專利名稱：抗病毒復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制劑領(lǐng)域，具體涉及中藥制劑的質(zhì)量控制方法，特別是抗病毒復(fù)方制劑 的質(zhì)量控制方法。
技術(shù)背景《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》WS3-49 (X-39) -92 (z)公開了一種由石膏、 板藍(lán)根、蘆根、地黃、郁金、知母、石菖蒲、廣藿香和連翹九味中藥經(jīng)過水提醇沉制備得到 的抗病毒口服液的質(zhì)量控制方法，具體步驟是按照薄層色譜法(中國(guó)藥典19卯年版一部附 錄57頁)試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液與連翹苷對(duì)照品溶液(lmg/ml)lnl和2jxl，分別點(diǎn)于同一 硅膠GF-254薄層板上，以體積比為85:10:5的氯仿一甲醇一冰醋酸為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)。同時(shí)按照色譜法(中國(guó)藥典1990年版一部附錄57頁 薄層掃描法)進(jìn)行掃描，光源氘燈，波長(zhǎng)人s-280nm, XR=320nm，測(cè)量供試品與對(duì)照品吸 收度積分值，按外標(biāo)二點(diǎn)法計(jì)算，每lml含連翹甙(C27H340u)不得少于3.0pg。該方法只能 對(duì)所述口服液中的連翹苷進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局2004年02月25日公開了一項(xiàng)"一種抗病毒口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法"的 發(fā)明專利申請(qǐng)(公開號(hào)為CN1477395),該申請(qǐng)公開了連翹、石菖蒲藥材的鑒別以及菝葜皂苷 元和連翹苷的含量測(cè)定方法。2007年04月4日公開了，項(xiàng)"一種控制抗病毒口服液質(zhì)量的 方法"公開號(hào)為CN1939524)的發(fā)明專利申請(qǐng)，該申請(qǐng)公開了一種用氣相色譜法測(cè)定抗病毒 口服液中廣藿香醇的含量。從上述方法可知，現(xiàn)有技術(shù)中抗病毒口服液的質(zhì)量控制方法都缺少知母中的芒果苷的檢 測(cè)，而知母中的芒果苷是該口服液起清熱作用的重要成分，具有抗病毒、抗氧化等作用，如 果缺少該成分或含量不達(dá)標(biāo)，難以確保該口服液的藥效，但目前尚無檢測(cè)該口服液中芒果苷 的方法。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種控制《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》WS3-49 (X-39) -92 (z)所記載抗病毒口服液以及根據(jù)該口服液的藥方制備的其它制劑質(zhì)量的新方法，該方 法可對(duì)所述抗病毒復(fù)方制劑中的芒果苷和連翹苷同時(shí)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案是抗病毒復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，該方法由以下步驟組成(1) 對(duì)照品溶液的制備芒果苷和連翹苷混合用甲醇溶解制成含芒果苷0.08 0.15mg/ml 和連翹苷0.04~0.08n]g/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備當(dāng)抗病毒復(fù)方制劑是固體制劑時(shí)，加20 30倍甲醇，超聲提取20 40min，過濾，濾渣加5 10倍水溶解，用10 15倍水飽和正丁醇萃取2 3次，合并IH丁醇 層，水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解成每毫升溶液相當(dāng)于0.2 0.3g原制劑，搖勻；當(dāng)抗病 毒復(fù)方制劑是液體制劑時(shí)，用10 15倍水飽和正丁醇萃取2 3次，合并正丁醇層，水浴蒸 干，所得千物質(zhì)用50X甲醇溶解成每毫升溶液相當(dāng)于3 5g干物質(zhì)，搖勻；(2) 以4.6mmx250mm、 5pm碳十八鍵合相硅膠柱為固定相填充色譜柱；首先精密吸取 對(duì)照品溶液10nl與供試品溶液5pl，分別注入高效液相色譜儀，然后以乙腈和含0.1% (v/v) 磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的混合液體為流動(dòng)相洗脫，流速為0.8 1.0ml/min，理論 塔板數(shù)按芒果苷計(jì)算應(yīng)不低于5000,按連翹苷計(jì)算應(yīng)不低于6000;最后以波長(zhǎng)為277nm的 紫外光檢測(cè)洗脫物，并繪制對(duì)照品的色譜圖和供試品的色譜圖；所述流動(dòng)相中，乙腈的體積 百分比含量為10 30%,含0.1% (v/v)磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的體積百分比含 量為70 卯％;(3) 將供試品的色譜圖與對(duì)照品溶液的色譜圖比較與對(duì)照品色譜圖中第一個(gè)峰保留時(shí) 間相同的特征峰即是芒果苷的特征峰，與對(duì)照品色譜圖中第二個(gè)峰保留時(shí)間相同的特征峰即 是連翹苷的特征峰；并分別根據(jù)這個(gè)兩個(gè)峰的峰面積按外標(biāo)法計(jì)算芒果苷和連翹苷含量。上述方法中，所述每毫升對(duì)照品溶液中含有芒果苷0.1172mg和連翹苷0.0480mg。 上述方法中，當(dāng)待測(cè)抗病毒制劑為固體制劑時(shí)，所述供試品溶液的制備方法最好是取 抗病毒制劑加25倍甲醇溶解，超聲提取40min，過濾，濾渣加5倍水溶解，用10倍水飽和 正丁醇萃取4次，合并正丁醇層，水浴蒸干，所得干物質(zhì)用50%甲醇溶解成每毫升溶液相當(dāng) 于0.2§原制劑搖勻。上述方法中，所述流動(dòng)相中乙腈的含量為20%，含0.P/。磷酸的0.05molZL的磷酸二氫鉀 溶液的含量為80%。本發(fā)明方法還可以結(jié)合薄層色譜法，在對(duì)連翹苷和芒果苷進(jìn)行了定量和定性檢測(cè)的基礎(chǔ) 上，分別對(duì)所述抗病毒復(fù)方制劑中的菝葜皂苷元、精氨酸、石菖蒲有效成分和百秋里醇中的 一種或兩種以上成分進(jìn)行定性檢測(cè)。