氟化氫在前述玻璃板20上 蝕刻出前述設計圖案。
接著，如圖2的(F)所示，通過除去前述光致抗蝕劑22和 前述合金21,獲得前述下基板l。
接著，制作前述上基板4 (未圖示)。在前述上基板4上形 成前述4個通孔的方法沒有特別限制。例如前述上基板4的材質 為前述玻璃的情況下，前述形成方法可舉出例如超聲波加工等。例如在前述上基板4的材質為前述聚合物材料的情況下，前述形 成方法可舉出例如使用模具進行的注射成型、澆鑄、模壓成型 等成型法、切削加工法等。前述4個通孔既可以分別形成各通孔，
也可以同時形成全部通孔。在分別形成前述4個通孔的情況下，
可以按照任意的順序來形成。通過前述使用模具的方法等可以
同時形成前述全部的4個通孔，其由于減少工序而4尤選。
最后，通過將前述下基板1和前述上基板4層疊，能夠制造 該例的電泳芯片。予以說明，前述下基板1和前述上基板4的層 疊方法沒有特別限制，優選例如通過加熱進行熔融粘著。此外， 圖2中示出了圖l的(C )所示截面的制造工序，但圖l的(B ) 所示的截面也可以按照同樣的制造工序來制造。
例如前述下基板1的材質為前述聚合物材料的情況下，前述 電泳芯片可例如下述這樣來制造。
首先，如圖3的(A)所示，將硅板31表面涂上光致抗蝕劑32。
接著，如圖3的(B)所示，使設有前述試樣分析用毛細管 流路3 x和前述試樣導入用毛細管流路3 y的設計圖案的感光薄膜 緊密貼合在前述光致抗蝕劑32表面，來制作光掩模33。接著， 從前述光掩模3 3的上方照射紫外線3 4,由此進行曝光。
如圖3的(C)所示，通過前述曝光而使曝光部分的前述光 致抗蝕劑32增溶，在前述硅板31上形成(轉印)前述設計圖案。
接著，如圖3的(D)所示，在前述石圭4反31上蝕刻出前述設 計圖案，制作母模35。前述蝕刻可列舉例如干蝕刻、各向異性 蝕刻等。從前述試樣分析用毛細管流路3x和前述試樣導入用毛 細管流路3y的尺寸精度、表面平滑性的觀點出發，前述蝕刻優 選為干蝕刻。
接著，如圖3的(E)所示，對前述母模35進行電鑄金屬鎳，制成注射成型用模具36。
接著，如圖3的(F)所示，使用前述注射成型用模具36,
通過注射成型制作由前述聚合物材料形成的下基板1 。
接著，制作前述上基板4 (未圖示)。前述上基板4的制作 方法與前述下基^反1的材質為前述玻璃的情況時相同。
最后，將前述下基板1和前述上基板4層疊，由此能夠制造 該例的電泳芯片。前述下基^反1和前述上基^反4的層疊方法與前 述下基板l的材質為前述玻璃的情況相同。予以說明，圖3中示 出圖l的(C)所示截面的制造工序，但圖l的(B )所示的截面 也可以按照同樣的制造工序來制造。
如前所述，本發明的電泳芯片還可具有多個電極。圖4中示 出前述具有多個電極的、該例的電泳芯片。該圖中，與圖l相同 的部分帶有相同附圖標記。如圖所示、該電泳芯片具有4根電極 6a~ d。前述4根電極6a d分別被配置為其 一 端位于前述多個液 槽2a d內。前述4根電極6a d埋入前述上基^反4中。前述4根電 極6a d能夠通過例如在制造前述上基板4時，在前述上基板4 側面預先形成前述4根電極6a d的導入孔而容易地配置。予以 說明，本發明的電泳芯片中，前述多個電極為任意的構成部件。 前述多個電極可以在例如使用前述電泳芯片時插入前述多個液 槽內。
