專利名稱：：前列地爾注射液的質量控制方法
技術領域：
：本發明屬于藥品技術的領域，更具體的是涉及前列地爾注射液的質量控制方法，涉及脂肪微乳制劑中前列地爾和前列地爾有關物質的分析與質量控制方法。
背景技術：
：前列地爾注射液是利用高壓均質將前列地爾形成脂肪微乳的制劑。前列地爾的化學名稱是前列腺素El(簡稱PGE1)，PGE1非常不穩定，在常溫下迅速分解轉化為前列腺素A1(簡稱PGA1)。PGA1的生物活性很低，失去了治療的意義。原有的分析方法和質量控制已經公開(中國藥品國家標準WS1-(X-041)-2002Z)。該控制質量的標準中，對前列地爾微乳制劑中前列地爾和前列地爾的降解物質(有關物質PGA1)的含量分析采用的方法是通過C18預處理柱進行破乳油水分離，并采用5(TC的減壓蒸餾濃縮供試溶液。具體的方法如下供試品溶液的制備精密量取前列地爾注射液適量(相當于前列地爾2.5yg)，置20ml棕色具塞試管中，加四氫呋喃2.5ml，混勻，加磷酸溶液(1—1000)15tnl，混勻，通過預處理柱(填充物為十八垸基硅垸鍵合硅膠，粒徑70um，①10mmx9mm聚丙烯管(SEP—PAKC18柱，Waters)'。使用前用甲醇10ml、水10ml沖洗)，試管用通過預處理柱的10ml水沖洗。再用甲醇7ml洗脫，洗脫液全部移入10ml棕色蒸餾瓶中，于5(TC減壓蒸餾1分鐘，蒸干溶劑，殘渣用內標溶液1.0ml溶解，搖勻，即得。然而，國家藥品標準WS1-(X-041)-2002Z采用的分析方法中，供試樣品預處理的過程復雜，先要通過C18柱的分離，再進行減壓濃縮。在這兩個過程中，PGE1和PGA1會在C18柱中損失一部分，更為嚴重的是在減壓蒸餾中PGE1降解明顯，這就導致了對PGE1和PGA1的分析結果不準確，嚴重影響了分析的精密度和準確度。因此，本領域迫切需要提供一種新的可以準確測定前列地爾微乳制劑中前列地爾和前列地爾的降解物質的方法。
發明內容本發明旨在提供一種前列地爾脂肪微乳制劑含量及有關物質測定的方法。本發明提供了一種前列地爾脂肪微乳制劑中前列腺素E1和/或前列腺素A1的測定方法，所述的方法包括步驟(1)將前列地爾脂肪微乳制劑進行超聲處理，得到去除油相的前列地爾溶液；(2)對去除油相的前列地爾溶液進行高效液相測定，得到前列腺素E1和/或前列腺素A1的含量，所述的高效液相測定條件為固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相磷酸鹽緩沖液:乙腈=1—6:1，檢測波長278nm。在另一優選例中，步驟(1)中所述的超聲處理次數為1一10次，每次0.5—20分鐘。在另一優選例中，步驟(1)中所述的超聲處理次數為l一5次，每次l一IO分鐘；優選超聲處理次數為l一3次，每次1一5分鐘。在另一優選例中，步驟(2)中所述的流動相為磷酸鹽緩沖液:乙腈=2—4:1。在另一優選例中，所述的步驟(2)中包括柱后反應，反應液為0.5—2mol/L的氫氧化鉀或氫氧化鈉溶液。在另一優選例中，所述的柱后反應液為0.7—1.5mol/L的氫氧化鉀溶液。在另一優選例中，步驟(2)中所述的去除油相的前列地爾溶液中含有P—萘酚作為內標。在另一優選例中，所述高效液相測定中得到的前列腺素El峰與前列腺素A,峰的分離度為3—20，前列腺素A,峰與內標物峰分離度分別為1一10;優選前列腺素El峰與前列腺素A,峰的分離度為5—20，前列腺素A,峰與內標物峰分離度分別為5—10。在另一優選例中，步驟(2)中所述的磷酸鹽緩沖液中含有磷酸二氫鉀和4磷酸氫二鈉，pH5-7。在另一優選例中，所述的磷酸緩沖液pH5.5-6.5。據此，本發明提供了一種新的可以準確測定前列地爾微乳制劑中前列地爾和前列地爾的降解物質的方法。圖1顯示了前列地爾高效液相檢測的標準曲線圖；其中前列地爾的線性為0.9989。圖2顯示了前列腺素A1高效液相檢測的標準曲線圖；其中前列腺素Al的線性為0.9988。具體實施例方式發明人經過廣泛而深入的研究，發現可以利用超聲波的方法使前列地爾脂肪微乳制劑破乳，然后進行其含量和相關物質的測定，簡化了前列地爾脂肪微乳制劑的預處理，使后續的含量和相關物質測定結果更為準確。本發明是前列地爾注射液制劑的質量控制方法，它包括對性狀進行觀察，對內容物進行鑒別，根據藥典的方法對內容物進行檢查，對含有的前列地爾和有關物質進行含量測定的步驟。在本發明的一個優選例中前列地爾注射液是脂肪微乳制劑。本發明提供對前列地爾脂肪微乳制劑中的前列地爾和有關物質進行含量測定的方法，所述的方法包括步驟(1)將前列地爾脂肪微乳制劑進行超聲破乳，得到去除油相的前列地爾溶液；(2)對去除油相的前列地爾溶液中的前列地爾和/或PGA1進行高效液相測定。