專利名稱：一種醫學組織切片染色方法
技術領域：
本發明涉及在醫學研究中通過對組織切片染色來觀察疾病的病理變化的醫學組織切片 染色方法。
技術背景在醫學研究中，通過組織切片來觀察疾病的病理變化極為重要。常用的HE (蘇木精一伊 紅〉染色法只能顯示藍色細胞核和紅色的細胞質，免疫組化染色也只能在一張切片上特異性 地顯示一種細胞成分。如要明確區分各種組織成分，則受到一定的限制。美國華盛頓大學病 理系的Movat (慕偉特)套染法，能在一張組織切片上用不同的五種顏色分別顯示膠原纖維、 蛋白聚糖、肌纖維、彈力纖維、纖維蛋白等，染色效果好，但是所用染料(藏紅花、阿爾辛 藍、酸性品紅、猩紅、蘇木精、苦味酸、碘等)成本太高， 一般實驗室很難承受，另外這種 方法的染色程序每次染色需8小時，時間太長。并且Movat套染法只限于應用在動脈粥樣硬 化的血管壁的石蠟切片染色。 發明內容本發明針對現有醫學組織切片染色方法存在的不足，提供一種成本低、染色耗時短、應 用范圍廣的醫學組織切片染色方法。本發明的醫學組織切片染色方法包括以下步驟(1) 如果不是冰凍切片，則取石蠟切片，用常規二甲苯脫蠟、系列乙醇水化；如果是冰 凍切片直接進入下一步；(2) 將飽和苦味酸75ml、 37—40M甲醛25ml和冰醋酸5ml混合均勻制成混合溶液，置 于微波爐中，在45'C—55r加熱45秒，將切片放入加熱后的溶液里10分鐘，取出后流水沖 洗10分鐘；(3) 將切片放入5%硫代硫酸鈉溶液中浸泡5分鐘，經蒸餾水沖2 — 3遍；(4) 將切片放入1%阿爾辛藍溶液內浸泡20分鐘，再用流水沖洗3分鐘；(5) 用95%乙醇90ml和氨水10ml配制成堿性乙醇，將堿性乙醇用微波爐在55。C一65'C 下預熱45秒，將切片放入預熱后的溶液里10分鐘，取出后用流水沖洗3分鐘；(6) 將2%蘇木素30ml、氯化鐵溶液40ml和碘溶液20ml混合均勻配制成蘇木素工作液， 在避光條件下將切片放入配制的工作液中60分鐘，用流水沖洗片刻，經蒸餾水洗3遍，每遍 3分鐘；其中2%蘇木素由蘇木素10g和95免乙醇500ml配制，氯化鐵溶液由氯化鐵12. 4g、 蒸餾水500tnl和濃鹽酸5ml配制，碘溶液由碘10g、碘化鉀20g和蒸餾水500ml配制；(7) 將藏紅花儲存液80ml和酸性品紅儲存液20ml混合均勻配制成藏紅花/酸性品紅工 作液，將切片放入藏紅花/酸性品紅工作液l分鐘，取出，經蒸餾水洗3遍，每次3分鐘； 其中藏紅花儲存液由猩紅lg、蒸餾水99. 5ml和濃冰醋酸0. 5ml配制，酸性品紅儲存液由酸 性品紅0. lg、蒸餾水99. 5ml和濃冰醋酸0. 5ml配制；(8) 將切片放入5%磷鎢酸溶液內浸泡5分鐘，直接轉入1%冰醋酸內浸泡5分鐘，再 經蒸餾水洗3遍，每次3分鐘；(9) 用95%乙醇脫水1分鐘，100%乙醇脫水2遍，每遍l分鐘；(10) 將切片放入乙醇藏紅花溶液內浸泡7分鐘；通過將藏紅花6g、無水乙醇100ml放 入密封瓶內，再放60'C烤箱48小時，冷卻后過濾制成乙醇藏紅花溶液；(11) 用100%乙醇脫水2遍，每遍l分鐘；(12) 用二甲苯透明中性樹膠封存切片。 本發明的醫學組織切片染色方法成本低。染色流程所用時間比原程序將縮短2—4小時(冰凍切片大約縮短4小時；石蠟切片大約縮短2.5小時)，使染色更加鮮艷。還增加了應用 范圍，能夠用于在動脈粥樣硬化的其它臟器的研究，如肝臟、腎臟等。也可用于動脈粥樣硬 化及其它疾病的病理學研究。
具體實施方式
按以下步驟進行醫學組織切片染色-(1) 如果不是冰凍切片，則取石蠟切片，用常規二甲苯脫蠟、系列乙醇水化；如果是冰 凍切片直接進入下一步；(2) 將飽和苦味酸75ml、 37—40X甲醛25ml和冰醋酸5ml混和均勻，置于微波爐中， 在45'C—55'C加熱45秒，將切片放入加熱后的溶液里10分鐘，取出后流水沖洗10分鐘；(3) 將切片放入5%硫代硫酸鈉溶液中浸泡5分鐘，經蒸餾水沖2—3遍；(4) 將切片放入1%阿爾辛藍溶液內浸泡20分鐘，再用流水沖洗3分鐘；(5) 用95W乙醇90ml和氨水10ml配制成堿性乙醇，將堿性乙醇用微波爐在55°C—65'C 下預熱45秒，將切片放入預熱后的溶液里10分鐘，取出后用流水沖洗3分鐘；(6) 將2%蘇木素30ml、氯化鐵溶液40ml和碘溶液20ml混合均勻配制成蘇木素工作液， 其中2%蘇木素由蘇木素10g和95%乙醇500 ml配制，氯化鐵溶液由氯化鐵12. 