專利名稱：一類分子檢測系統的制作方法
技術領域：
本發明涉及分子檢測領域，具體地，本發明提供了一類分子檢測系統。
背景技術：
生物分子和其他待檢物可以通過能與其反應的選擇性或特異性探針所檢測，已經 有基于生物傳感器陣列技術原理，將探針點排列在基質或芯片上的策略，以實施上述 檢測，例如M. Schena和R. W. Davis在DNA Microarrays: A Practical Approach (M. Schena ed., Oxford University Press 1999)—書中闡述了多種策略，陣列用于檢 測和發現基因序列，以選擇和測試候選藥物分子、研究毒理和藥理反應以及其他用途。 靶點可以通過多種相互作用方式與探針結合，包括核酸堿基配對或雜交、蛋白與蛋白 的相互作用、蛋白與配基的相互作用、酶和底物的相互作用、受體與配基的相互作用 和其他化學反應。
生物傳感器允許同時檢測大量的生物分子間的反應，如用微陣列檢測蛋白或者核 酸，這種技術成為利用來自于人類基因組計劃和其他物種基因組測序的大量序列的有 力工具。
來自于待檢物的信號通常很小，同時因為各種來源的背景造成此類檢測方法信噪 比相對較低，低信號導致低信噪比和待檢物難以檢出。 一種解決方法是加強待檢物的 信號以提高其固有的檢測信噪比，提高信噪比有利于降低對待檢物的檢測局限，使檢 到更低濃度待檢物和開拓新的分子檢測應用成為可能。
發明內容
本發明的目的之一為提供一類分子檢測系統，其包括
a)化學或生物分子；b)聚合物； C)交聯分子；以及 d)圖像傳感器，
其中，所述聚合物與所述光電傳感器共價連接，所述化學或生物分子與所 述聚合物橫向連接，所述聚合物通過交聯分子在分子內、分子間共價和/或非共 價連接。
優選地，所述圖像傳感器為CMOS圖像傳感器。
優選地，在所述光電傳感器之上設有透明薄層支持物，所述聚合物布于透明薄 層支持物。
本發明的目的之一是提供一種使用傳感器檢測待測物用的共聯聚合物。
根據本發明的共聯聚合物包括a)化學或生物分子；b)聚合物，以及C)交 聯分子，所述化學或生物分子與所述聚合物橫向連接，所述聚合物通過交聯分 子在分子內、分子間共價和/或非共價連接，其中所述聚合物為天然或合成的聚合
物，優選地，所述天然聚合物為可以線性或支鏈的多聚糖、分支DNA或水凝膠，
所述線性多聚糖為右旋糖酐，所述支鏈多聚糖為支鏈淀粉糖酐，所述合成聚合物 為甲基乙烯基醚/馬來酸酐共聚物。
本發明的共聯聚合物中所包含的聚合物可以是固體、膠體和非定型等狀態，片狀、 珠狀、盤狀或以上的混合形式，也可以由線狀、枝狀、側鏈枝狀、梳狀、星狀或者樹 枝狀等同種或異種組成，多聚物分枝包括長枝和短枝，是由化學合成或者從天然物質 中提取出來而獲得的。例如此類多聚物包括碳水化合物、糖類、同多糖、雜多糖、瓊 脂糖、直鏈淀粉、支鏈淀粉、糖原、葡聚糖、纖維素、幾丁質、脫乙酰幾丁質、肽聚 糖和粘多糖等，具體的說如高度分枝的葡聚糖、水合葡聚糖或瓊脂糖，就像水凝膠和聚丙烯酰胺凝膠，此類用于構成共聯物的多聚物也包括寡核苷酸、多肽、肽核酸、蛋 白聚糖、糖蛋白、糖脂，甚至還包括抗體或抗體的片段。
用于構成共聯物的多聚物還包括含有二醇基團的多聚物，如含有gam-diol和鄰 二醇基團的多聚物，也包括含有臨近的羥基和酯基的多聚物，如RNA內的磷酸二酯鍵。
此類共聯物還包括含有多個羥基的多聚物，本發明的描述包括以上多種多聚物的 各種組合。
合成的多聚物可以用于共聯聚合物的骨架，如聚(甲基乙烯基醚共聚馬來酐)，
共聯探針，又如甲醛與(氯甲基)環氧乙烷和2-甲基苯酚的聚合物，其重復單體為
基，然后被Nal04氧化成醛基，氧化后的多聚物就可以通過還原氨基化連接帶有一位 氨基的分子。
本發明的共聯聚合物(Meshed Polymer)是一種多聚衍生物，由一種或幾種化 學或生物分子交聯在這一多聚骨架上形成。
當根據本發明的共聯聚合物中交聯的化學或生物分子是捕獲分子，能選擇性地、 特異地結合到靶分子時，所述共聯聚合物為共聯探針(Mesh Probe)。
另一方面，所述化學或生物分子可以是捕獲分子，具有識別和產生信號的功能， 可以是化學或自然的生物分子，交聯在多聚骨架上，因此以物理方式緊密聯結，識別 分子可特異地、選擇性地結合"分子標簽"(tag),這一標簽常與靶分子相聯；信號 分子的功能是產生信號，用以檢測，可以是直接或間接產生信號，如熒光或化學發 光，從而此時本發明的共聯聚合物為共聯報告物(Mesh Reporter)。
，其帶有的酐基易于和蛋白或衍生寡核苷酸帶有的氨基形成
其帶有的環氧基在堿性pH下首先開環形成鄰二醇交連分子是交聯劑介導多聚骨架分子內或分子間的聯結。它們通常是雙功能的 交聯劑，其功能基團只對多聚骨架或被引入的衍生基團起反應，當然也有例外，如 在一端具有反應基團的G-豐富的寡核苷酸，此端可交聯在多聚骨架上，寡核苷酸內由 此產生的Hoogsteeri堿基配對，使其在多聚物內或多聚物之間形成非共價的交聯。
本發明的另一目的是提供一種制備上述共聯聚合物的方法，該方法包括以下步
驟
1) 用高碘酸鈉氧化多糖，形成含有大量的醛基團的直鏈或分支多聚物；
2) 添加具有氨基反應基的化學或者生物分子；
3) 與NaCNBrBH3同步還原結合完成耦合反應。
本發明的共聯聚合物是通過把多聚物和化學或生物分子耦聯制備而成，很多時候 這種耦聯依靠于化學或生物分子上的功能或反應基團，例如醛基、羥基、胺基、氨基、 羧基、巰基以及以上的組合。