前述多個電極6a d只要是電泳法中能夠使用的電極就可 以任意使用。前述多個電極6a d例如分別是不銹鋼(SUS)制 電極、白金(Pt)電極、金(Au)電極等。
本發明的電泳芯片還可以包含用于使含有前述糖化血紅蛋 白的試樣溶血且將其稀釋的前處理槽。前述試樣的溶血處理沒 有特別限制，可以是例如通過溶血劑使前述試樣溶血的處理。 前述溶血劑石皮壞例如后述試樣中的血細胞成分的血細胞膜。前述溶血劑可舉出例如前述電泳液、皂戒、大力，4亍7夕(抹)
制的商品名"Triton X-100"等，尤其優選前述電泳液。前述前處 理槽優選例如與前述導入槽連通。前述前處理槽可形成于與其 連通的前述液槽、例如前述第2導入槽2c的附近等適當的地方。 存在前述前處理槽的情況下，后述的試樣;波導入前述前處理槽 中。由此，經前處理的前述試樣通過連4妻前述前處理槽和與其 連通的前述液槽、例如前述第2導入槽2c的流^各， 一皮導入前述第 2導入槽2c。前述前處理槽可以是如下的構成，即，與用于使前 述試樣溶血的槽和用于稀釋前述試樣的槽2個槽連通。
圖5中示出包含該例的電泳芯片的電泳裝置的一例。該圖 中，與圖l、圖4相同的部分帶有相同的附圖標記。如圖所示， 該電泳裝置包含分析部7。該例的電泳裝置中，前述分析部7為 檢測器(在線檢測器)。前述在線檢測器在前述上基板4上被配 置為位于從前述試樣分析用毛細管流路3x和前述試樣導入用 毛細管流路3y的交叉部分起的前述第1回收槽2b側的前述試樣 分析用毛細管流^各3x的上部。前述在線^r測器內部收納著光源 和斗企測部。前述在線4企測器，通過由前述光源向試樣發光并利 用前述4企測部^r測來自^r測試樣的反射光來測定吸光度。前述 分析部7并不限于前述在線檢測器，只要是能進行糖化血紅蛋白 的分析的#r測器就可以任意使用。例如前述分析部7可以由配置 在前述電泳芯片的下方的光源、和配置在與前述在線檢測器的 配置處對應的位置的#企測部構成。這種情況下，從前述光源向 著試樣發光，通過前述檢測部檢測來自試樣的透射光來測定吸 光度。
圖6中示出含有該例的電泳芯片的電泳裝置的其它例子。該 圖中，與圖5相同的部分帶有相同的附圖標記。如圖所示，該例 的電泳裝置除分析部7不同之外，與圖5所示的電泳裝置構成相點測定吸光度。
接著，以使用圖5和6所示的電泳裝置的情況為例，對本發 明的糖化血紅蛋白的分析方法進行說明。
首先，將電泳液通過壓力或毛細管作用填充到前述試樣分 析用毛細管流路3x和前述試樣導入用毛細管流^各3y中。前述電 泳液如前所述。
予以說明，若在電泳裝置不使用時(非分析時)前述毛細 管流^各中預先填充有電泳液，則能夠省略前述的電泳液填充工 序而立即進入以下的工序，因此是優選的。
接著，將作為分析對象的試樣(含有糖化血紅蛋白的試樣) 導入到前述第2導入槽2c中。此時，優選導入已稀釋為前述試樣 電泳液(體積比)在l: 4~1: 99的范圍的稀釋試樣。即，優選 在使用本發明的電泳裝置(電泳芯片)的糖化血紅蛋白的分析 方法中，將含有前述糖化血紅蛋白的試樣用電泳液稀釋而成的 稀釋試樣導入前述多個液槽的至少一個槽中，并使前述試樣 電泳液(體積比)在l: 4~1: 99的范圍。^f旦前述體積比并不限 定于此。電泳芯片具有前述前處理槽(未圖示)的情況下，將 前述試樣導入前述前處理槽，在其中進行前處理。