菝葜皂苷元、精氨酸、石菖蒲有效成分和百秋里醇的薄 層色譜法定性檢測(cè)可以是本領(lǐng)域常用的方法，具體方法如下菝葜皂苷元的定性檢測(cè)方法 (1)取抗病毒制劑加4 8倍無水乙醇，超聲提取20 40min，過濾，濾液加0.1 0.2 倍36.5%的鹽酸，加熱回流l 2h后蒸干，加2 3倍水溶解，加4 5倍氯仿萃取2~3次，氯仿萃取液用4 5倍0.5WNaOH溶液洗滌，棄去堿液，再用4 5倍水洗滌，棄去水液，然 后將氯仿液蒸干，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜撩亢辽芤合喈?dāng)于4 6g原制劑，作為供試品溶液；(2) 另取菝葜皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為陽性對(duì)照溶液；(3) 吸取供試品溶液和陽性對(duì)照品溶液各5ixl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積 比為9 : 1的甲苯和丙酮混合物展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸液，在105°C 加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；(4) 結(jié)果判斷供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，說明 該供試品中含有菝葜皂苷元。精氨酸的定性檢測(cè)方法(1) 取抗病毒制劑加10 15倍乙醇回流提取20 40min,過濾，提取液蒸千，殘?jiān)?甲醇溶解成每毫升溶液相當(dāng)于1 2g原制劑，作為供試品液；(2) 另取精氨酸對(duì)照品加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為陽性對(duì)照品溶液；(3) 吸取供試品溶液和陽性對(duì)照品溶液各5^1，分別點(diǎn)于同一以0.5%羧甲基纖維素鈉溶 液為粘合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為8:2:2的正丁醇、冰醋酸和水的混合物為展開 劑，用硫酸控制濕度為58%，預(yù)飽和30min，展開8 9cm，取出，晾干，再以同一展開劑二 次展開8 9cm，取出，晾干，噴以5%茚三酮溶液顯色，105。C烘至斑點(diǎn)清晰；(4) 結(jié)果判斷供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，說明 該供試品中含有精氨酸。石菖蒲有效成分的定性檢測(cè)方法(1) 取抗病毒制劑加4 6倍水溶解后，加2 3倍石油醚萃取2 3次，合并石油醚層， 水浴蒸干，殘?jiān)靡宜嵋阴ト芙獬擅亢辽喈?dāng)于8 12g原制劑，作為供試品液；(2) 另取石菖蒲藥材細(xì)粉加30 50倍石油醚溶解，超聲提取20 40min，濾過，取濾 液蒸干，殘?jiān)靡宜嵋阴ト芙獬擅亢辽喈?dāng)于8 12g原藥材，作為陽性對(duì)照藥材溶液；(3) 吸取供試品溶液和陽性對(duì)照品溶液各5^1,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以 體積比為8 : 2的60 卯。C石油醚和乙酸乙酯的混合物為展開劑，展丌，取出，晾千，置254nm 紫外燈下檢視；(4) 結(jié)果判斷供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，說明 該供試品中含有石菖蒲的有效成分。百秋里醇的定性檢測(cè)方法(1)取抗病毒制劑加8 10倍水溶解后，用3 5倍乙醚萃取2 3次，取乙醚層蒸干' 殘?jiān)眉状既芙獬擅亢辽芤合喈?dāng)于4 6g原藥材，作為供試品溶液；(2) 另取百秋里醇對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為陽性對(duì)照品溶液;(3) 吸取供試品溶液和陽性對(duì)照品溶液各5nl，分別點(diǎn)于同一^I膠G薄層板上，以體積 比為10: 3的環(huán)己垸和乙酸乙酯混合液為展開劑，展開8 9cm;取出，晾干，噴以5%香草酵 濃硫酸溶液，在105'C烘至斑點(diǎn)顯色清晰；(4) 結(jié)果判斷供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，說明 該供試品中含有百秋里醇。為了進(jìn)一步保證定性檢測(cè)的準(zhǔn)確性，上述薄層色譜定性檢測(cè)方法還可以加入陰性對(duì)照， 即檢測(cè)每種成分時(shí)將供試品溶液、陽性對(duì)照溶液和陰性對(duì)照溶液同時(shí)進(jìn)行薄層色譜，色譜結(jié)果應(yīng)為供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品色譜中無相應(yīng)斑點(diǎn)。所述陰性對(duì)照溶液為缺少與所檢測(cè)成分相應(yīng)的藥^"的抗病毒復(fù)方提取物的甲醇溶液，制備方法如下 缺知母的陰性對(duì)照品(1) 取廣藿香2.9重量份、石菖蒲粗粉2.5重量份，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力 28MPa、溫度55t:下萃取2小時(shí)，收集揮發(fā)油，留藥渣備用；(2) 取石膏5.7重量份、蘆根粗粉6.1重量份，加水8 10倍，8(TC下提取2 3次，每 次1 2小時(shí)，過濾，合并提取液，在溫度為IOO'C、真空度為一0.08 一0.04MPa下減壓濃 縮成清膏，使其在5(TC下的密度為1.05~1.15g/ml;(3) 取連翹4.6重量份、板藍(lán)根12.9重量份、郁金2.5重量份、地黃3.2重量份和歩驟 (l)所得藥渣混合，用8 10倍80%乙醇加熱回流提取2 3次，每次1 2小時(shí)，過濾，合并提取液，將乙醇提取液在溫度為6(TC、真空度為一0.08 一0.04MPa下減壓濃縮成清膏， 使其在5(TC下的密度為1.05~U5g/mh(4) 取步驟(1)所得的揮發(fā)油、步驟(2)和(3)所得的清膏，按常規(guī)方法制備成顆 粒劑或口服液。缺板藍(lán)根的陰性對(duì)照品-(1) 取廣藿香2.9重量份、石菖蒲粗粉2.5重量份，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力 28MPa、溫度55t:下萃取2小時(shí)，收集揮發(fā)油，留藥渣備用；(2) 取知母2.5重量份、石膏5.7重量份、蘆根粗粉6.1重量份，加水8 10倍，80°C 下提取2 3次，每次1 2小時(shí)，過濾，合并提取液，在溫度為IO(TC、真空度為一0.08 一 0.04MPa下減壓濃縮成清膏，使其在5(TC下的密度為1.05~1.15g/ml;(3) 取連翹4.6重量份、郁金2.5重量份、地黃3.2重量份和步驟(1)所得藥渣混合， 用8 10倍80%乙醇加熱回流提取2 3次，每次1 2小時(shí)，過濾，合并提取液，將乙醇提取液在溫度為6(TC、真空度為一0.08 一0.04MPa下減壓濃縮成清膏，使其在5(TC下的密度 為1.05~1.15g/ml;(4)取步驟(1)所得的揮發(fā)油、步驟(2)和(3)所得的清膏按常規(guī)方法制備成口服 液或顆粒劑。