當化學或生物分子與多聚物耦聯或反應來制備共聯聚合物時，多聚物可以通過多 個位點的反應基團直接或通過連接體間接的結合化學或生物分子的功能或反應基團， 這種反應基團包括醛基、羥基、胺基、氨基、羧基、巰基、硫氰酸基、N—羥基琥珀 酰亞胺酯基、酮基、乙二醛基、環氧基、環氧乙烷基、酰亞胺酯基、碳二亞胺基、垸 磷酸基、酐基、馬來酰亞胺基、氮雜環丙烷、丙烯酰基、氟苯基、重氮乙酰基、N-羧 酰咪唑基、琥珀酰亞胺基碳酸酯基、羧甲基、異氰酸基、酰肼基以及以上的組合。
多聚物可以帶有一個氨基反應基團，如脫乙酰幾丁質帶有的氨基，也可以帶有硫 酸基、羧基和磷酸基等功能反應基團，如硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸肝素、硫酸 角質素帶有的硫酸基，和從多糖衍生出的唾液酸、醛糖酸、糖醛酸、氧代醛糖酸、抗 壞血酸帶有的羧基。帶有磷酸基的多聚物如DNA和RNA，這類多聚物可以通過具有不同功能的連接物 與化學或生物分子連接，如一個多聚核苷酸和另一個多聚核苷酸形成的共聯探針，或 一個RNA被氧化提供出醛基以與化學或生物分子形成共聯物。
多種化學或生物分子可以與多聚物連接形成能結合多種靶物質的共聯探針，換句 話說就是一個多聚物鏈可以連接多種化學或生物分子而形成一個共聯探針，這種混合 共聯探針也是本發明的一種應用。
例如，為連接多聚物和化學或生物分子的氨基使用二硫代二 (丙酸琥珀酰亞胺 酯)、酒石酸二琥珀酰亞胺酯或戊二酸二琥珀酰亞胺酯，為連接化學或生物分子的巰 基和多聚物的氨基使用N-琥珀酰亞胺3- (2-吡啶基二硫代)丙酸酯或N-羥基琥珀酰 亞胺-M-馬來酰亞胺基苯甲酸酯，為連接化學或生物分子的巰基和多聚物的醛基使用 4- (N-馬來酰亞胺基甲酯)環己烷-l-羧基-酰肼或3- (2-嘧啶二硫)丙酰肼，為連接 化學或生物分子的巰基和多聚物的羧基使用4- (p-疊氮水楊酰胺)丁胺。
化學或生物分子和多聚物的氨基也可以用異種交聯物連接，如N-5-疊氮基-2-氧 琥珀酰亞胺硝基芐酯或N-羥基硫代琥珀酰亞胺-4-疊氮苯甲酸。
有時候多聚物帶有的羥基可以與羰基化試劑反應，如N， N'-羰基二咪唑，變成 中間體氨基甲酸二氮雜茂酯，然后可以與N-親核試劑如胺、帶氨基的如多肽和蛋白， 而形成N-氨基甲酸烷酯連接物。
帶有羥基的多聚物還可以與N， N' -二琥珀酰亞胺基碳酸酯反應，然后和一個帶 氨基的如一個寡核苷酸上的一個氨基反應，這個氨基可以是在寡核苷酸一端的，也可 以是接近末端的。這種多聚物還可以與3-馬來酰亞胺基丙酸反應，然后與寡核苷酸上 的氨基反應。這種多聚物還可以與化學或生物分子的末端鹵化烷基團反應通過醚基構 成共聯聚合物。
當多聚物在相鄰碳原子上帶有羥基如多糖或糖蛋白，可以與高碘酸鈉反應產生醛
基官能團，從而與帶有氨基的化學或生物分子形成Schiff' s鍵構成共聯探針，
8Schiff' s鍵通過如硼氫化鈉或硼氫化氰鈉等還原劑產生在多聚物和化學或生物分子 之間的仲胺或叔胺連接。
共聯聚合物可以通過光反應交聯，如多聚物和化學或生物分子的氨基即可通過光 反應交聯，從而形成一個連接基團，例如多聚物的氨基連接于1羥基琥珀酰亞胺-4-疊氮水楊酸，然后化學或生物分子的氨基通過光分解與其形成共聯。
又如，化學或生物分子的巰基能與1- (p-疊氮水楊酰胺)-4-(碘代乙酰胺)丁 胺連接，然后多聚物的氨基通過光分解與其形成共聯。
又如，多聚物的醛基能與P-疊氮苯甲酰肼連接，然后化學或生物分子的氨基通過 光分解與其形成共聯。
為了實際應用，有必要甚至可能是必須引入一些多聚物本身分子間和分子內的物 理連接，由于大小的原因共聯聚合物本身可能受到移液管或攪拌器等產生的機械剪切 力而被破壞骨架結構，對應線狀骨架結構的多聚物這種破壞尤其顯著，通過給多聚物 骨架引入物理連接(包括分子內連接)可以減輕這一問題。實際上物理連接可以是共 價的也可以是非共價的，同種雙功能交聯例子如4， 7， 10-三惡-l， 13-十三垸二胺 可以產生共價連接.另一例類似的互連分子是常用的乙酰基二胺。其他強的分子相互 作用可以產生非共價連接，如鳥嘌呤之間的Hoogsteen堿基對導致4條鏈狀的DNA 形成。基于多聚物這種特性，其在水溶液中形成相當緊密的隨機線團，其骨架連接更 主要體現于分子間而非分子內。但在碳水化合物參與的許多情況下，分子力如氫鍵 (分子間和分子內)能幫助穩定基片的探針連接。
本發明的另一目的是提供一種檢測分析物用的具有圖像傳感器的陣列，該陣列包 括上述的共聯探針。所述圖像傳感器可以是CMOS圖像傳感器。所述共聯探針布于所 述圖像傳感器表面上，或者布于與所述圖像傳感器相鄰的基底上。
本發明的另一種體現是共聯探針交聯點樣于很薄而且透明的支持物上，這一基質
可以是多孔的滲水物質也可以是致密的固體。如透明的蓋玻片。這一透明的支持物可以與數字化傳感器直接接觸的或固定在其表面，固定可以通過機械原理或透明粘合 實現，這種薄的支持物易碎，不大可能用于芯片技術為基礎的實際應用，然而，這種 潛在的超薄易碎特性可以被緊貼在數字化傳感器表面而得以改善，在這一設計中，用 新的置換用過的透明支持物。實際應用中，這一設計非常有益，數字化傳感器并非耗 材的一部分可重復使用，因此，此發明中利用超薄透明的支持物是很關鍵的。光感應 點(pixels)和光源(共聯探針)之間的距離增加或采用厚一些的物體，會降低這一 系統的功能，因為，被光感應點(pixels)收集的光信號與它們之間距離的立方成反 比。常規的玻片由于太厚，而被排斥在此應用之列。
