專利名稱：：煙用香精香料液相指紋圖譜分析方法
技術領域：
：本發明涉及香精香料領域，特別是涉及一種煙用香精香料液相指紋圖譜分析方法，它是采用指紋圖譜測試方法，表征出煙用香精香料的組成特征，達到對煙用香精香料的質量整體予以控制。
背景技術：
：香精香料與人們的日常生活息息相關，一般所說的香精香料，包括天然香料、合成香料及兩者調和而成的香精。日用香精主要用于化妝品食用香精則專用于食品、飲料、煙草和醫藥。據統計，1970年世界香精香料消費總額為13億美元，1980年則達到40億美元，目前已達數百億美元。在生活中，人們往往是未嘗巻煙之味，已聞巻煙之香。無論是煙盒打開時散發出的芬芳煙香，還是抽吸時產生的馥郁香氣，煙用香精香料都功不可沒。而且煙葉是一個復雜的有機體，種植范圍廣，不同地區之間的土壤、氣候、品種等客觀因素的差異，都會影響煙葉香味的組成，或多或少會產生不良的吸味與氣息，通過加香加料的技術加以改善與修飾，就有化腐朽為神奇之效。用香精香料的相關技術一向被生產企業視為核心秘密，只有極少數人才得窺全豹，因而常常帶有一定的神秘色彩。煙用香料主要來源于自然界和人工化學合成，通常分為天然香料和合成香料。從香料植物的花、果、葉、莖、根或皮及動物的分泌物中提取出的致香物質稱為天然香料，如精油、浸膏、凈油、酊劑等；合成香料則是指通過人工化學合成而得到的香料化合物，可分為醇類、醚類、醛類、酮類、酯類、酸類、雜環類等。煙用香精香料是由兩種或兩種以上香料按一定的比例調配出來的混合體。早期的調香師多根據嗅香等感官評價和經驗進行香精香料調配，現在的巻煙加香加料技術已有長足發展發展，先應用分析儀器對煙氣致香成分進行剖析研究，從中尋找出與香氣吸味有關的化學成分或組份，然后再通過化學合成的方法，制備出適合于巻煙制品使用的合成香料，再經調香師進行調配，制備成煙用香精香料添加到巻煙中。巻煙企業香精香料品控技術相對落后，以往巻煙企業對香精香料產品的品質監控，主要是酸值、澄清度、揮發性成份總量、色度、密度、折光率、溶混度等少數指標的檢測，而這些指標受溶劑的影響較大，對香精香料產品的內在質量缺乏直觀、全面的表征，不能準確客觀地反映香精香料產品的內在質量，其品質的穩定性更是難以得到有效控制。煙用香精香料除個別外其組成都非常復雜，針對其中某一兩個化學成分進行指標成分分析，難以真正有效監控煙用香精香料的品質。因此能否提供一種更為可靠、穩定的檢測新方法，已經引起有關業內研究人員的關注。
發明內容本發明的目的正是針對上述現有技術中所存在的問題而專門提供的一種可直觀、全面反映出香精香料產品之內在質量的煙用香精香料液相指紋圖譜分析方法，進而有效監控煙用香精香料的品質，本發明的方法為煙用香精香料質量控制提供了一種可靠、穩定、全新的方法，可使煙用香精香料的質量更加穩定，檢測更為科學。本發明的主要特點是采用指紋圖譜表征出煙用香精香料的組成特征，進而對煙用香精香料的質量整體予以控制。本發明的目的是通過以下技術方案來實現的本發明的煙用香精香料的質量控制方法包括以下步驟(1)配制樣品稀釋溶液量取等體積的超純水、無水乙醇、丙二醇，混合后即為樣品稀釋溶液；(2)將待測香精香料用樣品稀釋溶液溶解，定容后取適量溶液過0.45或0.20微米濾膜，進液相色譜分析，記錄色譜圖；(3)色譜分析條件為高效液相色譜儀，紫外或二極管陣列檢測器高純硅膠為填料的反相C18液相色譜柱，進樣量1-50微升流速0.2-2.0ml/min流動相A:0.05%-2%的甲酸或乙酸溶液流動相B:乙腈(色譜純)溫度20°C-60°C梯度0%_30%流動相B(0min)30%-100%流動相B(60min)檢測波長275nm或253nm或230nm(4)采用外標