缺石菖蒲的陰性對(duì)照品(1) 取廣藿香2.9重量份，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力28MPa、溫度55。C下萃 取2小時(shí)，收集揮發(fā)油，留藥渣備用；(2) 取知母2.5重量份、石膏5.7重量份、戸根粗粉6.1重量份，加水8 10倍，80°C 下提取2 3次，每次1 2小時(shí)，過濾，合并提取液，在溫度為IOO'C、真空度為一0.08 一 0.04MPa下減壓濃縮成清膏，使其在50'C下的密度為1.05~U5g/ml;(3) 取連翹4.6重量份、板藍(lán)根12.9重量份、郁金2.5重量份、地黃3.2重量份和步驟 (l)所得藥渣混合，用8 10倍80%乙醇加熱回流提取2 3次，每次1 2小時(shí)，過濾，合并提取液，將乙醇提取液在溫度為60'C、真空度為一0.08 一0.04MPa下減壓濃縮成清膏， 使其在50'C下的密度為1.05 1.15g/ml;(4) 取步驟(1)所得的揮發(fā)油、步驟(2)和(3)所得的清膏按常規(guī)方法制備成口服 液或顆粒劑。缺廣藿香的陰性對(duì)照品(1) 取石菖蒲2.5重量份，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力28MPa、溫度55'C下萃 取2小時(shí)，收集揮發(fā)油，留藥渣備用；(2) 取知母2.5重量份、石膏5.7重量份、蘆根粗粉6.1重量份，加水8 10倍，80°C 下提取2 3次，每次1 2小時(shí)，過濾，合并提取液，在溫度為100°C、真空度為一0.08^^ — 0.04MPa下減壓濃縮成清膏，使其在50'C下的密度為1.05 1.15g/ml;(3) 取連翹4.6重量份、板藍(lán)根12.9重量份、郁金2.5重量份、地黃3.2重量份和步驟 (1)所得藥渣混合，用8 10倍80%乙醇加熱回流提取2 3次，每次1 2小時(shí)，過濾，合并提取液，將乙醇提取液在溫度為60'C、真空度為一0.08 一0.04MPa下減壓濃縮成清膏， 使其在5(TC下的密度為1.05 U5g/ml;(4) 取步驟(1)所得的揮發(fā)油、步驟(2)和(3)所得的清膏按常規(guī)方法制備成口服 液或顆粒劑。本發(fā)明方法適用于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》WS3-49 (X-39) -92 (z)所 記載抗病毒口服液以及根據(jù)該口服液的藥方"石膏、板藍(lán)根、蘆根、地黃、郁金、知母、石 菖蒲、廣藿香和連翹"制備得到的各種制劑。本發(fā)明建立了抗病毒復(fù)方制劑中有效成分的高效液相色譜檢測(cè)方法，可對(duì)該方中重要指 標(biāo)連翹苷和芒果苷同時(shí)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，不僅有效地控制該方制劑的質(zhì)量，還大大減少 了操作步驟、縮短了分析時(shí)間、節(jié)約了有機(jī)溶劑；本發(fā)明所述方法還可與檢測(cè)板藍(lán)根中的精 氨酸、知母中的菝葜皂苷元、廣藿香中的百秋里醇以及石菖蒲有效成分等公知方法結(jié)合，更 全面的反映抗病毒復(fù)方制劑的內(nèi)在質(zhì)量。
圖1是用實(shí)施例1方法檢測(cè)抗病毒顆粒劑的對(duì)照品的高效液相圖譜，其中1號(hào)峰為芒果 苷，2號(hào)峰為連翹苷。圖2是用實(shí)施例1方法檢測(cè)抗病毒顆粒劑的供試品的高效液相圖譜，其中1號(hào)峰為芒果苷，2號(hào)峰為連翹苷。圖3是用實(shí)施例1方法檢測(cè)抗病毒顆粒劑的芒果苷含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。 圖4是用實(shí)施例1方法檢測(cè)抗病毒顆粒劑的連翹苷含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。 圖5是用實(shí)施例2方法檢測(cè)抗病毒顆口服液的對(duì)照品的高效液相圖譜，其中l(wèi)號(hào)峰為芒果苷，2號(hào)峰為連翹苷。圖6是用實(shí)施例2方法檢測(cè)抗病毒顆口服液的供試品的高效液相圖譜，其中1號(hào)峰為芒果苷，2號(hào)峰為連翹苷。圖7是用實(shí)施例2方法檢測(cè)抗病毒顆口服液的芒果苷含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。 圖8是用實(shí)施例2方法檢測(cè)抗病毒顆口服液的連翹苷含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。 圖9是用實(shí)施例3方法檢測(cè)抗病毒顆粒劑檢測(cè)菝葜皂苷元的薄層色譜圖，其中1、 2為供試液，3、 4為缺知母的陰性供試液，5為菝葜皂苷元。圖10是用實(shí)施例3方法檢測(cè)抗病毒顆粒劑檢測(cè)精氨酸的薄層色譜圖，其中1、 2、 3為供試液，4為精氨酸，5為缺板藍(lán)根的陰性供試液。圖11是用實(shí)施例3方法檢測(cè)抗病毒顆粒劑檢測(cè)石菖蒲藥材的薄層色譜圖，其中1、 2為供試液，3、 4為石菖蒲對(duì)照藥材供試液，5、 6為缺石菖蒲的陰性供試液。圖12是用實(shí)施例3方法檢測(cè)抗病毒顆粒劑檢測(cè)百秋里醇的薄層色譜圖，其中1、 2、 3為供試液，4為百秋里醇，5為缺廣藿香的陰性供試液。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例所用的抗病毒制劑為-1、 抗病毒口服液為廣州市香雪制藥股份有限公司生產(chǎn)的抗病毒口服液，批號(hào)為060403;2、 抗病毒顆粒劑為自制，制備方法如下-(l)提取取廣藿香2.9Kg、石菖蒲2.5Kg，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力28MPa、溫度55'C下萃取2小時(shí)，收集得揮發(fā)油198g,備用；
藥渣與連翹4.6Kg、板藍(lán)根12.9Kg、郁金2，5Kg、地黃3.2Kg加8倍量80%乙醇，加熱回 流提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出醇提液，合并兩次醇提液，備用；