通常陣列中的探針用于捕獲和結合待檢物質，探針所捕獲的或者與其一部分結合 的靶點包括有核酸、多聚核苷酸、蛋白、肽核酸、小分子以及很大范圍內的生物分子， 靶點部分結合探針包括抗體等。例如，鏈酶親和素可以用來檢測帶有生物素標記的分 子。
從一方面看，本發明通過合成可以增加捕獲待檢物數量的共聯探針而提高陣列中 的每個點檢測待檢物的數量。這類共聯探針包括如多糖共聯物，此類可以用于放大微 陣列中的點攜帶待檢物數量的分子。
例如，由一個多聚物連接有化學或生物分子所形成的多糖共聯物，其化學或生物 分子作為一個探針或不同的探針，從而構成一個共聯物探針，作為探針的化學或生物 分子通過共價鍵或如離子相互作用或弱電結合力等非共價化學相互作用與多聚物連 接，多聚物可能是線狀的或分枝狀的，如線狀或分枝狀的多糖或寡核苷酸。
將共聯探針結合在傳感器表面可以通過多種途徑實現，例如可以在表面引入環氧 基團，以與共聯探針的羥基或氨基反應，還可以將表面用多聚賴氨酸處理，以結合點 在表面上的共聯探針或生物分子，紫外照射可以將探針或生物分子結合在如載玻片或 電子設備臨近的鈍化層等基質上，共聯探針或寡核苷酸可以被結合在引入醛基、氨基 或異硫氰酸酯基的傳感器表面。陣列的制造機制可以是針點、噴點或芯片上直接合成。本發明的另一目的是提供一種傳感器設備，該傳感設備包括光學數字圖像傳感 器、低光罩和共聯探針陣列。
本發明描述了通過數字圖象或者說"機器視覺"傳感技術來讀取陣列上結合的待 檢物信號，其具有低背景和相對高信噪比的特點，是一種強化的檢測待檢物的生物傳 感器系統。具體的說這種生物傳感器系統應用了包括有子板上的數字圖象傳感器、具 有共聯探針的陣列、帶有傳感器降溫裝置的低光外殼和待檢物信號的積分方法等的信 號傳感技術。
帶有共聯探針的陣列所產生的光學信號可以被數字圖象傳感器檢測，其中數字圖 象傳感器包括光敏元件的矩陣，點制的共聯探針通過共價或非共價結合于數字圖象傳 感器的表面形成陣列。用另一種方式，共聯探針可以點制在可以靠近數字圖象傳感器 的載玻片上，而在載玻片和傳感器直接存在有光纖耦合器。
陣列上單個探針點的局部區域可以大于數字圖象傳感器的單個光敏元件。
同樣探針點大小可以與單個光敏元件一致。
數字圖象傳感器可以是CMOS活性像素傳感器，其每個像素對應連接有數字轉換 器、放大器和寄存器的光敏二極管。CMOS活性像素傳感器的頂層是鈍化層，如可以充 分透光的二氧化硅，以作為隔絕陣列檢測的待檢物溶液和半導體線路的屏障。
另外，本發明涉及通過直接把陣列構建在數字圖象傳感器上以增強其檢測的信 號，這是通過檢測形成在數字圖象傳感器頂部薄的鈍化層上的陣列所發射的化學發光 來實現的，信號可以被接近于陣列的數字圖象傳感器感光原件方便的增強。
本發明通過緊密接觸圖象傳感器與探測器而降低了本底輻射，從而提高了陣列上 被待檢物光學信號測量的信噪比。如附圖1所示，低光外殼100包容了光學圖象傳感 器和陣列，其具有一個頂蓋160和一個底蓋180，底蓋180承載著光學圖象傳感器的 印刷電路板、可選的傳感器冷卻元件，并與頂蓋160機械連接。圖l中光學圖象傳感器的印刷電路板上包括有第二層外殼150與連接器360相連。當頂蓋160扣在底蓋180 上時，形成一個圍繞陣列120的為密閉屏障200所界定的低光區域300，液體受屏障 200界定在這個低光區域中接觸陣列。
在頂蓋160上有一個液體入口通道240，操作時通過液體入口通道240注射含有 靶分子的液體并轉運到陣列120，并匯集到低光區域300，待檢物是通過加工在外殼 100內的毛細結構或液體通道從液體入口通道240傳送到陣列120的，液體入口通道 240包括有一個導入液體的隔膜，并能屏障液體和光。
有時候在底蓋180上裝有一個可選的液體入口通道320， 一個可選的液體通道340 連接可選的液體入口通道320和低光區域300。
屏障200粘附在載玻片底窗280上，當頂蓋160扣在底蓋180上時，接近于圖象 傳感器，液體也匯集于載玻片底窗280上，同時陣列也是加工在低光區域300中的載 玻片底窗280上。
外殼100連接在讀取工作站400上從而可以保持充分的水平，外殼可以連接在讀 取工作站上也可以在任何重力方向上操作，這種情況下液體入口通道和外殼可以在任 何方向上通過表面張力和毛細管作用密閉待檢物液體，從而是待檢物陣列信號可以被 讀取。
如圖1、 2所示，支持有光學圖象傳感器140的印刷線路板380通過電路連接器 360與讀取工作站400進行電路連接，底蓋180上也可以有開口 220以連接光學圖象 傳感器140的電子線路。
生物傳感器系統通過積分待檢物信號而提高其檢測的信噪比，積分是通過增加檢
測來自于陣列的光的收集時間和降低圖象傳感器以外的信號數據傳輸比率來實現的。
為了積分待檢物信號所采用的數據傳輸方法是使用CMOS活性像素傳感器，典型的
CMOS活性像素傳感器就是可以用于攝影機的快速幀頻設備。CMOS活性像素傳感器可
以以非常慢速的狀態來整合(積分)緊密接觸在傳感器上的陣列信號，積分信號存入存儲器，然后重復積分，觀察待檢物信號隨時間的變化率。CMOS活性像素傳感器的幀
頻可以控制，例如在零時間點上清空所有芯片記錄，然后收集固定時段的待檢物發射 的信號，圖象傳感器的單個光敏元件可以同時積分不同的周期。待檢物信號的積分增 加了其信噪比，從而增強了對待檢物的檢測，而允許更低濃度的待檢物可以被檢測。