法定量配制外標標準溶液將2-甲基萘先加適量乙腈溶解，再用樣品稀釋溶液溶解，定容，取適量上述配好的2-甲基萘溶液稀釋，分別配制濃度為2yg/mL、10ng/mL、50ug/mL、100yg/mL、200ug/mL、500ug/mL的2-甲基萘溶液標準溶液，進液相色譜分析，記錄色譜圖，制作標準曲線；依據公式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>m組分樣品中組分的含量(Ug/g)c組分樣品中組分的濃度(ug/mL)v:樣品體積m:樣品稱量質量(g)制作外標標準曲線時，要求強制通過原點；(5)分析比較通過所獲得的煙用香精香料液相色譜圖指紋譜圖，其中包含了樣品色譜峰的含量、保留時間等詳細信息，能表征出煙用香精香料的組成特征，根據樣品特征組分的含量，運用夾角余弦等統計學分析方法比較待測香精香料樣品與2_甲基萘溶液標準樣品之間的相似度，根據相似度的高低程度來判斷樣品質量的穩定性，對于與標準樣品無明顯差異的樣品認為其質量合格。本發明的方法適用于不同濃度的香精香料(包含香精、料液、酊劑、浸膏及各種香原料)。本發明的主要特點是采用指紋圖譜表征出煙用香精香料的組成特征，進而對煙用香精香料的質量整體予以控制。本發明相比現有技術的優點在于:可對香精香料產品的內在質量進行直觀、全面的表征，能準確客觀地反應煙用香精香料產品的內在質量，進而有效監控煙用香精香料的品質，本發明的方法為煙用香精香料質量控制提供了一種可靠、穩定、全新的方法，可使煙用香精香料的質量更加穩定，檢測更為科學。圖l為本發明中標準曲線圖。圖2為香精香料樣品1#的液相色譜圖。圖3為香精香料樣品2#的液相色譜圖。圖4為標準樣品的液相色譜圖。具體實施方式本發明以下結合具體實例做進一步描述，但并不限制本發明。選取煙用香精樣品ltt，2tt，為控制其質量進行按如下步驟分析-首先準備如下儀器設備及試劑配有自動進樣器和柱溫箱的高效液相色譜儀，二級管陣列檢測器或紫外檢測器，萬分之一電子天平，超純水(R〉18MQ)，乙腈(色譜純)，無水乙醇(色譜純)，丙二醇(分析純)，2-甲基萘(分析純)，甲酸(色譜純)按如下方法進行操作先配制樣品稀釋溶液用量筒量取等體積的超純水、無水乙醇、丙二醇,混合后即為樣品稀釋溶液。然后配制外標標準溶液用萬分之一電子天平準確稱取2-甲基萘(1.9)0.lg于100mL容量瓶中，先加適量乙腈溶解，再用樣品稀釋溶液溶解，定容。取適量上述配好的2-甲基萘溶液稀釋，分別配制濃度為2iig/mL、10pg/mL、50ixg/mL、100ug/mL、200ug/mL、500ug/mL的2-甲基萘溶液標準溶液，進液相色譜分析，制作標準曲線。再稱取0.5g煙用香精香料樣品于10mL容量瓶中，用樣品稀釋溶液溶解，定容后取適量溶液(如3毫升)用有機相針式過濾器過濾，取過濾后的溶液進液相色譜儀分析。數據分析首先制作外標法標準曲線(制作標準曲線是定量分析的依據之一，Y代表色譜峰面積，X代表樣品中化合物的濃度；R2接近1，表示相關性很好。該曲線是通過2-甲基萘溶液的各濃度X值套入Y=29.646X計算得出的Y值而做出的曲線)圖l是制作好的典型的外標法曲線，豎軸為y，橫軸為x。y樣品中待測組分色譜峰面積，x樣品中待測組分濃度利用液相色譜儀分析記錄兩個煙用香精樣品和標準樣品液相色譜圖(見圖2、3、4)通過對上述樣品中的主要色譜峰積分計算得到下表兩個煙用香精樣品和標準樣品特征色譜峰面積表保留時間(分鐘)1#2#標準樣品13.9297.35110.85107.3917.36181.92190.75188.8119.0860.0461.0260.5821.9053.1456.2855.9722.7484.1087.3986.9724.5163.2164.6665.8925.082385.832440.032466.7832.61335.25341.33346.2833.39439.14448.28456.6035.04103.16lll.