專利名稱：：甾體化合物分析方法
技術領域：
：本發明涉及鹵甲松系列化合物以及其合成涉及的一些中間體的分析方法。
背景技術：
：鹵甲松是一個含鹵基的強效外用糖皮質類固醇藥物，具有快速抗炎、抗過敏、止癢、血管收縮、抗滲出及抗增生作用，它活性強作用快，廣泛應用于不同類型的炎癥性皮膚病，能迅速地減輕和消除如瘙癢等癥狀。關于鹵甲松的文章報道的己經很多，但是關于其分析方法的相關報道，主要是涉及其制劑的分析方法只有一篇，簡單介紹如下文獻Cesko-SlovenskaFarmacie(1986)，35(6),265-9.提到了利用微分脈沖極譜(differentialpulsepolarography;DPP)方法，對鹵甲松軟膏，乳膏和片劑中鹵甲松的含量進行測定。該文獻報道的方法雖然可以用來分析鹵甲松，但是適用性范圍比較窄，微分脈沖極譜應用起來不夠方便。為了了解鹵甲松工藝路線中各個中間體的含量和變化過程，監控反應過程，需要一種適用性很廣泛的分析方法，比如普通的高壓液相法，能對合成路線上涉及到的中間體以及成品進行系統得分析比較，以便于分析最終產品中產生的雜質的來源及其含量，可以通過優選反應條件，減少反應過程產生的雜質。然而，目前未見文獻報道解決該問題。針對鹵甲松以及合成涉及的一些中間體的系統分析方法問題，本發明提供了一個全新的鹵甲松液相分析方法，該方法能夠系統分析鹵甲松系列化合物以及其合成過程中間體。色譜法參照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄VD)測定。本發明提到的液相方法，測試樣品為鹵甲松系列化合物以及其合成過程中間體，即式(I)化合物，其結構式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>
發明內容其中1，2位上的H或鹵素，R2-H或鹵素。其分析方法如下a色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱b以乙腈和水為流動相，c檢測波長為235-255nmd取測試樣品適量，精密稱定，加乙腈溶解并用乙腈稀釋制成一定濃度Ca的溶液，搖勻，精密量取50^11注入液相色譜儀，記錄色譜圖。本發明提到的分析方法得到的色譜圖是測試樣品的歸一法液相色譜圖，得到了測試樣品的歸一法液相含量，使用同樣的分析方法，可以得到測試的對照品的歸一法液相含量，然后通過公式計算，可以得到測試樣品的外標法的液相含量。即本發明提到的分析方法可以用于測定測試樣品的外標法液相含量，其具體過程是分別測定測試樣品和測試的對照品的歸一法液相含量，按外標法以峰面積計算，即得到該樣品的液相含量Cn/。；C%=Aa/AsXCs/CaX100%其中Aa為測試樣品液相主峰面積；As為測試的對照品液相主峰面積；Ca為測試樣品濃度；Cs為測試的對照品濃度。本發明提到分析方法中測試的對照品為對應測試樣品精制得到的含量為99.5%以上的標準品或工作標準品。本發明提到的分析方法中，式(I)化合物優選l，2位為雙鍵。，本發明提到的分析方法中，鹵甲松系列化合物以及其合成過程中間體優選R=H或COCH3，R1-H或Cl，R2-H或C1。本發明提到的分析方法中，鹵甲松系列化合物以及其合成過程中間體優選1，2位上為雙鍵，R-H或OCOR3，其中R3-5個碳以下的烷基；更優選R1-鹵素，R2=H;1，2位上為雙鍵，R-H或COCH3，R1-鹵素，R2=H。最優選l，2位上為雙鍵，R=H或COCH3，R1-C1，R2-H;以及l,2位上為單鍵，R-H或COCH3，R1=C1，R2=C1。本發明提到的分析方法不僅適用于分析鹵甲松系列化合物以及其合成過程中間體，也適合于分析鹵甲松制劑中的鹵甲松含量。本發明提到的分析方法，流動相乙腈和水的體積配比選自乙腈水=35:75-50:50;優選體積配比乙腈水=40:6045:55;最優選乙腈水=43:57。本方法涉及的測試樣品濃度Ca和測試樣品的對照品濃度Cs可在0.110mg/ml范圍內，優選18mg/ml，最優選0.2lmg/ml。鹵甲松系列化合物以及其合成過程中間體，其紫外吸收最大峰波長在235-255nra之間；本發明提供的檢測方法使用檢測波長選自是238-245nm，優選為240nm。理論塔板數按主峰計算應以不低于2000為佳。本發明提到的分析方法，其流動相中還可以加入一定量的醋酸，可以減少個別峰的脫尾現象。本發明提到的分析方法，其流動相中還可以加入醋酸的體積配比是流動相乙腈和水的總體積的0.01%-10%，優選0.1%。鹵甲松制備過程路線以及涉及的中間體如下過程示意圖以雙氟米松醋酸酯為起始物，得到雙氯物和單氯物混和物，再得到單氯物，最后得到鹵甲松的過程。該過程涉及的雙氟米松醋酸酯、雙氯物和單氯物混和物、單氯物和鹵甲松均能使用本發明提供的分析方法，系統適應性較好。本發明提供的分析方法，進行了精密度、檢測限等測定手段，均符合中國藥典2005年版的相應規定。此外，根據中國藥典2005年版，目前已經做完了方法學驗證，包括系統適用性試驗、線性試驗、回收試驗以及專屬性試驗。經過這些驗證，本發明提供的分析方法實用可靠，穩定性較好。本發明提供的鹵甲松以及其合成涉及的一些中間體的高效液相方法，具有如下優點(1)使用普通的液相色譜儀即可，設備要求不高。(2)流動相選用的兩個介質普通易得，可行性高。，(3)操作過程較為簡單方便。(4)適用性好，可以廣泛應用于鹵甲松以及其合成涉及的一些中間體。圖2:樣品2的HPLC圖譜圖4:樣品4的HPLC圖譜圖6:樣品6的HPLC圖譜圖8:樣品8的HPLC圖譜圖1:樣品1的HPLC圖譜圖3:樣品3的HPLC圖譜圖5':樣品5的HPLC圖譜圖7:樣品7的HPLC圖譜具體實施例方式下面將通過實施例對本發明作進一步的描述，這些描述并不是對本
