專利名稱：一種提高血液樣本白細胞分類結果準確性的方法
技術領域：
本發明涉及醫療器械技術領域，尤其涉及一種可有效提高狗、貓等 動物血液樣本白細胞分類結果準確性的方法。
背景技術：
獸用血液細胞分析儀作為對動物血細胞參數進行計數和分類的儀
器已被廣泛應用于動物臨床和實驗室領域，主要提供白細胞(WBC)、淋 巴細胞百分比(Lymph°/ )、單核細胞百分比(Mon%)、粒細胞百分比 (Gran%)、紅細胞(RBC )、血小板(PLT )、平均紅細胞體積(MCV )、紅 細胞比容(HCT)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃 度(MCHC)、血紅蛋白(HGB)等測試參數，測試結果用于醫生對動物病 情的診斷，因此要求測試結果準確、可靠。
采用如圖l所示的電阻法計數原理的血液細胞分析儀進行白細胞分 類是通過加入溶血劑，溶解紅細胞，同時使白細胞按如圖2所示，對淋 巴細胞和粒細胞進行大小處理。目前，市場上銷售的如圖l所示的電阻 法計數原理的血液細胞分析儀都是通過一次加入溶血劑，對白細胞通道 參數進行測試的。在對狗、貓血液樣本測試時，主要采用以下兩種方法
一種是采用對人的樣本同樣的溶血劑作用方式對白細胞進行測試， 即在測試過程中加入的溶血劑量控制在使98。/。以上的樣本在溶血劑作用 后，紅細胞碎片不影響白細胞計數值。但由于動物樣本自身的特殊性， 尤其對于狗、貓等樣本，會明顯造成淋巴細胞測試結果偏高的問題，有相當比例的粒細胞在溶血劑作用后，縮水到了淋巴細胞區域，通過測試 樣本與鏡檢的對比，發現淋巴區域的細胞分布數明顯高于樣本實際的淋
巴數量，造成約l/3左右的樣本，機器淋巴測試結果偏高，無法準確給 出白細胞的3個分類參數淋巴細胞百分比(Lymph°/fl)、單核細胞百分比 (Mon%)、粒細胞百分比(Gran%)。
第二種方法是在狗、貓等動物白細胞計數過程中，減少溶血劑加入 量(即弱溶處理)，對一定比例的樣本，紅細胞在溶血劑作用后不影響 白細胞計數，通過與鏡檢分類數據的對比，可提高分類結果的準確性。 但是由于樣本對溶血劑作用的反應情況不同，由于減少溶血劑加入量， 造成一定比例的樣本存在紅細胞碎片干擾，導致計數結果和分類結果的 不準確，同時這部分紅細胞碎片對血紅蛋白的測試也會有影響，去掉紅 細胞碎片的干擾是提高這部分樣本計數和分類準確性的必須解決的問 題。目前是通過固定界標，對紅細胞碎片進行濾除，解決狗、貓等樣本 測試時分類不準的問題，通過這種方法可提高白細胞分類性能。但由于 動物樣本自身的特異性，用固定界標的方法，即界定在直方圖的一定位 置的左邊是紅細胞碎片，會有相當比例的動物樣本的白細胞計數值有較 大的偏差，有些樣本白細胞測試結果會減少，有些樣本白細胞值會增加， 部分樣本偏差大于20%。即由于紅細胞碎片分布范圍較寬，用固定界標 濾除紅細胞碎片干擾后，會造成白細胞計數結果不準確。
由此可見，目前對動物血細J包參數計數和分類中，第一種加入足夠 溶血劑的方法，可以解決白細胞計數準確性問題，但無法準確給出白細 胞的分類參數。第二種弱溶處理方法可提高分類結果的準確性，但白細 胞計數結果不準確，當采用固定界標濾除紅細胞碎片干擾時，由于動物 樣本自身的特異性，白細胞測試結果仍會偏離實際值。因此，就需要對 動物血細胞參數計數和分類的方法作進一步的改進。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種提高動物血液樣本白細胞 分類結果準確性的方法，該方法既可以保證白細胞計數結果和血紅蛋白 測量結果準確性，同時提高白細胞分類結果淋巴細胞百分比(Lymph°/fl)、 單核細胞百分比(Mon°/。)、粒細胞百分比(Gran°/。)的準確性。
本發明為解決上述技術問題所采用的技術方案為 一種提高血液樣本白細胞分類結果準確性的方法，包括以下步驟