待檢物信號可以通過冷卻低光外殼中CMOS活性像素傳感器降低其固有的"暗電 流"噪聲來加強，傳感器可以用熱電元件、噴口擴展、制冷、冷液浸泡等途徑進行冷 卻。 一般來說，將傳感器冷卻7'C可減少一半"暗電流"噪聲。因此將傳感器冷卻到 4'C則可以把這種噪聲降低至室溫水平的1/10，含有或者不含有待檢物的液體注入到 低光外殼中時也可以冷卻傳感器。
適用的光學檢測包括檢測熒光、化學發光、生物發光和量子點等方法，標記物或 信號分子附著在多聚物或共聯探針或靶混合物中的待檢物上，包括放射性同位素、熒 光劑、化學發光劑、化學發光體、生物發光劑、酶、抗體、顆粒如磁珠和量子點。附 著有熒光染料的帶有氨基的短寡核苷酸也用于標記物，其氨基可以和共聯報告物的多 聚物連接。用于檢測待檢物的信號分子包括放射性同位素，熒光染料如Cy3、Cy5、Alexa Fluor488、熒光素、羅丹明、得克薩斯紅、玫瑰紅、丹磺酰氯、溴化乙啶、萘胺、pyrenes、 卟啉，化學發光系統如魯米諾、發光氨、吖啶苯酯、釕鹽、生色團，和比色探針如膠 體金、偶氮染料、喹啉染料、花青染料。
標記物包括拮抗劑和對抗劑、毒素、抗原決定基、激素、抗體、多肽、酶、寡核 苷酸、肽核酸、凝集素、碳水化合物、蛋白和藥物，例如用于ELISA檢測的酶可以用 來進行熒光檢測，另外，熒光標記的抗生物素或鏈酶親和素。
對一種特定的待檢物可以通過多種標記物形成多種檢測方法，例如共聯報告物的 多聚物可以連接多種熒光或化學發光標記物，此外，共聯報告物也能夠結合多種靶點， 因此共聯探針的多聚物可以連接多種靶點結合分子和多種不同的標記物。
13對于熒光檢測，熒光物的激發光可以由靠近陣列或者靠近CMOS傳感器外殼的LED 面板提供，在陣列附近陣列點與光敏二極管之間的窄帶濾光片可以從陣列的讀取信號 中去除激發信號，而對發射光進行檢測。
另一種方法是待檢物信號可以通過光學檢測化學發光來讀取測定信息。化學發光 來自于化學反應產生的光，可以被沒有濾光片的寬帶探測器所檢測，如CM0S活性像 素傳感器，陣列點發出的光直接被檢測，背景信號主要來自于"暗電流"。待檢物可 以標記上化學發光標簽用于化學發光檢測，如堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。檢測效 率一部分依賴于對標記的選擇性或特異性附著效率，標記識別物可以是生物素或地高 辛抗體此類的能被酶檢測系統識別的物質，然后發生化學發光反應通過化學鍵斷裂釋 放能量產生離散波長的光子。
在共聯報告物上，信號分子或染料分子相對與標記識別分子的數量比例可以是多 種多樣的，有時至少是3、 4、 5，通常至少是6、 7、 8、 9，也有時至少需要10、 20、 30、 40、 50、 60、 70、 80、 90或者100，不同的組合方式來構成。
本發明中的陣列信號檢測可以使用數字圖象傳感器，也可以使用電荷耦合裝置 (CCD)、光電倍增管(PMT)或雪崩光電二極管來完成，待檢物的檢測也可以通過， 例如電導檢測來完成不同的陣列方案。
本發明涉及到共聯探針在工業、環境、生物醫學和生物技術領域的應用，這項發 明的共聯探針可以應用于分析診斷以及檢測液體、氣體或固體形態中的待檢物，共聯 探針可以與生物傳感器組合應用于對待檢物或液相、非液相、氣相中的有機、無機或 環境顆粒進行檢測。
本發明的再一目的是提供一種生物傳感器系統，其包括讀取工作站、包括有圖象 傳感器的便攜外殼。
如圖4所示，生物傳感器系統包括在低光外殼100中的數字圖象傳感器600、高
數據通量的讀取工作站400和一臺通用計算機700，讀取工作站400至少有一個供帶
14有CMOS數字圖象傳感器600的低光外殼100插入的插座，以形成傳感器外殼與讀取 工作站的電路和機械連接，讀取工作站可以通過通用串行總線(USB) 454、并行端口 接口設備452或以太網接口 456與計算機相連。
根據圖4，在讀取工作站400的主板上有一個可編程的邏輯設備460，如與個 人計算機的通用計算機700相連接，可編程的邏輯設備460也和數字圖象傳感器600 相連，通過監測開始和結束的圖象信號，包括幀、線和時鐘脈沖線，同步讀取數字圖 象傳感器的待檢物數據。可編程的邏輯設備460管理圖象數據從圖象傳感器600傳入 本地FIFO存儲器，直到計算機700要求數據傳送。可編程的邏輯設備460 —個典型 的循環包括計算機700命令傳感器輸出一個圖象，捕捉圖象并傳入讀取工作站400 主板上的本地FIFO存儲器里，傳送捕捉的圖象至計算機700。圖形用戶界面(GUI) 可以讓使用者簡便的實現急射的圖象捕捉顯示循環或連續的動態顯示方式。濾光片和 圖象處理工具可以讓使用者在低光條件下操作傳感器，包括使來自傳感器的弱信號提 升的圖象處理程序、圖象重復增強軟件程序、扣除背景或"全黑"圖象程序和濾除噪 聲程序。GUI還可以讓使用者控制調節傳感器本身的參數設置，如積分時間、增益和 模擬轉換數字的范圍。
讀取工作站包括一個匹配圖象傳感器和低光外殼的連接器，這樣安排是為了讓數 字圖象傳感器待檢物探測器與讀取工作站方便的分開以提高該生物傳感器系統的工 作通量，輕便的數字圖象傳感器外殼構成低光外殼。該生物傳感器系統即插即用的特 點允許其使用輕便可拋棄的數字圖象傳感器外殼，當然生物傳感探測器的外殼也可以 再生應用于其他陣列。
