專利名稱：一種hplc法分析分離米格列奈鈣中間體及其對映異構體的方法
技術領域：
本發明屬涉及一種高效液相色譜法，尤其是一種分析分離米格列奈鈣中間體 及其對映異構體的高效液相色譜法。
背景技術：
米格列奈鈣為一種降血糖藥，在其制備過程中的一種中間體的結構式為
.COOH
分子式為CuH^04，化學名為(S)-節基-l,4-丁二酸，該中間體的分子中含l個手 性碳原子，在通過定向合成目標化合物米格列奈鈣的過程中需要控制其對映異構 體的含量。
對于米格列奈鈣中間體的對映異構體雜質，在藥物合成過程當中是需要進行 質量控制的。含手性碳原子的對映異構體的分離一直是手性藥物合成和制劑過程 中質量控制的難點，實現米格列奈鈣中間體及其對應異構體的分離在米格列奈鈣 藥物的合成和制劑過程的質量控制方面具有現實意義。
發明內容
本發明的目的在于提供一種分析分離米格列奈鈣中間體及其對映異構體雜 質的高效液相色譜方法，從而實現米格列奈鈣中間體與其對映異構體雜質的分離 測定。
申請人發現，以環糊精類手性柱，以乙腈與四丁基氫氧化銨-磷酸/磷酸緩沖 液(pH值為6.5)的混合溶液為流動相，可以將米格列奈鈣中間體及其對映異構 體進行有效分離，從而可以準確控制米格列奈鈣的質量。本發明的方法能簡單、 快速、準確地分析分離米格列奈鈣中間體及其對映異構體雜質。
進一步地，選用CYCLOBOND I 2000 (astec 4.6醒x250mm， 5pm)環糊精 類手性柱，可以獲得更好的分析分離效果。CYCLOBOND I 2000 (astec4.6mmx250mm， 5pm)環糊精類手性柱是以p-環糊精為填料。
進一步地，本發明的離子對試劑選自陽離子對試劑，最優選四丁基氫氧化銨。
本發明的方法中的流動相選用體積比為10 : 90乙腈與離子對試劑-磷酸/磷 酸鹽緩沖溶液的混合溶液。
本發明的方法中的流動相中磷酸/磷酸鹽緩沖液pH值為6.5。 本發明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現
(1) 取米格列奈鈣中間體樣品適量，用無水乙醇溶解樣品，配制成每lmL 含米格列奈鈣0.1mg 0.5mg的樣品溶液。
(2) 設置流動相流速為0.4 1.2mL/min，檢測波長為205 235 nm，最佳檢 測波長為215nm，色譜柱柱溫箱為20 4(TC，色譜柱柱溫的最佳溫度為室溫。
(3) 取(l)的樣品溶液2-50pL注入液相色譜儀，完成米格列奈鈣中間體及其 對映異構體的分析與分離。
其中
高效液相色譜儀島津LC-10ATv; ， SPD-M10Av/ ， SCL-10Avp， DGU-12A; 色譜柱CYCLOBOND I 2000 (astec 4.6腿x250mm， 5pm)手性色譜柱； 流動相乙腈-(0.01mol/L磷酸氫二鈉+0.005M四丁基氫氧化銨，稀磷酸
調pH至6.5) =10 : 90; 檢測波長215nm; 流速1.0mL/min;
柱溫室溫； 進樣體積10pL。
本發明采用環糊精類CYCLOBOND 12000 (astec 4.6mmx250mm， 5|am)手
性色譜柱，能夠有效的分析分離米格列奈鈣中間體及其對映異構體(雜質)；選 擇流動相溶解樣品，確保了溶液的穩定性；選擇進樣體積lOpL，柱溫為室溫， 提高了色譜峰的對稱性。本發明解決了含米格列奈鈣中間體及其對映異構體的原 料及制劑的分析與分離問題，從而確保了米格列奈鈣及其制劑的質量可控。
圖1 實施例1，乙腈-(0.01mol/L磷酸氫二鈉+0.005M四丁基氫氧化銨，
4稀磷酸調pH6.5) =10:90的HPLC圖2實施例2，乙腈-(0.01mol/L磷酸氫二鈉+ 0.005M四丁基氫氧化銨， 稀磷酸調pH6.5 ) = 15:85的HPLC圖3實施例3，乙腈-(O.Olmol/L磷酸氫二鈉+ 0.005M四丁基氫氧化銨， 稀磷酸調pH6.5) =20:80的HPLC圖;
圖4實施例4，乙腈-(O.Olmol/L磷酸氫二鈉+ 0.005M四丁基氫氧化銨， 稀磷酸調pH6.0) =10:90的HPLC圖。
具體實施例方式
實施例l
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATv; ， SPD-M10Avp， SCL-lOAvp， DGU-12A; 色譜柱CYCLOBOND I 2000 (astec 4.6mmx250mm， 5(im); 流動相乙腈-(0.01mol/L磷酸氫二鈉+0.005M四丁基氫氧化銨，稀磷酸 調pH至6.5) =10 : 90; 流速l.OmL/min; 柱溫室溫； 進樣體積10pL。
檢測波長215nm;
實驗步驟
分別稱取米格列奈鈣中間體及其對映異構體各5mg，置于25mL容量瓶中， 加流動相溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取米格列奈鈣 中間體其對映異構體各5mg，分別置于2個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀 釋置刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖l，圖中1號峰為米格列奈鈣中間體，2號峰為異構體， 可以看出在該條件下米格列奈鈣中間體主峰可以和異構體完全分離開來，且米格 列奈鈣中間體主峰在8.3min左右。
實施例2
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A;
5色譜柱CYCLOBOND 12000 (astec 4.6mmx250mm， 5pm); 流動相乙腈_ (0.01mol/L磷酸氫二鈉+0.005M四丁基氫氧化銨，稀磷酸 調pH至6.5) =15 : 85; 流速1.0mL/min; 檢測波長225nm; 柱溫室溫； 進樣體積lOpL。 實驗步驟
