專利名稱：：子宮內膜增殖的生物標記的制作方法
技術領域：
：本發明涉及用于定性和/或定量測定樣品中子宮內膜增殖的方法。本發明還涉及用于定性和/或定量測定子宮內膜增殖的組合物或試劑盒和陣列。另外，本發明涉及用于診斷受試者中與子宮內膜增殖功能異常相關的紊亂或jHi傾向的方法。
背景技術：
：子宮內膜是子宮腔的粘膜。在卵巢激素的影響下，子宮內膜中發生了必要的解剖學和功能上的改變。因此，在生理條件下，子宮內膜在激素控制下變厚，并且貫穿于女性的生育周期，如果未發生懷孕會在月經期間脫落并在每個月經周期再生。直到月經周期的第五天，子宮內膜基質和腺體顯示出增殖，后者延伸。沿著腺體排列的細胞是立方形的，具有明確的界膜，而基質細胞是細長的紡錘形的，表明早期增殖階段。一周后，在第12天，腺體是非常大的并且此時是擴張的，表明晚期增殖階段。在此階段，血管也已突出并且毛細血管擴張。這些增殖改變是由于雌激素尤其是此時印巢所分泌的17-p-雌二醇的影響。排卵之后，黃體產生大量的孕酮，其引起腺體中分泌的改變以及基質細胞的膨脹。有充足的血供應且毛細血管變成竇狀的。直到28天周期結束，基質變得更加血管化和腫脹的，出現小量出血和血栓，而子宮內膜最終因激素支持的消失而脫落。子宮內膜的淺層與血和白血球一起脫落并排出，意味著月經。在一天或兩天內有裂傷的表面通過來自腺體基部的上皮細胞增殖而得以愈合。然而，失調的子宮內膜增殖可與幾種婦科疾病包括子宮內膜異位6(endometriosis)、子宮內膜異位(adenomyosis)、子宮內膜增生和婦考牛癌癥相關。到目前為止，對有關子宮內膜增殖的生理學和病理生理學機制所知甚少。而且，直到目前還未建立起對子宮內膜增殖相關疾病的有效治療和/或預防。對這些生理學和病理生理學機制以及對其中所涉及的基因和蛋白質功能的了解可為子宮內膜增殖的診斷和預后提供工具，并因而為子宮內膜增殖相關疾病的治療和/或預防提供工具。發明概述本發明提供了用于鑒定受試者中子宮內膜增殖的階段的方法。該目標是根據本發明通過提供定性和/或定量測定樣品中子宮內膜增殖的方法來完成的，所述方法包括測定所述樣品中受雌激素和/或選擇性雌激素受體調節劑(SERMs)調節的至少一種基因的表達水平和/或活性。令人驚奇地，鑒定出受雌激素和SERMs調節的幾種基因，其中所述基因的所述調節與雌激素和/或SERMs誘導子宮內膜增殖的不同潛力相關。優選實施方案詳述雌激素是對于正常的性發育和雌性生殖器官例如子宮內膜發揮功能所必需的類固醇激素。雌激素對于骨骼和心臟也具有重要的非生殖性影響。雌激素包含一組天然和合成物質。天然雌激素包括雌二醇(即n-p-雌二醇)、雌酮和雌三醇。特別是在17-p-雌二醇的影響下，子宮內膜發生增殖。17-p-雌二醇誘導其自身受體以及孕酮受體的合成。因此，子宮內膜在周期的前半部分(即在增殖階段)增殖，導致子宮內膜的一定厚度，其達到最大8到10mm。除了天然的雌激素，治療上有時將雌激素以綴合物的形式給予，例如乙炔雌二醇，舉例來說，綴合的雌激素或己烯雌酚。響應雌激素的體內組織稱為"雌激素敏感性"或"雌激素易感性"組織，并包括泌尿生殖道、心血管系統和骨骼系統的細胞。包含雌激素敏感性組織的細胞含有雌激素受體(ER)。ER可以為oc型或P型。雌激素進入細胞并結合至此類細胞的細胞質中的ER上，從而形成了雌激素-ER復合體。將結合至受體的分子例如雌激素稱為"配體"。一旦雌激素配體結合至ER，雌激素-ER復合體遷移至細胞核并結合至被稱為"雌激素反應元件"的細胞基因組內DNA的特定序列。此類雌激素反應元件位于細胞核內特定基因的啟動子中。雌激素-ER復合體與雌激素反應元件的結合引起特定基因轉錄的激活或抑制。特定基因轉錄的激活或抑制是由配體-受體復合體的形成引起的一種類型的分子和/或細胞反應。當此類反應發生時，受體據說已被激活。因此，雌激素-ER復合體作為轉錄因子調節這些基因的表達。當配體結合至受體且分子和/或細胞反應(例如，基因的轉錄調節)發生時，將此類配體稱為"激動劑"，將產生的反應稱作"激動作用"。除了雌激素和ER在細胞組織的正常發育和功能發揮中所起的作用外，雌激素和ER在某些人類疾病狀態例如增強的子宮內膜增殖、子宮內膜異位、婦科癌癥例如乳腺癌等等中也發揮重要作用。對由雌激素引起的結合至ER并阻止分子和/或細胞反應的物質給予了通用名稱"選擇性雌激素受體調節劑"或SERMs。SERMs也可被稱作"抗雌激素"。SERMs包含產生不同反應的ER配體。例如，一種特定的SERM可為拮抗劑。另一種特定的SERM可為部分激動劑。甚至另一特定的SERM可結合至ER并產生分子和/或細胞反應，該反應在強度上僅稍低于雌激素所產生的反應。此SERM將導致比部分激動劑所產生的反應更強的分子和/或細胞反應，但并不被稱為激動劑，因為該分子和/或細胞反應小于由激動劑樣雌激素所產生的反應。化學上，可將SERMs分為三類。第一類包含三苯乙烯衍生物，他莫昔芬---種抗癌藥是其中之一。作為三苯乙烯衍生物的其它物質有托瑞米芬、著洛西芬、(3-羥泰米芬)、艾多昔芬、TAT-59(4-羥泰米芬的磷酸化衍生物)和GW5638(他莫昔芬的羧酸衍生物)。SERMs的第二組包含其它非類固醇類化合物。此類包含EM-800、EM652(苯并吡喃)、雷洛昔芬、LY353381(SERM3)和LY357489。SERMs的第三類包含具有較好抑制雌激素產生的反應的能力的類固醇類化合物。ICE-182780(ICE)是此第三類的成員。包含每種類別的次感受器列表是不完全的，可能存在其它的感受器。根據本發明，已發現某些基因的表達水平和/或活性受雌激素和/或SERMs調節，與所述雌激素和SERMs誘導子宮內膜增殖的不同潛能相關。因此，測量所述某些基因的表達和/或活性的水平為定性和/或定量測定樣品種子宮內膜增殖提供了方法。優選地，雌激素是雌二醇，且SERMs是他莫昔芬和/或雷洛昔芬。在優選的實施方案中，本發明的方法，受雌激素和/或SERMs調節的基因是哺乳動物基因，優選地人類基因。預期將本發明的方法應用于人、獸醫和/或診斷藥物。優選地，受雌激素和/或SERMs調節的至少一種基因選自如下基因前梯度2同源物(光滑爪蟾(Xenopuslaevis))(基因ID10551);疏酸軟骨素蛋白聚糖2(多功能蛋白聚糖)(基因ID130(B);膠原，I型，al(基因ID1277);膠原，I型，a2(基因ID1278);膠原，III型，al(IV型愛-唐綜合征(Ehlers畫Danlossyndrome)，常染色體顯性)(基因ID1281);膠原，IV型，a1(基因ID1282);膠原，VI型，a3(基因ID1293);肌酸激酶，腦(基因ID24264);動力蛋白，細胞質，輕多肽l(基因ID8655);3-磷酸甘油醢脫氫酶(基因ID2597);熱激27kDa蛋白1(基因ID3315);小鼠肢芽和心臟基因的可能的直向同源物(基因ID81606);賴氨酰氧化酶樣l(基因ID4016);黑素瘤抗原，D家族，l(基因ID9500);RGS16的膜相互作用蛋白(基因ID51573);前膠原C內肽酶增強子(基因ID5118);前列腺素D2合酶21kDa(腦X基因ID5730);分泌型巻曲相關蛋白4(基因ID6424);絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑，進化枝H(熱激蛋白47)，成員1(膠原結合蛋白1)(基因ID871);原肌球蛋白1(a)(基因ID7168)和/或胰島素樣生長因子結合蛋白5(基因ID3488)和/或其組合。