讀取工作站包括一個USB微型計算機接口，也可以包括一個微軟擴展容量接口 (ECP)界面并帶有一個決定主動連接的使用者控制開關，讀取工作站主板可以由USB 線纜供電，但對于ECP則需要9V的直流供電。 一個手控開關可以重啟生物傳感器主 板和可編程的邏輯設備。本發明涉及了通過時間積分來增強待檢物信號檢測的方法，靶物質中待檢物參數 的數據產生和測量受限于數字圖象傳感器陣列檢測產生的光所固有的信噪比。信噪比 可以通過積分待檢物信號幾毫秒或更長時間的積分，通常是10毫秒至大約2分鐘， 有時是30至大約1000毫秒，有時是50至大約600毫秒，這個時間也可以通過儲存 一系列陣列信號幀(畫面)來實現，每一幀也是通過一個時段的待檢物信號積分(整 合)而來的。
USB微型計算機接口為圖象傳感器和可編程的邏輯設備提供了主時鐘，圖象傳感 器輸出像素數據和線幀脈沖，通過連接器傳至主板，存入FIFO存儲器，幀脈沖用于 復位FIF0指針，線脈沖用于許可寫入FIFO， FIFO中儲存的像素數據安排為以上面左 邊的像素作為起始零位置。
一旦圖象存入FIFO，即可通過兩種接口之一被讀取。如圖4所示，ECP允許陣列 圖象數據通過每次讀一個像素的方式讀入并口 (PP) 452，當PP452發送一個反向請 求時，可編程的邏輯設備460許可其向PP452的輸出驅動程序，而開始讀取，然后可 編程的邏輯設備460發送一次時鐘，PP452就相應一次應答，時鐘應答順序進行直到 計算機700讀取完一幀像素，可編程的邏輯設備460用PP452的數據位0和1分別作 為12C總線的SDA和SCL。
另外，FIFO中的圖象數據還可以通過USB接口讀取，相對于常規的USB傳輸來講 提高串行數據傳輸的帶寬可以提高生物傳感器的使用，而常規的USB傳輸中從FIFO 讀取兩個數據包之間存在有一個間隔時間。例如，當從FIF0讀取一個63像素的數據 包并通過常規的USB微型計算機接口的一條數據線傳輸，在FIFO里指定2個終點以 建立2個緩存，實際運行上一個緩存可以在另一個滿了的情況下讀取并通過USB的數 據線傳輸，因此比普通串行總線提高了 100%的傳輸帶寬。第一個緩存數據傳輸即將 結束之前，如1個或幾個時鐘脈沖之前，第二個緩存開始通過通用串行總線的數據線 開始傳輸，而當第二個緩存數據傳輸接近完成的同時，第一個緩存也用了同樣的時間加載數據，這樣的步驟反復進行直至要傳輸的數據完成，因此比傳統的USB提高了傳 輸率。
本發明主要包括幾個關鍵因素傳感器直接對探針檢測、共聯探針、及配對報告 物。此外，共聯探針和共聯報告物通過共價或非共價交聯于聚合物骨架。通過這些過 程的結合使用，本發明能夠建立一種超敏感、高速、低成本、高度便攜的分子檢測系 統，在其眾多潛在的應用中，突出例子就是直接檢測多種形式粗略樣品中的核酸，而 不需要核酸的抽提和擴增環節，這種全新的發明可能會改變或替代目前針對臨床核酸 樣品或其它核酸樣品應用領域的基因分型、基因突變和基因表達圖譜的應用現狀。另 一項應用是以一種超敏感的方式改變或替代以蛋白免疫為基礎的現有多種形式的
ELISA檢測。
圖1示例一個讀取工作站上的低光圖象傳感器外殼；
圖2示例側視低光圖象傳感器外殼；
圖3示例用CMOS圖象傳感器檢測一個探針點的熒光；
圖4a c 示例生物傳感器系統對一個待檢物進行檢測及其陣列檢測數據的顯 示，其中a為單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes), b為流感桿菌 (Hemophilus influenzae) ， c為3、腦膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitides)。
具體實施方式
實施例1
線性葡聚糖(Sigma)用于耦聯帶氨基的寡核苷酸-
線性葡聚糖(Sigma)溶于去離子水，終濃度1%，高壓滅菌，室溫暗環境下每 0. 4毫升葡聚糖溶液被44微升0. 5M的高碘酸鈉氧化，搖床過夜，氧化的葡聚糖用0. 3M的NaOAC和2倍體積的乙醇沉淀洗滌兩次，沉淀空氣干燥后重溶于0. 4毫升5mM pH7. 2 的磷酸鈉緩沖液。
在離心管中加入1微升氧化葡聚糖、7微升10mM的Na2C03 (pH9. 0)和2微升寡 核苷酸(2uM水溶液)，寡核苷酸長度是25—45mer，并在合成時在3，或5，端引入 首位氨基，37'C水浴過夜，加入NaBH4室溫孵育30分鐘，然后用0. 3M的NaOAC和2 倍體積的乙醇沉淀，沉淀用TE重溶，并取一部分進行1%的瓊脂糖凝膠電泳，EtBr 染色，游離的寡核苷酸泳動至很接近鹽前端，而與葡聚糖耦聯的寡核苷酸泳動的非常 慢。
實施例2
高分子量分枝多糖、糖原(Sigma)和支鏈淀粉(Sigma)用于交聯帶氨基的寡核苷酸。 這些聚合物的二醇鍵通過NaIO,氧化成醛基，0.4毫升1%多糖水溶液中加入高碘
酸鈉，對于糖原和支鏈淀粉分別終濃度為25mM和20mM，室溫暗環境搖床氧化過夜，
用0. 3M的NaOAC和2倍體積的乙醇沉淀兩次去除過量的NaI04，沉淀空氣干燥后重溶
于0. 4毫升5mM pH7. 2的磷酸鈉緩沖液，耦聯帶氨基的寡核苷酸及耦聯產物的凝膠分
析與實施例1中葡聚糖相同。
共聯聚合物的制備交聯密度為每10個葡萄糖單體交聯1個寡核苷酸，平均大約每
個糖原分子交聯1000個寡核苷酸分子。
實施例3
信號分子5' -ACTGCT-3， (BP001)的5'末端帶有氨基，3'末端帶有Cy5熒光燃料， 5' 末端帶有氨基的識別探針寡核苷酸分子 AKH108 (5， -CCGTGCAGATCTTAATGTGCCAGTAAAAG-3')與同一多糖交聯，AKH108能與流感嗜 血桿菌基因組中編碼3-磷酸甘油酸激酶基因片段的引物 5， -CCGTGCAGATCTTAATGTGC-3，和5， -GCGCTGTACCAAAGGCATC-3，擴增的PCR產物雜 交，PCR產物以微陣列的形式點在包被有多聚賴氨酸的玻璃載玻片上。 所謂交聯反應即在裝有20nmo1氧化糖原、10mM Na2C03的離心管中加入0. 2nmo1AKH108和2nmo1 BP001，終體積10微升，37。C過夜。