分別稱取米格列奈鈣中間體及其對映異構體各5mg，置于25mL容量瓶中， 加流動相溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取米格列奈鈣 中間體其對映異構體各5mg，分別置于2個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀 釋置刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖2，圖中1號峰為米格列奈鈣中間體，2號峰為異構體， 可以看出在該條件下米格列奈鈣中間體主峰可以和異構體基線分離開，且米格列 奈鈣中間體主峰在6.8min左右。
實施例3
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A; 色譜柱CYCLOBOND I 2000 (astec 4.6mmx250匪，5pm); 流動相乙腈_ (0.01mol/L磷酸氫二鈉+0.005M四丁基氫氧化銨，稀磷酸 調pH至6.5) =20 : 80; 流速1.0mL/min; 檢測波長215nm; 柱溫室溫； 進樣體積10pL。 實驗步驟
分別稱取米格列奈鈣中間體及其對映異構體各5mg，置于25mL容量瓶中， 加流動相溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取米格列奈鈣
6中間體其對映異構體各5mg，分別置于2個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀 釋置刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖3，圖中1號峰為米格列奈鈣中間體，2號峰為異構體， 可以看出在該條件下米格列奈鈣中間體主峰可以和異構體基線分離開來，且米格 列奈鈣中間體主峰在6.1min左右。
實施例4
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A; 色譜柱CYCLOBOND I 2000 (astec 4.6mmx250mm， 5(am); 流動相乙腈-(0.01mol/L磷酸氫二鈉+0.005M四丁基氫氧化銨，稀磷酸 調pH至6.0) =10 : 90; 流速1,OmL/min; 檢測波長215nm; 柱溫室溫； 進樣體積lOpL。 實驗步驟
分別稱取米格列奈鈣中間體及其對映異構體各5mg，置于25mL容量瓶中， 加流動相溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取米格列奈鈣 中間體其對映異構體各5mg，分別置于2個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀 釋置刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖。結果見附圖4，圖中1號峰為米格列奈鈣中間體，2號峰為異構體，可以 看出在該條件下米格列奈鈣中間體主峰可以和異構體基線分離開來，且米格列奈 鈣中間體主峰在9.5min左右。
權利要求
1. 一種高效液相色譜法分析分離米格列奈鈣中間體及其對映異構體的方法，其特征在于采用以環糊精類手性柱，離子對試劑-磷酸/磷酸鹽緩沖液作為流動相。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述環糊精類手性柱為CYCLOBOND I 2000。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的離子對試劑為陽離子對試劑。
4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述的陽離子對試劑為四丁基氫氧化銨。
5. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸鹽為磷酸氫二銨或磷酸氫二鈉。
6. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸鹽為磷酸氫二鈉。
7. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述磷酸/磷酸鹽緩沖液的pH值為6.0-7.0。
8. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述磷酸/磷酸鹽緩沖液的pH值為6.5。
9. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步驟(1) 取米格列奈鈣中間體樣品適量，用無水乙醇溶解樣品，得到lmL含米格列奈鈣0.1mg 0.5mg的樣品溶液。(2) 設置流動相流速為0.4 1.2mL/min，檢測波長為205 235nm，檢測波長為215nm，色譜柱柱溫箱為20 40°C 。(3) 取步驟(l)的樣品溶液2-50pL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
全文摘要
本發明公開了一種米格列奈鈣中間體及其對映異構體的分析與分離測定方法，采用環糊精類手性柱，離子對-磷酸/磷酸鹽緩沖液色譜法進行分離，用該方法可以快速的分離分析米格列奈鈣以及含米格列奈鈣制劑的對映異構體雜質。
文檔編號G01N30/00GK101464431SQ20071017982
公開日2009年6月24日 申請日期2007年12月19日 優先權日2007年12月19日
發明者牟淑慧 申請人:北京德眾萬全藥物技術開發有限公司