更優選地，至少一種基因是膠原，I型，al(基因ID1277);膠原，I型，a2(基因ID1278);膠原，III型，a1(IV型愛-唐綜合征，常染色體顯性)(基因ID1281);肌酸激酶，腦(基因ID24264)和/或前列腺素D2合酶21kDa(腦)(基因ID5730)。最優選地，至少一種基因是前列腺素D2合酶21kDa(腦)(基因ID5730)。上述基因的檢索號是通過參考公共基因數據庫NCBIEntrezGene數據庫(http〃www.ncbi.nhn.nih.gov/entrez/query.fcgidb=gene)進行標示的。在本發明優選的實施方案中，受雌激素和/或SERMs調節的至少一種基因的基因表達水平和/或活性是通過測量所述基因的轉錄水平來測定的。令人驚奇地，發現轉錄物的轉錄水平(見實施例1)是與雌激素和SERMs誘導子宮內膜增殖的不同雌激素潛能相關的。優選地，顯著性的測定可如實施例1中所述地來進行。顯著性的測定可通過充分數量例如至少500、優選地500至700個探針組(基因)的基因表達分析來進行。用于獲得轉錄物的組織優選地是垂體和子宮組織。測定基因轉錄水平的方法包括測定mRNA的水平。可通過本領域技術人員所公知的方法從樣品中分離RNA,例如Afo/""/arC7(m/wg，爿Lfl6oratofjMflWMfl/，第一巻，第7章，pp7.4to7.12，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork,第3版(2001)中所迷。在本發明優選的實施方案中，利用雜交反應進行轉錄水平的測定。通常，雜交反應包括將至少一種寡核苷酸或多核苷酸與轉錄產物mRNA相雜交。優選地，測定進一步包括延長和/或擴增反應。在本發明優選的實施方案中，擴增包括選自反轉錄酶PCR和/或實時PCR的至少一種4支術。根據本發明，寡核苷酸或多核苷酸優選地具有能與上述基因的互補轉錄物特異雜交的足夠長度。如此處所述，術語"寡核苷酸"或"多核苷酸"指的是單鏈核酸。通常，寡核苷酸或多核苷酸在長度上將是至少16至20個核苷酸，盡管在一些情況下至少20至25個核苷酸的較長探針將是期望的。可用一種或多種標記部分標記寡核苷酸或多核苦酸從而允許對雜交的探針/靶多核苷酸復合體的檢測。標記部分可包括通過光i普學、生物化學、光化學、生物電子學、免疫化學、電學、光學或化學方法進行檢測的組分。標記部分的例子包括但不限于，放射性同位素，例如"P、33P、35S，化學發光化合物、標記的結合蛋白質、重金屬原子、光鐠學標記物例如焚光標記物和染料、連接的酶、質譜法標簽和磁性標簽。根據本發明的另一優選實施方案，通過測量受雌激素和/或SERMs調節的至少一種基因的蛋白質產物的水平來測定基因表達水平。優選地，蛋白質產物選自如下具有相應檢索號的蛋白質產物前梯度2同源物(NP—006399)、硫酸軟骨素蛋白聚糖(多功能蛋白聚糖)(NP—004376)、a1I型膠原前蛋白原(NP—000079)、a2I型膠原(NP_000080)、a1III型膠原(NP—000081)、a3IV型膠原同工型1前體(NP_000082)、a4IV型膠原前體(NP—000083)、a1IV型膠原前蛋白原(NP—001836)、a3IV型膠原同工型1前體(NP—004360)、腦肌酸激酶(NP—001814)、細胞質動力蛋白輕多肽(NP—003737)、3-磷酸甘油醛脫氫酶(NP_002037)、甘氨酰-tRNA合成酶(NP—002038)、生長阻滯特異1(NP—002039)、熱激蛋白27kDa蛋白1(NP_001531)、假設的蛋白質DKFZp566J091(NP—112177)、賴氨酰氧化酶樣1(NP—005567)、黑素瘤抗原家族D，1同工型b(NP—008917)、RGS16的膜相互作用蛋白(NP一057725)、前膠原C內肽酶增強子(NP—002584)、前列腺素D2合酶21kDa(NP_000945)、分泌型巻曲相關蛋白4(NP—003005)、絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑，進化枝HI,成員1前體(NP—001226)、原肌球蛋白(a)(NP—000357)和/或胰島素樣生長因子結合蛋白5(NPJ)005卯)。更優選地，蛋白質產物是all型膠原前蛋白原(NP—000079)、a21型膠原(NP_000080)、a1III型膠原(NP_000081)、腦肌酸激酶(NP—001814)、和/或前列腺素D2合酶21kDa(NP_000945)。ii最優選地，蛋白質產物是前列腺素D2合酶21kDa(NP—000945)。所有上述蛋白質選自有關蛋白序列的公共可用數據庫NCBIEntrez蛋白質數據庫(11"口^^￥1^^￥.11(;1^.111111.11111.80￥/611汁7/9116^.&經1(^=protein)。優選地，蛋白質產物是通過酶結合、免疫學和/或物理學方法測定的，其可適用于蛋白質測定例如免疫測定或質鐠法。可通過探針對至少一種蛋白質或其片段例如催化結構域的表達進行檢測，所述探針經可檢測標記或隨后可經標記。通常，探針可為能夠識別所表達蛋白質的抗體、抗體衍生物或抗體片段。如此處所用的，術語"抗體"包括但不限于多克隆抗體、單克隆抗體、人源化或嵌合抗體和生物學功能抗體片段，其為足以用于抗體片段結合蛋白質或其片段的那些片段。為生產針對由一種公開的基因編碼的蛋白質或針對該蛋白質片段的抗體，可通過利用所述多肽或其部分注射來免疫多種宿主動物。所述動物可包括但不限于兔子、小鼠和大鼠等等。多種佐劑可用于增強免疫反應，依賴于宿主種類，包括但不限于弗氏佐劑(完全的和不完全的)、礦物凝膠例如氫氧化鋁、表面活性物質例如溶血卵磷脂、普流羅尼多元醇、聚陰離子、肽、油乳劑、鑰孔血藍蛋白、二硝基苯酚和潛在可用的人佐劑例如BCG(6"7/eCfl/"e"層Cwe"/,Vi)和ConVie6acteW"附pflrv"/w。多克隆抗體是抗體分子的異質性群體，所述抗體分子來自于經抗原例如目標產物或其抗原功能性衍生物所免疫的動物的血清。為生產多克隆抗體，可通過利用所編碼的蛋白質或其部分注射來免疫例如上述的那些宿主動物，該注射補充有同樣如上所述的佐劑。單克隆抗體(mABs)為針對特定抗原的抗體的同質性群體，可通過提供用于通過培養的連續細胞系來生產抗體分子的任何技術來完成。