4g、蒸餾水 500ml和濃鹽酸5ml配制，碘溶液由碘10g、碘化鉀20g和蒸餾水500ml配制，在避光條件下 將切片放入配制的工作液中60分鐘，用流水沖洗片刻，經蒸餾水洗3遍，每遍3分鐘；(7) 配制藏紅花/酸性品紅工作液:藏紅花儲存液80ml(猩紅lg+蒸餾水99. 5ml+濃冰 醋酸0. 5ml)十酸性品紅儲存液20ml (酸性品紅0. lg+蒸餾水99. 5ml+濃冰醋酸0. 5ml)混勻， 將切片放入l分鐘，取出，經蒸餾水洗3遍，每次3分鐘；(8) 將切片放入5%磷鎢酸溶液內浸泡5分鐘，直接轉入1%冰醋酸內浸泡5分鐘，再 經蒸餾水洗3遍，每次3分鐘；(9) 用95%乙醇脫水1分鐘，100%乙醇脫水2遍，每遍l分鐘；(10) 將切片放入乙醇藏紅花溶液(國產藏紅花6g+無水乙醇100ral放入密封瓶內，放 6(TC烤箱48小時，冷卻后過濾即可)內浸泡7分鐘；(11) 用100%乙醇脫水2遍，每遍l分鐘；(12) 用二甲苯透明中性樹膠封存切片。 經上述過程染色后，最終得到的切片染色結果是 核及彈力纖維一黑色，基質和粘蛋白 一藍色， 肌肉 一紅色，膠原和網狀纖維一黃色， 纖維蛋白 —深紅色。
權利要求
1.一種醫學組織切片染色方法，其特征在于，包括以下步驟(1)如果不是冰凍切片，則取石蠟切片，用常規二甲苯脫蠟、系列乙醇水化；如果是冰凍切片直接進入下一步；(2)將飽和苦味酸75ml、37-40％甲醛25ml和冰醋酸5ml混合均勻制成混合溶液，置于微波爐中，在45℃--55℃加熱45秒，將切片放入加熱后的溶液里10分鐘，取出后流水沖洗10分鐘；(3)將切片放入5％硫代硫酸鈉溶液中浸泡5分鐘，經蒸餾水沖2-3遍；(4)將切片放入1％阿爾辛藍溶液內浸泡20分鐘，再用流水沖洗3分鐘；(5)用95％乙醇90ml和氨水10ml配制成堿性乙醇，將堿性乙醇用微波爐在55℃--65℃下預熱45秒，將切片放入預熱后的溶液里10分鐘，取出后用流水沖洗3分鐘；(6)將2％蘇木素30ml、氯化鐵溶液40ml和碘溶液20ml混合均勻配制成蘇木素工作液，在避光條件下將切片放入配制的工作液中60分鐘，用流水沖洗片刻，經蒸餾水洗3遍，每遍3分鐘；其中2％蘇木素由蘇木素10g和95％乙醇500ml配制，氯化鐵溶液由氯化鐵12.4g、蒸餾水500ml和濃鹽酸5ml配制，碘溶液由碘10g、碘化鉀20g和蒸餾水500ml配制；(7)將藏紅花儲存液80ml和酸性品紅儲存液20ml混合均勻配制成藏紅花/酸性品紅工作液，將切片放入藏紅花/酸性品紅工作液1分鐘，取出，經蒸餾水洗3遍，每次3分鐘；其中藏紅花儲存液由猩紅1g、蒸餾水99.5ml和濃冰醋酸0.5ml配制，酸性品紅儲存液由酸性品紅0.1g、蒸餾水99.5ml和濃冰醋酸0.5ml配制；(8)將切片放入5％磷鎢酸溶液內浸泡5分鐘，直接轉入1％冰醋酸內浸泡5分鐘，再經蒸餾水洗3遍，每次3分鐘；(9)用95％乙醇脫水1分鐘，100％乙醇脫水2遍，每遍1分鐘；(10)將切片放入乙醇藏紅花溶液內浸泡7分鐘；通過將藏紅花6g、無水乙醇100ml放入密封瓶內，再放60℃烤箱48小時，冷卻后過濾制成乙醇藏紅花溶液；(11)用100％乙醇脫水2遍，每遍1分鐘；(12)用二甲苯透明中性樹膠封存切片。
全文摘要
本發明提供了一種醫學組織切片染色方法，包括以下步驟石蠟切片脫蠟、水化；將切片放入加熱后的苦味酸、甲醛和冰醋酸溶液里，取出后流水沖洗；將切片放入5％硫代硫酸鈉溶液中浸泡、經蒸餾水沖洗；將切片放入阿爾辛藍溶液內浸泡、用流水沖洗；將切片放入預熱后的堿性乙醇溶液里浸泡、用流水沖洗；在避光條件下將切片放入蘇木素工作液中，用流水和蒸餾水洗；將切片放入藏紅花/酸性品紅工作液中、經蒸餾水洗；將切片放入磷鎢酸溶液內浸泡，再轉入冰醋酸內浸泡，經蒸餾水洗；用乙醇脫水；將切片放入乙醇藏紅花溶液內浸泡；再用乙醇脫水；封存。本發明的染色方法成本低，染色流程所用時間縮短，染色更加鮮艷，還增加了應用范圍。
文檔編號G01N1/30GK101251449SQ20081001509
公開日2008年8月27日 申請日期2008年4月10日 優先權日2008年4月10日
發明者軍 徐, 莉 李, 李瑞峰, 胡志敏, 胡維誠, 融 陳 申請人:山東大學