專利名稱：一種塑料包埋制片方法
技術領域：
本發明涉及一種生物標本的包埋制片方法，尤其是一種塑料包埋制片方法。
背景技術：
塑料包埋是指它的包埋劑是一種甲基丙烯酸羥乙酯、聚乙二醇-400、 N-N二 甲基苯胺的混合試劑，用于替代石蠟。用塑料包埋劑制作的切片，與石蠟切片 相比，具有細胞收縮小，結構清晰，分辨率高等優點。傳統的塑料包埋的制片 方法采用下述工藝步驟
1、 固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液(PCF)固定組織標本。固 定時間〉12h。
2、 脫鈣用體積分數2X硝酸對組織標本脫轉2.5h。
3、 脫水梯度脫水，對組織標本脫水，用體積分數80M乙醇脫水40mim-95 %乙醇脫水40mim-100%乙醇脫水40mim (2次)，純丙酮吸附組織標本中殘留乙 醇15mim。
4、 浸透浸透液選用甲基丙烯酸羥乙脂(HEMA)，浸透脫水后的組織標本， 在浸透進行到一半時，用甲基丙烯酸羥乙脂更換一次甲基丙烯酸羥乙脂，繼續 浸透，約12h。
5、 包埋(1)從浸透液最后一步液體中取出組織標本，用濾紙吸去多余浸 透液；
(2) 把組織標本放入包埋盒底部，放平，同時把標簽放入，包埋盒壁的一 側數字正面向外；
(3) 包埋液甲液(甲基丙烯酸羥乙脂)乙液(聚乙二醇-400、 N-N二甲 基苯胺的混合液)二IOO : 1.6—100 : 2，將包埋液攪拌均勻立即加滿盛滿組織 標本的內包埋盒，在包埋盒口蓋一塑料薄膜，使液體與空氣隔離促進表面聚合;(4)將包埋盒放入4r冰箱內冷藏，時間大于12h。取出后放室溫2h，變 硬后即可去掉包埋盒。
6、 切片用鋼銼磨去包埋塊底部，暴露出組織切面，用切片機將組織切面 切成l一3um薄切片，在潔凈水面中展平，撈至潔凈玻片上。并在60—8(TC電 熱板上充分烤1. 5-2. 5h。此過程需3h左右。
7、 染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅(H-Gieinsa-E)染色，然后用中性樹膠 封片，即可得到塑料包埋制片。
上述得到的塑料包埋制片用圖文分析系統根據組織形態的特點即可分析結 果。這種傳統常規操作程序大致需要4個工作日(注在〉12小時操作中過夜 的時間未計算在工作日內)，嚴重制約了制片速度，長期以來是組織學領域的一 個難以解決的困難。對于急需獲得病理結果的患者來說，4天時間太長，尤其是 門診病人、遠道求醫的患者或者外地甚至國外的患者，4天的時間的等待、住宿 及消費會消耗患者大量的時間和金錢，從而使患者承擔嚴重的經濟負擔、消耗 保貴的治療時間。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種制片時間短的塑料包埋制片方法，以 減少患者的經濟負擔和等待時間。
為解決上述技術問題，本發明方法包括固定、脫鈣、脫水、浸透、包埋、 切片和染色過程，其中固定、脫鈣、脫水、浸透在超聲波高頻振諧下進行。
本發明方法進一步的工藝步驟為
(1) 、固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標本3 — 5h;
(2) 、脫鈣用體積分數2^硝酸對組織標本脫鈣15—25mim;
(3) 、脫水用體積分數60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液對脫鈣 后的組織標本梯度脫水，各濃度乙醇溶液分別脫水7 — 12mim，然后用純丙酮吸 附組織標本中殘留乙醇3—6mim;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標本2 — 5h;(5) 、包埋從浸透液取出的組織標本放入包埋盒內，然后在包埋盒內加
入包埋液后密封，將包埋盒在4。C冷藏40mim—2h，然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片機將包埋后的組織切面切成l一3ixm薄切片，將薄切 片在60—80。C電熱板上充分烤1. 5—2. 5h;
(7) 、染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹膠封
片，即可得到塑料包埋制片。
本發明原理是超聲波以每秒80萬次高頻振諧使生物組織、有機溶劑、浸
透液(HEMA)隨高速振蕩而產生周期性縮張運動，在一定溫度下加速分子運動， 使生物組織的水分更容易被有機溶劑替代出來，并加速有機溶劑、浸透液(HEMA) 浸透到生物組織內。由于分子運動加快，加速了組織與各種試劑的反應，使整 個操作程序在短時間內完成。
采用上述技術方案所產生的有益效果在于本發明方法與傳統塑料包埋制 片法相比，時間從50小時縮短到15小時左右，約節省3個工作日。大大減少 塑料包埋制片的時間，從而減少了患者的經濟負擔，贏來保貴的治療時間。
具體實施例方式
本塑料包埋制片方法使用生物組織快速處理儀(型號規格TKY-KC)在超 聲波為每秒80萬次高頻振諧的環境下進行包埋切片。
實施例h本塑料包埋制片方法在超聲波每秒80萬次高頻振諧下，采用下 述工藝步驟，
1、 固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標本4h;
2、 脫鈣用體積分數2。/a肖酸對組織標本脫鈣20mim;
3、 脫水采用梯度脫水，即用體積分數60%、 70%、 80%、 95%乙醇溶液 對脫鈣后的組織標本分別脫水10mim，再用體積分數100X乙醇脫水5min，更換 100%乙醇后，再脫水5min;最后用純丙酮吸附組織標本中殘留乙醇4mim;
4、 浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標本1.5h，更換甲基丙烯 酸羥乙脂后再浸透1.5h。5、 包埋(1)從浸透液最后一步液體中取出組織標本，用濾紙吸去多余浸 透液；
(2) 把組織標本放入包埋盒底部，放平，同時把標簽放入，包埋盒壁的一 側數字正面向外；
(3) 包埋包埋液是甲液乙液=100 : 1.6 100 : 2 (體積比)混合而成； 其中甲液是甲基丙烯酸羥乙脂，乙液為聚乙二醇-400 : N-N二甲基苯胺^15 : 1
(體積比)的混合液。將包埋液攪拌均勻立即加滿盛滿組織標本的內包埋盒， 在包埋盒口蓋一塑料薄膜，使液體與空氣隔離促進表面聚合；
(4) 將包埋盒放入4'C冰箱內冷藏lh。包埋盒取出變硬后即可去掉包埋盒。
6、 切片用鋼銼磨去包埋塊底部，暴露出組織切面，用切片機將組織切面 切成1—3um薄切片，在潔凈水面中展平，撈至潔凈玻片上。并在60—8(TC電 熱板上充分烤2h。