在本發明的一個優選例中按照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VD)測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以0.0067mol/L磷酸鹽緩沖液(pH為6.3)(取磷酸二氫鉀9.07g，加水使溶解，制成1000ml，另取無水磷酸氫二鈉9.46g，加水使溶解，制成1000ml,將后者加到前者中，直至pH為6.3，取此液100ml加水至1000ml，搖勻，即得)一乙腈(3:1)為流動相；柱后反應液為lmol/L氫氧化鉀溶液，柱后反應管為聚四氟乙烯管(小O.5mmX10m);柱溫60°C;檢測波長為278nm。前列地爾與內標物的分離度應符合要求。內標溶液的制備取P—萘酚約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，量取5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液的制備取前列地爾對照品(在五氧化二磷減壓干燥器中，室溫干燥4小時)約5mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加無水乙醇10tnl溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml與內標溶液lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密量取本品適量(相當于前列地爾5yg)，置10ml棕色量瓶中，加四氫呋喃4ml，混勻，超聲1分鐘。精密加入內標溶液lml，并加磷酸溶液(1—1000)約置刻度，搖勻，超聲5min，靜置5分鐘。加磷酸溶液以水油分液面定容至刻度，搖勻，高速離心5分鐘，取下清液作為供試品溶液。測定法取供試品溶液和對照品溶液各100u1注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按內標法以峰面積計算，即得。本發明提到的上述特征，或實施例提到的特征可以任意組合。本案說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。本發明的主要優點在于質量控制的分析過程簡單，供試樣品的穩定性高，基本沒有PGE1的降解，分析的精密度、回收率和準確性高。下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分比和份數按重量計。除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。實施例1前列腺素A,的測定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VD)測定。l.色譜條件儀器Agilent1100HPLC色譜柱KromasilC18,4.6X250mm，5um流動相0.0067mol/L磷酸鹽緩沖液乙腈(74:26)流速1.4ml/min柱后反應儀器Waters515泵，Waters柱溫箱柱后反應液lmol/L氫氧化鉀溶液柱后反應管聚四氟乙烯管(4)0.5mmX10m)柱溫60°C檢測波長278nm進樣量100ul流速0.3ml/min2.試藥和試液前列地爾對照品(中國藥品生物制品檢定所)前列地爾原料(制作脂肪乳劑時的原料)(哈高科藥業有限公司)樣品h巿售凱時⑧前列地爾注射液，(上海醫藥股份有限公司)樣品2:前列地爾注射液(福達制藥有限公司制造的三批樣品；批號分別為040301、040302、040303)P—萘酚(SIGMA)前列腺素A,對照品(SIGMA)無水磷酸氫二鈉(分析純國藥集團化學試劑有限公司)磷酸二氫鉀(分析純油頭市光華化學廠)氫氧化鉀(分析純上海上試綜合經營公司)乙月青(HP1XTediaCompany,Inc)四氫呋喃(HPLCTediaCompany,Inc)7無水乙醇(HPLCTediaCompany,Inc)磷酸(分析純振亞化工廠)蒸餾水(上海正廣和飲用水有限公司)3.實驗方法3.1專屬性試驗3.1.1系統適應性實驗輔料溶液制備按處方量即每毫升溶液含精制大豆油100nig、精制蛋黃卵磷脂18—25mg、甘油22.lmg、油酸2.4mg稱取適量輔料，置10ml棕色量瓶中，加四氫呋喃4ml，混勻，超聲1分鐘，加磷酸溶液(1—1000)約置刻度，搖勻，超聲5min，靜置5分鐘。