專利名稱：一種采用液相色譜法測定溴甲納曲酮及其雜質的方法
技術領域：
本發明屬于分析化學領域，具體涉及用液相色譜法(HPLC)分離測定溴甲納曲酮及其制 劑的雜質和含量的方法。
背景技術：
漠甲納曲酮(Methylnaltrexone Bromide)是一種外周阿片受體拮抗劑，其分子式為 C21H2604NBr，其結構式見下(1)。
溴甲納曲酮的化學名為溴化17-(環丙甲基)-4,5a-環氧-3,14-二羥-17-甲基-6-氧代-嗎啡喃。 在合成該化合物的過程中，有幾步重要的中間體和未知雜質可能會由于去除不完全而影響藥 物的純度和質量，這幾個已知中間體和未知雜質以及產生的降解產物即藥物質量控制中通常 所說的有關物質(即雜質)。對于溴化(R) -N-甲基納曲酮的合成主要控制的己知雜質有四個， 分別是起始原料納曲酮鹽酸鹽，其結構式見下式(II)，中間體1{17-(環丙甲基)-4,501-環氧-3,14-二羥-6-(l,3-二氧戊環-2-基)嗎啡喃，其結構式見下式(III) }，中間體2{3-[(叔丁基二甲基硅 烷基)氧基]-17-(環丙甲基)-4,5a-環氧-14-羥基-6-(l，3-二氧戊環-2-基)嗎啡喃，其結構式見下式 (IV) }和中間體3{碘化3-[(叔丁基二甲基硅垸基)氧基]-17-(環丙甲基)-4,5a-環氧-14-羥基 -6-(1,3-二氧戊環-2-基)->^-甲基嗎啡喃，其結構式見下式(V) }。
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上述測定方法的難度在于溴甲納曲酮與起始原料只是N原子上多了一個甲基，二者的保 留行為幾乎一致，給分離帶來難度，而且與中間體2和中間體3比較，極性相差很大，在滿足其與起始原料分離的前提下，同時檢測中間體2和中間體3，再加上中間體2和中間體3在 一般色譜條件系統下，峰形很差，柱效很低，增大了檢測難度。
對于合成溴甲納曲酮中引入的雜質及其降解產物，不論是在原料藥還是在制劑中都需要 進行質量控制。因此，實現溴甲納曲酮及其制劑中雜質的分離測定對溴甲納曲酮原料藥以及 制劑的質量控制中具有重要的意義。
根據文獻(Joachim Osinski， AnbaoWang等，Journal of Chromatography B Volume 780， Issue 2， 25 November 2002， Page 251-259)報道，用Phenomenex Prodigy ODS-2 (5um， 150 X3,2腿)色譜柱為分離柱，以0.05mol/L醋酸鉀溶液-甲醇(89: 11) (pH=4.5)為流動相， 流速為0.5ml/min，測定血樣中的甲基納曲酮，我們參照試驗，發現此條件下，甲基納曲酮峰 形不好，色譜峰前傾嚴重；根據專利(PCT/US2006/020233)報道，方法一用Luna C18(2) (5um， 150X4. 6mm)色譜柱為分離柱，以0.1%三氟乙酸溶液為流動相A，以0.1%三氟乙 酸甲醇溶液為流動相B，進行梯度洗脫，流速為lml/min，波長為230nm;方法二用Phenomenex InertsilODS-3 (5um， 150X4. 6mm)色譜柱為分離柱，柱溫為50。C，以水-甲醇-三氟乙酸(95: 5: 0.1%; V/V/V)為流動相A，以水-甲醇-三氟乙酸(35: 65: 0.1%; V/V/V)為流動相B， 梯度洗脫，流速為1.5ml/min，檢測波長為280nm;測定(R) -N-甲基納曲酮和(S)-N-甲基納 曲酮；我們參照試驗，發現，此兩種條件下中間體1峰形很差，柱效很低，用于檢測可能引 入溴甲納曲酮的雜質中間體1時，檢測限達不到要求，即不能有效控制溴甲納曲酮的質量， 故沒有采用。
為了準確地控制溴甲納曲酮的質量，有必要尋找一種能簡單、快速、準確地分離檢測出 溴甲納曲酮的有關物質的方法。
發明內容