A、 在白細胞計數過程中分先后兩次加入溶血劑，并測試獲得第一 次加入溶血劑后的第 一 白細胞計數值和第 一白細胞直方圖，以及第二次 加入溶血劑后的第二白細胞計數值；第一次加入的溶血劑量，其作用后 使血液樣本中仍有影響白細胞計數值的紅細胞碎片存在，第二次加入的 溶血劑量，其作用后使白細胞計數值中沒有紅細胞碎片的影響；
B、 根據所述第一白細胞計數值和第二白細胞計數值，確定進行白 細胞分類的直方圖，并進行白細胞分類。
所述的方法，其中所述第一次溶血劑加入量使不低于50%的血液 樣本的第一白細胞計數值與第二白細胞計數值之比大致在1.1至1.8之間。
所述的方法，其中所述步驟A中第一次溶血劑加入量按照以下步 驟設定
Dl、取若干個血液樣本，在白細胞計數過程中加入標準溶血劑量， 使溶血劑作用后紅細胞碎片對白細胞計數沒有影響，并記錄下此時每個 血液樣本的白細胞計數值；
D2、分別取所述標準溶血劑量50%至75%中至少兩個實驗溶血劑 量，測試不同實驗溶血劑量作用后每個血液樣本的白細胞計數值；
D3、計算各血液樣本在不同實驗溶血劑量時白細胞計數值與標準溶
7血劑量時白細胞計數值之比為白細胞測試系數；
D4、統計每個實驗溶血劑量下白細胞測試系數在1.1至1.8之間的血液樣本個數，找出其中最大值，并且當該最大值與總樣本個數之比不小于50%時，所述最大值對應的實驗溶血劑量為所述第一次溶血劑加入量。
所述的方法，其中所述步驟A中第二次溶血劑加入量等于所述標準溶血劑量減去所述第 一次溶血劑加入量。
所述的方法，其中所述步驟B包括如下步驟Bl、計算所述第一白細胞計數值與第二白細胞計數值之比為白細胞因子；
B2、當所述白細胞因子超過預定值時，依據白細胞因子在所述第一白細胞直方圖上確定紅細胞碎片與白細胞間第一界標位置，得到去掉紅細胞碎片影響的第二白細胞直方圖，并用所述第二白細胞直方圖進行白細胞分類。
所述的方法，其中所述步驟B2還包括如下處理當所述白細胞因子小于所述預定值時，用所述第一白細胞直方圖進行白細胞分類。
所述的方法，其中所述步驟B2中紅細胞碎片與白細胞間第一界標位置滿足以下關系所述第 一白細胞直方圖總面積與所述第 一界標右邊直方圖區域的面積之比等于所述白細胞因子。
5所述的方法，其中所述步驟B2中的預定值大致為1.02。
所述的方法，其中所述步驟A包括如下具體步驟Al、確定所述第一次溶血劑加入量和第二次溶血劑加入量；A2、稀釋白細胞計數池中的被檢血液樣本，并在稀釋后的被檢血液樣本中加入所述第一次溶血劑加入量，當溶血劑作用后，完成白細胞通
道第 一次計數過程，獲得所述第 一 白細胞計數值和第 一 白細胞直方圖；A3、向白細胞計數池中加入所述第二次溶血劑加入量，當溶血劑作用后，完成白細胞通道第二次計數過程，獲得所述第二白細胞計數值。
所述的方法，其中在向白細胞計數池中加入所述第二次溶血劑加入量后，測量血紅蛋白值。
本發明的有益效果為本發明通過先后二次加入溶血劑，保證了第二次加入溶血劑量后，紅細胞碎片不影響白細胞的計數值和血紅蛋白的測試，既保證了白細胞計數值和血紅蛋白測試結果的準確性，同時通過兩次白細胞計數值的比例準確找出濾除紅細胞碎片的第一界標的位置，并利用濾除紅細胞碎片后的第二白細胞直方圖對白細胞進行分類，解決了狗、貓等動物血液樣本白細胞分類結果淋巴細胞百分比(LympM4)、單核細胞百分比(Mon%)、粒細胞百分比(Gran50的準確性問題。
圖1為采用微孔電阻法測試血液細胞的原理示意圖2為標有淋巴細胞和粒細胞分布的白細胞直方圖3為第一次加入溶血劑后血液分析儀的液路狀態；
圖4為第一次加入溶血劑后排空計量管時的液i 各狀態示意；
圖5為開始第一次白細胞計數過程的示意圖6為第二次加入溶血劑后排空計量管時的液路狀態示意；
圖7為開始第二次白細胞計數過程的示意圖8為第一次加溶血劑測試的第一白細胞直方圖9為第二次加溶血劑測試的白細胞直方圖IO為標有第一界標位置的第一白細胞直方圖11為濾除紅細月包碎片后的第二白細胞直方圖12為帶第一界標且標有淋巴細胞和粒細胞分布的第二白細胞直方圖13為本發明實施例流程圖。
具體實施例方式