接著，對前 述電極6c和前述電極6d施加電壓，使前述試樣導入用毛細管流 路3y的兩端產生電位差。由此，使前述試樣移動到前述試樣分 析用毛細管流路3x和前述試樣導入用毛細管流路3y的交叉部 分。前述試樣只要是含有血紅蛋白(Hb)的試樣即可，可舉出 例如全血、對全血進行溶血處理后的溶血試樣等。前述溶血處 理可舉出例如超聲波處理、冷凍解凍處理、加壓處理、滲透壓 處理、表面活性劑處理等。前述溶血處理可在例如前述前處理 槽中進行。此外，也可以將通過其它裝置等預先進行溶血處理 的試樣導入電泳裝置(電泳芯片)中。前述試樣可以是被例如水、生理食鹽水、電泳液等適當稀釋后的試樣。前述稀釋可在 例如前述前處理槽中進行。此外，也可以將通過其它裝置等預 先進行稀釋處理的稀釋試樣導入到電泳裝置(電泳芯片)中。
前述電極6c和前述電極6d之間的電位差在例如0.5 ~ 5kV的范圍。
4妾著，對前述電才及6a和前述電才及6b施加電壓，4吏前述試樣 分析用毛細管流^各3x的兩端產生電位差。 <象這樣，4吏兩端有電 位差的毛細管流^各瞬間/人前述試才羊導入用毛細管流if各3y切換到 前述試樣分析用毛細管流路3x，如圖5和6中箭頭所示那樣，使 前述試樣8乂人前述試樣分析用毛細管流3各3x和前述試樣導入用 毛細管流路3y的交叉部分移動到前述第l回收槽2b側。
前述電極6a和前述電極6b之間的電位差在例如0.5 ~ 5kV的 范圍。
接著，通過前述檢測器7來檢測因移動速度之差而被分離的 前述試樣中的各成分。由此，能夠進行前述試樣中的各成分的 分析(分離測定)。根據本發明，能夠以高精度分析(分離測 定)含有血紅蛋白(Hb)的試樣中的糖化血紅蛋白及其它成分。 (實施方式2 )
圖7中示出本發明的電泳芯片的其它例。該圖中，與圖1 相同的部分帶有相同的附圖標記。該例的電泳芯片中，在基板 (下基板)1上，形成有多個(該例中是4個)凹部和十字狀 的槽。前述基板(下基板)1的表面用密封材料(上基板)4 進行密封，所述密封材料上的與前述4個凹部對應的位置開有 孔。前述基板(下基板)1上所形成的4個凹部即為4個液槽 2a d。前述基板(下基板)1上所形成的十字狀的槽的上部被 前述密封材料(上基板)4封閉，由此而形成試樣分析用毛細 管流^各3x和試才羊導入用毛細管流^各3y。除這些外，該例的電泳芯片與圖1所示的電泳芯片構成相同。
該例的電泳芯片例如可如下述這樣進4亍制造。^旦前述電泳 芯片也可以通過下述制造方法以外的方法來制造。
前述基板(下基板)l可使用例如由與圖l所示的電泳芯片 的下基板1同樣的材質形成的基板。
該例的電泳芯片中，前述基板(下基板)l的長度和寬度為 前述芯片整體的最大長,度和最大寬,度。所以，前述基玲反(下基 板)l的長度和寬度可以與前述芯片整體的最大長度和最大寬度 相同。該例的電泳芯片中的前述基板(下基板)l的厚度在例如
0.1 3mm的范圍，^f尤選l ~ 2mm的范圍。
前述密封材料(上基板)4的材質也沒有特別限制，可使用 例如由與圖l所示的電泳芯片的下基板l同樣的材質形成的密封材料。
前述密封材料(上基板)4的長度和寬度與前述基板(下基 板)l的長度和寬度相同。前述密封材料(上基板)4的厚度在 例^口50 ~ 1000fim的范圍，^尤選100 ~ 300^m的范圍。