本發明的目的在于提供一種用液相色譜法(HPLC)分離測定溴甲納曲酮或其制劑中甲納 曲酮及其雜質的方法，從而實現對溴甲納曲酮及其制劑質量的有效控制。
這里所說的雜質是指從合成過程中引入的雜質或產品或其制劑降解產生的雜質，包括起 始原料。所述的測定方法包括溴甲納曲酮及其制劑的定性分析和定量分析(含量的測定)。
本發明所說的一種采用液相色譜法(HPLC)測定溴甲納曲酮及其制劑中雜質的方法，其 特征在于
a采用烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱為分離柱；
b以緩沖溶液為流動相A，水與有機溶劑的混合溶劑為流動相B;
c流動相采用梯度方式，流速為0.5ml/min 1.5ml/min，用紫外檢測器進行檢測；
其中，緩沖溶液選自垸基磺酸鹽溶液、高氯酸及高氯酸鹽溶液、磷酸及磷酸鹽溶液中的一種或幾種，有機溶劑為低級醇和/或乙腈。本方法實現對溴甲納曲酮(Methylnaltrexone bromide) 及其制劑中雜質的分離測定和對溴甲納曲酮中間體的分析檢測。
本發明所述的方法，在流動相B中，水、低級醇和乙腈的體積百分比分別為2%~8%、 70%~90%和28%~2%。
本發明所述的方法，所說的低級醇為甲醇、乙醇或丙醇，優選甲醇。
本發明所述的方法，在流動相A中，所說的緩沖溶液的pH為1.5至6.0;緩沖溶液的濃 度為0.0005mol/L至0.1mol/L，優選0.001mol/L至0.02mol/L，最優0.0025mol/L。所說的緩 沖溶液選自垸基磺酸鹽緩沖溶液、高氯酸及高氯酸鹽緩沖溶液、磷酸及磷酸鹽緩沖溶液或它 們的混合物，其中，所說的垸基磺酸鹽為戊烷磺酸鹽、己烷磺酸鹽、庚垸磺酸鹽、辛烷磺酸 鹽或癸烷磺酸鹽，優選庚垸磺酸鈉或辛烷磺酸鈉，更優選辛垸磺酸鈉；所說的高氯酸及高氯 酸鹽，其中，高氯酸鹽優選高氯酸鈉或高氯酸鉀，更優選高氯酸鈉；所說的磷酸及磷酸鹽， 其中磷酸鹽優選磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉，更優選磷酸二氫鉀。
上述所說的緩沖溶液中優選垸基磺酸鹽緩沖溶液，其濃度為0.0005mol/L至0.1mol/L，優 選0.001mol/L至0.02mol/L，最優0.0025mol/L;其pH選擇范圍為1.5至6.0，優選pH2.0至 3.0，最優pH2.5。
本發明所述的方法，其中，烷基硅烷鍵合硅膠為十八烷基硅垸基鍵合硅膠或辛烷基硅烷 鍵合硅膠，也就是說本發明所說的色譜柱選自十八烷基硅烷基鍵合硅膠柱或辛烷基硅烷鍵合 硅膠柱。
上述所說的色譜柱選擇牌號為Zorbax SB-C18、 Zorbax XDB-C18、 Zorbax XDB-C18、 AichromBond-AQ C18和Venusil MP C18的色譜柱。
本發明所說的梯度洗脫方法為0分鐘至5分鐘，流動相八為50% 70% (V/V)，流動 相B為50% 30% (V/V); 5分鐘至25分鐘，流動相A線性減少至10% 30% (V/V)，流 動相B線性增加至90。/。 70。/Q (V/V); 25分鐘至50分鐘，流動相A為10% 30% (V/V)， 流動相8為90% 70% (V/V); 50.1分鐘至60分鐘，流動相A為50% 70% (V/V)，流動 相B為50% 30% (V/V)，即50.1分鐘后為平衡色譜柱。
本發明所說的梯度洗脫方法優選為0分鐘至5分鐘，流動相A為60y。 (V/V)，流動相 B為40。/。(V/V); 5分鐘至25分鐘，流動相A線性減少至20。/。 (V/V)，流動相B線性增加 至80% (V/V); 25分鐘至50分鐘，流動相A為20% (V/V)，流動相B為80% (V/V); 50.1 分鐘至60分鐘，流動相A為60% (V/V),流動相B為40% (V/V)，即50.1分鐘后為平衡 色譜柱。
