專利名稱：風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡試劑盒。
背景技術(shù)：
目前，尚無同時(shí)檢測(cè)8種自身抗體(Sm、U1RNP、ssA、ssB、Scl-70、Jo-1、Ro60、Rib抗體)、對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，干燥綜合癥(SS)，硬皮癥(PPS)，皮肌炎和多發(fā)性肌炎(DM/PM)混合性結(jié)締組織病(MCTD)，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)等6種風(fēng)濕病診斷和鑒別診斷的免疫印跡試劑盒。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡試劑盒，利用免疫印跡技術(shù)，在一條印跡膜上可同時(shí)檢測(cè)8種自身抗體(Sm、U1RNP、ssA、ssB、Scl-70、Jo-1、Ro60、Rib抗體)，為風(fēng)濕病的診斷和鑒別診斷提供可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明由以下的技術(shù)方法來實(shí)現(xiàn)。
一種風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于所述的試劑盒組成成份包括置反應(yīng)槽內(nèi)的印跡膜條、酶聯(lián)試劑、顯色劑A、顯色劑B、終止液、濃縮洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)區(qū)帶；將可提取性核抗原(ENA)用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，按份子量大小依次分開，在通過印跡技術(shù)轉(zhuǎn)移至印跡膜上，其印跡膜條上即含有按分子量大小不同排列的各種可提取性核自身抗原成份。將其放入反應(yīng)槽與待測(cè)血清反應(yīng)，如待測(cè)血清含有自身抗體，將會(huì)分別與相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入酶聯(lián)免疫顯色區(qū)帶，與標(biāo)準(zhǔn)帶對(duì)照即可判斷待血清中含有何種抗體。其抗體的有無及抗體的種類和數(shù)量，對(duì)風(fēng)濕病診斷和鑒別診斷有重要的臨床意義。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例和制劑實(shí)施例可更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1本試劑盒組成成份包括置反應(yīng)槽內(nèi)的印跡膜條5板每板8條、酶聯(lián)試劑0.5ml、顯色劑A25ml、顯色劑B25ml、終止液25ml、濃縮洗滌液25ml、標(biāo)準(zhǔn)區(qū)帶。樣品要求，靜脈取血2-5ml，置試管待凝固后離心分離血清，血清標(biāo)本保存于2-8℃，在24小時(shí)內(nèi)不能測(cè)試的標(biāo)本應(yīng)放-20℃保存，嚴(yán)重溶血，有絮狀物或霉變的血清標(biāo)本會(huì)影響測(cè)試。
測(cè)定步驟1.洗滌應(yīng)用液的配制在2-8℃貯存的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶析出，將整瓶(25ml)濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋至500ml，放入試劑瓶中，標(biāo)簽上注明配制時(shí)間，保存于2-8℃，有效期6個(gè)月，如有絮狀物或霉變應(yīng)廢棄。
2.在含有印跡膜條的反應(yīng)槽中加入洗滌應(yīng)用液1ml和待檢血清10ul。
3.置搖床上室溫下(20℃以上，37℃以下)搖動(dòng)30分鐘或置37℃溫箱30分鐘。
4.棄去反應(yīng)槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應(yīng)用液1ml，洗滌1分鐘棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體。
5.在反應(yīng)槽中加入洗滌應(yīng)用液0.5ml和酶聯(lián)試劑10ul。
6.置搖床上室溫下(20℃以上，37℃以下)搖動(dòng)30分鐘或置37℃溫箱30分鐘。
7.棄去反應(yīng)槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應(yīng)用液1ml，洗滌1分鐘棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體。
8.在反應(yīng)槽中分別加入顯色劑A 0.5ml，顯色劑B 0.5ml。
9.在搖床上搖動(dòng)2-10分鐘，顯色。
10.待質(zhì)控帶和陽(yáng)性區(qū)帶顯色清晰后加終止液0.5ml，在搖床上搖動(dòng)2分鐘。
11.用自來水沖去槽中液體，取出印跡膜條，置吸水紙上，待干后與標(biāo)準(zhǔn)帶對(duì)照判斷結(jié)果。
結(jié)果判斷將印跡膜上起始線與標(biāo)準(zhǔn)帶起始線對(duì)齊，觀察陽(yáng)性顯色區(qū)帶與對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)帶位置即可判斷顯色區(qū)帶是何種自身抗體。