前述密封材料(上基板)4可使用例如在與前述4個凹部(前 述4個液槽2a d)對應的位置開有孔的市售的密封材料。
該例的電泳芯片中，前述芯片整體的最大厚度為前述基板 (下基板)l和前述密封材料(上基板)4的厚度的合計。前述 芯片整體的最大厚度如前所述。
下面示出該例的電泳芯片的制造工序的一例。^旦前述電泳 芯片也可以通過下述制造工序以外的工序來制造。
首先，制作前述基板(下基板)1。在前述基板(下基板) l上形成前述試樣分析用毛細管流路3x和前述試樣導入用毛細 管流路3y的方法沒有特別限制，例如，可以與前述實施方式l 同樣形成。在前述基板(下基板)l上形成前述4個液槽2a d的方法也沒有特別限制。例如，前述基板(下基板)l的材質為 前述玻璃的情況下，前述形成方法可舉出例如超聲波加工等。 例如在前述基板(下基板)l的材質為前述聚合物材料的情況下， 前述形成方法可舉出例如使用模具進行的注射成型、澆鑄、擠
壓成型等成型法、切削加工法等。前述4個液槽2a d既可以各 自分別形成，也可以全都同時形成。分別形成前述4個液槽2a d的情況下，可以按照任意順序來形成。通過4吏用前述才莫具的方 法等同時形成前述全部的4個液槽2a d,由于可以減少工序，
故優選。
接著，通過用在與前述4個凹部(前述4個液槽2a d)對應 的位置開有孔的密封材料(上基板)4密封前述基板(下基板) l的表面，能夠制作該例的電泳芯片。
該例的電泳芯片的構成并不限于圖7的構成。例如既可以與 圖4等同樣具有多個電極，也可以適當具有前述的前處理槽等。 使用該例的電泳芯片的電泳裝置的構成也沒有特別限定，可以 具有與例如圖5或6的電泳裝置同樣的檢測器。進而，使用前述 電泳裝置的糖化血紅蛋白的分析方法也沒有特別限定，能夠通 過與例如4吏用圖5或6所示的電泳裝置時同樣的方法來實施。 (實施方式3 )
圖8中示出本發明的電泳芯片另 一個例子。該圖中，與圖 1相同的部分帶有相同的附圖標記。在該例的電泳芯片中，基 板(上基板)4上形成有多個(該例中為4個)通孔。在前述 基板(上基板)4的底面形成有十字狀的槽。前述基板(上基 板)4的底面用密封材料(下基板)1進行密封。前述基板(上 基板)4上所形成的4個通孔的底部用前述密封材料(下基板) l進行封閉，由此形成4個液槽2a d。前述基^1(上基^1)上 所形成的十字狀的槽的下部用前述密封材料封閉，由此而形成試樣分析用毛細管流^各3x和試樣導入用毛細管流^各3y。除這 些以外，該例的電泳芯片與圖1所示的電泳芯片構成相同。
該例的電泳芯片可例如下述這樣來制造。^f旦前述電泳芯片 也可以通過下述制造方法以外的方法來制造。
前述基板(上基板)4可以使用例如由與圖1所示的電泳芯 片的下基板l同樣的材質所形成的基板。
在該例的電泳芯片中，前述基板(上基板)4的長度和寬度 為前述芯片整體的最大長度和最大寬度。所以前述基板(上基 板)4的長度和寬度可以與前述芯片整體的最大長度和最大寬度 相同。該例的電泳芯片中的前述基板(上基板)4的厚度在例如 0.1 3mm的范圍，^尤選l 2mm的范圍。
前述密封材料(下基板)l的材質也沒有特別限制，例如可 使用由與圖l所示的電泳芯片的下基板l同樣的材質所形成的基 板。