取知母2.5Kg、石膏5.7Kg、蘆根6.1Kg粗粉，加8倍量的水在8(TC下提取2次，每次2 小時(shí)，經(jīng)臥式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出水提液，合并兩次水提液，備用；
(2) 濃縮將水提液和醇提液分別在溫度為100'C和6(TC、真空度為-0.06MPa下減壓濃 縮，合并，得約11800ml (5(TC時(shí)測(cè)其密度均為1.12g/ml)濃縮液，同時(shí)測(cè)定其出膏率，備用；
(3) 干燥在濃縮液中加入相當(dāng)于其干膏量30%的糊精，溶解混勻，得到浸膏12000ml (50'C時(shí)測(cè)其密度均為1.15g/ml),在進(jìn)風(fēng)口溫度為155~165°C、出風(fēng)口溫度為IO(TC、壓力
為lbar條件下進(jìn)行噴霧干燥即得9.27Kg黃褐色干燥粉末；
(4) 包合物的制備取步驟(1)所得揮發(fā)油按l: 1比例用無水乙醇稀釋，滴入6倍量 揮發(fā)油重量的p-環(huán)糊精飽和溶液中，于5(TC攪拌2小時(shí)，攪拌速度為200rpm，靜置24小時(shí)， 抽濾，控制溫度在6(TC以下進(jìn)行真空干燥即得1.39Kg白色粉末狀包合物，包合率為70.2%;
(5) 制粒將上述所得的黃褐色干燥粉未與揮發(fā)油包合物以及兩者混合后總重量1.5倍 量的糊精混勻，加入30%的95%乙醇潤(rùn)濕，制軟材，過篩，過篩顆粒4(TC熱風(fēng)循環(huán)千燥，整 粒；
(6) 灌裝、滅菌干燥顆粒灌裝成2.5g/袋，滅菌，即可。 例l
抗病毒顆粒劑中芒果苷和連翹苷的檢測(cè)
1、 對(duì)照品溶液的制備精密稱取芒果苷、連翹苷適量，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成芒果苷濃度0.1172mg/ml、連翹苷濃度為0.0480mg/ml溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備取本品2g，精密稱重，置具塞三角燒瓶中，加甲醇50ml，超聲40min， 濾過，殘?jiān)铀?0ml溶解，用水飽和正丁醇萃取4次(20mlx4)，合并正丁醇層，水浴蒸干， 殘?jiān)?0%甲醇溶解，定容于10ml量瓶，搖勻，備用。
2、 以4.6mmx250mm、 5jim碳十八鍵合相硅膠柱為固定相填充色譜柱；首先精密吸取對(duì) 照品溶液與供試品溶液5pl，分別注入高效液相色譜儀，然后以體積比為20% : 80%的 乙腈和含0.1%磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的混合液體為流動(dòng)相洗脫，流速為 lm)/min，理論塔板數(shù)按芒果苷計(jì)算應(yīng)不低于5000,按連翹苷計(jì)算應(yīng)不低于6000;最后以波 長(zhǎng)為277nm的紫外光檢測(cè)洗脫物，并繪制對(duì)照品的色譜圖和供試品的色譜3、 圖l為對(duì)照品的色譜圖，其中平均保留時(shí)間為15.6min的峰為芒果苷的特征峰，平均 保留時(shí)間為32.6min的峰為連翹苷的特征峰；圖2為供試品的色譜圖，在平均保留時(shí)間為15.5min和32.4min分別有兩個(gè)峰，與對(duì)照品色譜圖中芒果苷和連翹苷的保留時(shí)間一致，分別 為芒果苷和連翹苷的特征峰。圖3為根據(jù)外標(biāo)法繪制的芒果苷含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為 y=1146.2x+70.62, Y=0.9998,圖4為根據(jù)外標(biāo)法繪制的連翹苷含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為 1506.7x-6.34， "0.9999，其中y為峰面積，x為待測(cè)成分含量；根據(jù)圖2中芒果苷和連翹苷 的特征峰的峰面積和標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，可得該制劑中芒果苷和連翹苷的含量分別為0.608mg/g 和0.124mg/g。
例2 '
抗病毒顆口服液中芒果苷和連翹苷的含量測(cè)定
1、 對(duì)照品溶液的制備精密稱取芒果苷、連翹苷適量，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成芒果苷濃度0.15mg/ml、連翹苷濃度為0.04mg/ml溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備取市售抗病毒口服液20ml，加水飽和正丁醇萃取2次，每次30ml， 棄去水層，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，定容至10ml刻度，作為供試品溶 液。
2、 以4.6mmx250mm、 碳十八鍵合相硅膠柱為固定相填充色譜柱；首先精密吸取對(duì) 照品溶液與供試品溶液5^1,分別注入高效液相色譜儀，然后以體積比為30% : 70%的 乙腈和含0.1%磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的混合液體為流動(dòng)相洗脫，流速為0.8 ml/min,理論塔板數(shù)按芒果苷計(jì)算應(yīng)不低于5000，按連翹苷計(jì)算應(yīng)不低于6000;最后以波長(zhǎng) 為277nm的紫外光檢測(cè)洗脫物，并繪制對(duì)照品的色譜圖和供試品的色譜3、 圖5為對(duì)照品的色譜圖，其中平均保留時(shí)間為9.3min的峰為芒果苷的特征峰，平均 保留時(shí)間為26.2min的峰為連翹苷的特征峰；圖6為供試品的色譜圖，在平均保留時(shí)間為 9.3min和26.3min分別有兩個(gè)峰，與對(duì)照品色譜圖中芒果苷和連翹苷的保留時(shí)間一致，分別 為芒果苷和連翹苷的特征峰。圖7為根據(jù)外標(biāo)法繪制的芒果苷含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為 y = 2330x - 66.844, 7=0.9994，圖8為根據(jù)外標(biāo)法繪制的連翹苷含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為 y = 615.13x+13.516, y=0.9995，其中y為峰面積，x為待測(cè)成分含量；根據(jù)圖6中芒果苷和 連翹苷的特征峰的峰面積和標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，可得該口服液中芒果苷和連翹苷的含量分別為 0.182mg/10ml和0.3O8mg/10ml。