本發明所說的梯度洗脫方法，具體實施方案為0分鐘至5分鐘，垸基磺酸鹽溶液為60%(V/V)，水/有機溶劑為40%(V/V); 5分鐘至25分鐘，烷基磺酸鹽溶液線性減少至20%(V/V)， 水/有機溶劑線性增加至80% (V/V); 25分鐘至50分鐘，烷基磺酸鹽溶液為20% (V/V)，水 /有機溶劑80% (V/V); 50.1分鐘至60分鐘，烷基磺酸鹽溶液為60% (V/V)，水/有機溶劑 為40M(V/V)，即50.1分鐘后為平衡色譜柱。這里所說的烷基磺酸鹽為0.0025mol/L辛烷磺 酸鈉溶液(pH為2.5),為流動相A，所說的水/有機溶劑為流動相B，即為水、低級醇和乙腈 的混合物。
在一具體實施方案中，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(如ZorbaxSB-C18 (5pm， 250X4. 6mm))的色譜柱，以0.0025mol/L辛垸磺酸鈉溶液(用10%磷酸溶液調節pH值至 2.5)為流動相A，水-甲醇-乙腈(50: 800: 150; V/V/V)為流動相B，進行梯度洗脫0分 鐘至5分鐘，流動相A為60W (V/V)，流動相B為40y。 (V/V); 5分鐘至25分鐘，流動相 A線性減少至20M (V/V)，流動相B線性增加至80。/。 (V/V); 25分鐘至50分鐘，流動相A 為20% (V/V)，流動相B為80% (V/V); 50.1分鐘至60分鐘，流動相A為60% (V/V)， 流動相B為40。/Q (V/V)，即50.1分鐘后為平衡色譜柱。流速為1.0ml/min，柱溫為4(TC，檢 測波長為230nm。
本發明所說的測定方法，在一具體實施方案中，還包括以下步驟
a) 供試品溶液的配制取溴甲納曲酮或含溴甲納曲酮的制劑適量，加稀釋劑溶解樣品， 并配制成每lml含溴甲納曲酮0.1至10mg的樣品溶液作為供試品溶液。
b) 對照溶液的配制精密量取供試品溶液適量，加稀釋劑制成濃度為供試品溶液濃度 0.1% 2.0%的溶液，作為對照溶液。其中，稀釋劑為流動相A與流動相B的混合溶液，其比 例為50: 50 70: 30，優選60: 40。
c) 設置流動相的流速為0.5 1.5ml/min,優選1.0ml/min;設置檢測波長為200nm至250nm 或者270至300nm，優選230nm;設置色譜柱的柱溫為15'C至60°C，優選40'C;設置進樣 量為5pl至10(^1，優選20pl。分別精密量取等體積供試品溶液與對照溶液，注入液相色譜儀， 記錄色譜圖，完成供試品溶液有關物質的分離測定。
其中
液相色譜儀Agilent 1100型高效液相色譜儀 色譜柱ZorbaxSB-C18 (5pm， 250X4.6mm) 柱溫40 °C
流動相A: O.0025mol/L辛烷磺酸鈉溶液(用10%磷酸溶液調節pH值至2.5) 流動相B:水-甲醇-乙腈(50: 800: 150; V/V/V)
梯度洗脫程序0分鐘至5分鐘，流動相A為60n/。 (V/V)，流動相B為40M (V/V); 5分鐘至25分鐘，流動相A線性減少至20。/。 (V/V)，流動相B線性增加至80。/。 (V/V); 25分鐘至50分鐘，流動相A為20% (V/V)，流動相B為80% (V/V); 50.1分鐘至60 分鐘，流動相A為60% (V/V)，流動相B為40% (V/V)，即50.1分鐘后為平衡色譜柱。 稀釋劑流動相A-流動相B (60: 40) 流速1.0ml/min;檢測波長230nm;進樣體積20/^1。
