一種檢測個體抗氧化遺傳易感性的試劑盒的制作方法

專利名稱：一種檢測個體抗氧化遺傳易感性的試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及分子生物學和醫學領域，更具體的，本發明涉及一種檢測個體抗氧化遺傳易感性的試劑盒， 通過同時檢測與抗氧化能力密切相關的過氧化氫酶基因(CAT)、還原型輔酶葉綠醇基因(CYBA)、內皮型 一氧化氮合成酶基因(N0S3)、胞外過氧化物岐化酶基因(S0D3)、對氧磷酯酶1基岡(P0N1)的單核苷酸 多態性位點基因型來評估個體抗氧化遺傳易感性。
背景技術：
人體內存在著一個非常重要的平衡系統氧化一還原系統。這一系統調節著體內氧C3由基的產生和代 謝，維持著體內適當的氧化能力和氧t3由基的清除能力，從而保障了生命活動的進行。氧化一還原系統失 衡、過多氧自由基的積累會引起一系列的心腦血管、神經系統、消化系統等疾病以及過早的衰老。因此抗 氧化能力在人的生命活動中十分重要。遺傳體質不同的人在相同的環境下有著不同水平的抗氧化能力，面對不同的抗氧化能力缺陷風險需要 采取不同的干涉手段。因此，綜合利用現代科學研究成果，開發一項基F分子遺傳基礎的抗氧化易感遺傳 風險檢測及個性化干預提示產品會對由于抗氧化能力缺陷而引起疾病的發生起到預警、個性化防治的提示 作用，具有很強的社會意義和市場前景。目前，涉及抗氧化能力的一些基因，己經被很好的進行研究。其作用機制、生化功能、信號通路、調 控、轉錄等等方面都有明確可靠的研究結果；研究手段、方法、儀器設備和試劑等都已經發展到了一個相 當的高度。目前，經證實并且機理研究清楚的與抗氧化能力密切相關的基岡有過氧化氫酶基因(CAT)、還 原型輔酶葉綠酵基因(CYBA)、內皮型一氧化氮合成酶基因(N0S3)、胞外過氧化物岐化酶基因(S0D3)、對 氧磷酯酶l基因(P0N1)。過氧化氫酶CAT全稱catalase，編碼此酶的CAT基因位f 11p13，全長33130bp,包含13個外顯子， niRNA長2294bp，編碼528個氨基酸。過氧化氫酶是人體內一種天然的、很重要的抗氧化酶，在R0S的清 除過程中作為S0D (超氧化物岐化酶)的下游抗氧化蛋白，通過催化超氧陰離子Q由基的自身氧化還原反 應，有效清除自由基,維持體內自由基和氧化還原狀態的動態平衡，以避免損傷機體的組織細胞。隨著對 許多疾病的研究深入，研究者發現體內的氧化還原狀態與常見的一些疾病關系發生有著越來越緊密的聯 系，如高血壓，動脈粥樣硬化，亨廷頓氏綜合癥(Hungtington' s),阿爾茨海默病(Alzhemeimer)等。 由于其抗氧化的特性，過氧化氫酶基因目前己成為心血管疾病研究的候選基。rs7692M是位丁-過氧化氫酶 基因啟動子區域上的一個A/G多態，即A-844G多態，在世界人群中該多態的分布為G: A=0. 40: 0.60。有 研究表明，此位點的多態性可導致下游過氧化氫酶的表達水平的不同，從而影響與原發性高血壓的發病有 關的脂質過氧化等生理生化反應。通過分別將含有-844A和-844G的的CAT基因啟動子的片斷克隆到pGL3 載體中，轉染293細胞，再進行熒光素酶檢測，最后發現此多態性位點為G時的熒光素酶表達水平比為A 時要高，而且具有顯著性差異。關于這種由A和G造成的轉錄調控水平的差異，研究表明可能是由T兩種 啟動子結合了兩種不同的轉錄因子，或對同一種轉錄因子的親和力不同。A等位基岡含有MZF1和AP2的結 合位點，AP2調節表皮和神經特異基因的表達，而MZF1參與造血過程的調節；G等位基因含有Ikaros-2 和LYK-1的結合位點，Ikaros-2是淋巴細胞發育的土要調節岡子。此項研究表明此多態性位點的存在會影 響卜游過氧化氛酶的表達。CYBA為NAD(P)H氧化酶編碼基因，是血管平滑肌細胞和內皮細胞氧G由基最重要的來源。由氧Q由基 誘發的氧化應激反應，參與了高血壓、動脈粥樣硬化、心肌梗死等心血管病的發生發展。CYBA編譯的酶是 中胚層來源的多種細胞膜上的一組酶類。它不僅存在于巨噬細胞、神經細胞，而且還存在于心血管系統的 內皮細胞、平滑肌細胞和血管外膜成纖維細胞。NAD(P)H氧化酶系統是一個多個亞單位組成的酶的復合體， 包括P22phox 、 P47phox 、 P67phox 、 Rac和gp91phox或其他Nox家族。