例3
抗病毒顆粒劑中菝葜皂苷元、精氨酸、百秋里醇以及石菖蒲藥材的薄層色譜檢測(cè)以及芒 果苷和連翹苷的高效液相色譜檢測(cè)。 菝葜皂苷元的定性檢測(cè)
1、取本品5g，加20ml無水乙醇，超聲提取40min，濾過，濾液加鹽酸lml，加熱回流]h后蒸千，加水15ml溶解，加氯仿萃取3次，每次20ml，氯仿萃取液用0.5%NaOH溶液 20ml洗滌，棄去堿液，再用蒸餾水20ml洗滌，棄去水液，氯仿液蒸千，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜?lml，作為供試品溶液。
2、 另取菝葜皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
3、 缺知母的陰性對(duì)照品溶液的制備
(1) 提取取廣藿香2.9Kg、石菖蒲2.5Kg，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力28MPa、 溫度55"C下萃取2小時(shí)，收集得揮發(fā)油198g,備用；
藥渣與連翹4.6Kg、板藍(lán)根12.9Kg、郁金2.5Kg、地黃3，2Kg加8倍量80%乙醇，加熱回 流提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出醇提液，合并兩次醇提液，備用；
取石膏5.7Kg、蘆根6.1Kg粗粉，加8倍量的水在80'C下提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥 式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出水提液，合并兩次水提液，備用；
(2) 濃縮將水提液和醇提液分別在溫度為IOO'C和6(TC真空度為-0.06MPa下減壓濃縮， 合并，得約11800ml (5(TC時(shí)測(cè)其密度均為1.12g/ml)濃縮液，同時(shí)測(cè)定其出膏率，備用；
(3) 干燥在濃縮液中加入相當(dāng)于其干膏量30%的糊精，溶解混勻，得到浸膏12000ml (5(TC時(shí)測(cè)其密度均為1.15g/ml)，在進(jìn)風(fēng)口溫度為155 165'C、出風(fēng)口溫度為IOO'C、壓力
為lbar條件下進(jìn)行噴霧干燥即得9.27Kg黃褐色干燥粉末；
(4) 包合物的制備取步驟(1)所得揮發(fā)油按l: 1比例用無水乙醇稀釋，滴入6倍量 揮發(fā)油重量的(3-環(huán)糊精飽和溶液中，于5(TC攪拌2小時(shí)，攪拌速度為200rpm，靜置24小時(shí)， 抽濾，控制溫度在6(TC以下進(jìn)行真空干燥即得1.39Kg白色粉末狀包合物，包合率為70.2%;
(5) 制粒將上述所得的黃褐色干燥粉末與揮發(fā)油包合物以及兩者混合后總重量1.5倍 量的糊精混勻，加入30%的95%乙醇潤(rùn)濕，制軟材，過篩，過篩顆粒4(TC熱風(fēng)循環(huán)千燥，整 粒；
(6) 取上述顆粒5g，加20ml無水乙醇，超聲提取40min，濾過，濾液加鹽酸Iml，加 熱回流lh后蒸干，加水15ml溶解，加氯仿萃取3次，每次20ml，氯仿萃取液用0.5%NaOH 溶液20ml洗滌，棄去堿液，再用蒸餾水20ml洗滌，棄去水液，氯仿液蒸千，殘?jiān)蛹状级?容至lml，作為陰性對(duì)照品溶液。
4、 照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5^1， 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9: 1的甲苯-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以5%香草醛濃硫酸液，在105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無干擾，如圖9所示。
精氨酸的定性檢測(cè)1、 取本品2g，用20ml乙醇回流提取30min，過濾，提取液蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜羖ml， 作為供試品液。
2、 另取精氨酸對(duì)照品加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
3、 缺板藍(lán)根的陰性對(duì)照溶液-
(1) 提取取廣藿香2.9Kg、石菖蒲2.5Kg，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力28MPa、 溫度55'C下萃取2小時(shí)，收集得揮發(fā)油198g，備用；
藥渣與連翹4.6Kg、板藍(lán)根12.9Kg、郁金2.5Kg、地黃3.2Kg加8倍量80%乙醇，加熱回 流提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出醇提液，合并兩次醇提液，備用；
取石膏5.7Kg、蘆根6.1Kg粗粉，加8倍量的水在8(TC下提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥 式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出水提液，合并兩次水提液，備用；
(2) 濃縮將水提液和醇提液分別在溫度為IO(TC和60'C真空度為-0.06MPa下減壓濃縮， 合并，得約11800mL (5(TC時(shí)測(cè)其密度均為1.12g/mL)濃縮液，同時(shí)測(cè)定其出膏率，備用
(3) 千燥在濃縮液中加入相當(dāng)于其干膏量30%的糊精，溶解混勻，得到浸膏12000mL (5(TC時(shí)測(cè)其密度均為1.15g/mL)，在進(jìn)風(fēng)口溫度為155 165°C、出風(fēng)口溫度為IO(TC、壓
力為lbar條件下進(jìn)行噴霧干燥即得9.27Kg黃褐色干燥粉末；
(4) 包合物的制備取步驟(1)所得揮發(fā)油按l: I比例用無水乙醇稀釋，滴入6倍量 揮發(fā)油重量的p-環(huán)糊精飽和溶液中，于50'C攪拌2小時(shí)，攪拌速度為200rpm，靜置24小時(shí)， 抽濾，控制溫度在6(TC以下進(jìn)行真空干燥即得1.39Kg白色粉末狀包合物，包合率為70.2%;
(5) 制粒將上述所得的黃褐色干燥粉末與揮發(fā)油包合物以及兩者混合后總重量1.5倍 量的糊精混勻，加入30%的95。/。乙醇潤(rùn)濕，制軟材，過篩，過篩顆粒4(TC熱風(fēng)循環(huán)干燥，整 粒；