發明內容作進一步的限定。本領域的技術人員應理解，對本發明的技術特征所作的等同替換，或相應的改進，仍屬于本發明的保護范圍之內。實施例一色譜條件-色譜柱C18;5|im;4.6mmx250mm。流^]相乙腈水=43:57(體積比)進樣量50pl檢測波長240nm流速1.0ml/min操作取樣品適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每lml中含0.4mg的溶液，搖勻，精密量取50^il注入液相色譜儀，記錄色譜圖，即得樣品的歸一法液相含量。樣品為同一批號(060501)的鹵甲松以及其合成涉及的中間體，液相結果見附圖1-5。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例:色譜條件色譜柱C18;5ym;4.6mmx250mmc流動相乙腈一水(4:6)進樣量50nl檢測波長240nm流速l.Oml/min操作取鹵甲松樣品6適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每lml中含0.8mg的溶液，搖勻，精密量取50pl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；即得歸一法液相含量。樣品6和樣品1為同一批鹵甲松，得到的液相含量98.96%，保留時間(min):17.732，得到HPLC圖見附圖6。實施例三色譜條件色譜柱C18;5,4.6mmx250mm。流動相乙腈一水(48:52)進樣量5(^1檢測波長245nm流速l.Oml/min操作取鹵甲松樣品7適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每lmi中含0.2mg的溶液，搖勻，精密量取50pl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；即得歸一法液相含量。樣品7和樣品1為同一批鹵甲松，得到的液相含量99.06%，保留時間(min):9.107，得到HPLC圖見附圖7。實施例四色譜條件色譜柱C18;5pm;4.6mmx250mm。流動相乙腈一水一醋酸(40:60:0.1)進禪量50|al檢測波長245nm流速1.Oml/min操作取鹵甲松樣品8適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每lml中含0.2mg的溶液，搖勻，精密量取50pl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；即得歸一法液相含量。。樣品8和樣品1為同一批鹵甲松，得到的液相含量99.21%,保留時間(min):20.432，得到HPLC圖見附圖8。權利要求1.一種式(I)化合物的分析方法其中1，2位上的為單鍵或雙鍵，R＝H或COR3，其中R3＝5個碳以下的烷基；R1＝H或鹵素，R2＝H或鹵素；a色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱b以乙腈和水為流動相，c檢測波長為235-255nmd取測試樣品適量，精密稱定，加乙腈溶解并用乙腈稀釋制成一定濃度Ca的溶液，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。2.如權利要求1所述分析方法，其特征在于式(I)化合物結構式1，2位為雙鍵。3.如權利要求1或2所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物優選R-H或COCH3，R1-H或C1，R2-H或C1。4.如權利要求1至3中任一所述的分析方法，其特征在于提到的液相方法，流動相乙腈和水的體積配比選自乙腈水=35:7550:50;提到的測試樣品濃度Ca選自0.110mg/ml，檢測波長選自238-245nm。5.如權利要求1至3中任一所述的分析方法，其特征在于提到的液相方法，流動相乙腈和水的優選體積配比乙腈水=40:6045:55;提到的測試樣品濃度Ca優選18mg/ml;檢測波長優選240nm。6.如權利要求1至5中任一所述的分析方法，其特征在于提到的液相方法，流動相乙腈和水的最優選體積配比乙腈水=43:57;提到的測試樣品濃度Ca最優選0.2lmg/ml;檢測波長優選240nm。7.如權利要求1至6中任一所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物是1，2位上為雙鍵，F^H或COR3，其中R3-5個碳以下的烷基；R1-卣素，R2=H。8.如權利要求1至7中任一所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物是1，2位上為雙鍵，R-H或COCH3，R1-卣素，R2=H。9.如權利要求1至8中任一所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物是1，2位上為雙鍵，R:H或COCH3，R1-C1,R2=H。10.如權利要求1至9中任一所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物是1，2位上為單鍵，R二H或COCH3，R1=C1，R2=Cl。全文摘要一種甾體化合物的分析方法，涉及鹵甲松系列化合物以及其合成涉及的一些中間體的分析方法，提供了一個全新的鹵甲松液相分析方法，該方法能夠系統分析鹵甲松系列化合物以及其合成過程中間體。文檔編號G01N30/00GK101470103SQ200710060218公開日2009年7月1日申請日期2007年12月27日優先權日2007年12月27日發明者朱潤芝,娜樊申請人:天津金耀集團有限公司