加磷酸溶液以水油分液面定容至刻度，搖勻，高速離心5分鐘，取下清液進樣。內標溶液制備取B—萘酚約25mg,精密稱定，置50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，量取5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取內標溶液lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣。對照溶液制備精密稱取前列地爾對照品適量(約5mg)，置50ml棕色量瓶中，加無水乙醇10ml溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml與內標溶液lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。樣品溶液制備精密量取本品(樣品2)適量(相當于前列地爾5"g)，置10ml棕色量瓶中，加四氫呋喃4ml，混勻，超聲1分鐘。精密加入內標溶液lml，并加磷酸溶液(1—1000)約至刻度，搖勻，超聲5min,靜置5分鐘。加磷酸溶液以水油分液面定容至刻度，搖勻，高速離心5分鐘，取下清液作為供試品溶液。前列腺素A,溶液制備取前列腺素A,對照品(在五氧化二磷干燥器中，室溫減壓干燥4小時約3mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加無水乙醇10ml溶解，并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液5ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，取上訴溶液lml與含量測定項下的內標溶液lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。前列地爾峰與前列腺素A,以及前列腺素A,與內標物峰分離度分別為14.69和5.09，分離效果良好。理論塔板數按前列地爾峰計算為2070。3.1.2最小檢測限量測定最小檢出量按前列地爾計為0.5ng(相當于供試溶液濃度1%)，按前列腺素A,計為2.lng(相當于前列腺素Al對照溶液濃度1.4y。)。3.2樣品溶液穩定性按樣品溶液制備方法配制，并于0，3,6，12,18，24小時分別連續進樣3次，記錄色譜圖，記錄前列腺素A,峰面積與內標物峰面積的比值結果見表1:表1樣品溶液穩定性測試結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>前列腺素A,量沒有明顯變化，結果表明溶液在24小時內穩定；超聲波破乳的效果非常好，一般一次1分鐘就可以達到要求。3.3強力破壞試驗(批號040301)3.3.l高溫破壞精密量取前列地爾注射液(樣品2)lml(約相當前列地爾g)在105。C下加熱1小時。按樣品溶液配制方法配制并進行測定，結果穩定。3.3.2強光照射破壞將本品在光照儀4500LX照度下放置IO天后，精密量取lml(約相當前列地爾5ug)，按樣品溶液配制方法配制并進行測定，結果穩定。3.3.3強堿破壞精密量取前列地爾注射液lml(約相當前列地爾5ug)，滴入lmol/L氫氧化鈉溶液3滴，在8(TC下放置1小時，按樣品溶液配制方法配制并進行測定，結果穩定。3.3.4強酸破壞精密量取前列地爾注射液lml(約相當前列地爾5ug)，滴入稀鹽酸3滴，在8(TC下放置1小時，按樣品溶液配制方法配制并進行測定，結果穩定。3.3.5強氧化破壞精密量取前列地爾注射液lml(約相當前列地爾g)，滴入10%雙氧水3滴，在80。C下放置1小時，按樣品溶液配制方法配制并進行測定，結果穩定。由上述破壞性試驗可知，前列地爾在高溫、強光照射、強酸、強堿、強氧化條件下均會被破壞產生降解產物，該方法能較好檢測出所產生的雜質，是可行方法。3.5線性見含量測定項3.6加樣回收精密稱取前列腺素A,對照品適量(約相當于前列腺素A,3mg)置50ml量瓶，加無水乙醇10ml溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取前列地爾樣品(樣品2)兩份(各lral)、前列地爾樣品(樣品1)(lml)加入已知量的前列腺素A,對照品(約相當前列腺素A,1.5ug、3ug、4.5yg)各三份，分別置lOml量瓶，按含量測定方法配制溶液并測定，計算前列腺素A1加樣回收率。結果見表2。