前述密封材料(下基板)l的長度和寬度與前述基板(上基 板)4的長度和寬度相同。前述密封材料(上基板)4的厚度在 例3口50 ~ 1000pm的范圍，4尤選100 ~ 300[im的范圍。
前述密封材料(下基板)l還可以使用例如市售的密封材料。
該例的電泳芯片中，前述芯片整體的最大厚度為前述基板 (上基板)4和前述密封材料(下基板)l的厚度的合計。前述 芯片整體的最大厚度如前所述。
下面示出該例的電泳芯片的制造工序的 一 例。^f旦前述電泳 芯片也可以通過下述制造工序以外的工序來制造。
首先，制作前述基板(上基板)4。在前述基板(上基板) 4上形成前述試樣分析用毛細管流路3x和前述試樣導入用毛細 管流路3y的方法沒有特別限制，例如可以與前述實施方式1同樣 形成。在前述基纟反(上基纟反)4上形成前述4個通孔的方法也沒有特別限制，例如可以與前述實施方式l同樣形成。
接著，通過用密封材料(下基板)l密封前述基板(上基板)
4的底面，由此能夠制作該例的電泳芯片。
該例的電泳芯片的構成并不限定于圖8的構成。例如可以與
圖4等同樣具有多個電極，也可以適當具有前述的前處理槽等。
使用該例的電泳芯片的電泳裝置的構成也沒有特別限定，例如
可以具有與圖5或6的電泳裝置同樣的檢測器。進而，使用前述 電泳裝置的糖化血紅蛋白的分析方法也沒有特別限定，例如可 以通過與使用圖5或6所示的電泳裝置時同樣的方法來實施。 (實施方式4 )
圖9示出本發明的電泳芯片另 一個例子。該圖中，與圖1 相同的部分帶有相同的附圖標記。該例的電泳芯片只有1個基 板，前述多個液槽通過作為除前述基板外的另 一部件的毛細管 ^皮連通。前述毛細管由4才艮毛細管3xl、 3x2、 3yl禾口 3y2構成。 前述4根毛細管各自的一端在中心部c集合并連結。這樣，前 述4根毛細管的內部能夠連通。前述基板1設有用于前述4才艮 毛細管嵌入的空洞(未圖示)。前述毛細管3xl的另一端嵌入 前述基板1中，并位于前述第1導入槽2a的底面。前述毛細管 3x2的另 一端嵌入前述基4反1中，并位于前述第1回收槽2b的 底面。前述毛細管3xl和3x2成為前述試樣分析用毛細管流鴻-3x。前述毛細管3yl的另 一端嵌入前述基4反1中，并位于前述 第2導入槽2c的底面。前述毛細管3y2的另 一端嵌入前述基板 1中，并位于前述第2回收槽2d的底面。前述毛細管3yl和3y2 成為前述試樣導入用毛細管流路3y。前述多個液槽2a~ d分別 在前述基板1上形成為凹部。前述基板1在前述試樣導入用毛 細管流路3y至第1回收槽2b側具有長方體狀的開口部(窗)9。 除此之外，該例的電泳芯片與圖1所示的電泳芯片構成相同。該例的電泳芯片可例如下述那才羊來制造。^旦前述電泳芯片 也可以通過下述制造方法以外的方法來制造。
前述基板l可以使用例如由與圖l所示的電泳芯片的下基板 1同樣的材質所形成的基板。
該例的電泳芯片中，前述基板l的長度、寬度和厚度為前述 芯片整體的最大長度、最大寬度和最大厚度。所以前述基板l 的長度、寬度和厚度可以與前述芯片整體的最大長度、最大寬 度和最大厚度相同。
前述4才艮毛細管的內徑分別按照前述毛細管流^各的最大直
徑。前述4才艮毛細管的長度分別由前述試樣分析用毛細管流路3x 和前述試樣導入用毛細管流路3y的最大長度來決定。