下面根據附圖和實施例對本發明作進一步詳細說明本發明是基于現有血液細胞分析儀在動物樣本測試中存在的問題，提出的一種提高狗、貓等動物血液樣本白細胞分類結果準確性的新方法。本發明方法基本思想是在白細胞計數過程中，分先后兩次加入溶血劑，第一次加入的溶血劑量，其作用后使血液樣本中仍有一定數量影響白細胞計數值的紅細胞碎片存在，此時完成白細胞通道第一次計數過程，獲得第一白細胞計數值和白細胞直方圖；之后，第二次加入的溶血劑量，其作用后將第一次計數過程中剩下的紅細胞碎片進一步溶解，使白細胞計數值中沒有紅細胞碎片的影響，并測試獲得此時的第二白細胞計數值；依據第一白細胞計數值和第二白細胞計數值，在保證白細胞計數準確性的同時，準確找出濾除紅細胞碎片的第一界標的位置，解決狗、貓等樣本計數和分類結果準確性的問題。
本發明方法的具體過程如圖13所示，包括如下步驟步驟l:
確定第一次和第二次溶血劑加入量。
U、取若干個血液樣本，例如以狗為例，取100個狗的樣本。1.2、在白細胞計數過程中只加一次溶血劑，并且通過調整溶血劑量，使98%以上的樣本在溶血劑作用后，紅細胞碎片對白細胞計數沒有影響，此時業界即認為血液樣本中沒有影響白細胞計數值的紅細胞碎片存在了，記錄下這個溶血劑量為標準溶血劑量M,對應樣本測試結果的白細胞值為W1、 W2......W100。1.3 、取這個標準溶血劑量M的50%至75%中至少兩個實驗溶血劑量，例如取M的60。/。、 65%、 70%、 75%四個實驗溶血劑量進行測試，得到不同實驗溶血劑量作用后每個血液樣本的白細胞計數值，例如
Wal、Wa2WalOO。
Wbl、Wb2窗OO。
Wcl、Wc2Wc亂
Wdl、Wd2...WdlOO。
1.4、 計算各血液樣本在不同實驗溶血劑量時白細胞計數值與標準溶血劑量時白細胞計數值之比為白細胞測試系數；
fai = Wai/Wifbi =衡/Wifci = Wc羅fdi = Wdi/Wi
1.5、 統計每個實驗溶血劑量下白細胞測試系數fai、 fbi、 fci、 fdi在1.1至1.8之間的血液樣本個數
fal、 fa2......fa100在1.1和1.8之間的樣本個數為N1;
fbl、 fb2......fb100在1.1和1.8之間的樣本個數為N2;
fcl、 fc2......fc100在1.1和1.8之間的樣本個數為N3;
fdl、 fd2......fd100在1.1和1.8之間的樣本個數為N4;
1.6、 找出N1、 N2、 N3、 N4的最大值對應的溶血劑量為M1，這個溶血劑量初步設定為第一次溶血加入的溶血劑量；第一次溶血劑加入量Ml對應的第 一次計數白細胞值為
Wxl、 Wx2......WxlOO
溶血劑加入量M1和溶血劑加入量M下白細胞計數的比值為fkl、 fk2......fid00，即fki = Wxi/Wifkl、 fk2......fidOO在1.1和1.8之間的樣本要超過總樣本數50%,否
則需對第一次溶血劑加入量M進行調整。
1.7、第二次加入的溶血劑量等于標準溶血劑量M減去第一次溶血劑加入量Ml,即為M-M1 。步驟2:
確定了第一次和第二次溶血劑加入量后，開始對^皮;險的動物血液樣本進行白細胞計數和分類。本發明方法適用于目前市場上銷售的多種類采用電阻法對白細胞通道參數進行測試的血液細胞分析儀，在此僅以圖3所示液路狀態的分析儀為例說明其測試方法。
將動物血液樣本通過血液細胞分析儀樣本稀釋裝置，用稀釋液稀釋到一定比例后，加入白細胞計數池中，在白細胞計數池稀釋后的血液樣本中加入第一次溶血劑量M1，這時白細胞計數池中液體的體積為V,稀釋比為rl，液路狀態如圖3所示，閥1和閥2關閉。步驟3:
打開閥2，排空計量管中的液體，如圖4所示。步驟4:
如圖5所示，關閉閥2，打開閥l，白細胞第一次計數過程開始，當液面到光耦開始位置時，記錄時間為T1;光耦從開始位置到結束位置時的時間記錄為T2，光耦開始位置到光耦結束位置的計量管體積為V2，當液面到底光耦結束位置時，關閉閥l，第一次白細胞計數結束。Tl時間內白細胞計數池中流出液體的體積V1為
TlT2
計數池中剩余液體的體積為