表2回收率實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>平均回收率(％)=99.93%RSD=0.63%加樣回收試驗結果表明，該雜質方法能準確檢測出雜質，為可行方法。4.三批樣品(上海福達制藥有限公司制造的樣品2)前列腺素A,含量測定(見表3)表3三批樣品有關物質測定結果批號040301040301040301市售樣品1前列腺素A,含量1.421.351.381.14實施例2PGE1含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VD)測定。經系統適用性試驗，精密度試驗、線性回歸試驗及回收率試驗，其結果理想。1.色譜條件同實施例1中前列腺素Al的檢測方法2.系統適用性試驗見實施例1中前列腺素Al—項下系統適用性實驗。3.精密度試驗按樣品溶液制備方法配制，照含量測定方法，重復測6次，記錄主峰面積與內標物峰面積的比值，計算相對標準偏差。(見表4)表4精密度測試結果123456A樣品/A內標0.7790.7700.7640.7670.7600.762平均值=0.767RSD=0.875%因RSD〈2.0%，樣品精密度試驗結果符合藥典方法要求(中國藥典2000年版二部附錄VD)。4.線性試驗精密稱取前列地爾對照品適量(約相當前列地爾5mg)置50ml量瓶，加無水乙醇lOml溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。另精密稱取前列腺素Al對照品適量(約相當前列腺素A13mg)置50ml量瓶，加無水乙醇10ml溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。按表5分別精密量取一定體積的上述溶液置10ml量瓶，分別精密加入lml內標溶液，用流動相稀釋至刻度，搖勻。照含量測定方法測定，記錄樣品峰面積與內標峰面積的比值，計算相關系數及回歸方程。見表6，7。11<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>標準曲線見圖1。可見，在O.25-0.75|iig/nil的濃度范圍內，前列地爾的線性關系良好,<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>標準曲線見圖2。可見，在0.06-0.45i^g/ml的濃度范圍內，前列腺素Al的線性關系良好。5.回收率試驗精密稱取前列地爾原料適量(約相當前列地爾5mg)置50ml量瓶，加無水乙醇10ml溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。另按處方量混合輔料一份。精密量取混合輔料兩份(各lml)、前列地爾原料兩份(約相當前列地爾5yg)、前列地爾原料(約相當前列地爾3.5ug、g、7.0ug)按處方量(按實施例1中所述)分別加入輔料各三份(各lml)，分別置10ml量瓶，按含量測定方法配制溶液并測定，計算主藥回收率。(表8)表8回收率實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>回收率試驗結果表明，輔料不干擾含量測定，該含量測定方法可行。6.日間差按樣品溶液制備方法配制，照含量測定方法，共測3天，每天進樣1次(n=3)，記錄主峰面積與內標物峰面積的比值，計算平均值及相對標準偏差。(表9)表9日間差<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>結論天間精密度要求符合藥典規定。7.含量測定內標溶液的制備取P—萘酚約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，量取5ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液的制備取前列地爾對照品(在五氧化二磷減壓干燥器中，室溫干燥4小時)約5mg，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加無水乙醇10ml溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至100ral量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml與內標溶液lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密量取本品(樣品2)適量(相當于前列地爾g)，置10ml棕色量瓶中，加四氫呋喃4ml，混勻，超聲1分鐘。