這些技術包括但不限于Kohler和Milstein的雜交瘤技術(Nature，Vol.256，pp.495-497(1975)和美國申請號4，376，110)、人B細胞雜交瘤技術(Kosbor等人，ImmunologyToday,Vol.4，p.72(1983);Cole等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA，Vol.80，pp.2026-2030(1983))、以及EBV雜交瘤技術(Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss，Inc.pp.77-96(1985))。此類抗體可為任何免疫球蛋白種類，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD及其任何亞類。本發明的產生mAb的雜交瘤可在體外或體內培養。在體內高效價mAbs的生產使其成為目前優選的生產方法。此外，可使用開發用于生產"嵌合抗體"的技術(Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,Vol.81，pp.6851-6855(1984);Neubergeretal.，Nature,Vol.312，pp.604-608(1984);Takeda等人，Nature,Vol.314，pp.452-454(1985))，該技術通過將來自具有合適抗原特異性的小鼠抗體分子的基因與來自具有合適生物活性的人抗體分子的基因剪接在一起來實現。嵌合抗體是其中不同部分來源于不同動物種類的分子，例如具有來自鼠mAb的可變或高變區和人免疫球蛋白恒定區的那些分子。備選地，所述用于生產單鏈抗體的技術(美國專利號4,946,778;Bird,Science,Vol.242，pp.423-426(1988);Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，Vol.85，pp.5879-5883(1988);和Ward等人，Nature,Vol.334，pp.544-546(1989))可適用于生產差異表達的基因單鏈抗體。單鏈抗體可通過經氨基酸橋連接Fv區的重鏈和輕鏈片段從而獲得單鏈多肽來形成。最優選地，用于生產"人源化抗體，，的技術可適用于生產針對蛋白質、其片段或衍生物的抗體。此類技術在美國專利號5，932，448、5，693，762、5,693,761、5.585,089、5，530，101、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5，789，650、5，661，016和5,770,429中公開。識別特定表位的抗體片段可通過已知技術產生。例如，此類片段包括但不限于，可通過抗體分子的胃蛋白酶消化產生的F(ab')2片段、和可通過還原F(ab')2片段的二硫鍵而產生的Fab片段。備選地，可構建Fab表達文庫(Huse等人，Science,Vol.246，pp.1275-1281(1989))來促使對具有目的特異性的單克隆Fab片段的快速和容易的鑒定。然后可利用上述抗體、抗體衍生物或抗體片段通過免疫測定方法來測定生物樣品中表達的蛋白質(片段)的水平。此類免疫測定方法包括但不限于，蛋白質印跡、熒光激活細胞分選術(FACS)、免疫組織化學、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、酶聯免疫斑點測定(ELISPOT)、斑點印跡、竟爭性和非竟爭性蛋白質結合測定、和其它通常使用及在科學和專利文獻中廣泛描述的方法，以及許多商業上使用的方法。為檢測簡便，特別優選的是存在多種變型的夾層ELISA，有意將所有變型均包括于本發明中。例如，在典型的向前測定中，將未標記的抗體、抗體衍生物或抗體片段固定于固體基質上并將待測樣品與結合的分子相接觸，并溫育一段足以允許形成抗體-抗原二元復合體的時間。此時，然后將標記有能夠誘導可檢測信號的分子的第二抗體、抗體衍生物或抗體片段加入并溫育，允許足以形成抗體-抗原-標記抗體的三元復合體的時間。洗滌除去任何未反應物質，并通過觀察信號來測定抗原的存在或可通過與含有已知量抗原的對照樣品相比較來定量抗原。向前測定的變型包括同時測定，其中將樣品和抗體同時添加至結合的抗體中，或者反向測定，其中首先組合標記的抗體和待測樣品、溫育并添加至未標記的表面結合的抗體中。這些技術對本領域技術人員而言是公知的，且較小變型的可能性將是顯而易見的。如此處所述，"夾層測定"意在包括基礎的雙位點技術的所有變型。在此類測定中用于標記抗體、抗體片段或衍生物的最普遍使用的報告分子是含有酶、熒光團或放射性核素的分子。在酶免疫測定(EIA)的情況中，通常通過戊二醛或高碘酸將酶連接至第二抗體。然而，如可容易地認識到，存在多種不同的連接技術，他們對于本領域技術人員而言是公知的。常用的酶包括辣根過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、P-半乳糖苷酶和堿性磷酸酶等等。通常選擇用于特定酶的底物來在相應酶水解下產生可檢測的顏色變化。例如，對硝基苯磷酸適合于與堿性磷酸酶綴合物使用；對于過氧化物酶綴合物，1，2-苯二胺或甲苯胺是常用的。還可能使用產生熒光產物的熒光底物，而不是上面所指出的顯色底物。然后將含有合適底物的溶液加入三元復合體中。底物與連接至第二抗體上的酶反應，發出定性可見的信號，該信號進一步可定量，通常用分光光度計測量，從而給出對蛋白或其片段的量的評估。備選地，熒光化合物例如熒光素和羅丹明可化學偶聯至抗體，而不改變其結合能力。當受到具有特定波長的光照激發時，熒光染料標記的抗體吸收光能，誘導分子的應激狀態，隨后是具有特征性的較長波長的光發射。發射顯示為特征性的顏色，利用光學顯微鏡可在視覺上檢測。免疫熒光和EIA技術都是本領域很完善建立的并且對于本方法是特別優選的。然而，也可使用其它報告分子，例如放射性同位素、化學發光或生物發光分子。如何改變步驟來適于所需應用對本領域技術人員而言是顯而易見的。優選地，根據本發明用于本方法的樣品是體液或組織樣品。優選地，體液是血液、血漿、尿液和/或血清。本發明的另一方面涉及用于定性和/或定量測定樣品中子宮內膜增殖的組合物或試劑盒，其包含用于測定受雌激素和/或SERMs調節的至少一種基因的基因表達水平和/或活性的試劑。優選地，受雌激素和/或SERMs調節的至少一種基因的基因表達和/或活性選自如上所述的基因。在本發明優選的實施方案中，組合物或試劑盒包含用于測定受雌激素和/或SERMs調節的至少一種基因的轉錄水平的試劑。優選地，用于測定選地，雜交探針和引物能夠結合至上述基因的轉錄物上。本發明另一優選的實施方案包含用于定性和/或定量測定樣品中子宮內膜增殖的組合物或試劑盒，其包含用于測定如上所述的至少一種基因編碼的蛋白質產物的水平。優選地，組合物或試劑盒包含用于酶、結合、生理學和/或免疫學測定以便測定如上定義的至少一種基因編碼的蛋白質產物水平的組合物或試劑盒。更優選地，組合物或試劑盒包含能夠結合由上述至少一種基因編碼的至少一種蛋白質產物的至少一種抗體、抗體衍生物或抗體片段。優選地，所述組合物或試劑盒包含如上所詳細描述的單克隆抗體。在另一優選的實施方案中，提供了組合物或試劑盒，其進一步包含用于收集生物樣品的裝置。