上述步驟中，所說的稀釋劑，由流動相A與流動相B的體積比為50: 50至70: 30組成。 本發明所述的雜質包括已知結構的雜質和其它未知結構的雜質(包括降解產物)。所述的 已知結構的雜質至少包括以下四種中的一種納曲酮鹽酸鹽、17-(環丙甲基)-4,5(1-環氧-3，14-二羥-6-(l，3-二氧戊環-2-萄嗎啡喃、3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-17-(環丙甲基)-4,5a-環氧 -14-羥基-6-(1,3-二氧戊環-2-基)嗎啡喃、碘化3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-17-(環丙甲 基)-4，5a-環氧-14-羥基-6-(l，3-二氧戊環-2-基)-N-甲基嗎啡喃。
本發明采用Zorbax SB-C18色譜柱，能夠有效的分離檢測溴甲納曲酮及其制劑的雜質和 含量。選用梯度0至5分鐘等度段比例流動相作為稀釋劑溶解樣品，排除了溶劑峰的干擾， 酸性緩沖液和近40%有機相，確保溶解完全極性稍小的中間體2和中間體3;柱溫為4(TC， 讓分離度達到最佳，采用梯度洗脫，確保能夠檢測到極性稍小的中間體2和中間體3，配合 辛烷磺酸鈉，可以增強保留，改善分離度，確保色譜峰的良好對稱性和較高的柱效。有機相 中加入適量的水和乙腈， 一方面，增大了分離度；另一方面，避免了用純甲醇時產生系統峰 干擾測定。
本發明的方法可以將甲基納曲酮與相鄰的雜質峰、降解產物以及起始原料、中間體l、中 間體2和中間體3有效分離，能準確測定雜質，而且峰形對稱，柱效較高，從而解決了溴甲 納曲酮及其制劑雜質(包括起始原料、中間體和降解產物)分離和測定較困難的問題，尤其 解決了溴甲納曲酮與納曲酮難以分離的問題，從而保證了溴甲納曲酮及其制劑的質量可控。
圖1稀釋劑的液相色譜圖
圖2溴甲納曲酮對照的液相色譜圖
圖3納曲酮鹽酸鹽(起始原料)對照溶液的液相色譜圖
圖4中間體l對照溶液的液相色譜圖
圖5中間體2對照溶液的液相色譜圖
圖6中間體3對照溶液的液相色譜圖
圖7溴甲納曲酮+起始原料+中間體l+中間體2+中間體3的液相色譜圖 圖8梯度基線的液相色譜圖
8圖9溴甲納曲酮有關物質供試品溶液的液相色譜圖
圖10溴甲納曲酮有關物質0.5%對照溶液的液相色譜圖
圖ll以0.01mol/L辛烷磺酸鈉溶液(pH=2.0)為流動相A，水-甲醇-乙腈(20: 700: 280)為流動相B，柱溫為2(TC時的液相色譜圖
圖12溴甲納曲酮含量測定對照溶液的液相色譜圖
圖13溴甲納曲酮含量測定供試品溶液的液相色譜圖
圖14溴甲納曲酮注射液雜質測定供試品溶液的液相色譜圖
圖15溴甲納曲酮注射液雜質測定0.5%對照溶液的液相色譜圖
圖16溴甲納曲酮注射液雜質測定空白輔料供試液的液相色譜圖
圖17對比實施例測定溴甲納曲酮雜質的液相色譜圖
具體實施方式
實施例1 儀器與條件
Agilent IIOO型液相色譜儀及化學工作站；自動進樣；以Zorbax SB-C18柱(5pm， 250 X4.6mm)為分離色譜柱；紫外檢測器波長230nm;流動相以0.0025mol/L辛烷磺酸鈉溶 液(用10。/。磷酸溶液調節pH值至2.5)為流動相A，以水-甲醇-乙腈(50: 800: 150; V/V/V) 為流動相B，梯度洗脫；0分鐘至5分鐘，流動相A為60% (V/V)，流動相B為40% (V/V); 5分鐘至25分鐘，流動相A線性減少至20。/。 (V/V)，流動相B線性增加至80n/。 (V/V); 25 分鐘至50分鐘，流動相A為20。/。 (V/V)，流動相B為80。/。 (V/V); 50.1分鐘至60分鐘， 流動相A為60% (V/V)，流動相B為40% (V/V)，即50.1分鐘后為平衡色譜柱。柱溫為40 °C,流速1.0ml/min，進樣體積為20^1。 實驗步驟
取溴甲納曲酮約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加稀釋劑(流動相A-流動相B (60:
40))溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溴甲納曲酮對照溶液；取納曲酮鹽酸鹽約5mg，精密稱
