專利名稱：一種d-型和/或l-型苯乳酸快速檢測方法
技術領域：
一種D-型和/或L-型苯乳酸快速檢測方法，特別涉及D-型苯乳酸和/或L-型 苯乳酸的定性檢測和含量測定的方法，屬于生物防腐劑的檢測方法技術領域。
背景技術：
苯乳酸是乳酸菌產生的一種新型抑菌物質。研究表明苯乳酸抑菌譜廣，它 對多種食源性致病菌如致病性大腸桿菌、單核細胞增李斯特菌和金黃色葡萄球 菌；腐敗菌包括產毒素的絲狀真菌如赭曲霉、疣孢青霉和桔青霉，有很強的抑 菌作用。
苯乳酸是一種天然防腐劑。它存在于天然蜂蜜中，對人和動物細胞無毒。 乳酸菌是公認為安全(Generally recognized as safety, GRAS)的微生物，千百年來 用于食品保藏。因此，苯乳酸被認為是繼乳酸菌產生的第一代抑菌物質如乳酸、 醋酸，第二代抑菌物質如Nisin(乳酸鏈球菌素)等細菌素以外，可用于食品體系的 新型抑菌物質。與Nisin相比，苯乳酸抑菌譜寬、穩定性高、親水性強。
目前對苯乳酸的檢測方法主要有薄層層析和高效液相色譜等方法。其中薄 層層析的方法只能定性檢測和半定量檢測苯乳酸。而已有的高效液相色譜檢測 方法是利用反相柱層析對樣品中的苯乳酸進行檢測，根據保留時間與峰面積來 定性和定量檢測苯乳酸；然而，利用反相柱層析不能將D-型苯乳酸和L-苯乳酸 分離開，檢測的是總苯乳酸含量，其弊端是1)不能鑒定出樣品中苯乳酸的構 型，2)不能分別對D-型和/或L-型苯乳酸進行定性和定量分析。然而，D-型和/ 或L-型苯乳酸的同時定性定量分析，對于不同構型苯乳酸作為新型生物防腐劑 的效價分析及苯乳酸發酵生產的構型形式分析，具有重要的意義。
發明內容
本發明的目的是提供一種D-型和/或L-型苯乳酸的快速檢測方法。本發明檢 測快速，定量準確，重現性好；可檢測的樣品范圍廣；可用于苯乳酸發酵生產 研究中的定性定量檢測，及苯乳酸作為生物防腐劑在食品工業中的劑量檢測。
本發明的技術方案 一種D-型和/或L-型苯乳酸快速檢測方法，通過高效液 相色譜方法，利用手性柱將待測樣品中的D-型和/或L-型苯乳酸與雜質分離，通 過紫外光吸收在線檢測，分別通過高效液相色譜的保留時間和峰面積來定性和 定量檢測D-型和/或L-型苯乳酸。
高效液相色譜條件為高效液相色譜儀型號為AgilentllOO;手性層析柱型 號為Chiral-cel OJ-R;流動相為pH2.0、 0.2 M H3P04-KH2P04緩沖液-甲醇-乙氰體積比為85 : 1 : 14的混合液；流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣量為50 |iL; 檢測條件為210nm。
本發明的有益效果本發明檢測快速，定量準確，重現性好；可檢測的樣 品范圍廣；可用于苯乳酸發酵生產研究中的定性定量檢測，及苯乳酸作為生物 防腐劑在食品工業中的劑量檢測。
圖l D-型苯乳酸標準樣品的檢測結果圖。 圖2 L-型苯乳酸標準樣品的檢測結果圖。 圖3 D-型和L-型苯乳酸混合物的檢測結果圖。 圖4微生物發酵產物中的D-型和L-型苯乳酸的檢測結果圖。
具體實施例方式
實施例l D-型苯乳酸標準樣品的快速檢測
以Sigma公司產品D-苯乳酸配制成1 mg/mL濃度的標準溶液，取一定體積 的該溶液進行高效液相色譜檢測分析。高效液相色譜條件為高效液相色譜儀 型號為Agilent 1100;手性層析柱型號為Chiral-cel OJ-R;流動相為0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)緩沖液-甲醇-乙氰(體積比為85 : 1 : 14);流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣量為50 jiL;檢測條件為210nm。
圖1給出了 D-型苯乳酸標準樣品的檢測結果圖。D-型苯乳酸在該層析條件 下的出峰保留時間約為18.3 min，可通過積分軟件進行D-型苯乳酸的峰面積計 算，并進行樣品中D-型苯乳酸的定量分析。
實施例2 L-型苯乳酸標準樣品的快速檢測