7、 染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹膠封片， 即可得到塑料包埋制片。
實施例2:本塑料包埋制片方法在超聲波每秒80萬次高頻振諧下，采用下 述工藝步驟，
(1) 、固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標本3h;
(2) 、脫鈣用體積分數2X硝酸對組織標本脫鈣25mim;
(3) 、脫水脫水，用體積分數60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液 對脫鈣后的組織標本梯度脫水，各濃度乙醇溶液分別脫水7mim，然后用純丙酮 吸附組織標本中殘留乙醇3mim;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標本5h;
(5) 、包埋從浸透液取出的組織標本放入包埋盒內，然后在包埋盒內加 入包埋液后密封，將包埋盒在4。C冷藏40mim,然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片機將包埋后的組織切面切成l一3um薄切片，將薄切 片在60—8(TC在烤片機上烤2. 5h;
7(7)、染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹膠封 片，即可得到塑料包埋制片。
實施例3:本塑料包埋制片方法在超聲波每秒80萬次高頻振諧下，采用下 述工藝步驟，
(1) 、固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標本5h;
(2) 、脫鈣用體積分數2。/a肖酸對組織標本脫鈣15mim;
(3) 、脫水脫水，用體積分數60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液 對脫鈣后的組織標本梯度脫水，各濃度乙醇溶液分別脫水12mim，然后用純丙酮 吸附組織標本中殘留乙醇6mirn;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標本2h;
(5) 、包埋從浸透液取出的組織標本放入包埋盒內，然后在包埋盒內加 入包埋液后密封，將包埋盒在fC冷藏2h，然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片機將包埋后的組織切面切成l一3um薄切片，將薄切 片在60—8(TC在烤片機上烤1. 5h;
(7) 、染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹膠封
片，即可得到塑料包埋制片。
權利要求
1、一種塑料包埋制片方法，該方法包括固定、脫鈣、脫水、浸透、包埋、切片和染色過程，其特征在于該方法中固定、脫鈣、脫水、浸透在超聲波高頻振諧下進行。
2、 根據權利要求1所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于該方法采用 下述工藝步驟-(1) 、固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標本3 —5h;(2) 、脫鈣用體積分數2Q/a肖酸對組織標本脫鈣15—25mim;(3) 、脫水用體積分數60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液對脫鈣 后的組織標本梯度脫水，各濃度乙醇溶液分別脫水7 — 12mim，然后用純丙酮吸 附組織標本中殘留乙醇3—6mim;(4) 、浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標本2 — 5h;(5) 、包埋從浸透液取出的組織標本放入包埋盒內，然后在包埋盒內加入包埋液后密封，將包埋盒在4(冷藏40mim—2h,然后去掉包埋盒；(6) 、切片用切片機將包埋后的組織切面切成1—3nm薄切片，將薄切 片在60—8(TC電熱板上充分烤1. 5—2, 5h;(7) 、染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹膠封 片，即可得到塑料包埋制片。
3、 根據權利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述固 定過程中的固定時間為4h。
4、 根據權利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述脫 鈣過程中的脫f5時間為20min。
5、 根據權利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述脫 水過程中在用體積分數100%乙醇脫水時，更換一次同等濃度乙醇溶液進行脫 水。
6、 根據權利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述浸透過程中的浸透時間為3h。
7、 根據權利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述浸透過程中，更換一次甲基丙烯酸羥乙脂進行浸透。
8、 根據權利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述包 埋過程中的包埋液是體積比甲液乙液=100 : 1.6 100 : 2混合而成；其中甲 液是甲基丙烯酸羥乙脂，乙液為體積比聚乙二醇-400 : N-N^甲基苯胺二15 : 1的混合液。
9、 根據權利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述包 埋過程中，包埋盒在4'C冷藏lh。
全文摘要
本發明公開了一種骨髓組織塑料包埋制片方法，該方法包括固定、脫鈣、脫水、浸透、包埋、切片和染色過程，其中固定、脫鈣、脫水、浸透過程在超聲波高頻振諧下進行。本塑料包埋制片方法與傳統塑料包埋制片法相比，時間從50小時縮短到15小時左右，約節省3個工作日。大大減少塑料包埋制片的時間，從而減少了患者的經濟負擔，蠃來寶貴的治療時間。
文檔編號G01N1/36GK101430261SQ20081007982
公開日2009年5月13日 申請日期2008年11月25日 優先權日2008年11月25日
發明者麗 姚, 尚銀濤, 張學軍, 華 彭, 琳 楊, 楊敬慈, 溫樹鵬, 王福旭, 羅建民 申請人:河北醫科大學第二醫院