專利名稱：一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質量檢測方法
技術領域：
本發明屬中藥成方制劑領域，具體來說是涉及一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質量檢測方法。
背景技術：
以蒲黃、丹參、地黃等制成的治療眼底出血的中藥制劑和血明目具有涼血止血、滋陰化瘀、養肝明目。用于陰虛肝旺，熱傷絡脈所引起的眼底出血。然而中藥成份比較復雜，含有許多未知成份。目前既能有效控制治療急性咽喉炎的中藥制劑的產品質量，又能操作方便的檢測方法，還沒有報道。
發明內容
本發明的目的在于提供一種能有效控制中藥制劑和血明目質量，準確度高的質量檢測方法。
為達到上述目的，本發明采用的技術方案為一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質量檢測方法，將菊花、黃芩、半量的車前子、半量的蒲黃，混合粉碎成細粉，備用；剩余車前子、蒲黃與其余丹參、地黃、墨旱蓮、決明子、茺蔚子、女貞子、夏枯草、龍膽、郁金、木賊、赤芍、牡丹皮、山楂、當歸、川芎加水浸泡30分鐘，煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過。濾液減壓濃縮至60℃時相對密度為1.35～1.39的稠膏，加入上述細粉混合均勻，60℃烘干，粉碎成細粉，加入糊精，用85％乙醇制成顆粒，60℃烘干，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得，其檢測方法包括以下步驟
(1)取本品10片(每片0.3g)，除去包衣，研細，加乙醇20ml，浸漬1小時后，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取墨旱蓮對照藥材1g，加乙醇20ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品10片(每片0.3g)，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取本品10片(每片0.3g)，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取決明子對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素、大黃酚對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)取本品20片(每片0.3g)，除去包衣，研細，加熱水30ml使溶解，用稀鹽酸調節PH值為2-3，離心，取上清液用乙酸乙酯振搖提取二次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶6∶3∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)丹參素的含量測定對照品溶液的制備取丹參素對照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用50％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參素0.01mg的對照品溶液；供試品溶液的制備取本品20片(每片0.3g)，除去包衣，精密稱定，研細，取1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加50％甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90的甲醇-0.5％醋酸為流動相；檢測波長為281nm；理論板數按丹參素峰計算應不低于1500；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中丹參素的含量。
本發明通過試驗得出，每片含丹參以丹參素(C9H10O5)計，不得少于0.25mg。
本發明的治療眼底出血的中藥制劑包括丸劑、膠囊劑、顆粒劑、片劑常規劑型。
本發明相對于現有技術的優點為本發明提供了對黃芩苷、大黃素、大黃酚、原兒茶醛的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開劑，能對該制劑進行有效的定性鑒別。此外本發明改進了丹參中主要成分的含量測定方法，采用高效液相色譜法對丹參素進行含量測定，制定出了最佳的供試品制備方法和流動相配制方法，克服了原測定丹參中主要成分丹參酮II A方法步驟多、時間長、有機溶劑用量多的缺點，大大提高含量檢測的準確度。本方法的建立，有利于市場上對治療眼底出血中藥制劑和血明目的真偽優劣進行鑒別。
四、具體實施例以下通過治療眼底出血中藥制劑和血明目質量檢測方法的實施例進一步說明本發明的有益的效果將菊花、黃芩、半量的車前子、半量的蒲黃，混合粉碎成細粉，備用；剩余車前子、蒲黃與其余丹參、地黃、墨旱蓮、決明子、茺蔚子、女貞子、夏枯草、龍膽、郁金、木賊、赤芍、牡丹皮、山楂、當歸、川芎加水浸泡30分鐘，煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過。濾液減壓濃縮至60℃時相對密度為1.35～1.39的稠膏，加入上述細粉混合均勻，60℃烘干，粉碎成細粉，加入糊精，用85％乙醇制成顆粒，60℃烘干，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得，其檢測方法包括以下步驟(1)取本品10片，除去包衣，研細，加乙醇20ml，浸漬1小時后，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取墨旱蓮對照藥材1g，加乙醇20ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品10片，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取本品10片，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取決明子對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素、大黃酚對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)取本品20片，除去包衣，研細，加熱水30ml使溶解，用稀鹽酸調節PH值為2-3，離心，取上清液用乙酸乙酯振搖提取二次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶6∶3∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)丹參素的含量測定對照品溶液的制備取丹參素對照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用50％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參素0.01mg的對照品溶液；供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加50％甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90的甲醇-0.5％醋酸為流動相；檢測波長為281nm；理論板數按丹參素峰計算應不低于1500；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中丹參素的含量。
重復上述步驟一次，計算樣品中丹參素含量的平均值為0.32mg/粒。
用實施例所述質量檢測方法反復試驗9次，得出丹參素含量(mg/粒)平均值，結果見下表