而在所有的NAD(P)H氧化酶中 P22phox亞單位是決定酶活性的關鍵部分。NADP在NAD(P)H氧化酶作用下形成MD(P)H,并通過P22phox 將電子傳遞給氧，形成超氧陰離子或其衍生物，此過程是血管壁上活性氧的主要來源途徑。rs4673是位于 第16號染色體上CYBA基因上的一個C/T多態，引起基因編碼蛋A的第72個氨基酸由His變為Tyr。在世界人群頻率C: 0.72T: 0.28;亞洲人群中C: 0.93 T: 0.07。 CYBA基因第242位核苷酸的C點突變為T， 使氨基酸序列第72位組氨酸被酪氨酸取代，組氨酸是血紅蛋白的結合位點，C-*T突變與NAD(P)H氧化海 功能降低密切相關，而NAD(P)H氧化酶在冠心病等心腦血管疾病發生發展中起著重要的作用。內皮型一氧化氮合成酶NOS3即nitric oxide synthase 3 (endothelial cell),常用名為eNOS。 eNOS 主要分布于冠狀血管及心腔面的內膜，主要功能是參與精氨酸和脯氨酸代謝，并催化生成(N0)。 一氧化 氮是一種內皮松弛因子，具有舒張血管、調節血流、抑制血管平滑肌細胞增殖、抑制血小板和白細胞粘附 等重要功能，參與了多種疾病的病理生理過程。在該基因第7外顯子上，894位堿基G突變成T (G894T， rsl799983),相應蛋白產物第298位上的谷氨酸則被替換成大冬氨酸(Glu298Asp)，這個位點的突變導致 eNOS功能受損，N0產生減少，血管緊張性增高而引起高血壓。2004年，van Onna等人發現了在動脈動脈 粥樣硬化患者中，eNOS基因298Asp多態要明顯高f對照組(0R=1. 44， 95%CI=1. 00-2. 09)。動脈粥樣硬 化與高血壓經常是相伴發生的；而且催化的動脈血管，更是誘發高血壓的原因。2005年，Zhu等人在美國 人群中，證實了 eN0S基因的298Asp多態，可以影響到高血壓發生的性別偏向和發病年齡，以及高血.壓發 病風險的增加。Pereira等人于2006年的最新發表的研究顯示，eNOS基因的298A印多態在高血壓患者中 的分布，依據血壓高低有區別。在血壓值高T正常血壓的50^的病人中，298Asp多態表現除了顯著的相 關性。同時，他們還指出，298Asp多態會嚴重影響到病人的血脂含量。最后，他們得到結論是，298Asp 多態會影響到血脂的量，并調節血壓。賈崇奇等對中國人群研究了內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因第7 外顯子G894T(Glu298Asp)變異與超重交互作用對早發冠心病的影響。發現eNOS基因G894T變異與超重在 早發冠心病的患病中存在明顯的正相加模型交互作用，使早發冠心病患病危險性增加近3倍；G894T變異 與超重同時存在時，早發冠心病患病危險性中約27%是由于-兩者交互作用所導致。S0D3 (Superoxide dismutase , extracellular)基因為胞外過氧化物岐化酶編碼基因。S0D3是SOD同 工酶的一種，與其他SOD同工酶一樣，可以消除體內代謝產生的反應氧族，抵御內外環境中超氧離子的損 傷，作為唯一可在胞外表達的SOD,其在脈管系統抵御氧自由基所造成損傷方面起到歪要作用，與冠心病、 動脈粥樣硬化、高血壓等心腦血管疾病密切相關。S0D3以Cu2+、 Zn2+為輔基，屬丁CuZn-SOD,分布于-血 液、淋巴、滑膜液及組織中。rsl799895是位f第四號染色體上S0D3基岡第3個外顯子處的一個G/C多態， 引起S0D3基因編碼的蛋白第231個氨基酸由Arg變為Gly，目前研究表明該氨基酸位于構成S0D3肝磷脂 結合功能域的陽性氨基酸殘基的C末端群的中心位置。變異C沒有影響到S0D3的酶活力，但使其對f肝 磷脂的結合能力下降，使得S0D3從組織間隙釋放入脈管的速度大為增加。這樣最終導致了 S0D3在血漿中 的濃度上升了 1(T30倍。相應的，SOD3在血液中的活性大為提高，而同時伴隨著組織內活性的下降。P0N1全稱paraoxonasel ( I型二乙基對氧磷酸酯酶)基因位于第七號染色體7q21. 3位置。P0N1基 因全長26.9kb, mRNA全長2393bp，含9個外顯子，8個內含子，編碼含356個氨基酸的蛋白質。