(6) 取上述顆粒2g，用20ml乙醇回流提取30min，過濾，提取液蒸干，殘?jiān)眉状级?容至lml，作為陰性對(duì)照品溶液。
4、 照薄層色譜法，吸取上述三種溶液各5pl，分別點(diǎn)于同一以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液 為粘合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為8:2:2的正丁醇-冰醋酸一水上層為展丌劑，用硫 酸控制濕度為58%，預(yù)飽和30min,展開約8cm，取出，晾干，再以同一展開劑二次展開約 8cm,取出，晾千，噴以5%茚三酮溶液顯色，105'C烘至斑點(diǎn)清晰，供試品色譜和對(duì)照品色 譜中，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照在相應(yīng)位置上無斑點(diǎn)，如圖10所示。
石菖蒲有效成分的檢測(cè)
1、取本品5g,加水20ml溶解后，加石油醚萃取2次，每次30ml，合并石油醚層，水浴 蒸干，殘?jiān)靡宜嵋阴ザㄈ葜羖ml，作為供試品液。2、 另取石菖蒲藥材細(xì)粉0.5g，加石油醚20m超聲提取30min，濾過，取濾液蒸干，殘 渣用乙酸乙酯定容至lml，作為對(duì)照藥材溶液。
3、 缺石菖蒲的陰性對(duì)照溶液
(1) 提取取廣藿香2.9Kg，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力28MPa、溫度55。C下萃 取2小時(shí)，收集得揮發(fā)油198g，備用；
藥渣與連翹4.6Kg、板藍(lán)根12.9Kg、郁金2.5Kg、地黃3.2Kg加8倍量80%乙醇，加熱回 流提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出醇提液，合并兩次醇提液，備用；
取石膏5.7Kg、蘆根6.1Kg粗粉，加8倍量的水在80。C下提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥 式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出水提液，合并兩次水提液，備用
(2) 濃縮將水提液和醇提液分別在溫度為10(TC和6(TC、真空度為-0.06MPa下減壓濃 縮，合并，得約11800mL (50'C時(shí)測(cè)其密度均為1.12g/mL)濃縮液，同時(shí)測(cè)定其出膏率，備 用；
(3) 干燥在濃縮液中加入相當(dāng)于其千膏量30%的糊精，溶解混勻，得到浸膏12000mL (5(TC時(shí)測(cè)其密度均為1.15g/mL)，在進(jìn)風(fēng)口溫度為155 165°C、出風(fēng)口溫度為IOCTC、壓
力為lbar條件下進(jìn)行噴霧干燥即得9.27Kg黃褐色干燥粉末；
(4) 包合物的制備取步驟(1)所得揮發(fā)油按l: 1比例用無水乙醇稀釋，滴入6倍量 揮發(fā)油重量的p-環(huán)糊精飽和溶液中，于50'C攪拌2小時(shí)，攪拌速度為200rpm，靜置24小時(shí)， 抽濾，控制溫度在6(TC以下進(jìn)行真空干燥即得1.39Kg白色粉末狀包合物，包合率為70.2%;
(5) 制粒將上述所得的黃褐色干燥粉末與揮發(fā)油包合物以及兩者混合后總重量1.5倍 量的糊精混勻，加入30%的95%乙醇潤(rùn)濕，制軟材，過篩，過篩顆粒40。C熱風(fēng)循環(huán)干燥，整 粒；
(6) 取上述顆粒10g，加水20ml溶解后，加石油醚萃取2次，每次30ml，合并石油醚 層，水浴蒸干，殘?jiān)靡宜嵋阴ザㄈ葜羖ml，作為陰性對(duì)照品溶液。
4、 照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5pl， 分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為8 : 2的石油醚(60 90°C)-乙酸乙酯為展開 劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位 置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無干擾，如圖11所示。
百秋里醇的定性檢測(cè)
1、 取本品2.5g，加水20ml溶解，用乙醚20ml萃取3次，乙醚層蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ?至lml，作為供試品液。
2、 另取百秋里醇對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。3、 缺廣藿香的陰性對(duì)照溶液-
(1) 提取取石菖蒲2.5Kg，裝入C02超臨界萃取釜中，在壓力28MPa、溫度55。C下萃 取2小時(shí)，收集得揮發(fā)油98g，備用；
藥渣與連翹4.6Kg、板藍(lán)根12.9Kg、郁金2,5Kg、地黃3.2Kg加8倍量80%乙醇，加熱回 流提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出醇提液，合并兩次醇提液，備用；
取石膏5.7Kg、蘆根6.1Kg粗粉，加8倍量的水在80'C下提取2次，每次2小時(shí)，經(jīng)臥 式螺旋卸料過濾離心機(jī)放出水提液，合并兩次水提液，備用；
(2) 濃縮將水提液和醇提液分別在溫度為IOO'C和6(TC真空度為-0.06MPa下減壓濃縮， 合并，得約I1800ml (5(TC時(shí)測(cè)其密度均為1.12g/tnl)濃縮液，同時(shí)測(cè)定其出膏率,備用；
(3) 干燥在濃縮液中加入相當(dāng)于其干膏量30%的糊精，溶解混勻，得到浸膏12000ml (5(TC時(shí)測(cè)其密度均為U5g/ml)，在進(jìn)風(fēng)口溫度為155 165'C、出風(fēng)口溫度為IOO'C、壓力
為lbar條件下進(jìn)行噴霧干燥即得9.27Kg黃褐色干燥粉末
(4) 包合物的制備取步驟(1)所得揮發(fā)油按l: 1比例用無水乙醇稀釋，滴入6倍量 揮發(fā)油重量的p-環(huán)糊精飽和溶液中，于50'C攪拌2小時(shí)，攪拌速度為200rpm，靜置24小時(shí)， 抽濾，控制溫度在60"C以下進(jìn)行真空干燥即得1.39Kg白色粉末狀包合物，包合率為70.2°/0;
(5) 制粒將上述所得的黃褐色干燥粉末與揮發(fā)油包合物以及兩者混合后總重量1.5倍 量的糊精混勻，加入30。/。的95。/。乙醇潤(rùn)濕，制軟材，過篩，過篩顆粒4(TC熱風(fēng)循環(huán)干燥，整 粒；