下面示出該例的電泳芯片的制造工序的 一 例。^f旦前述電泳 芯片也可以通過下述制造工序以外的工序來制造。
首先，制作前述基板l。在前述基板l形成前述4個液槽2a d和前述開口部(窗)9的方法沒有特別限制，例如可以通過與 圖7所示的電泳芯片的4個液槽2a d同樣的方法來形成。前述4 個液槽2a d和前述開口部(窗)9既可以各自分別形成，也可 以全部同時形成。分別形成前述4個液槽2a ~ d和前述開口部 (窗)9的情況下，可以按照任意順序來形成。通過前述使用模 具的方法等來同時形成全部前述4個液槽2a d和前述開口部 (窗)9,能夠減少工序，故優選。
接著，將前述4根毛細管嵌入前述基板1。由此能夠獲得該 例的電泳芯片。
圖10示出具有多個電極的該例的電泳芯片。該圖中，與圖4 相同的部分帶有相同的附圖標記。如圖所示，該電泳芯片中，4 根電極6a d埋入前述基才反l中。除此以外，該例的電泳芯片與 圖4所示的電泳芯片構成相同。前述4才艮電才及6a d能夠通過例如在前述基板1制造時在前述基板1側面預先形成前述4根電極
6a~ d的導入孔而容易地配置。
圖ll中示出含有該例的電泳芯片的電泳裝置的一例。該圖 中，與圖5相同的部分帶有相同的附圖標記。如圖所示，該電泳 裝置中，分析部(在線檢測器)7直接配置在前述毛細管上。此 外，該電泳裝置中，基板l不僅設有用于前述4根毛細管嵌入的 空洞，而且設有用于前述分析部(在線檢測器)7嵌入的空洞(未 圖示)。除此以外，該例的電泳裝置與圖5所示的電泳裝置構成 相同。該例的電泳裝置并不限于圖ll的構成，還可以具有例如 與圖6的電泳裝置相同的檢測器。使用該例的電泳裝置的糖化血 紅蛋白的分析也可以通過與使用圖5或6所示的電泳裝置時同樣 的方法來實施。
(實施方式5 )
圖12示出本發明的電泳芯片的另 一個例子。該圖中，與圖 1相同的部分帶有相同的附圖標記。該圖為該例的電泳芯片的 平面圖。如圖所示，該電泳芯片中，在下基板1 (未圖示)上 形成雙T字狀的槽來代替十字狀的槽，由此而形成試樣分析用 毛細管流^各3x和試樣導入用毛細管流i 各3y。即，首先，試樣 分析用毛細管流路3x為直線狀，第1導入槽2a和第1回收槽 2b通過前述試樣分析用毛細管流路3x被連通。從前述試樣分 析用毛細管流路3x的一部分分支出第1分支流3各llx。前述第 1分支流路llx與第2導入槽2c連通。在前述第1分支流路llx 的下游側(該圖中為右側)的前述試樣分析用毛細管流路3x 的一部分分支出第2分支流路lly。前述第2分支流路lly與 前述第2回收槽2d連通。前述第1分支流^各llx、前述第2分 支流路lly、以及連接它們的前述試樣分析用毛細管流路3x的 一部分形成了前述試樣導入用毛細管流路3y。前述第1分支流路llx和前述第2分支流路lly與前述試樣分析用毛細管流路 3x大致垂直，與前述試樣分析用毛細管流^各3x—起形成為雙T 字狀的槽。除此以外，該例的電泳芯片與圖1所示的電泳芯片 構成相同。
此外，該例的電泳芯片的構成并不限于圖12的構成。例如 也可以與圖8同樣地^又由l個基片反構成。此外，可以與圖4和10 等同樣地具有多個電極，也可以適當具有前述的前處理槽等。 該例的電泳芯片的制造方法也沒有特別限定，例如可以與前述 實施方式1 4中說明的制造方法相同。使用該例的電泳芯片的 電泳裝置的構成也沒有特別限定，例如可以具有與圖5、 6或11 的電泳裝置同樣的檢測器。進而，使用前述電泳裝置的糖化血 紅蛋白的分析方法也沒有特別限定，例如可以通過與使用圖5、 6或11所示的電泳裝置時同樣的方法來實施。