人血清 對氧磷酶主要由肝臟分泌，它是一種廣譜非專一酯酶，可以水解有機磷酸酯、芳香族碳酸酯和氨基甲酸酯 等，在有機磷神經毒劑解毒中起重要作用。其主要功能為保護LDL免受氧化修飾，降低氧化型LDL (ox-LDL) 水平，防止HDL免受氧化修飾，抑制T2DM患者DNA的氧化修飾，防止內皮細胞的損傷。P0N1基因多態性 與腦卒中、動脈粥樣硬化、冠心病及2型糖尿病發病等有密切關系。rs662是位于第7號染色體上P0N1基 因第632位的一個A/G多態，引起基因編碼蛋白的第192個氨基酸由Gln變為Arg。第192個氨基酸的多 態性使酶出現2種對對氧磷酶水解活力不同的同型異構體，A型192位為精氨酸，活力低；B型192位為 谷氨酸，具有高活力。多岡素logistic冋歸分析表明P0N1的192R單倍型是動脈瘁攣、II艱糖尿病合并 冠心病的獨立危險因子。發明內容基于過氧化氫酶基因(CAT)、還原型輔酶葉綠醇基因(CYBA)、內皮型一氧化氮合成酶基因(N0S3)、 胞外過氧化物岐化酶基因(S0D3)、對氧確酯酶1基因(P0N1)上的5個SNPs位點多態性可用來評估個付 遺傳抗氧化能力的基礎上，本發明提供一種檢測個體抗氧化遺傳易感性的試劑盒。該試劑盒包括-.檢溯過氧化教酶基因上rs769214號SNP多態性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針對； 檢測還原型輔酶葉綠醇基因上rs4673號SNP多態性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針對；檢測內皮型一氧化氮合成酶基因上rs 1799983號SNP多態性基因型的特異性弓I物對及特異性熒光探針對；檢測胞外過氧化物岐化酶基因上rsl799895號SNP多態性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針對；檢測對氧磷酯酶1基因上rs662號SNP多態性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針對； 熒光定量PCR反應組件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgC:b溶液、反應緩沖液、去離子水等)。本試劑盒中所述的特異性引物對是指針對過氧化氫酶基因上rs769214號SNP位點、還原型輔酶葉綠 醇基因上rs4673號SNP位點、內皮型一氧化氮合成酶基因上rsl799983號SNP位點、胞外過氧化物岐化 酶基因上rsl799895號SNP位點、對氧磷酯酶1基因上rs662號SNP位點而設計，能特異性擴增出包含這 5個SNPs位點的DNA片段的引物對。設計這類引物對是本領域技術人員能夠輕易完成的。優選地，試劑盒 中包含具有SEQ ID NO: l和2、 3和4、 5和6、 7和8、 9和10所示序列的引物對。特異性引物對可用常 規的合成技術進行合成。本領域的技術人員能夠理解，本發明的引物不限T這五對引物。本試劑盒中所述的特異性熒光探針對是指針對過氧化氫酶基岡上rs769214號SNP位點、還原型輔酶 葉綠醇基因上rs4673號SNP位點、內皮型一氧化氮合成酶基因上rsl799983號SNP位點、胞外過氧化物 岐化酶基因上rsl799895號SNP位點、對氧磷酯酶1基因上rs662號SNP位點而設計，能通過熒光定量PCR 技術特異性檢測出這五個SNPs位點基因型的T叫raan探針對。設計這類探針是本領域技術人員能夠輕易完 成的。優選地，試劑盒中包含具有SEQ ID NO: 11和12、 13和14、 15和16、 17和18、 19和20所示序 列的T叫raan探針對。特異性熒光探針對可用常規的探針合成技術進行合成。本領域的技術人員能夠理解， 本發明的特異性熒光Taq腦n探針對不限于這五對探針，所有可用f熒光定量PCR法檢測本發明中所述用 來評估抗氧化遺傳易感性的五個SNPs位點的探針均在本發明范圍內。本發明試劑盒的組分和含量包括-5nl 10 X熒光定量PCR反應緩沖液，0. 5nl 25raM dNTP混合液，3^1 25mM MgCl2溶液，0. 125fil (5units/|iil) Taq DNA聚合酶，20nM特異性引物對每條引物各0.225nl，WjxM特異性熒光探針對每條探針各0.25p1,去離子水26. 625nl。