更優選地，本發明的組合物或試劑盒進一步包含用于收集受試者的生物樣品的裝置，另外還可包含試劑盒的使用說明書以及對所測定的基因表達水平和/或活性及蛋白質產物水平的解釋。本發明的另一方面涉及用于定性和/或定量測定樣品中子宮內膜增殖的陣列，其包含載體和用于測定所述樣品中受雌激素和/或SERMs調節的15至少一種基因的表達水平和/或活性和/或轉錄水平的探針。陣列是檢測從多種基因所獲得的mRNA轉錄物水平的特別有用的方法，其涉及標記的mRNA與寡核苷酸或多核苷酸的有序陣列的雜交。通常將該雜交方法中所用的寡核苷酸或多核苷酸結合至固相支持體上。固相支持體的例子包括但不限于膜、濾器、載玻片、紙、尼龍、晶片、纖維、磁性或非磁性層、凝膠、管、聚合物、聚氯乙烯盤，等等。寡核苷酸或多核苷酸可直接或非直接、共價或非共價結合的任何固體表面均可使用。用于如Affymetrix公司的手冊中所述的。此類方法允許同時檢測多種基因的轉錄水平，從而產生基因表達圖i瞽或模式。另外，陣列是測定如上所迷的基因中至少一種多態性的存在的優選方法。此類陣列優選地包含具有固定其上的至少一種探針的栽體，所述探針用于測定受雌激素和/或SERMs調節的基因的至少一種多態性的存在。優選地，陣列載體，例如平面載體或微通道裝置，具有固定其上的多種不同探針，所述探針定位于栽體的不同區域，這些區域經設計以便它們可結合核酸分子例如RNA分子或DNA分子、擴增產物、引物延長產物等等，所述核酸分子含有這樣的序列，其中待測多態性位于所述序列中。因而，通過檢測核酸樣品分子對固定于載體上的探針的位點特異性結合事件來鑒定所分析的多態性可得以完成。本發明的另一方面涉及用于診斷受試者中與子宮內膜增殖相關的紊亂和/或狀況或其傾向的方法，其包括測定所述樣品中如上所述至少一種基因的表達水平和/或活性，其中實質上偏離于健康受試者的參考值的表達水平和/或活性表明子宮內膜增殖的功能異常或其傾向。術語"紊亂"定義為哺乳動物、優選人的病理狀態，術語"狀況，，定義為哺乳動物、優選人的非病理狀態。在本發明的上下文中，與子宮內膜增殖相關的狀況是例如懷孕或排卵，然而與子宮內膜增殖相關的紊亂是例如子宮內膜異位或子宮內膜炎。優選地，用于診斷根椐本發明的紊亂的方法與子宮內膜增殖的功能異常相關。本發明首次公開了具有子宮內膜增殖功能異常或其傾向的受試者中差異表達的基因。可將來自從受試者獲得的生物樣品的基因表達圖語與來自從未受子宮內膜增殖功能異常或其傾向影響的受試者或受試者群體獲得的樣品的基因表達圖譜進行比較。從而可確定受試者是否受到子宮內膜增殖功能異常的影響或處于受影響的危險中。優選地，受試者是哺乳動物，更優選地是人。在優選的實施方案中，通過檢測至少一種基因的轉錄水平和/或蛋白質產物的水平來測定基因表達水平和/或活性。如果在體液中可檢測的話，上述基因所編碼的蛋白質可用作子宮內膜增殖的生物標記。優選地，與子宮內膜增殖相關的紊亂和/或狀況或其傾向選自子宮內膜萎縮、發育不良的子宮內膜閉經、子宮內膜炎、增強的子宮內膜增殖、子宮內膜異位、紊亂的月經周期、懷孕、排卵、不孕、子宮內膜增生、子宮內膜息肉和/或婦科腫瘤。子宮內膜萎縮是其中子宮內膜阻止正常發育的一種紊亂。子宮內膜萎縮的一般原因是長期使用孕激素治療，引起了生物體中雌激素的強烈耗竭。由于子宮發育的障礙，子宮內膜會發育不全。此外，月經異常例如閉經與子宮內膜增殖功能異常相關。將閉經定義為在很多種情況下的無月經。在生理條件下，閉經發生在生命的四個不同階段初潮的早期、懷孕期間、哺乳期間和絕經之后。在病理狀況下，由于例如子宮內膜萎縮或發育不全的子宮內膜的原因而發生了閉經。然后，與月經周期相關的狀況例如懷孕和排卵是與子宮內膜增殖相關的。與子宮內膜增殖功能異常相關的另一紊亂是不育，例如由于子宮內膜異位或子宮內膜炎引起，下面對其做進一步解釋。根據本發明與子宮內膜增殖功能異常相關的另一重要疾病是子宮內膜異位。子宮內膜異位是女性中的第二常見疾病，將其定義為在子宮外出現了子宮內膜細胞。子宮內膜異位影響大約1/5的育齡婦女，以及多達l/2的有生育力問題的婦女。在正常情況下，子宮內膜僅發現于子宮。在子宮內膜異位中，子宮外部發現具有類似子宮內膜的組織學外觀的組織，例如在子宮外部、在腸上或甚至在胰腺或肺中。盡管這些子宮內膜異位病灶位于子宮外部，它們在月經期間也會出血，因此它們受女性周期的激素影響。因為子宮內膜異位病灶，如子宮內膜，在周期過程中經歷體積變化，所以這些變化可取決于位置而引起疼痛。而且，身體對子宮內膜異位細胞和炎癥反應起反應，其再次引起疼痛。此外，炎癥導致卵巢和輸印管區域的粘連，并因此導致受影響婦女的所謂機械性不育。顯然，然而，在子宮內膜異位中，也釋放信使(例如細胞因子、前列腺素類)，其甚至在不存在粘連的情況下可降低受影響婦女的生育力。根據其病理生物學特性，可將子宮內膜異位細胞分類為處于正常細胞和胂瘤細胞之間一方面它們未顯示出腫瘤行為，然而另一方面，像轉移性腫瘤細胞一樣，它們能夠移動穿過生物中的器官邊界并能生長到其它器官中，即它們顯示出侵襲行為。因此，文獻中將子宮內膜異位細胞定義為"良性腫瘤細胞"，盡管直到現在在此類型細胞中還未發現原癌基因中的腫瘤特異性突變。與子宮內膜增殖功能異常相關的另一紊亂或其傾向是子宮內膜炎。將該紊亂定義為子宮內膜的急性炎癥，其可在分娩或流產后響應于感染或響應于避孕器具的插入而發生或者作為淋病感染的一部分。根據本發明的另一相關紊亂是子宮內膜增生，將其定義為增強的子宮內膜，尤其是腺上皮的增殖。將該紊亂細分為i至ni級(非典型增生)。首先，ni級是子宮內膜癌的前癌狀況。子宮內膜增生是在缺乏孕激素("非對抗性雌激素")情況下雌激素的延長影響下發生的，主要是在更年期和絕經后期。此外，子宮內膜息肉主要發生在所有女性的10%中的更年期。大多息肉伴隨著子宮內膜基底的局限性增生而生長。在患有子宮內膜息肉的病人中，肌瘤的發生高于正常群體。這表明了子宮中普遍的增殖活性。僅在低于1%的病例中有發現于子宮內膜息肉中的癌。在子宮內膜息肉中，可發現來自子宮的不規則或進行性出血。此外，幾種婦科腫瘤與子宮內膜增殖功能異常相關，其選自子宮內膜癌、乳腺癌、卵巢癌、外陰癌和/或陰道癌。子宮內膜癌是最常見的婦科癌癥之一。其通常發現于絕經后的婦女中(75%),55至65的年齡之間最頻繁，且大多數(60%)在該范圍的后半部分。腫瘤的大多數(60。/。)是純腺癌。根據其腺體分化程度可將其分為三組。通常，此癌從子宮腔擴散緩慢，可能是因為子宮內膜缺乏淋巴系統。在晚期病例中出現遠端轉移瘤。肺部沉積是最普遍的。此癌的實際原因是未知的。爭論已集中圍繞于該腫瘤和雌激素之間的確定關聯。已經報道了單獨給予雌激素作為絕經后激素替代療法的女性中以及那些發生了卵巢的雌激素分泌型腫瘤的病人中增加的發病率。雌激素在子宮內膜癌的病原學中的中心位置得到了下述事實的加強，在激素替代療法中向雌激素中添加孕激素顯示出消除了子宮內膜癌的增加的發病率。本發明的另一方面涉及用于篩選與子宮內膜增殖功能異常相關的紊亂或其傾向的調節劑的方法，其包括在候選試劑的存在下測定細胞樣品中如上所述至少一種基因的表達水平和/或活性，將檢測所述候選試劑對子宮內膜增殖的影響，與不存在所述候選試劑時的所述表達水平和/或活性相比較。