定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為納曲酮鹽酸鹽貯備液，精密量取貯
備液0.51111，置25ml量瓶中，加稀釋劑(流動相A-流動相B (60: 40))溶解并稀釋至刻度，
搖勻，作為納曲酮鹽酸鹽對照溶液；另取中間體l、中間體2與中間體3各約5mg，精密稱
定，各置10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為中間體l、中間體2與中間體
3貯備液；分別精密量取中間體l、中間體2與中間體3貯備液0.5ml，各置25ml量瓶中，加與中間體3對照溶液；取溴甲納曲酮約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，精密加入納曲酮 鹽酸鹽貯備液、中間體l、中間體2與中間體3貯備液各0.5ml，加稀釋劑(流動相A-流動相 B (60: 40))溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照溶液。
分別取稀釋劑、溴甲納曲酮對照溶液、納曲酮鹽酸鹽對照溶液、中間體1對照溶液、中 間體2對照溶液與中間體3對照溶液以及混合對照溶液，按上述色譜條件進行液相色譜分析， 記錄色譜圖，結果見圖l、圖2、圖3、圖4、圖5、圖6、圖7;另外，不進樣，按上述色譜 條件采集梯度基線色譜圖，見圖8。
圖7中保留時間為1.979min的色譜峰為Br—或1—的色譜峰，10.440min的色譜峰為甲基納 曲酮的色譜峰，11.604min的色譜峰為納曲酮鹽酸鹽的色譜峰，14.319min的色譜峰為中間體 l的色譜峰，32.500min的色譜峰為中間體2和中間體3的色譜峰，其它峰為未知雜質。
圖1證明，稀釋劑不千擾測定；圖8證明，色譜系統無干擾；圖7證明，本法可以有效 分離溴甲納曲酮中可能存在的未知雜質和已知雜質，即本方法可以用于溴甲納曲酮及其制劑 的雜質和含量的測定；同時，本方法還可以用于甲基納曲酮的其它鹵化物以及由這些鹵化物 所制成的制劑的雜質和含量的測定。 實施例2
溴甲納曲酮雜質的測定。
取溴甲納曲酮約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加稀釋劑(流動相A-流動相B (60: 40))超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取0.5ml，置100ml量 瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液；照實施例1的色譜條件進行液相色譜分 析，供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰(除主峰相對保留時間約0.19處溴離子峰外)，單個 雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積(0.5%)，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面 積的2倍(1.0%)。結果見圖9、圖IO。 實施例3 儀器與條件
Agilent 1100型液相色譜儀及化學工作站；自動進樣；以AichromBond-AQ C18 (5|im， 250X4.6mm)為分離色譜柱；紫外檢測器波長230nm;流動相以0.01mol/L辛垸磺酸鈉 溶液(用10%磷酸溶液調節pH值至2.0)為流動相A，以水-甲醇-乙腈(20: 700: 280; V/V/V) 為流動相B，梯度洗脫；0分鐘至5分鐘，流動相A為50% (V/V)，流動相B為50% (V/V); 5分鐘至25分鐘，流動相A線性減少至10% (V/V)，流動相B線性增加至90。/c (V/V); 25 分鐘至50分鐘，流動相A為10% (V/V)，流動相B為90% (V/V); 50.1分鐘至60分鐘， 流動相A為50% (V/V)，流動相B為50% (V/V)，即50.1分鐘后為平衡色譜柱。柱溫為20°C，流速L2ml/min，進樣體積為20^1。 實驗步驟