本試劑盒供一人份檢測應用，試劑盒的保存溫度為-20°C 。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規 條件，或按照廠商所建議的條件。實施例l.檢測試劑盒的使用 步驟l: DM模板的抽取 用硅膠吸附法抽提口腔上皮細胞的基因組DNA。 步驟2:熒光定量PCR反應使用可個體抗氧化遺傳易感性的熒光定量PCR檢測試劑盒，其中，含有下列引物對和熒光探針對有義引物l: 5' _ TTTCAAAATTCCTGCTTAC -3' (SEQ ID NO: 1)反義引物l: 5' - AGAAATCTGCTTCCCC -3' (SEQ ID NO: 2)有義引物2: 5' _ TCCTCCCTCCC -3' (SEQ ID NO: 3)反義引物2: 5' - MCAGCTTCACCAC -3' (SEQ ID NO: 4)有義引物3: 5' - CCCTGCTGCTGC -3' (SEQ ID NO: 5)反義引物3: 5， - GGGGCAGAAGGAA -3' (SEQ ID NO: 6)有義引物4: 5' — GGAGCA(TCAGAGC -3' (SEQ ID NO: 7)反義引物4: 5' - GCCTTGCACTCGCTC -3' (SEQ ID NO: 8) 有義引物5: 5' - GGACCTGAGCACTTTTATG -3' (SEQ ID NO: 9) 反義引物5: 5' - TTGGACTATAGTAGACAACA -3' (SEQ ID NO: 10) 帶VIC熒光基團探針l: 5' — CTGGGaGTAAAAT _3' (SEQ ID NO: 11) 帶FAM熒光基團探針l: 5' - CTGGGgGTAMA-3' (SEQ ID NO: 12) 帶VIC熒光基團探針2: 5' - AGMGcACATGAC -3' (SEQ ID NO: 13) 帶PAM熒光基團探針2: 5' - AGAAGtACATGACC-3' (SEQ ID NO: 14) 帶VIC熒光基團探針3: 5' — AgCCCCCAGAAC -3' (SEQ ID NO: 15) 帶FAM熒光基團探針3: 5' - GAtCCCCCAGAAC-3' (SEQ ID NO: 16) 帶VIC熒光基團探針4: 5' - AGAAGcGGCGG -3' (SEQ ID NO: 17) 帶FAM熒光基團探針4: 5' - AGMGgGGCGG-3' (SEQ ID NO: 18) 帶VIC熒光基團探針5: 5' - CgATCCTGGGAGA -3' (SEQ ID NO: 19) 帶FAM熒光基團探針5: 5' — CaATCCTGGGAGAT-3' (SEQ ID NO: 20)有義引物1，反義引物1、帶VIC熒光基團探針1、帶FAM熒光基團探針1特異地針對檢測過氧化氫酶 基因上rs769214號SNP位點多態性；有義引物2,反義引物2、帶VIC熒光基團探針2、帶FAM熒光基團探針2特異地針對檢測還原型輔酶 葉綠醇基因上rs4673號SNP位點多態性；有義引物3，反義引物3、帶VIC熒光基團探針3、帶PAM熒光基團探針3特異地針對檢測內皮型一氧 化氮合成酶基因上rsl799983號SNP位點多態性；有義引物4，反義引物4、帶VIC熒光基團探針4、帶FAM熒光基團探針4特異地針對檢測胞外過氧化 物岐化酶基因上rsl799895號SNP位點多態性；有義引物5，反義引物5、帶VIC熒光基團探針5、帶FAM熒光基團探針5特異地針對檢測對氧磷酯酶 1基因上rs662號SNP位點多態性5個SNPs位點分別進行5次獨立的熒光定量PCR反應，每個反應的體系為總體積1(^1，包含濃度為 20ng/nl的DNA模板2pl、 lpl 10 X熒光定量PCR反應緩沖液、0. lpl 25mM dNTP混合液、0. 61 25mMMgCl2 溶液、0.025nl (5units/nl) Taq DNA聚合酶、20nM的有義引物和反義引物各0. 225^1、 lOpM的帶VIC 熒光探針和帶FAM熒光探針各0. 25^1，去離子水5. 325til。在ABI9700型PCR擴增儀上進行反應，反應條件為50'C、 2分鐘，95°C、 10分鐘，進行60個循環的 95°C、 30秒，60°C、 l分鐘。