以Sigma公司產品L-苯乳酸配制成1 mg/mL濃度的標準溶液，取一定體積 的該溶液進行高效液相色譜檢測分析。高效液相色譜條件為高效液相色譜儀 型號為Agilent 1100;手性層析柱型號為Chiml-cel OJ-R;流動相為0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)緩沖液-甲醇-乙氰(體積比為85 : 1 : 14);流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣量為50 pL;檢測條件為210nm。
圖2給出了 L-型苯乳酸標準樣品的檢測結果圖。L-型苯乳酸在該層析條件 下的出峰保留時間約為17.2 min，可通過積分軟件進行L-型苯乳酸的峰面積計 算，并進行樣品中L-型苯乳酸的定量分析。
實施例3 D-型和L-型苯乳酸混合物的快速檢測
以Sigma公司產品D-型苯乳酸和L-型苯乳酸配制成0.5 mg/mL D-型苯乳酸 和0.5 mg/mL L-苯乳酸混合液，取一定體積的該混合液進行高效液相色譜檢測分 析。高效液相色譜條件為高效液相色譜儀型號為Agilent 1100;手性層析柱型 號為Chiral-cel OJ-R;流動相為0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)緩沖液-甲醇-乙氰 (體積比為85 : 1 : 14);流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣量為50 pL;檢測條件為210 nm。
圖3給出了 D-型和L-型苯乳酸混合物的快速檢測圖。D-型和L-型苯乳酸在 該層析條件下的出峰保留時間分別約為18.6和17.3 min，可通過積分軟件分別 進行D-型和L-型苯乳酸的峰面積計算，并進行樣品中D-型和L-型苯乳酸的定
量分析。
實施例4待測樣品中的D-型和L-型苯乳酸的快速檢測
以植物乳桿菌發酵液為待測樣品，通過高效液相色譜檢測分析D-型和L-型 苯乳酸的含量。高效液相色譜條件為高效液相色譜儀型號為Agilent 1100;手 性層析柱型號為Chiral-cel OJ-R;流動相為0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)緩沖 液-甲醇-乙氰(體積比為85 : 1 : 14);流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣 量為50jiL;檢測條件為210nm。
圖4給出了植物乳桿菌發酵液中的D-型和L-型苯乳酸的檢測結果圖。D-型 和L-型苯乳酸在該層析條件下的出峰保留時間分別約為18.9和17.6 min，可通 過積分軟件分別進行D-型和L-型苯乳酸的峰面積計算，并進行樣品中D-型和 L-型苯乳酸的定量分析，分別為0.408 mg/mL和0.397 mg/mL。
權利要求
1、一種D-型和/或L-型苯乳酸快速檢測方法，其特征是通過高效液相色譜方法，利用手性柱將待測樣品中的D-型和/或L-型苯乳酸與雜質分離，通過紫外光吸收在線檢測，分別通過高效液相色譜的保留時間和峰面積來定性和定量檢測D-型和/或L-型苯乳酸；高效液相色譜條件為高效液相色譜儀型號為Agilent 1100；手性層析柱型號為Chiral-cel OJ-R；流動相為pH 2.0、0.2M H3PO4-KH2PO4緩沖液-甲醇-乙氰體積比為85∶1∶14的混合液；流速為0.4mL/min；柱溫為20℃；上樣量為50μL；檢測條件為210nm。
全文摘要
一種D-型和/或L-型苯乳酸快速檢測方法，屬于生物防腐劑的檢測方法技術領域。本發明通過高效液相色譜方法，利用手性柱將待測樣品中的D-型和/或L-型苯乳酸與雜質分離，通過紫外光吸收在線檢測，分別通過高效液相色譜的保留時間和峰面積來定性和定量檢測D-型和/或L-型苯乳酸。本發明檢測快速，定量準確，重現性好；可檢測的樣品范圍廣；可用于苯乳酸發酵生產研究中的定性定量檢測，及苯乳酸作為生物防腐劑在食品工業中的劑量檢測。
文檔編號G01N30/02GK101308124SQ200810123519
公開日2008年11月19日 申請日期2008年6月17日 優先權日2008年6月17日
發明者周宏敏, 波 江, 沐萬孟, 羅昭鋒 申請人:江南大學