此類方法包括體內或基于細胞和/或無細胞測定，用來鑒定能夠干擾上述受雌激素和/或SERMs調節的至少一種基因的表達和/或活性的化合物。本發明還涉及如上所述至少一種基因和/或蛋白質產物作為藥物開發把標的用途，所述藥物對與子宮內膜增殖相關的紊亂和/或狀況是有活性的。藥物尋靶是針對化合物向身體特定組織的遞送的策略。特定靶標的藥物能力是通過化合物例如小分子藥物或抗體能夠達到靶標的程度、或通過化合物能夠實際達到靶標的效率來定義的。多種參數影響特定靶標的藥物能力，這些參數包括細胞定位、抗藥性的發展、轉運機制例如輸出泵、副作用、毒性及其它。將受體、蛋白質、酶、DNA、RNA和核糖體耙標考慮作為治療干預的把標。依據本發明，受雌激素和/或選擇性雌激素受體調節劑(SERMs)調節的基因、所述基因的轉錄物及其蛋白質產物作為靼標是特別有用的。通過利用所述基因、轉錄物和/或蛋白質產物作為用作藥物耙標的標記，可能發現對子宮內膜增殖相關紊亂和/或狀況新的和更好的療法。根據本發明，藥物組合物優選含有與一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑和/或添加劑相組合的活性成分。該組合物可單獨或與至少一種其它試劑例如穩定性化合物組合施用，其可在任何無菌、生物相容的藥物栽體中施用，所述載體包括但不限于鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖和水。該組合物可單獨或與其它試劑、藥物或激素組合施用于病人，其中至少一種基因的水平和/或至少一種蛋白質產物的水平實質上偏離健康受試者的參考值的，這表明子宮內膜增殖的功能異常或其傾向。藥物組合物可通過任意數量的途徑來施用。藥物組合物可通過任意數量的途徑來施用，包括但不限于口服的、舌下的、靜脈內的、肌內的、關節內的、動樂K內的、髓內的、鞘內的、心室內的、目艮內的、鞘內的、大腦內的、顱內的、呼吸的、氣管內的、鼻咽的、經皮的、真皮內的、皮下的、腹膜內的、鼻內的、經腸的、局部的、或經直腸的方式，灌注或植入。優選地，所述施用途徑是口服的。當施用時，將本發明的藥物組合物以藥學上可接受的制劑形式施用。如此處所用的術語"藥學上可接受的載體"指一種或多種相容的固體或液體填充劑、稀釋劑或包皎物質，其適用于對哺乳動物包括人類施用。術語"載體"表示天然或合成的有機或無機成分，活性成分與其相結合來方便應用。術語"藥學上可接受的，，意味著非毒性材料，其不干擾活性成分的生物學活性的有效性。此類制劑可常規地含有藥學上可接受濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、相容性載體、補充的免疫增效劑例如佐劑和細胞因子以及任選地其它治療劑例如化療劑。當用于藥物中時，鹽應當是藥學上可接受的，但非藥學上可接受的鹽可方便地用于制備其藥學上可接受的鹽，并不排除于本發明的范圍之外。藥物組合物可含有合適的緩沖劑，包括乙酸鹽、檸檬酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽。藥物組合物還可任選地含有合適的防腐劑，例如苯扎氯銨、氯代丁醇、對羥基苯曱酸酯類和硫柳汞。藥物組合物可方便地存在于單位劑量形式中，并可通過任意一種藥學領域中眾所周知的方法來制備。所有方法均包括^f吏活性劑與構成一種或多種輔助成分的載體相結合的步驟。通常，通過使活性化合物與液體載體、細分固體載體、或兩者均一并緊密地相結合，然后如果需要的話，使產品成型來制備組合物。適合口服施用的組合物可呈現為離散單位，例如膠嚢劑、片劑、錠劑，每種含有預定量的活性化合物。其它組合物包括水性液體或非水性液體形式的混懸液，例如糖漿劑、酏劑或乳劑。適合腸胃外給藥的組合物方便地包含多肽或編碼所述多肽的核酸的無菌水性或非水性制劑，其優選地與接受者的血液等滲。該制劑可根據已知方法利用合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑來配制。無菌可注射制劑還可為在非毒性的腸胃外可接受稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如，1，3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的載體和溶劑有水、林格液、和等滲氯化鈉溶液。另外，通常將無菌的非揮發性油用作溶劑或懸浮介質。因此，可使用任何溫和的非揮發松、'由，包括合成的甘油單酯或二酯。另夕卜，脂肪酸例如油酸可用于注射物的制備中。適合于口服、皮下、靜脈內、肌內等施用的載體制劑可在Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCo"Easton，PA中找到。本發明的另一方面包含如上所述的至少一種基因的調節劑的用途，用于制造預防和/或治療與子宮內膜增殖相關的紊亂和/或狀況的藥物。優選地，藥物組合物的調節劑是雌激素和/或選擇性雌激素受體調節劑(SERM)、其拮抗劑和/或激動劑，例如抗體或抗體片段、siRNA(小干擾RNA)、miRNA(孩iRNA)、反義分子和/或核酶。蛋白質或激素的激動劑，例如雌激素或SERM，是例如酶、輔酶、膜21受體等的分子，其增強了各個蛋白質或激素的活性。在一個方面，特異于本發明的蛋白質產物和同源性蛋白質產物的抗體可直接用作調節劑，例如拮抗劑或激動劑，或間接作為用于將藥劑帶向表達該蛋白質的細胞或組織的靶向或遞送機理。抗體可利用本領域公知的方法來產生。此類抗體可包括但不限于多克隆的、單克隆的、嵌合的單鏈、Fab片段和通過Fab表達文庫產生的片段。中和抗體(即那些抑制二聚體形成的抗體)是對于治療用途特別優選的。為生產抗體，多種宿主包括山羊、兔、大鼠、小鼠、人等等可通過利用具有免疫原特性的蛋白質或其片段或寡肽注射進行免疫。取決于宿主種類，可使用多種佐劑來增強免疫反應。優選用于誘導針對蛋白質產物的抗體的肽、片段或寡肽具有由至少5個氨基酸且更優選地至少10個氨基酸組成的氨基^列。針對蛋白質產物的單克隆抗體可利用通過培養的連續細胞系提供生產抗體分子的任何技術來制備。這些包括但不限于雜交瘤技術、人B細胞雜交瘤技術、和EBV雜交瘤技術(K6hler，G.等人(1975)Nature256:495-497;Kozbor，D.等人(1985)J.Immunol.Methods81:31-42;Cote,R.J.等人Proc.Natl.Acad.Sci.80:2026-2030;Cole,S.P.等人(1984)Mol.CellBiol.62:109-120)。另外，可使用開發的用于生產"嵌合抗體"的技術，其將小鼠抗體基(Morrison,S.L.等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.81:6851-6855;Neuberger,M.S.等人(1984)Nature312:604-608;Takeda，S.等人(198S)Nature314:452-454)。