反應結束后在ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量。步驟3: SNP基因型分析熟悉熒光定量PCR技術的本領域技術人員能夠通過辨識熒光定量PCR儀上顯示的最終樣品熒光量，根 據不同序列探針VIC和FAM熒光信號的強弱即可確定所檢測的SNP位點的基因型。實施例2.對人們進行個體抗氧化遺傳易感性檢測的服務 步驟l: DNA提取由醫院檢驗科醫師指導被檢者使用口腔采樣拭進行口腔上皮細胞取樣，采用硅膠吸附法進行口腔上皮 細胞的DNA抽提。步驟2:基因分型檢測使用本發明提供的試劑盒，對被檢測者基因組DNA的過氧化氫酶基岡上rs76924號SNP位點、還原 型輔酸葉綠醇基因上rs4673號SNP位點、內皮型一氧化氮合成酶基因上rsl799983號SNP位點、胞外過 氧化物岐化酶基因上rsl799895號SNP位點、對氧磷酯酶1基因上rs662號SNP位點分別進行熒光定量PCR 檢測，確定這五個SNPs位點的基因型。步驟3:個體抗氧化遺傳易感性的分析通過對被檢測者SNPs基因型的分析，出具個體抗氧化遺傳易感性的分析報告單。報告中詳細說明了 被檢測者抗氧化遺傳能力的髙低，并由醫師向被檢者詳細說明和解讀個體抗氧化遺傳易感性分析報告單。序列表<110〉上海主健生物工程有限公司<120> —種檢測個體抗氧化遺傳易感性的試劑盒<勝20<210〉 1 <211〉 19 <212> DNA <213>人工序列〈220〉<223〉引物 <400> 1TTTCAAAATT CCTGCTTAC 19〈210〉 2 <211> 16 <212〉腿 <213>人工序列〈220〉<223>引物 <400> 2AGAAATCTGC TTCCCC 16<210> 3 〈211> 11 <212>腿 <213〉人工序列<220>〈223>引物 <400> 3TCCTCCCTCC C 11〈210〉 4<211〉 14 〈212〉 DNA <213>人工序列<220〉<223〉引物 <400〉 4AACAGCTTCA CCAC<210> 5 〈211〉 12 <212> DNA <213>人工序列<220><223〉引物 <400〉 5CCCTGCTGCT GC<210> 6 <211〉 13 <212> DNA <213>人工序列<220><223>引物 <400> 6GGGGCAGAAG GAA〈210〉 7 〈211〉 14 <212> DNA 〈213〉人工序列<220〉<223>引物 <400〉 7GGAGCACTCA GAGC<210> 8<211> 15<212> DNA <213>人工序列〈220><223>引物200710037167. 5■> 8GCCTTGCACT CGCTC<210> 9 <211〉 19 <212〉鵬 <213>人工序列<220〉<223〉引物 <400> 9GGACCTGAGC ACTTTTATG<210> 10 <211> 20 <212〉 DNA <213>人工序列<220〉<223〉引物 <400> 10TTGGACTATA GTAGACAACA〈210> 11 <211> 13 <212> DNA <213>人工序列<220〉<223〉探針 <400> 11CTGGGaGTAA AAT〈210〉 12<211> 12<212〉 DNA <213>人工序列<220〉〈223〉探針 <400〉 12CTGGGaGTAA AA200710037167. 5說明書第8/9頁<210> 13 <211> 13 <212>腿 〈213>人工序列<220〉<223>探針 〈400> 13AGAAGcACAT GAC 13<210> 14 <211> 14 〈212〉 DNA <213>人工序列<220><223>探針 <400> 14AGAAGtACAT GACC 14<210> 15 <211> 12 <212〉 DNA <213>人工序列<220>〈223 >探針 〈德15AgCCCCCAGA AC 12<210> 16 <211> 13 <212> DNA <213>人工序列〈220〉<223>探針 <400> 16GAtCCCCCAG AAC 13 〈210> 17〈211〉 11 <212> DNA <213〉人工序列<220〉〈223〉探針 <400> 17AGAAGcGGCG G U<210> 〈211〉 <212> 〈213>18 11 腿人工序列<220〉<223>探針 <400〉 18AGAAGgGGCG G 11<210> 19 <211> 13 <212>腿 <213〉人工序列<220>〈223>探針 〈400〉 19CgATCCTGGG AGA 13<210> <211〉 <212> <213>20 14 DNA人工序列<220><223〉探針 〈400〉 20CaATCCTGGG AGAT 1權利要求