(6) 取上述顆粒2g，加水20ml溶解，用乙醚20ml萃取3次，乙醚層蒸干，殘?jiān)眉?醇定容至lml，作為陰性對(duì)照品溶液。
4、 照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5pl， 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為10 : 3的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展幵約IOcm。 取出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸溶液，在105'C烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在 與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無干擾，如圖12所示。
芒果苷和連翹苷的檢測(cè)
1、 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取芒果苷、連翹苷適量，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成芒果苷濃度0.1172mg/ml、連翹苷濃度為0.0480mg/ml溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備取本品2g，精密稱重，置具塞三角燒瓶中，加甲醇50ml，超聲40min， 濾過，殘?jiān)铀?0ml溶解，用水飽和正丁醇萃取4次(20mlx4)，合并正丁醇層，水浴蒸干， 殘?jiān)?0%甲醇溶解，定容于10ml量瓶，搖勻，備用。
2、 以4.6mmx250mm、 5pm碳十八鍵合相硅膠柱為固定相填充色譜柱；首先精密吸取對(duì)照品溶液1(^1與供試品溶液5^1，分別注入高效液相色譜儀，然后以體積比為20% : 80%的 乙腈和含0.1%磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的混合液體為流動(dòng)相洗脫，流速為 lml/min，理論塔板數(shù)按芒果苷計(jì)算應(yīng)不低于5000，按連翹苷計(jì)算應(yīng)不低于6000;最后以波 長(zhǎng)為277nm的紫外光檢測(cè)洗脫物，并繪制對(duì)照品的色譜圖和供試品的色譜3、結(jié)果對(duì)照品和供試品的色譜圖與例l相似，芒果苷的平均保留時(shí)間為15.7min，含 量為0.602mg/g，連翹苷的平均保留時(shí)間為32.6min，含量分別為0.119mg/g。
例4
抗病毒口服液中菝葜皂苷元、精氨酸、百秋里醇以及石菖蒲藥材的薄層色譜檢測(cè)以及芒 果苷和連翹苷的高效液相色譜檢測(cè)。 1、菝葜皂苷元的鑒別-
取市售抗病毒口服液20ml，加鹽酸lml加熱回流lh后蒸干，加水15ml溶解，加氯仿 萃取3次，每次20ml，氯仿萃取液用0.5%NaOH溶液20ml洗滌，棄去堿液，再用蒸餾水20ml 洗滌，棄去水液，氯仿液蒸干，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜羖ml，作為供試品溶液。另取菝葜皂苷元 對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005 年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5^1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體 積比為9: 1的甲苯-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸液，在105°C 加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。 精氨酸的鑒別-
取市售抗病毒口服液10ml，蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜羖ml，作為供試品液。另取精氨酸 對(duì)照品加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法，吸取上述兩 種溶液各5pl，分別點(diǎn)于同一以0.5。/。羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑的硅膠G薄層板上，以體 積比為8:2:2的正丁醇-冰醋酸一水上層為展開劑，用硫酸控制濕度為58%,預(yù)飽和30min， 展開約8cm，取出，晾干，再以同一展開劑二次展開約8cm，取出，晾干，噴以5%茚三酮 溶液顯色，105'C烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜和對(duì)照品色譜中，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
石菖蒲藥材中的鑒別
取市售抗病毒口服液20ml，加石油醚萃取2次，每次30ml，合并石油醚層，水浴蒸干， 殘?jiān)靡宜嵋阴ザㄈ葜羖ml，作為供試品液。另取石菖蒲對(duì)照藥材細(xì)粉0.5g，加石油醚20ml 超聲提取30min，濾過，取濾液蒸干，殘?jiān)靡宜嵋阴ザㄈ葜羖ml，作為對(duì)照藥材溶液。照薄 層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B )試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5pl，分別點(diǎn)于同 一硅膠GF254薄層板上，以體積比為8:2的石油醚(60 90'C)-乙酸乙酯為展開劑，展開， 取出，晾干，置紫外燈(254mn)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
百秋里醇的鑒別
取市售抗病毒口服液20ml,用乙醚20ml萃取3次，乙醚層蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜羖ml， 作為供試品液。另取百秋里醇對(duì)照品，加甲醇制成每lml含O. 5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B )試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5一，分別點(diǎn) 于同一硅膠G薄層板上，以體積比為10:3的環(huán)己垸-乙酸乙酯為展開齊L展開約10cm。取 出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸溶液，在105'C烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與 對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。 芒果苷和連翹苷的含量測(cè)定