V-(l + 二)xV2T2如圖8所示，第一次白細胞計數過程中，測試白細胞的計數值為 WBC1，第一白細胞直方圖為f(x)。可以理解的是，第一次白細胞計數值 WBC1中包含有紅細胞碎片數值。 步驟5:
向白細胞計數池中第2次加入溶血劑，加入量為M-Ml,混勻計數 池內樣本，白細胞計數池中的稀釋比為
rl x
r2 =-
Tl
V-(l + ^)xV2 T2
M-Ml + V-(l + L)xV2 T2
如圖6所示，打開閥2，排空計量管中的液體。 步驟7:
如圖7所示，關閉閥2，打開閥l,白細胞第二次計數過程開始。第二 次白細胞計數過程中，如圖9所示，獲得第二白細胞計數值為WBC2，以 及白細胞直方圖g(x)。第二白細胞計數值WBC2中沒有紅細胞碎片的影 響，因此用第二白細胞計數值作為白細胞測試結果來顯示。并且，血紅 蛋白值也在第2次加入溶血劑后進行測量，由于沒有紅細胞碎片的影響， 測試的血紅蛋白值準確。 步驟8:
計算第 一 白細胞計數值WBC1與第二白細胞計數值WBC2之比，得 到白細胞因子factor;即 r 附C1
步驟8:
根據白細胞因子factor,確定進行白細胞分類的白細胞直方圖，并 進行白細胞分類。當白細胞因子factor小于某個預定值，例如factor〈 1.02時，說明血液樣本第一次加溶血劑的過程已經將紅細胞碎片溶解到不影響白細胞計數的程度，此時可直接用第一次溶血形成的第一白細胞
直方圖直接進行白細胞分類。當白細胞因子factor超過預定值，即factoid 1.02時，說明樣本第一次加溶血劑作用后，紅細胞形成的碎片對白細胞 計數值有影響，此時需要根據第二次白細胞計數結果將第一白細胞直方 圖進行修正，并用修正后的第二白細胞直方圖進行白細胞分類。 ^!"正方法如下
8.1如圖IO所示，依據白細胞因子factor在第一白細胞直方圖上找 出紅細胞碎片與白細胞間第一界標Dl位置，Dl界標位置滿足以下關系 第一白細胞直方圖總面積與所述第一界標右邊直方圖區域的面積之比 等于所述白細胞因子factor,即滿足以下公式
其中S1—-D1界標左邊的直方圖面積； S2—D1界標右邊的直方圖面積； S l+S2—第 一 白細胞直方圖總面積。 8.2、直方圖D1界標左邊的部分是紅細胞碎片形成的直方圖，將這部 分取掉后，形成的直方圖如圖ll所示，即為修正后的第二白細胞直方圖。 用圖ll所示的第二白細胞直方圖進行白細胞分類，分類界標位置如圖 12所示。
第一次加入溶血劑，得到白細胞在弱溶處理后的直方圖，第二次加 入溶血劑用于對白細胞的計數和血紅蛋白測量，通過兩次白細胞計數值 的比例對第 一次計數得到的第 一白細胞直方圖的紅細胞碎片部分進行 濾除，對濾除紅細胞碎片后剩下的第二白細胞直方圖進行白細胞的分類 計算，這樣既可解決白細胞分類準確性問題，同時也保證了白細胞計數 和血紅蛋白測試結果的準確性。在實際應用中，經和賴:;險的對比試驗， 狗和貓等動物的分類性能得到大幅提升。可以理解的是，對本領域普通技術人員來說，可以根據本發明的技 術方案及其發明構思加以等同替換或改變，而所有這些改變或替換都應 屬于本發明所附的權利要求的保護范圍。
權利要求
1、一種提高血液樣本白細胞分類結果準確性的方法，其特征在于，包括以下步驟A、在白細胞計數過程中分先后兩次加入溶血劑，并測試獲得第一次加入溶血劑后的第一白細胞計數值和第一白細胞直方圖，以及第二次加入溶血劑后的第二白細胞計數值；第一次加入的溶血劑量，其作用后使血液樣本中仍有影響白細胞計數值的紅細胞碎片存在，第二次加入的溶血劑量，其作用后使白細胞計數值中沒有紅細胞碎片的影響；B、根據所述第一白細胞計數值和第二白細胞計數值，確定進行白細胞分類的直方圖，并進行白細胞分類。
2、 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所迷第一次溶血劑 加入量使不低于50°/。的血液樣本的第一白細胞計數值與第二白細胞計數 值之比大致在1.1至1.8之間。