實施例
使用圖5所示的電泳裝置來進行HbAlc的分析。即，首先通 過加壓將電泳液填充到試樣分析用毛細管流^各3 x和試樣導入用 毛細管流路3y中。前述電泳液4吏用的溶液為在100mM的蘋果 酸中加入精氨酸而制成p H 5.5的溶液，向其中按照0.5重量％的 比例添加軟骨素C。
接著，將試樣導入第2導入槽2c中。前述試樣使用Hb對照 樣品。^妄著，對電才及6c施加0.60kV的電壓而不對電才及6d施加電 壓，從而4吏前述試樣導入用毛細管流3各3y的兩端產生電位差。 由此，使前述試樣移動到前述試樣分析用毛細管流^各3x和前述 試樣導入用毛細管流^各3y的交叉部分。此時，電才及6a和電極6b 上共施加了 0.30kV的電壓。
接著，在對前述電極6c和前述電極6d共施力卩0.40kV的電壓 的同時，通過對前述電4及6a施加1.00kV的電壓而不對前述電極6b施加電壓，由此Y吏前述試樣分一斤用毛細管流^各3x的兩端產生 電位差。由此， -使前述試樣8從前述試樣分析用毛細管流路3x 和前述試樣導入用毛細管流路3y的交叉部分移動到前述第l回 收槽2b側。
接著，通過前述在線檢測器7測定距前述試樣分析用毛細管 流路3x和前述試樣導入用毛細管流路3y的交叉部分的距離(泳 動距離)和吸光度的關系。測定結果示于圖13的圖表。如圖所 示，本實施例中，能夠將HbAlc與試樣中的其他成分如HbAO等 分離后進行檢測。分析需要的時間(泳動時間)為20秒，是極 短的時間。
產業上的利用可能性
本發明的電泳芯片能夠使裝置小型化和縮短分析時間，且 能夠以高精度分析糖化血紅蛋白。本發明的電泳芯片能夠應用 于例如臨床檢查、生化檢查、醫學研究等中的糖化血紅蛋白的 分析的全部領域，其用途沒有限定，能應用于廣闊的領域中。
權利要求
1.一種電泳芯片，其為用于糖化血紅蛋白分析的電泳芯片，其特征在于，包含基板、多個液槽、以及毛細管流路，前述多個液槽包含第1導入槽和第1回收槽，前述毛細管流路包含試樣分析用毛細管流路，前述基板上形成有前述第1導入槽和前述第1回收槽，前述第1導入槽和前述第1回收槽通過前述試樣分析用毛細管流路被連通。
2. 根據斥又利要求1所述的電泳芯片，前述多個液槽還包含第2導入槽和第2回收槽，前述毛細管流^各還包含試樣導入用毛細管流^各，前述基板上形成有前述第2導入槽和第2回收槽，前述第2導入槽和前述第2回收槽通過前述試樣導入用毛細管流路:故連通，前述試樣導入用毛細管流路和前述試樣分析用毛細管流路交叉，前述試樣導入用毛細管流^各和前述試樣分析用毛細管流路通過前述交叉部分被連通。
3. 根據權利要求2所述的電泳芯片，從前述試樣分析用毛細管流路的一部分分支出第l分支流路，前述第1分支流路與前述第2導入槽連通，從位于前述第1分支流路下游側的前述試樣分析用毛細管流路的一部分分支出第2分支流路，前述第2分支流3各與前述第2回收槽連通，通過前述第l分支流路、前述第2分支流:路、以及連接它們的前述試樣分析用毛細管流路的一部分來形成前述試樣導入用毛細管流3各。