取溴甲納曲酮約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加稀釋劑(流動相A-流動相B (50: 50))超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取20pl，注入液相色譜 儀，結果見圖11。 實施例4
用液相色譜法測定溴甲納曲酮的含量。
取溴甲納曲酮約10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加水適量，超聲處理使溶解并稀釋 至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取溴甲納曲酮對照品約10mg，精密稱定，置50ml量瓶 中，加水適量，超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；照實施例1的色譜 條件進行液相色譜分析，按外標法計算，即得。結果見圖12、圖13。 實施例5
用液相色譜法測定溴甲納曲酮注射液的雜質。 取本品適量(約相當于溴甲納曲酮10mg)，置10ml量瓶中，加稀釋劑(流動相A-流動相B (60: 40))使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取0.5ml，置100ml量瓶 中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液；另取處方比例的空白輔料，照供試品溶液 相同的方法制備空白輔料供試液；照實施例1的色譜條件進行液相色譜分析，供試品溶液的 色譜圖中如有雜質峰(除主峰相對保留時間約0.19處溴離子峰外)，各雜質峰面積的和不得 大于對照溶液主峰面積的2倍(1.0%)。結果見圖14、圖15、圖16。 對比實施例
用液相色譜法測定溴甲納曲酮雜質。 儀器與條件
Agilent 1100型液相色譜儀及化學工作站；以Intertsil 0DS-2柱(5|mn， 150X4.6mm)為 分離色譜柱；紫外檢測器波長230nm;流動相水—甲醇(80: 20)。柱溫為25'C，流速 1.0ml/min，進樣體積為20|_U。
實驗步驟
取本品適量(約相當于溴甲納曲酮10mg),置10ml量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻 度，搖勻，作為供試品溶液；照上述色譜條件進行液相色譜分析。實驗結果表明，在此色譜 條件下溴甲基納洛酮在色譜柱上幾乎沒有保留，而且色譜峰峰形很差，嚴重拖尾。結果見圖 17。
權利要求
1.一種采用液相色譜法測定溴甲納曲酮或其雜質的方法，其特征在于a采用烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱為分離柱；b以緩沖溶液為流動相A，水與有機溶劑的混合溶劑為流動相B；c流動相采用梯度方式，流速為0.5ml/min～1.5ml/min，用紫外檢測器進行檢測；其中，緩沖溶液選自烷基磺酸鹽溶液、高氯酸及高氯酸鹽溶液、磷酸及磷酸鹽溶液中的一種或幾種，有機溶劑為低級醇和/或乙腈。
2、 根據權利要求1所述的方法，流動相B中，水、低級醇和乙j青的體積百分比分別為2%~8%、 70%~90%和28°/。~20/o。
3、 根據權利要求l或2所述的方法，所說的低級醇為甲醇、乙醇或丙醇，優選甲醇。