3、 根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟A中 第 一次溶血劑加入量4姿照以下步驟設定Dl、取若干個血液樣本，在白細胞計數過程中加入標準溶血劑量， 使溶血劑作用后紅細胞碎片對白細胞計數沒有影響，并記錄下此時每個 血液樣本的白細月包計數值；D2、分別取所述標準溶血劑量50%至75%中至少兩個實驗溶血劑 量，測試不同實驗溶血劑量作用后每個血液樣本的白細胞計數值；D3、計算各血液樣本在不同實驗溶血劑量時白細胞計數值與標準溶 血劑量時白細胞計數值之比為白細胞測試系數；D4、統計每個實驗溶血劑量下白細胞測試系數在1.1至1.8之間的血液樣本個數，找出其中最大值，并且當該最大值與總樣本個數之比不小于50%時，所述最大值對應的實驗溶血劑量為所述第一次溶血劑加入 量。
4、 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟A中第二 次溶血劑加入量等于所述標準溶血劑量減去所述第一次溶血劑加入量。
5、 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟B包括如 下步驟Bl、計算所述第一白細胞計數值與第二白細胞計數值之比為白細胞 因子；B2、當所述白細胞因子超過預定值時，依據白細胞因子在所述第一 白細胞直方圖上確定紅細胞碎片與白細胞間第一界標位置，得到去掉紅 細胞碎片影響的第二白細胞直方圖，并用所述第二白細胞直方圖進行白 細胞分類。
6、 根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述步驟B2還包括 如下處理當所述白細胞因子小于所述預定值時，用所述第一白細胞直 方圖進行白細胞分類。
7、 根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述步驟B2中紅細 胞碎片與白細胞間第一界標位置滿足以下關系所述第一白細胞直方圖 總面積與所述第 一界標右邊直方圖區域的面積之比等于所述白細胞因 子。
8、 根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述步驟B2中的預 定值大致為1.02。
9、 根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述步驟A包括如 下具體步驟Al、確定所述第一次溶血劑加入量和第二次溶血劑加入量；A2、在稀釋后的被檢血液樣本中加入所述第一次溶血劑加入量，當 溶血劑作用后，完成白細胞通道第一次計數過程，獲得所述第一白細胞 計數值和第一白細胞直方圖；A3、向白細胞計數池中加入所述第二次溶血劑加入量，當溶血劑作 用后，完成白細胞通道第二次計數過程，獲得所述第二白細胞計數值。
10、根據權利要求9所述的方法，其特征在于在向白細胞計數池 中加入所述第二次溶血劑加入量后，測量血紅蛋白值。
全文摘要
一種提高血液樣本白細胞分類結果準確性的方法，包括以下步驟A.在白細胞計數過程中分先后兩次加入溶血劑，并測試獲得第一次加入溶血劑后的第一白細胞計數值和第一白細胞直方圖，以及第二次加入溶血劑后的第二白細胞計數值；第一次加入的溶血劑量，其作用后使血液樣本中仍有一定量影響白細胞計數值的紅細胞碎片存在，第二次加入的溶血劑量，其作用后使白細胞計數值中沒有紅細胞碎片的影響；B.根據第一白細胞計數值和第二白細胞計數值之比，確定進行白細胞分類的直方圖，并進行白細胞分類。采用本發明方法，既保證了白細胞計數值和血紅蛋白測試結果的準確性，同時也提高了狗、貓等動物血液樣本白細胞分類結果準確性。
文檔編號G01N33/49GK101470109SQ20071012574
公開日2009年7月1日 申請日期2007年12月25日 優先權日2007年12月25日
發明者孔繁鋼, 李斌華, 煉 王, 許文娟 申請人:深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司