1、 對(duì)照品溶液的制備精密稱取芒果苷、連翹苷適量，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成芒果苷濃度0.15mg/ml、連翹苷濃度為0.04mg/ml溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備取市售抗病毒口服液20ml，加水飽和正丁醇萃取2次，每次30ml, 棄去水層，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，定容至10ml刻度，作為供試品溶 液。
2、 以4.6mmx250mm、 5nm碳十八鍵合相硅膠柱為固定相填充色譜柱；首先精密吸取對(duì) 照品溶液iow與供試品溶液5pl，分別注入高效液相色譜儀，然后以體積比為30% : 70%的 乙腈和含0.1%磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的混合液體為流動(dòng)相洗脫，流速為 0.8ml/min，理論塔板數(shù)按芒果苷計(jì)算應(yīng)不低于5000，按連翹苷計(jì)算應(yīng)不低于6000;最后以波 長(zhǎng)為277nm的紫外光檢測(cè)洗脫物，并繪制對(duì)照品的色譜圖和供試品的色譜3、 結(jié)果對(duì)照品和供試品的色譜圖與例2相似，芒果苷的平均保留時(shí)間為9.3min，含 量為0.598mg/g,連翹苷的平均保留時(shí)間為26.6min，含量為0.118mg/g。
權(quán)利要求
1、抗病毒復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，該方法由以下步驟組成(1)對(duì)照品溶液的制備芒果苷和連翹苷混合用甲醇溶解制成含芒果苷0.08～0.15mg/ml和連翹苷0.04～0.08mg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備當(dāng)抗病毒復(fù)方制劑是固體制劑時(shí)，加20～30倍甲醇，超聲提取20～40min，過濾，濾渣加5～10倍水溶解，用10～15倍水飽和正丁醇萃取2～3次，合并正丁醇層，水浴蒸干，所得干物質(zhì)用50％甲醇溶解成每毫升溶液相當(dāng)于0.2～0.3g原制劑，搖勻；當(dāng)抗病毒復(fù)方制劑是液體制劑時(shí)，用10～15倍水飽和正丁醇萃取2～3次，合并正丁醇層，水浴蒸干，所得干物質(zhì)用50％甲醇溶解成每毫升溶液相當(dāng)于3～5g干物質(zhì)，搖勻；(2)以4.6mm×250mm、5μm碳十八鍵合相硅膠柱為固定相填充色譜柱；首先精密吸取對(duì)照品溶液10μl與供試品溶液5μl，分別注入高效液相色譜儀，然后以乙腈和含0.1％磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的混合液體為流動(dòng)相洗脫，流速為0.8～1.0ml/min，理論塔板數(shù)按芒果苷計(jì)算應(yīng)不低于5000，按連翹苷計(jì)算應(yīng)不低于6000；最后以波長(zhǎng)為277nm的紫外光檢測(cè)洗脫物，并繪制對(duì)照品的色譜圖和供試品的色譜圖；所述流動(dòng)相中，乙腈的含量為10～30％，含0.1％磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的含量為70～90％；(3)將供試品的色譜圖與對(duì)照品溶液的色譜圖比較與對(duì)照品色譜圖中第一個(gè)峰保留時(shí)間相同的特征峰即是芒果苷的特征峰，與對(duì)照品色譜圖中第二個(gè)峰保留時(shí)間相同的特征峰即是連翹苷的特征峰；并分別根據(jù)這個(gè)兩個(gè)峰的峰面積按外標(biāo)法計(jì)算芒果苷和連翹苷含量；上述步驟中各種液體的百分比含量均為體積百分比含量。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述對(duì)照品溶液中芒果苷的含量為 0.1172mg/ml和連翹苷的含量為0.0480mg/ml。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述供試品溶液的制備方法是取抗病毒固 體制劑加25倍甲醇溶解'超聲提取40min，過濾，濾渣加5倍水溶解，用10倍水飽和正丁 醇萃取4次，合并正丁醇層，水浴蒸干，所得干物質(zhì)用50%甲醇溶解成每毫升溶液相當(dāng)于0.2g 原制劑搖勻。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l、 2或3所述的方法，其特征在于所述流動(dòng)相中乙腈的含量為20%， 含0.1%磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的含量為80%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抗病毒復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，該方法是用高效液相色譜法對(duì)芒果苷和連翹苷同時(shí)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，其色譜條件為以4.6mm×250mm、5μm碳十八鍵合相硅膠柱為固定相，以乙腈和含0.1％磷酸的0.05mol/L的磷酸二氫鉀混合溶液為流動(dòng)相，流速為0.8～1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。本發(fā)明方法可以對(duì)抗病毒復(fù)方制劑中的芒果苷和連翹苷同時(shí)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，不僅有效地控制該方制劑的質(zhì)量，還大大減少了操作步驟、縮短了分析時(shí)間、節(jié)約了有機(jī)溶劑。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101285812SQ20081002665
公開日2008年10月15日 申請(qǐng)日期2008年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月6日
發(fā)明者林朝展, 祝晨蔯 申請(qǐng)人:廣州中醫(yī)藥大學(xué)