4、 根據權利要求1所述的方法，所說的烷基硅垸鍵合硅膠為十八烷基硅烷基鍵合硅膠或辛烷 基硅烷鍵合硅膠。
5、 根據權利要求1所述的方法，所說的緩沖溶液為垸基磺酸鹽溶液。
6、 根據權利要求5所述的方法，所說的垸基磺酸鹽為戊烷磺酸鹽、己垸磺酸鹽、庚垸磺酸鹽、 辛垸磺酸鹽或癸垸磺酸鹽，優選庚烷磺酸鈉或辛烷磺酸鈉，更優選辛烷磺酸鈉。
7、 根據權利要求1或5或6所述的方法，所說的緩沖溶液的濃度為0.0005mol/L至0.1mol/L， 優選0.001mol/L至0.02mol/L。
8、 根據權利要求1所述的分離測定方法，所說的緩沖溶液用10。/。磷酸溶液調節pH為1.5至 6.0，優選pH為2.0至3.0。
9、 根據權利要求I所述的方法，所說的梯度方法為0分鐘至5分鐘，流動相A為50% 70% (V/V)，流動相B為50% 30% (V/V); 5分鐘至25分鐘，流動相A線性減少至10°/。 30% (V/V)，流動相B線性增加至90% 70%(V/V); 25分鐘至50分鐘，流動相A為10% 30% (V/V)，流動相B為90% 70%(V/V); 50.1分鐘至60分鐘，流動相A為50% 70%(V/V)，流動相B為50% 30% (V/V)，即50.1分鐘后為平衡色譜柱。
10、 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所說的方法還包含以下步驟a) 供試品溶液的配制取溴甲納曲酮或含溴甲納曲酮的制劑適量，加稀釋劑溶解樣品， 并配制成每lml含溴甲納曲酮0.1至10mg的樣品溶液作為供試品溶液；b) 對照溶液的配制精密量取供試品溶液適量，加稀釋劑制成濃度為供試品溶液濃度 0.1% 2.0%的溶液，作為對照溶液，其中，稀釋劑為流動相A與流動相B的混合溶液，其比例為50: 50 70: 30，優選60: 40;c) 設置流動相的流速為0.5 1.5ml/min，優選1.0ml/min，設置檢測波長為200nm至 250nm或者270至300nm，優選230nm,設置色譜柱的柱溫為15'C至60°C,優選40°C，設置進樣量為5jal至100M1,優選20pl，分別精密量取等體積供試品溶液與對照 溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，完成供試品溶液有關物質的分離測定。
11. 權利要求l所述的雜質為已知結構的雜質和其它未知結構的雜質(包括降解產物)。
12. 權利要求ll所述的已知結構的雜質至少包括以下四種中的一種納曲酮鹽酸鹽、n-(環 丙甲基)-4,5a-環氧-3,14-二羥-6-(l，3-二氧戊環-2-基)嗎啡喃、3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧 基]-17-(環丙甲基)-4，5a-環氧-14-羥基-6-(l，3-二氧戊環-2-基)嗎啡喃、碘化3-[(叔丁基二甲基硅 烷基)氧基]-17-(環丙甲基)-4，5a-環氧-14-羥基-6-(l,3-二氧戊環-2-基)-N-甲基嗎啡喃。
全文摘要
本發明提供了一種溴甲納曲酮及其制劑中雜質和含量測定的方法，屬分析化學領域。所述的檢測方法是用液相色譜法，非極性的固定相，在以緩沖溶液為流動相A，水與有機溶劑的混合溶劑為流動相B的流動相體系下，采用梯度洗脫，分離測定溴甲納曲酮及其制劑的雜質和含量。采用該方法可以很好的將甲基納曲酮與其它已知中間體雜質和未知雜質進行有效分離和測定。本法還可以用于溴甲納曲酮及其中間體的質量控制。本發明方法專屬性強，準確度高，操作簡便。
文檔編號G01N30/00GK101685084SQ20081007034
公開日2010年3月31日 申請日期2008年9月22日 優先權日2008年9月22日
發明者付曉泰, 劉澤榮, 孫化富, 薇 廖, 張道林, 斌 樊 申請人:重慶醫藥工業研究院有限責任公司