在管中加入終濃度4mM的Na朋"室溫孵育90分鐘，終產物用乙醇沉淀，離心， 交聯產物和游離AKH108處在沉淀中，游離的BP001處在上清中棄去，用10微升3X SSPE/0. 1% SDS/1.0 mg/ml BSA溶解沉淀并加到微陣列表面，室溫雜交5小時，用10 微升的新鮮的0. 1XSSPE/0. 1%SDS清洗載玻片3次，用激光掃描儀進行掃描，觀測PCR 產物的斑點圖譜。 實施例4
能特異性雜交來自以糞腸球菌的RecA基因的PCR擴增產物的寡核苷酸 5' -NH2-CCGATGCC TTAGTTTCAAGTGGTGCGATTGACATCGTTGTCAT-3'，與糖原或支鏈淀粉交 聯，多糖氧化同實施例2。交聯反應即，20nmol氧化糖、2n即l帶氨基的寡核苷酸與 10mM的Na2C03緩沖液(pH9.0)混合，終體積10微升，37。C孵育過夜，交聯反應結束 后加入終濃度4mM的NaB&室溫孵育60分鐘。
終產物用0.3M的NaOAC和2倍體積的乙醇沉淀，然后溶解于lOmM的Na2C03 (pH9.0)。 一部分交聯的寡核苷酸點在環氧處理的玻璃載玻片上，等量的寡核苷酸和 未氧化的多糖混合也點在同一張載玻片上作為對照。芯片上雜交即標記有Alexa Fluor 546 (Molecular Probes Inc)的RecA的PCR產物溶解于3 X SSPE/0. 1% SDS/1. 0mg/ml BSA，并加在玻璃載玻片表面上，室溫雜交3小時，0. 1 X SSPE/0. 1%SDS 清洗，用激光掃描儀進行掃描，與糖原交聯的寡核苷酸點信號相對于非氧化糖原對照 點5. 86倍，與支鏈淀粉交聯的寡核苷酸點信號相對于非氧化支鏈淀粉對照點5. 63倍。 實施例5
二咪唑羰(CDI)活化的過程即4微升0.5M CDI (溶于DMSO)與10微升0.5
X溶于DMSO的多糖、6微升DMS0混合，室溫孵育3小時，偶爾蝸旋振蕩，每管加入
l毫升n-丁醇，蝸旋振蕩徹底混勻，離心，去除丁醇空氣干燥沉淀后，用10微升的
DMS0溶解。對于寡核苷酸交聯，2. 2nmo1帶氨基的寡核苷酸與5微升0. 5%活化CDI
多糖混合，終體積20微升，室溫孵育5天，偶爾蝸旋振蕩，反應結束后加入1微升10
%氨基乙醇，孵育30分鐘，乙醇沉淀，產物溶于10微升TE緩沖液，凝膠電泳分析。實施例6用CMOS圖象傳感器直接在芯片上檢測雜交信號
模塊裸露的PB0330單色圖象傳感器(Photobit)通過插頭座連接于子板，連接 線用環氧樹脂封閉固定，模塊表面用滅菌蒸餾水沖洗3次，空氣干燥。為環氧化表面， 用2%溶于甲醇的(3-丙氧基縮水甘油)三丙氧基-硅垸加到模塊表面，室溫孵育10 分鐘，用甲醇洗2次，空氣干燥。
四種不同的探針(100pmol/ml溶于50mMNa2C03緩沖液，pH10. 5)人工點在環氧 處理過的模塊表面，均點復點。
點干燥后，用1%溶于50 mM Na2C03的氨基乙醇快速洗一次，然后用同樣的封閉 液室溫孵育10分鐘，然后用滅菌蒸餾水沖洗表面4次。
芯片上雜交，模塊表面用3XSSPE/50y。甲酰胺/1. 0 mg/ml BSA室溫孵育20分鐘， 然后和溶于20毫升的3XSSPE/50。/。甲酰胺/1. Omg/ml BSA的PCR產物(末端標記有生 物素，如后詳述)雜交(此前于沸水浴加熱2分鐘，迅速冷卻至4X:)， 3(TC濕盒中雜 交過夜，完成后室溫用O. 1XSSPE清洗4次，每次5分鐘。用鏈酶親和素-堿性磷酸 酶結合雜交的PCR產物上的生物素，首先模塊表面用溶于TBS的lmg/ral BSA室溫孵 育20分鐘，然后用TBS/lmg/ml BSA 1: 100稀釋的Avidx-AP (Tropix)室溫孵育2 小時，再用TBS室溫清洗5次，每次5分鐘。
檢測芯片上雜交信號，模塊表面帶有TBS的子板插入讀取工作站閉光外殼的連接 器里，安裝在PC上的授權軟件接收"暗圖象"(即背景圖象，Idark)，子板插在讀取 工作站上，TBS被換成化學發光底物溶液，包括依據供貨說明制備的CDP-star和增強 劑Emerald II (均來自Tropix)。
大約0.1秒積分時間的圖象幀(I)被從傳感器接收，I-Idark作為真實信號快照， 軟件具有一個把連續處理的快照加在一起并作為一幅圖像顯示結果的子程序，因此更 加延展了積分時間。
以下的傳感器寄存器設置最優增益(寄存器53、 43—46)，最大；積分時間(寄 存器9、 10)，每幀O. 1秒；相似負偏移(寄存器32、 57)，最大；增益級(寄存器62)， 74;其他寄存器保持默認設置。實施例7用T0TDA涂布合成多聚物
在一個Eppendorff管中加入8微升溶于5mM磷酸緩沖液(pH 7. 2)的1%氧化葡 聚糖-500， 1微升lmM 5'帶有氨基的寡核苷酸衍生物，2微升0. 2M的Na2B03 (pH 9. 0)， 2微升20 mM的Na朋3CN， 1微升0. 3mM的TOTDA和6微升的水。混勻在4°C溫育過夜。 然后加入4微升的水和6微升的DMS0，轉到微量滴定板上，轉印到GeneMachine 0mniGrid Accent arrayer的芯片表面。涂布的交聯劑與捕獲的分子比例在10: 1到 1: 1000之間。應該注意在這一還原氨化反應中，靠NaBH3CN形成的shift， s鍵的同 步還原反應幫助偶聯反應完成。