備選地，利用本領域已知的方法，可改造所迷用于生產單鏈抗體的技術，來生產特異于本發明的蛋白質產物和同源性蛋白質產物的單鏈抗體。具有相關特異性但具有不同個體基因型組成的抗體，可通過來自隨機組合免疫球蛋白文庫的鏈改組來產生(Burton,D.R.(1991)Proc,Natl.Acad.Sci.88:11120-11123)。還可通過i秀導淋巴細胞群體在體內產生或通過篩選重組免疫球蛋白文庫或如文獻中所公開的系列高度特異的結合試劑來生產抗體(Orlandi，R.等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.86:3833-3837;Winter,G.等人(1991)Nature349:293-299)。還可產生含有蛋白質產物的特異結合位點的抗體片段。例如，此類片段包括但不限于可通過抗體分子的胃蛋白酶消化而產生的F(ab')2片段，和Fab片段，所述Fab片段可通過還原F(ab')2片段的二硫鍵來產生。備選地，可構建Fab表達文庫來促使具有目的特異性的單克隆Fab片段的快速和容易的鑒定(Huse，W.D.等人(1989)Science254:1275-1281)。可使用多種免疫測定進行篩選來鑒定具有目的特異性的抗體。利用具有確定特異性的多克隆或單克隆抗體的用于竟爭性結合和免疫放射測定的多種方案是本領域中公知的。此類免疫測定通常包括測量蛋白質和其特異性抗體之間的復合體形成。利用與兩個非干擾性蛋白質表位相反應的單克隆抗體的基于雙位點單克隆的免疫測定是優選的，但也可使用竟爭性結合測定(Maddox,同上)。在本發明的另一實施方案中，可將多核苷酸或其片段或核酸調節劑分子例如反義分子、適體、siRNA分子、miRNA分子或核酶用于治療目的。在一方面，適體，即能夠結合至本發明的蛋白質產物并調節其活性的核酸分子，可通過包括使用組合核酸文庫的篩選和選擇步驟來產生。在另一方面，可將反義分子用于其中期望阻斷mRNA轉錄的情況中。特別地，可利用與編碼如上所述蛋白質產物和同源性蛋白質產物的多核苷酸互補的序列來轉化細胞。因此，可將反義分子用于調節蛋白質產物活性或實現基因功能的調節。此技術是目前本領域公知的，并且可從沿著編碼蛋白質產物的序列的編碼區或調控區的多個位置來^:計有義或反義寡聚體或更大的片段。可使用來自逆轉錄病毒、腺病毒、皰疹或痘苗病毒或來自多種細菌質粒的表達載體將核苷酸序列遞送至靶器官、組織或細胞群體。可使用本領域技術人員所^^知的方法構建重組栽體，其將表達與編碼本發明蛋白質和同源性蛋白質產物的基因的多核苷酸互補的反義分子。這些技術在Sambrook等人(同上)和Ausubel等人(同上)中有所描述。編碼本發明蛋白質產物和同源性蛋白質產物的基因可通過用表達載體轉化細胞或組織而關閉，所述表達載體表達高水平的編碼本發明蛋白質產物和同源性蛋白質產物或其片段的多核苷酸。此類構建體可用于將不可翻譯的有義或反義序列引入細胞中。甚至在不整合進DNA的情況下，此類載體仍可持續轉錄RNA分子直至它們被內源性核酸酶^C壞。利用非復制型載體，瞬時表達可持續一個月或更長，如果合適的復制元件是載體系統的一部分，瞬時表達則會更長。如上所述，基因表達的修飾可通過設計針對編碼上述蛋白質產物和同源性蛋白質產物的基因的調控區(即啟動子、增強子和內含子)的反義分子例如DNA、RNA或核酸類似物例如PNA來獲得。來自轉錄起始位點，例如在起始位點的-10至+10位之間的寡核苦酸是優選的。類似地，利用"三螺旋"堿基配對方法學可實現抑制。三螺旋配對是有用的，因為引起雙螺旋為結合聚合酶、轉錄因子或調節分子而充分打開的能力受到抑制。利用三螺旋DNA的新近治療itj艮已在文獻中有所描述(Gee，J.E.等人(1994)In;Huber,B.E.andB.I.Carr,MolecularandImmunologicApproaches,FuturaPublishingCo.,Mt.Kisco，N.Y.)。也可i殳計反義分子通過阻止轉錄物結合至核糖體而阻斷mRNA的翻譯。核酶——酶促RNA分子，也可用來催化RNA的特異切割。核酶作用的機制涉及核酶分子對互補的靶RNA的序列特異性雜交，隨后是內核分離。可使用的實例包括工程化的錘頭基序核酶分子，其可特異且有效地催化編碼本發明的蛋白質產物和同源性蛋白質產物的序列的內核分離。任何可能的RNA靶標內部的特異性核酶切割位點最初是通過掃描靶分子的核酶切割位點來鑒定的，所述核酶切割位點包括下列序列GUA、GUU和GUC。一旦得以鑒定，可對對應于含有切割位點的靶基因區域的15至20個核糖核苷酸的短RNA序列評估其二級結構特征，該特征可使得寡核苷酸不可操作。候選靶標的適用性還可利用核糖核酸酶保護試驗，通過測試與互補寡核苷酸的雜交的可及性來評估。核酸調節劑分子，例如，反義分子和核酶可通過本領域已知的用于合成核酸分子的任何方法來制備。這些包括用于化學合成寡核苷酸的技術，例如固相亞磷酰胺化學合成。備選地，RNA分子可通過DNA序列的體外和體內轉錄來產生。可將此類DNA序列摻入多種具有合適的RNA聚合酶啟動子的載體中，例如T7或SP6。備選地，可將組成型或可誘導地合成反義RNA的這些cDNA構建體引入細胞系、細胞或組織中。可修飾RNA分子來增強細胞內穩定性和半衰期。可能的修飾包括但不限于，在分子的5，和/或3，端增加側翼序列或在核堿基、糖和/或磷酸部分中的修飾，例如在分子的主鏈內部使用硫代磷酸酯或2，0-甲基而不是磷酸二酯酶鍵。此概念是PNAs的生產中固有的，并可通過包含非傳統堿基例如肌苷、queosine、和wybutosine以及乙酰基、甲基、硫代、和腺嘌呤、胞嗜啶、鳥噪呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶的類似修飾形式在所有這些分子中得以擴展，上述修飾形式不容易被內源性核酸內切酶所識另1j。將栽體引入細胞或組織的許多方法是可用和同樣適用于體內、體外和先體外后體內(exvivo)。對于先體外后體內治療，可將載體引入從病人取出的干細胞并進行克隆繁殖用于自體移植回同一病人中。通過轉染和通過脂質體注射的遞送可利用本領域中公知的方法來完成。可將上述的任何治療方法用于任何合適的受試者，包括，例如哺乳動物例如狗、貓、奶牛、馬、兔、猴和最優選地，人。實施例基因表達分析材料和方法動物將卵巢切除的(OVX)短尾猴(Macacafascicularis)用作雌激素缺乏的模型，這種短尾猴已被證實是預測雌激素和SERMs的人類臨床試驗結果的有用模型。該研究是按照動物健康規則(AnimalHealthregulation)，委員會管理號(CouncilDirectiveNo,)86/609/EEC關于與用于實驗或其它科學目的的動物保護相關的法律、規程或管理規定來進行的。在開始治療25前使動物適應治療設施至少14天。除了治療的最后一天動物被禁食外，每天在給藥之后的至少1小時動物隨意接受水和大約180g的OWM顆粒食物(DietexFrance,SDS，SaintGratien，France)。另外，每個動物每天接受兩種水果或蔬菜。