ENA對(duì)肽抗體與風(fēng)濕性疾病對(duì)應(yīng)關(guān)系分子量相應(yīng)抗體相應(yīng)疾病29/28KD、13.5KD 抗Sm抗體SLE標(biāo)記抗體73KD、32KD、17.5KD抗U1RNP抗體 多見于MCTD38KD、16.5KD、15KD抗Rib抗體 SLE標(biāo)記抗體52KD 抗ssA 多見于SS48/47KD、45KD 抗ssB抗體 多見于SS86KD、70KD抗Scl-70PSS標(biāo)記抗體55KD 抗Jo-1抗體 多見于PM/DM60KD Ro60抗體多見于RA與風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡標(biāo)準(zhǔn)帶對(duì)照。臨床意義根據(jù)自身抗體的有無或多少，對(duì)常見系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，干燥綜合癥(SS)，硬皮癥(PPS)，皮肌炎和多發(fā)性肌炎(DM/PM)混合性結(jié)締組織病(MCTD)，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)等風(fēng)濕病診斷和鑒別診斷提供參考依據(jù)。
權(quán)利要求
1.一種風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于所述的試劑盒組成成份包括置反應(yīng)槽內(nèi)的印跡膜條、酶聯(lián)試劑、顯色劑A、顯色劑B、終止液、濃縮洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)區(qū)帶；將可提取性核抗原(ENA)用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，按份子量大小依次分開，在通過印跡技術(shù)轉(zhuǎn)移至印跡膜上，其印跡膜條上即含有按分子量大小不同排列的各種可提取性核自身抗原成份。將其放入反應(yīng)槽與待測(cè)血清反應(yīng)，如待測(cè)血清含有自身抗體，將會(huì)分別與相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入酶聯(lián)免疫顯色區(qū)帶，與標(biāo)準(zhǔn)帶對(duì)照即可判斷待血清中含有何種抗體。其抗體的有無及抗體的種類和數(shù)量，對(duì)風(fēng)濕病診斷和鑒別診斷有重要的臨床意義。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于試劑盒的測(cè)定步驟包括1.洗滌應(yīng)用液的配制在2-8℃貯存的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶析出，將整瓶(25ml)濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋至500ml，放入試劑瓶中，標(biāo)簽上注明配制時(shí)間，保存于2-8℃，有效期6個(gè)月，如有絮狀物或霉變應(yīng)廢棄2.在含有印跡膜條的反應(yīng)槽中加入洗滌應(yīng)用液1ml和待檢血清10ul3.置搖床上室溫下(20℃以上，37℃以下)搖動(dòng)30分鐘或置37℃溫箱30分鐘4.棄去反應(yīng)槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應(yīng)用液1ml，洗滌1分鐘棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體5.在反應(yīng)槽中加入洗滌應(yīng)用液0.5ml和酶聯(lián)試劑10ul6.置搖床上室溫下(20℃以上，37℃以下)搖動(dòng)30分鐘或置37℃溫箱30分鐘7.棄去反應(yīng)槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應(yīng)用液1ml，洗滌1分鐘棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體8.在反應(yīng)槽中分別加入顯色劑A 0.5ml，顯色劑B 0.5ml9.在搖床上搖動(dòng)2-10分鐘，顯色10.待質(zhì)控帶和陽(yáng)性區(qū)帶顯色清晰后加終止液0.5ml，在搖床上搖動(dòng)2分鐘11.用自來水沖去槽中液體，取出印跡膜條，置吸水紙上，待干后與標(biāo)準(zhǔn)帶對(duì)照判斷結(jié)果結(jié)果判斷將印跡膜上起始線與標(biāo)準(zhǔn)帶起始線對(duì)齊，觀察陽(yáng)性顯色區(qū)帶與對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)帶位置即可判斷顯色區(qū)帶是何種自身抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡試劑盒。包括置反應(yīng)槽內(nèi)的印跡膜條、酶聯(lián)試劑、顯色劑A、顯色劑B、終止液、濃縮洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)區(qū)帶；將可提取性核抗原(ENA)用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，按分子量大小依次分開，再通過印跡技術(shù)轉(zhuǎn)移至印跡膜上，其印跡膜條上即含有按分子量大小不同排列的各種可提取性核自身抗原成份。將其放入反應(yīng)槽與待測(cè)血清反應(yīng)，如待測(cè)血清含有自身抗體，將會(huì)分別與相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入酶聯(lián)和顯色試劑，就會(huì)出現(xiàn)顯色區(qū)帶，與標(biāo)準(zhǔn)帶對(duì)照即可判斷待血清中是否含有Sm、U
文檔編號(hào)G01N21/77GK101021533SQ20071013567
公開日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月12日
發(fā)明者馬偉民, 張永頂 申請(qǐng)人:深圳市伯勞特生物制品有限公司