實驗報告1、儀器與試藥儀器Shimadzu 10A型高效液相色譜儀，日本島津。LC-10AVP輸液泵，SPD-10AVP型紫外檢測器。
試藥甲醇為色譜純，水為超純水，其它化學試劑均為分析純。
對照品丹參素，由上海醫科大學藥學院提供。
供試品和血明目片。
2、色譜條件色譜柱C18色譜柱，150×4.6mm；流動相甲醇-0.5％醋酸(10∶90)。
柱溫室溫檢測波長281nm靈敏度0.2AUFS
3、提取完全性考察根據提取條件分析，正文樣品溶液的制備過程，主要受超聲處理的影響，因此，我們對其進行考察與比較。
超聲處理時間對提取完全性的影響 取同一批樣品(批號001228)，約1.0g，共三份，精密稱定，置100ml量瓶中，加入50％甲醇90ml，分別按15、30、45分鐘不同時間進行超聲處理，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。按上述色譜條件，依法測定，試驗結果請見表1。
表1超聲處理試驗及結果
試驗結果表明，超聲處理30分鐘，丹參素即可提取完全，故選擇30分鐘為超聲處理時間。
4、方法學考察線性關系及范圍的考察精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10μl，分別注入液相色譜儀，依法測定，結果請見表2。
表2線性關系考察試驗及結果
以進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，并進行直線回歸，回歸方程為Y＝237216X-1806.5，r＝0.9991。試驗結果表明，本方法進樣量在0.0208～0.104mg范圍內，呈良好的線性關系。
精密度試驗精密吸取同一對照品溶液5μl，連續重復進樣5次，測定峰面積積分值，試驗結果請見表3。
表3精密度試驗及結果
試驗結果表明，本方法具有良好的精密度。
穩定性試驗精密吸取同一批(批號010110)供試品溶液，按0、2、4、8小時時間間隔，分別注入液相色譜儀進行測定，試驗結果請分別見表4。
表4穩定性考察試驗與結果
試驗結果表明，樣品溶液在8小時內，積分值穩定。
重現性試驗取同一批(批號010121)樣品5份，按正文方法重復進行處理測定，結果請見表5。
表5樣品重復性試驗及結果
試驗結果表明，本方法5次重復測定的相對標準偏差RSD＝1.77％，說明其重現性較好。
回收率試驗采用加樣回收試驗法，精密稱取同一批(批號010114)樣品0.5g，精密稱定，分別精密加入對照品溶液，揮干，依法測定，試驗結果請見表6。
表6加樣回收試驗及結果
試驗結果表明，本方法具有較高的回收率，其平均回收率為99.42％，相對標準偏差為RSD＝1.58％。
5、樣品中鹽酸小檗堿含量測定分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液5μl，按正文方法進行含量測定，結果請見表7。
表7十批樣品含量測定結果
7、含量限度的確定從十批樣品測定結果來看，含量有一定變化，考慮到不同產地丹參藥材中所含丹參素有一定差異及提取率等方面的影響，暫定本品含丹參以丹參素計，每片不得少于0.2mg。
權利要求
1.一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質量檢測方法，將菊花、黃芩、半量的車前子、半量的蒲黃，混合粉碎成細粉，備用；剩余車前子、蒲黃與其余丹參、地黃、墨旱蓮、決明子、茺蔚子、女貞子、夏枯草、龍膽、郁金、木賊、赤芍、牡丹皮、山楂、當歸、川芎加水浸泡30分鐘，煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過；濾液減壓濃縮至60℃時相對密度為1.35～1.39的稠膏，加入上述細粉混合均勻，60℃烘干，粉碎成細粉，加入糊精，用85％乙醇制成顆粒，60℃烘干，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，即得成品，其特征在于包括以下步驟(1)取本品0.3g，研細，加乙醇20ml，浸漬1小時后，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取墨旱蓮對照藥材1g，加乙醇20ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品0.3g，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取本品0.3g，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取決明子對照藥材1g，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素、大黃酚對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)取本品0.6g，研細，加熱水30ml使溶解，用稀鹽酸調節PH值為2-3，離心，取上清液用乙酸乙酯振搖提取二次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶6∶3∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)丹參素的含量測定對照品溶液的制備取丹參素對照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用50％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml中含丹參素0.01mg的對照品溶液；供試品溶液的制備取本品0.6g，精密稱定，研細，取1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加50％甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90的甲醇-0.5％醋酸為流動相；檢測波長為281nm；理論板數按丹參素峰計算應不低于1500；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中丹參素的含量。
2.如權利要求1所述的一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質量檢測方法，其特征在于所述的中藥制劑每0.3g含丹參以丹參素計，不得少于0.25mg。
3.如權利要求1或2所述的一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質量檢測方法，其特征在于所述中藥制劑的劑型包括丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑常規劑型。
全文摘要
本發明屬中藥成方制劑領域，具體來說是涉及一種治療眼底出血中藥制劑和血明目的質量檢測方法。本發明提供了對黃芩苷、大黃素、大黃酚、原兒茶醛的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開劑，能對該制劑進行有效的定性鑒別。此外本發明改進了丹參中主要成分的含量測定方法，采用高效液相色譜法對丹參素進行含量測定，制定出了最佳的供試品制備方法和流動相配制方法，克服了原測定丹參中主要成分丹參酮IIA方法步驟多、時間長、有機溶劑用量多的缺點，大大提高含量檢測的準確度。本方法的建立，有利于市場上對治療眼底出血中藥制劑和血明目的真偽優劣進行鑒別。
文檔編號G01N30/90GK101028487SQ20071001758
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月4日 優先權日2007年4月4日
發明者黃小華, 付彬, 張 浩, 王敏 申請人:西安碑林藥業股份有限公司