在藥物治療之前的10周，對大約48月齡的性成熟雌性短尾猴(獲得自R.C.HartelustBV，Tilburg，荷蘭的食蟹猴)實施外科手術(卵巢切除或假手術)。外科手術步驟治療首日之前的10周在CIT(Evreux，France)通過標準的外科手術方案進行卵巢切除。利用甲苯蓉噪(Rompun⑧0.4mL/動物，BayerPharmaDivisionSant6Animale，Puteaux，France)和鹽酸氯胺酉同(Imalg6ne⑧0.6mL/kg，M6rial，Lyon，France)的組合肌內注射進行麻醉之后除去卵巢。除了去除卵巢之外，對假手術的動物進行相同的外科手術步驟。雌二醇測定在外科手術之后的大約2周測定每只動物中的雌二醇血清水平來確認卵巢切除的效果。在無抗凝血劑的管中收集未禁食動物的靜脈血樣品(大約1.5mL)并利用放射性免疫測定進行分析(Sorin，EcoleNationaleV6"rinairedeLyon,France)。此外，在開始藥物治療后的大約2至4周進行雌二醇測定來確定動物是否發生了異位卵巢組織生長；從該研究和后續分析中除去任何此類動物。治療方案將卵巢切除的和假手術的動物分成4組。使^f叚手術的和一組卵巢切除的動物僅接受載體，而使剩余組的卵巢切除的猴接受雌二醇(SigmaNo.E8875)或他莫昔芬(Tamofene,AventisPharma)或雷洛昔芬(Evista,LillyFranceSA)。將測試項目制備為載體中的混懸液并通過口服強飼法每天施用。在治療的最后一天，通過由肌內鹽酸氯胺酮和靜脈內硫噴妥鈉引起的深度麻醉來處死動物，隨后放血。垂體和子宮基因表達組織制備在藥物治療結束時測定垂體和子宮中的基因表達。切除所要分析的組織(垂體和子宮)，在液氮中迅速冷凍，并儲存于-80'C直至進行RNA提取。DNA微陣列分析通過酸性異石克氰酸胍-苯酚-氯仿萃取(Trizol;InvitrogenLifeTechnologies,SanDiego,CA，USA)來獲得總RNA，并根據廠商說明書在親和樹脂柱(RNeasy;Quiagen，Hilden，Germany)上純化。DNA微陣列實驗按照基因芯片系統廠商(Affymetrix,Inc.2002)的建議來進行。先前的微陣列研究已經證實了交叉種類DNA芯片分析的有效性，因此使用了含有22283個探針組的人類基因表達探針陣列HGU133A(AffymetrixInc.,SantaClara,CA，USA),所述探針組主要涉及經注釋的人類基因。利用MicroarrayAnalysisSuite5(MAS5)軟件(Affymetrix，Inc.)對所獲得的圖像文件(.dat文件)進行加工。獲得了含有關于信號強度(Signal)和明確的表達水平檢測(AbsoluteCall)數據的Tab-定界的文件。發現待差異表達的轉錄物通過參考Affymetrix探針組編號209173—at、221731—xat、202310—s一at、202403_s—at、201852一x一at、21S076一s—at、211161_s—at、211980at、201438—at、200884—at、200703_at、217398_x—at、213453_x—at、212581—x—at、201841—s—at、221011—s—at、203570_at、20卯14—at、202593_s—at、202465—at、211663—x—at、204051—s_at、207714—s—at、206116_s_at和/或211959—at指出。雌激素效能的定量雌激素得分軸(ScoreAxis)為定義代表藥物治療的雌激素效能的參考軸，選擇了兩種情況來代表極端——卵巢切除的動物(ovx組、雌激素缺失)和雌二醇治療的ovx(OVX-EE)組(最高的雌激素)。使用這兩組通過設置它們的相對雌激素效能分值分別為0%和100%來定量標記此軸的刻度。然后將來自假手術動物和來自經他莫昔芬或雷洛昔芬處理的動物的基因表達定位于此軸上來排列它們的雌激素效能。用于此分析的基因的選擇(探針組)是在數學和統計學標準的基礎上來選擇的，從而滿足雌激素調節的操作定義，另外基于生物功能的現有知識對基因進行分組。探針組A(n=544)是通過使用下列針對基因表達數據的過濾標準來定義的(1)在至少一種測試條件下給定探針的平均信號強度必需高于50;(2)當OVX情況與假手術相比較時必須具有1.5倍或更高的變化(上升或下降)；且(3)改變的表達才莫式必須已經被雌二醇治療逆轉(OVX-EE)。在利用基因功能的現有知識和將基因分類(信號轉導、運輸、細胞外基質、和生長因子)的基礎上，將探針組B(n=74)鑒定為組A的亞組。利用嚴格無偏的數學和統計學參數過濾數據來確定探針組C(n=225),其僅包括那些探針(1)在OVX和OVX-EE條件中的一種或兩種下具有高于50的中間信號強度，(2)在這些條件之間的表達顯示出1.5倍或更高的改變，且(3)顯示出P.05(利用t檢驗針對loglO轉換的強度值進行統計學顯著性分析)。將OVX和OVX-EE動物的loglO轉換的基因表達(GEP)數據的協方差矩陣進行主要成分分析(PCA)，其是一種先前使用的用來描述微陣列基因表達數據的統計學維度縮減方法。PCA算法計算所謂的"負荷量"和"分值，，。負荷量是變量(基因)的線性組合中的權重，其定義了坐標系的軸(PrincipalComponents,PCs)。分值代表了在相同坐標系中單個動物基于其GEP數據的坐標。然后將所有其它對數轉換的GEP數據用作此PCA模型的輸入并計算它們的分值。僅計算出一個PC值，并將針對此PC的所有樣品的分值用于后續計算。從所有分值中扣除OVX樣品分值的中位數。然后通過用OVX-EE動物分值的中位數除以所有分值并乘以100來衡量所有分值。此部分所述的計算是利用用于多變量分析的SIMCA軟件(版本10，Umetrics.，Umea，Sweden)和Excel2002(MicrosoftCorp.,RedmanWA,USA)來完成的。該表達圖謙研究證實了所分析的轉錄物的相應基因的特定影響，所述基因受到作為子宮內膜增殖調節劑的雌激素和/或SERMs的調節。因此，這些基因編碼的蛋白質可用作子宮內膜增殖的生物標記。下面表l中包括的候選物的選摔是基于科學標準、并基于基因表達的高水平(對于平均控制至少180)和通過雌激素乙炔雌二醇的至少平均2倍的調節。表l中的值表示任意單位，其反映了表2中所示的所測單個基因表達水平的基因平均表達水平，即存在的轉錄物的計算出的平均數量。表1灰色欄的標題中給出的倍數增加表明了所分析轉錄物的各個基因的基因表達變化，所述轉錄物由于乙炔雌二醇以及SERMs、他莫昔芬和雷洛昔芬的影響而受到調節。