專利名稱：微量稀釋法和扣除上清液法的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫用免疫檢驗技術，特別是用來克服HOOK效應和省去洗滌的免 疫檢驗技術，二者可分別使用或聯合使用。
背景技術：
現有的免疫檢驗方法(比如ELISA)中的一步法，常會遇到H00K效應，即 在檢測高濃度標本時，反而呈現假低值或陰性(后帶現象)。通常通過稀釋待測物或 兩步法或競爭法來解決，而這些方法存在操作繁瑣或線性范圍較窄等問題。本發明以 一種簡便的微量稀釋法就可基本克服H00K效應。大多數免疫檢驗方法都需要將結合 物和未結合物分離，以使結合物的顯示不受干擾。 一般是通過洗滌來達到此目的，而 洗滌是個繁瑣又容易造成誤差的環節。本發明以一種扣除上清液法就可避免常規洗 滌。
發明內容
一. 微量稀釋法將一尖頭物(比如細針或牙簽硬毛等)在待測物中點一下，使尖頭 沾微量待測物；將此尖頭(可除去或不除去多余液體)在反應容器(試管或微孔)底 壁點一下(或在該容器的試劑中點一下)，加入試劑(容器中已有試劑時省去此步)， 混合反應一定時間；將已沾待測物的尖頭在容器的試劑中點一下，再混合反應一定時 間(可重復此歩驟)。即在檢測時稀釋。可用無吸附無殘留反應容器。
二. 扣除上清法將上清液和沉集物分離后(可用磁分離或其他分離方式)，將部分 或全部上清液(或稀釋的上清液)吸入另一相同容器(吸頭和容器用硅烷化材料制成， 無吸附無殘留，或使各吸頭或容器中殘留量盡量一致)，并聯檢測(對照值)，再從沉 集物的顯示值扣除對照值或經過計算的對照值，就可得出沉集物上結合物的顯示值。 由此省去洗滌。另一方案是將上清液(或稀釋的上清液)和沉集物在同一反應容器中 分歩反應顯示，比如，在沉集物集于容器底一側后，在磁場固定下，用無殘留吸頭移 去部分或全部上清液，將試劑加入該容器，反應一定時間后，測顯示值；然后去掉磁 場，使沉集物重懸混勻，再反應一定時間后，使沉集物沉集于容器底一側，測上清液 顯示值，算出沉集物上結合物的顯示值，査出待測物濃度。
方案特點
3一. 根據文獻，在液相中抗原和抗體結合反應可在數秒中內完成。同理，微量稀 釋法使高濃度待測物稀減到合適濃度后，在數秒內就可完成抗原和抗體結合反應，達 到或超過某一上限顯示值(無需準確定量)，提示需做進一步定量分析。微量稀釋法 雖然不能準確加標本，但可用來篩檢高濃度標本。用無吸附無殘留吸頭和容器。
二. 將上清液初步分離后測的顯示值，減去沉集物中所剩余上清液所產生的顯示 值，其效果應基本等同于充分洗滌沉集物后測的顯示值。全部移去上清液后各容器之 間殘余上清液量的差別應基本等同于放射免疫法時殘余上清液量的差別。也可去掉全 部上清液，加入稀洗液，再將稀洗液移入另一容器，并聯測定顯示值，進一步減少誤 差。用無吸附無殘留的吸頭和容器。
三. 一種硅垸化的微孔條板可用作無吸附無殘留容器。
具體實施例方式
用微量加樣排針(在一排用松緊帶相連的小塊上各附一根細針或牙簽等尖頭物， 各針間距可伸縮改變)批量加樣。拉開微量加樣排針，使針距加大，針頭插入各試管 的標本中點一下，松開排針使針距縮小，將沾有標本的針對準插入各反應容器(試管 或微孔)在容器底壁點一下，加試劑混合反應；又將沾有標本的排針插入各反應容器 的試劑中點一下，混合反應；然后加入足量標本，混合反應，繼續進行余步驟。
經磁吸(或其他分離方式)分離后，將容器(沉集孔)中部分或全部上清液移入 另一空白容器(對照孔)中，并聯加入試劑反應、檢測沉集孔和對照孔顯示值，再從 沉集孔顯示值扣除對照孔顯示值(或經過計算的值)，就可得出沉集物中結合物的顯 示值，查出待測物含量。
權利要求
1一組用于免疫檢測的技術，其特征是以微量稀釋法來基本克服HOOK效應；以扣除上清液法來避免常規洗滌，兩者可組合使用或分別使用。
2.根據權利要求1所述技術，微量稀釋法是用一尖頭物沾取微量標本，置入反應 容器中，使微量標本參與反應(可重復此步驟)；再加足量標本參與反應。
3.根據權利要求1所述技術，在與沉集物分離后，將部分或全部上清液(或稀釋 上清液)移入另一容器對照反應顯示；或將上清液(或稀釋上清液)和沉集物在同一 容器中分步反應顯示，再算出沉集物的顯示值，査出待測物濃度。
4.根據權利要求1所述技術，所用硅烷化微孔板。
全文摘要
一組用于免疫檢測技術，其特征是(一)以微量稀釋法來基本克服HOOK效應用一尖頭物沾取微量標本，置入無吸附反應容器中，使微量標本參與反應，再加足量標本參與反應；(二)以扣除上清液法來避免常規洗滌在與沉集物分離后，用無殘留吸頭將部分或全部上清液(或稀釋上清液)吸入另一容器對照反應顯示，再從沉集孔顯示值扣除對照孔顯示值(或經過計算的值)，就可得出沉集物中結合物的顯示值，查出待測物含量；或將上清液(或稀釋上清液)和沉集物在同一容器中分步反應顯示，再算出沉集物的顯示值，查出待測物濃度。兩者可組合使用或分別使用。
文檔編號G01N33/50GK101676720SQ200810149019
公開日2010年3月24日 申請日期2008年9月16日 優先權日2008年9月16日
發明者陳純美 申請人:陳純美