卯110.3842.2153.5454.8955.03<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>根據標準曲線的計算公式Y39.646X計算各組分含量(y:樣品中待測組分色譜峰面積，x:樣品中待測組分濃度)。如下表所示兩個煙用香精樣品和標準樣品特征組分含量表(pig/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>測試樣品若質量穩定，其主要色譜峰的含量應與標準樣品接近，其指紋譜圖與標準樣品也應相似。按化學計量學的方法，經夾角余弦等統計學方法計算，樣品itt，2#與標準樣品相似度，計算結果顯示相似度大于0.9999，表明樣品1#與2#質量穩定，質量合格。權利要求1.一種煙用香精香料液相指紋圖譜分析方法，其特征在于它包括以下步驟(1)配制樣品稀釋溶液量取等體積的超純水、無水乙醇、丙二醇，混合后即為樣品稀釋溶液；(2)將待測香精香料用樣品稀釋溶液溶解，定容后取適量溶液過0.45或0.20微米濾膜，進液相色譜儀分析，記錄色譜圖；(3)色譜分析條件為高效液相色譜儀，紫外或二極管陣列檢測器高純硅膠為填料的反相C18液相色譜柱，進樣量1-50微升流速0.2-2.0ml/min流動相A0.05％-2％的甲酸或乙酸溶液流動相B乙腈(色譜純)溫度20℃-60℃梯度0％-30％流動相B(0min)30％-100％流動相B(60min)檢測波長275nm或254nm或230nm(4)采用外標法定量配制外標標準溶液將2-甲基萘先加適量乙腈溶解，再用樣品稀釋溶液溶解，定容，取適量上述配好的2-甲基萘溶液稀釋，分別配制濃度為2μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500μg/mL的2-甲基萘溶液標準溶液，進液相色譜分析，記錄色譜圖，制作標準曲線；計算樣品特征組分的含量；(5)分析比較通過所獲得的煙用香精香料液相色譜圖指紋譜圖，其中包含了樣品色譜峰的含量、保留時間等詳細信息，能表征出煙用香精香料的組成特征，根據樣品特征組分的含量，運用夾角余弦等統計學分析方法比較待測香精香料樣品與2-甲基萘溶液標準樣品之間的相似度，根據相似度的高低程度來判斷樣品質量的穩定性，對于與標準樣品無明顯差異的樣品認為其質量合格。全文摘要一種煙用香精香料(包含香精、料液、酊劑、浸膏及各種香原料)液相指紋圖譜分析方法，其特征在于它包括以下步驟(1)配制樣品稀釋溶液，(2)將待測香精香料用樣品稀釋溶液溶解，(3)設定色譜條件，(4)采用外標法定量，(5)分析比較。本發明的主要特點是采用指紋圖譜表征出煙用香精香料的組成特征，進而對煙用香精香料的質量整體予以控制。本發明相比現有技術的優點在于可對香精香料產品的內在質量進行直觀、全面的表征，能準確客觀地反應煙用香精香料產品的內在質量，進而有效監控煙用香精香料的品質，本發明的方法為煙用香精香料質量控制提供了一種可靠、穩定、全新的方法，可使煙用香精香料的質量更加穩定，檢測更為科學。文檔編號G01N30/88GK101226178SQ20081004911公開日2008年7月23日申請日期2008年1月21日優先權日2008年1月21日發明者劉克建,劉惠民,冰王,昇王,謝復煒申請人:中國煙草總公司鄭州煙草研究院