4. 根據權利要求1所述的電泳芯片，芯片整體的最大長度在10 ~ 100mm的范圍，芯片整體的最大寬度在10 ~ 60mm的范圍，芯片整體的最大厚度在0.3 ~ 5mm的范圍。
5. 才艮據^L利要求1所述的電泳芯片，在分析前述糖化血紅蛋白時，將用電泳液稀釋含有前述糖化血紅蛋白的試樣而成的稀釋試樣導入前述多個液槽中的至少一個槽，前述試樣前述電泳液的體積比在1: 4~1: 99的范圍。
6. 根據權利要求1所述的電泳芯片，前述毛細管流路中填充有電泳液。
7. 根據權利要求1所述的電泳芯片，前述毛細管流路中，其最大直徑在10~ 200jim的范圍，其最大長度在0.5 ~ 15cm的范圍。
8. 根據權利要求1所述的電泳芯片，其還包含前處理槽，所述前處理槽用于對含有前述糖化血紅蛋白的試樣進行溶血且將其稀釋，前述前處理槽和前述多個液槽中的至少一個槽連通。
9. 根據權利要求1所述的電泳芯片，前述糖化血紅蛋白為HbAlc。
10. 根據權利要求1所述的電泳芯片，前述基板包括上基板和下基板，前述上基板上形成有多個通孔，前述下基板上形成有槽，前述上基板層疊在前述下基板上，前述上基板上所形成的多個通孔的底部被前述下基板封閉而形成空間，該空間成為前述多個液槽，前述下基板上所形成的槽的上部被前述上基板封閉而形成空間，該空間成為前述毛細管流路。
11. 根據權利要求1所述的電泳芯片，前述基板上形成有多個凹部和槽，前述基板表面被在與前述多個凹部對應的位置開有孔的密 封材料密封，前述基板上所形成的多個凹部成為前述多個液槽， 前述基板上所形成的槽的上部被前述密封材料封閉而形成 空間，該空間成為前述毛細管流^各。
12. 根據權利要求1所述的電泳芯片，其還含有密封材料， 前述基板上形成有多個通孔，前述基板的底面形成有槽， 前述基板的底面被前述密封材料密封，前述基板上所形成的多個通孔的底部被前述密封材料封閉 而形成空間，該空間成為前述多個液槽，前述基板的底面上所形成的槽的下部被前述密封材料封閉 而形成空間，該空間成為前述毛細管流^各。
13. 根據權利要求1所述的電泳芯片，前述多個液槽通過 作為除前述基板外的另 一部件的毛細管被連通，前述毛細管成 為前述毛細管流^各。
14. 根據權利要求1所述的電泳芯片，前述多個液槽的容 積分別在1 ~ 1000mm3的范圍。
15. 根據權利要求1所述的電泳芯片，其還具有多個電極， 前述多個電招j皮配置為各自的一端位于前述多個液槽內。
16. —種電泳裝置，其為包含電泳芯片和分析部的電泳裝置，前述電泳芯片為斥又利要求1所述的電泳芯片。
全文摘要
本發明提供一種毛細管電泳芯片，其能夠小型化和縮短分析時間，且能夠以高精度分析糖化血紅蛋白。所述芯片包含上基板(4)、下基板(1)、第1導入槽(2a)、第1回收槽(2b)、以及試樣分析用毛細管流路(3x)，前述下基板(1)上形成有前述第1導入槽(2a)和前述第1回收槽(2b)，前述第1導入槽(2a)和前述第1回收槽(2b)通過前述試樣分析用毛細管流路(3x)被連通。
文檔編號G01N27/447GK101663578SQ20088001292
公開日2010年3月3日 申請日期2008年4月23日 優先權日2007年4月27日
發明者中山雄介, 杉山幸司, 米原聰 申請人:愛科來株式會社