實施例9 G四聯體共聯報告物
一個富含G寡聚核苷酸TP(TGGACCAGACCAGCTATGGGGGAGCTGGGGAA ^T,AATGTGA)可以從含有一個通過鳥嘌呤間的Hoogsteen型堿基對而形成的四鏈 G4-DNA結構的免疫球蛋白基因轉換區中獲得。報道于Sen and Gilbert (1988) 7fe^re 334:364-366, Sen and Gilbert (1990)組,344: 410-414.—個截斷的TP如寡 聚核苷酸Q3 (5' -CACGTATGGGGGAGCTGGGGTAT-3')，被用來制備純化G4-DNA特殊核酸 酶的G4-DNA親和矩陣，報道于Liu and Gilbert (1994) 1083-1092.在鈉
和鉀離子存在的條件下，四鏈結構是非常穩定的。
在一個Eppendorff管中加入，2 mM服P 25微升，0. 3mM濃度5，尾端帶有一個 氨基的Q3寡核苷5微升，20mM濃度NaCNBrH3 IO微升，0. lmm濃度的抗生物素蛋白 5微升，1%的氧化葡聚糖_500 40微升和水5微升。在4'C孵育過夜。然后過柱，柱子 是Bio-GelP-50介質。收集過柱的小部分碎片，然后用包含40%甘油，200mM氯化鈉， 和100mM氯化鉀的緩沖液l: l混勻。-2(TC保存。這個試劑能夠監測分子包含有生物 素標簽的樣品，它能增強其靈敏度。相比于直接的HRP聚合，目前方法得到的多聚服P 有具多優勢。這是因為在冊P之間有更多的間距，這種多聚HRP的形成浮力密度很 小，因此不太可能由于沉淀而與檢測的表面黏著在一起，減少沒有非特異結合的噪聲 信號。另外，HRP之間更好的間距能夠減小底物損耗和底物擴散這些限速的可能性可減少發光信號的收集。堿性磷酸酶或者熒光染料能容易地替代HRP做其它共聯報告物。 葡聚糖骨架中的Q3寡聚核苷主要是提供一個機械的穩定性，能夠減輕由于機械
剪切導致的骨架損傷。眾所周知，在Na和K離子存在的情況下，富含G的寡聚核苷
酸能夠通過Hoogsteen堿基配對形成一個穩定的四級結構(稱為G4DNA或者G四聚體)。 Q3寡聚核苷在葡聚糖中的作用是提供某個物理連接(或連接橋)這個物理連接
是非共價的，在聚合體骨架中間，在自然情況下既能在分子內部又能在分子之間。 當然，帶氨基的Q3寡核苷酸同樣也能用來制備共聯探針，例如替代TOTDA，正
如在例8中所描述的，將產生一個穩定，非共價的聚合體骨架物理連接，從而提供更
好的機械穩定性。
實施例9 Watson-Crick堿基配對穩定共聯報告物
有其它的方法建立聚合體骨架的非共價連接， 一個例子，利用互補的寡核苷酸 之間的特異的堿基配對。可以合成一個17-mer隨機序列寡核苷酸，在3'端帶有氨基 基團，然后合成他的互補核苷酸，在3'端也帶有氨基。正如實施例8所描述的準備 共聯報告物的過程，結合使用這2個寡核苷酸能替代Q3寡聚核苷酸。
實施例10寡聚核苷雜交的敏感滴定
在直接探針感應器的方法中，聯合使用共聯探針和共聯報告物的重要原因是此
舉能夠在很大程度上改良其敏感性。本實施例評估這個結合系統的敏感性。
如實施例5所述，2個不同的寡聚核苷酸A105和D207，各自與氧化葡聚糖交叉
結合。每個共聯探針都以2.2矩陣印在CM0S傳感器上，總共7個芯片被印記。印記
之后，芯片在70%濕度的小室中干燥2小時，然后再80。C真空烘烤過夜，然后用PBS
或相應的溶液漂洗。在含有被生物素化的互補寡聚核苷BC-A105和BC-D207的雜
交溶液，加入了上述芯片。對于所有7個芯片，每個芯片(或雜交反應)BC-A105數
量維持在10—17摩爾，寡聚核苷BC-D207的數量降低10倍，約為10—16到1(T'摩爾之間。
第7個芯片是省略BC-D207的雜交反應。雜交之后，用O. 1XSSPE完全洗脫芯片，然
后，用含有Straptavidin-Poly HRP和1%BSA的TBS緩沖液中溫育1小時，再用TBS洗脫芯片數次，HRP發光的底物就被加在芯片上，雜交結果經過USB閱讀器，直接還 原在個人電腦的桌面上。
重復的數據反復證實這套系統的敏感度是500分子(也就是總量既包括未結合 態也包括雜交后結合態化合物)當沒有BC-D207的時候，在D207共聯探針的"點" 上沒有雜交信號。為了評估這套系統的動態范圍，來自D207的雜交信號數量被A105 的雜交信號數量除后或者數量化修飾之后，這些數據相對BC-D207的濃度作圖，雙對 數圖中，其線性范圍顯示出至少有4.5的對數數量級。
實施例11血清中基因的無擴增檢測
將10毫升人類病人血液離心。從離心管中提出血清的白色細胞層加入到裝有3 毫升細玻璃珠和6毫升PBS緩沖液的15毫升離心管中。然后，用臺式超聲破碎機破 碎一分鐘，重復4次以上。將20微升未經處理的融胞產物加在含有人類CYP450基因 捕獲探針的CMOS傳感器芯片上，然后加入1微升末端含有生物素標簽并能與捕獲探 針雜交的報告探針。經過兩個小時的雜交，并在嚴格的條件下漂洗。然后加入含有 Straptavidin和poly-HRP (多聚辣根過氧化物酶)的共聯報告物在室溫下焙育一小 時。再用PBS緩沖液漂洗數次并將化學發光底物(LMA-6， Lumigen)加到芯片上。雜交 結果通過一個便攜USB讀取裝置傳送到筆記本電腦上。