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表2測定的個體值選擇的生物標記(候選物)子宮SERMs<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>權利要求1、用于定性和/或定量測定樣品中子宮內膜增殖的方法，其包括測定所述樣品中受雌激素和/或選擇性雌激素受體調節劑(SERMs)調節的至少一種基因的表達水平和/或活性，其中所述至少一種基因選自如下基因組成的組前梯度2同源物(光滑爪蟾(Xenopuslaevis))(基因ID10551)；鈣粘蛋白11，2型；硫酸軟骨素蛋白聚糖2(多功能蛋白聚糖)(基因ID13003)；膠原，I型，α1(基因ID1277)；膠原，I型，α2(基因ID1278)；膠原，III型，α1(IV型愛-唐綜合征，常染色體顯性)(基因ID1281)；膠原，IV型，α1(基因ID1282)；膠原，VI型，α3(基因ID1293)；肌酸激酶，腦(基因ID24264)；動力蛋白，細胞質的，輕多肽1(基因ID8655)；3-磷酸甘油醛脫氫酶(基因ID2597)；熱激27kDa蛋白1(基因ID3315)；小鼠肢芽和心臟基因的可能的直向同源物(基因ID81606)；賴氨酰氧化酶樣1(基因ID4016)；黑素瘤抗原，D家族，1(基因ID9500)；RGS16的膜相互作用蛋白(基因ID51573)；前膠原C內肽酶增強子(基因ID5118)；前列腺素D2合酶21kDa(腦)(基因ID5730)；分泌型卷曲相關蛋白4(基因ID6424)；絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑，進化枝H(熱激蛋白47)，成員1(膠原結合蛋白1)(基因ID871)；原肌球蛋白1(α)(基因ID7168)和/或胰島素樣生長因子結合蛋白5(基因ID3488)和其組合。2、權利要求1的方法，其中所述基因是膠原，I型，al(基因ID1277);膠原，I型，a2(基因ID1278);膠原，III型，al(IV型愛-唐綜合征，常染色體顯性)(基因ID1281);肌酸激酶，腦(基因IDMM"和/或前列腺素D2合酶21kDa(腦)(基因ID5730)。3、權利要求2的方法，其中所述基因是前列腺素D2合酶21kDa(腦)(基因ID5730)。4、權利要求1至3的方法，其中通過測量轉錄物水平來測定基因表達水平和/或活性。5、權利要求1至4中任意一項的方法，其中所述測定包括雜交反應。6、權利要求4至5中任意一項的方法，其中所述測定進一步包括擴增和/或延長反應。7、權利要求6的方法，其中擴增包括選自反轉錄酶PCR和/或實時PCR的至少一種技術。8、權利要求1至3中任意一項的方法，其中基因表達水平是通過檢測選自下述的蛋白產物的水平來測定的前梯度2同源物(NP_006399)、硫酸軟骨素蛋白聚糖(多功能蛋白聚糖)(NP—004376)、all型膠原前蛋白原(NP—000079)、a2I型膠原(NP—000080)、a1III型膠原(NP_000081)、a3IV型膠原同工型1前體(NP_000082)、a4IV型膠原前體(NP—000083)、a1IV型膠原前蛋白原(NP_001836)a3IV型膠原同工型1前體(NP_004360)、腦肌酸激酶(NP—001814)、細胞質動力蛋白輕多肽(NP—003737)、3-磷酸甘油醛脫氫酶(NP—002037)、甘氨酰-tRNA合成酶(NP_002038)、生長阻滯特異1(NP_002039)、熱激蛋白27kDa蛋白1(NP_001531)、假設的蛋白質DKFZp566J091(NP_112177)、賴氨酰氧化酶樣1(NP—005567)、黑素瘤抗原家族D，1同工型b(NP—008917)、RGS16的膜相互作用蛋白(NP—057725)、前膠原C內肽酶增強子(NP—002584)、前列腺素D2合酶21kDa(NP—000945)、分泌型巻曲相關蛋白4(NP—003005)、絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑，進化枝HI，成員1前體(NP—001226)、原肌球蛋白1(a)(NP—000357)和/或胰島素樣生長因子結合蛋白5(NP—0005卯)。9、權利要求8的方法，其中蛋白質產物是a1I型膠原前蛋白原(NP_000079)、a2I型膠原(NP—000080)、a1HI型膠原(NP_000081)、腦肌酸激酶(NP—001814)和/或前列腺素D2合酶21kDa(NP_000945)。10、權利要求9的方法，其中蛋白質產物是前列腺素D2合酶21kDa(NP一000945)。11、權利要求8至10任一項的方法，其中通過酶的、結合、物理和/或免疫學方法來測定蛋白質產物水平。12、權利要求1至11中任意一項的方法，其中樣品是體液或組織樣品。13、權利要求12的方法，其中體液是血液、血漿、尿液和/或血清。14、用于定性和/或定量測定樣品中子宮內膜增殖的陣列，其包含載體和用于測定所述樣品中受雌激素和/或SERMs調節的至少一種基因的表達水平和/或活性和/或轉錄水平的探針，其中至少一種基因選自如權利要求1至3中任意一項所述的基因。15、用于診斷受試者中與子宮內膜增殖相關的紊亂和/或狀況或其傾向的方法，其包括測定所述樣品中如權利要求1至4中任意一項所述的至少一種基因的表達水平和/或活性，其中實質上偏離于健康受試者的參考值的表達水平和/或活性表明子宮內膜增殖的功能異常或其傾向。16、權利要求15的方法，其中所述受試者是哺乳動物。17、權利要求16的方法，其中所述哺乳動物是人。18、權利要求15至17中任意一項的方法，其中通過測量至少一種基因的轉錄水平和/或蛋白質產物水平來測定基因表達水平和/或活性。19、權利要求15至18中任意一項的方法，其中所述紊亂和/或狀況選自子宮內膜萎縮、發育不良的子宮內膜、閉經、子宮內膜炎、增強的子宮內膜增殖、子宮內膜異位、紊亂的月經周期、懷孕、不孕、子宮內膜增生、子宮內膜息肉、和/或婦科腫瘤。20、權利要求19的方法，其中婦科腫瘤選自子宮內膜癌、乳腺癌、卵巢癌、外陰癌和/或陰道癌。21、篩選與子宮內膜增殖相關的紊亂和/或狀況或其傾向的調節劑的方法，其包括在候選試劑存在下測定細胞樣品中如權利要求1至3中任意一項所述的至少一種基因的表達水平和/或活性，將檢測所述候選試劑對子宮內膜增殖的影響，與不存在所述候選試劑時的所述表達水平和/或活性相比較。22、權利要求1至3中任意一項所述的至少一種基因和/或如權利要求8至10中任意一項所述的至少一種蛋白質產物作為子宮內膜增殖的靶標和/或調節劑的用途。23、權利要求22的用途，用于生產對與子宮內膜增殖相關的紊亂和/或狀況有活性的活性劑。24、權利要求1至3中任意一項中所述的至少一種基因的調節劑的用途，用于生產預防和/或治療與子宮內膜增殖相關的紊亂和/或狀況的藥物。全文摘要本發明涉及定性和/或定量測定樣品中子宮內膜增殖的方法。本發明還涉及用于定性和/或定量測定子宮內膜增殖的組合物或試劑盒和陣列。此外，本發明涉及用于診斷受試者中與子宮內膜增殖的功能異常相關的紊亂或其傾向的方法。文檔編號G01N33/68GK101427139SQ200780014476公開日2009年5月6日申請日期2007年4月26日優先權日2006年4月28日發明者A·科迪爾,M·博巴迪拉,S-D·希布申請人:諾瓦提斯公司