精密加入內標溶液lml，并加磷酸溶液(1—1000)約置刻度，搖勻，超聲5min，靜置5分鐘。加磷酸溶液以水油分液面定容至刻度，搖勻，高速離心5分鐘，取下清液作為供試品溶液。測定法取供試品溶液和對照品溶液各100yl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按內標法以峰面積計算，即得。用含量測定方法對三批樣品(福達制藥有限公司制造的三批樣品。批號分別為040301、040302、040303)及市售樣品1進行含量測定，結果見表10。表10三批樣品及市售樣品含量測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>結果表明，三批樣品及市售品含量均在標示量的90.0%—110.0%之間；表明超聲波破乳的效果非常好。以上所述僅為本發明的較佳實施例而己，并非用以限定本發明的實質技術內容范圍，本發明的實質技術內容是廣義地定義于申請的權利要求范圍中，任何他人完成的技術實體或方法，若是與申請的權利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權利要求范圍之中。權利要求1.一種前列地爾脂肪微乳制劑中前列腺素E1和/或前列腺素A1的測定方法，其特征在于，所述的方法包括步驟(1)將前列地爾脂肪微乳制劑進行超聲處理，得到去除油相的前列地爾溶液；(2)對去除油相的前列地爾溶液進行高效液相測定，得到前列腺素E1和/或前列腺素A1的含量，所述的高效液相測定條件為固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相磷酸鹽緩沖液∶乙腈＝1-6∶1，檢測波長278nm。2.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(1)中所述的超聲處理次數為1一10次，每次0.5—20分鐘。3.如權利要求5所述的測定方法，其特征在于，步驟(1)中所述的超聲處理次數為1一5次，每次1一10分鐘；優選超聲處理次數為l一3次，每次1一5分鐘。4.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(2)中所述的流動相為磷酸鹽緩沖液:乙腈=2—4:1。5.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述的步驟(2)中包括柱后反應，反應液為0.5—2mol/L的氫氧化鉀或氫氧化鈉溶液。6.如權利要求5所述的測定方法，其特征在于，所述的柱后反應液為0.7一l.5mol/L的氫氧化鉀溶液。7.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(2)中所述的去除油相的前列地爾溶液中含有P—萘酚作為內標。8.如權利要求7所述的測定方法，其特征在于，所述高效液相測定中得到的前列腺素El峰與前列腺素A,峰的分離度為3—20,前列腺素Ai峰與內標物峰分離度分別為1一10;優選前列腺素E1峰與前列腺素A,峰的分離度為5—20，前列腺素A,峰與內標物峰分離度分別為5—10。9.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(2)中所述的磷酸鹽緩沖液中含有磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉，PH5-7。10.如權利要求9所述的測定方法，其特征在于，所述的磷酸緩沖液pH5.5-6.5。全文摘要本發明公開了一種前列地爾脂肪微乳制劑中前列腺素E1和/或前列腺素A1的測定方法，所述的方法包括步驟(1)將前列地爾脂肪微乳制劑進行超聲處理，得到去除油相的前列地爾溶液；和(2)對去除油相的前列地爾溶液進行高效液相測定，得到前列腺素E1和/或前列腺素A1的含量，所述的高效液相測定條件為固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相磷酸鹽緩沖液∶乙腈＝1-6∶1，檢測波長278nm。本發明的方法能準確地測定前列地爾微乳制劑中前列地爾及其降解物質。文檔編號G01N30/00GK101581702SQ200810037319公開日2009年11月18日申請日期2008年5月13日優先權日2008年5月13日發明者陳中怡申請人:上海萬特醫藥科技有限公司