1. 一種檢測個體抗氧化遺傳易感性的試劑盒，其特征在于包括同時檢測過氧化氫酶基因上rs769214號SNP位點、還原型輔酶葉綠醇基因上rs4673號SNP位點、內皮型一氧化氮合成酶基因上rs1799983號SNP位點、胞外過氧化物岐化酶基因上rs1799895號SNP位點、對氧磷酯酶1基因上rs662號SNP位點的特異性引物對及特異性熒光探針對、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、熒光定量PCR反應緩沖液、去離子水。
2. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的特異性引物對是指針對過氧化氫酶基因上 rs769214號SNP位點、還原型輔酶葉綠醇基因上rs4673號SNP位點、內皮型一氧化氮合成酶基因上 rsl799983號SNP位點、胞外過氧化物岐化酶基因上rsl799895號SNP位點、對氧磷酯酶1基因上rs662 號SNP位點而設計，能特異性擴增出包含這5個SNPs位點的DNA片段的引物對。
3. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的特異性熒光探針對是指針對過氧化氫酶基因 上rs769214號SNP位點、還原型輔酶葉綠醇基因上rs4673號SNP位點、內皮型 一氧化氮合成酶基因上 rsl799983號SNP位點、胞外過氧化物岐化酶基因上rsl799895號SNP位點、對氧磷酯酶1基丙上rs662 號SNP位點而設計，能通過熒光定量PCR技術特異性檢測出這五個SNPs位點基因型的T叫腿n探針對。
4. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在T:所含的特異性引物對選自具有SEQIDNO: l和2、 3 和4、 5和6、 7和8、 9和IO所示序列的引物對。
5. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所含的特異性熒光探針選Q具有SEQ ID N0: 11和 12、 13和14、 15和16、 17和18、 19和20所示序列的Taqman探針對。
6. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于試劑盒的組分和含量包括5^1 IOX熒光定量PCR反 應緩沖液、0. 5nl 25mM dNTP混合液、3^1 25mMMgCl2溶液、0. 125pl (5units/nl) T叫DNA聚合嗨、20nM 特異性引物對每條引物各0.225nl、 1(^M特異性熒光探針對每條探針各0.25fil、去離子水26. 625"。本 試劑盒供一人份檢測應用，試劑盒的保存溫度為-20°C 。
全文摘要
本發明公開了一種檢測個體抗氧化遺傳易感性的試劑盒。該試劑盒包括同時檢測過氧化氫酶基因(CAT)上rs769214號SNP位點、還原型輔酶葉綠醇基因(CYBA)上rs4673號SNP位點、內皮型一氧化氮合成酶基因(NOS3)上rs1799983號SNP位點、胞外過氧化物岐化酶基因(SOD3)上rs1799895號SNP位點、對氧磷酯酶1基因(PON1)上rs662號SNP位點的特異性引物對及特異性熒光探針對、用于熒光定量PCR檢測的常規組件等。本發明的試劑盒通過同時檢測與抗氧化能力密切相關的CAT、CYBA、NOS3、SOD3、PON1的單核苷酸多態性位點基因型來評估個體抗氧化遺傳易感性。
文檔編號G01N21/00GK101241066SQ20071003716
公開日2008年8月13日 申請日期2007年2月6日 優先權日2007年2月6日
發明者馮哲民, 鄒祖燁 申請人:上海主健生物工程有限公司