每十微升血液中含有一百二十萬個白細胞。假定檢測特殊的CYP450單倍體，通 過上述程序回收的樣品總量將達到70%，每20微升未處理的融胞產物就有10， 000份 CYP基因拷貝用于芯片雜交檢測。當前的系統比檢測特異雜交靈敏度更高，因此可以 繞過前面對目標序列的擴增。
實施例12微生物病原體的非擴增檢測
在活細胞中，核糖體RNA是一種大量存在的核酸，估計每個細胞中含有大約
10, 000個。雖然這種RNA在序列上十分保守，但通過特異核酸雜交，種間序列上的差
異足以進行物種鑒定。下面是一個微生物病原體檢測的例子。
23舉例說明大體上檢測原理。將沙眼衣原體溶液濃縮到10，000 cfu/ml備用。在一 個EP管中將0. 3毫升CT溶液與0. 3毫升含有2%SDS的PBS緩沖液和0. 3毫升(體積) 的玻璃珠混合。然后用最高速度在漩渦器上旋轉混勻。在10微升上清液加入10微升 含有90%甲酰胺和6XSSPE的溶液并加入1微升生物素指示探針，然后轉到含有通過多 聚骨架結合了捕獲探針(合為共聯探針)的感受芯片上雜交一小時。在此例，共聯探針 是點在一個透明薄層上，然后再固定到CMOS光電傳感器表面上的(組成感受芯片)。 指示探針和捕獲探針在規定的雜交條件下與同一個核糖體RNA接合。這個長度在17 到45個核苷酸殘基。雜交后芯片的處理過程與上面的例子相同。做這種臨床檢測， 需要包括芯片陽性和陰性對照。而且，可能需要同一種檢測的另外一種病原體如淋球 菌的捕獲和指示探針。假如玻璃珠漩渦造成的CT細胞溶菌破裂率大約是10%，那么對于任何給定的核糖 體RNA，可以計算出目標分子出現在每個雜交反應中的數量正如上面描述的是大約 150000。雖然這僅僅是下限，但是對于沒有任何酶擴增的系統這個數值已經足夠用于 檢測。在對于最常見的性傳染疾病CT/NT進行臨床檢測時， 一般是用棉花球插入陰道取 樣。取樣后的棉花球可用PBS緩沖液將大部分細胞清洗下來，然后重懸在1毫升的PBS 中。CT/NC呈陽性的病人，以這種方式收集到的細胞至少可以達到10000個細胞每毫 升。這樣上面所描述的檢測法就完全可以適用了。這兒揭示的原理可以應用于通過水 或食物傳播的病原體的非擴增檢測。
權利要求
1、一類分子檢測系統，其特征在于，所述檢測系統包括a)化學或生物分子；b)聚合物；c)交聯分子；以及d)圖像傳感器，其中，所述聚合物與所述光電傳感器共價連接，所述化學或生物分子與所述聚合物橫向連接，所述聚合物通過交聯分子在分子內、分子間共價和/或非共價連接。
2、 如權利要求1所述的分子檢測系統，其特征在于，在所述光電傳感器 之上設有透明薄層支持物，所述聚合物布于透明薄層支持物上。
3、 如權利要求1或2所述的分子檢測系統，其特征在于，所述圖像傳感 器為CMOS圖像傳感器。
4、 一類共聯聚合物，其特征在于，所述共聯聚合物包括a) 化學或生物分子；b) 聚合物；以及 C)交聯分子；其中，所述化學或生物分子與所述聚合物橫向連接，所述聚合物通過交 聯分子在分子內、分子間共價和/或非共價連接。
5、 如權利要求4所述的共聯聚合物，其特征在于，所述聚合物為天然或合成的聚合物。
6、 如權利要求5所述的共聯聚合物，其特征在于，所述天然聚合物為線 性或支鏈多聚糖、分支DNA或水凝膠。
7、 如權利要求6所述的共聯聚合物，其特征在于，所述線性多聚糖為右旋 糖酐。
8、 如權利要求6所述的共聯聚合物，其特征在于，所述支鏈多聚糖為支 鏈淀粉糖酐。
9、 如權利要求5所述的共聯聚合物，其特征在于，所述合成聚合物為甲基乙 烯基醚/馬來酸酐共聚物。
10、 如權利要求4所述的共聯聚合物，其特征在于，所述生物分子為蛋白質、 DNA、 RNA、抗體或抗體片段。
11、 一種制備權利要求4所述共聯聚合物的方法，其特征在于，所述方法包括 以下步驟1) 用高碘酸鈉氧化多糖，形成含有大量的醛基團的直鏈或分支多聚物；2) 添加具有氨基反應基的化學或者生物分子；3) 與NaCNBrBH3同步還原結合完成耦合反應。
12、 一種檢測分析物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟1) 將權利要求1的分子檢測系統接觸分析物樣本；2) 然后加入共聯聚合物，接觸陣列；3) 加入陣列的底物；以及4) 在不需要外在掃描器的情況下直接從光學傳感器得到數據。
13、 一種傳感器設備，其特征在于，包括權利要求1所述的分子檢測系統。
14、 一種生物傳感器系統，其特征在于，包括權利要求1所述的分子檢測系統。
全文摘要
本發明涉及分子檢測領域，具體地，本發明提供了一類分子檢測系統。根據本發明的分子檢測系統包括a)化學或生物分子；b)聚合物；c)交聯分子；以及d)圖像傳感器，其中，所述聚合物與所述光電傳感器共價連接，所述化學或生物分子與所述聚合物橫向連接，所述聚合物通過交聯分子在分子內、分子間共價和/或非共價連接。使用本發明的分子檢測系統可以直接檢測多種形式粗略樣品中的核酸，而不需要核酸的抽提和擴增環節，這種全新的發明可能會改變或替代目前針對臨床核酸樣品或其它核酸樣品應用領域的基因分型、基因突變和基因表達圖譜的應用現狀。另一項應用是以一種超敏感的方式改變或替代以蛋白免疫為基礎的現有多種形式的ELISA檢測。
文檔編號G01N33/48GK101514956SQ20081011795
公開日2009年8月26日 申請日期2008年8月18日 優先權日2008年8月18日
發明者劉治平, 升 欒 申請人:北京九州泰康生物科技有限責任公司