專利名稱：：診斷動物體重狀況或傾向的方法
技術領域：
：本發明涉及診斷動物的體重狀況(condition)或傾向(predisposition)的方法。本發明還涉及計算動物的體況評分(bodyconditionscore)的方法。現有技術肥胖癥的流行在人和非人群體中都有增加。人類的肥胖率達到了流行病比例。此外，研究表明在所有美國家庭寵物中有25%-40%超重或肥胖，這個趨勢正導致超重相關性寵物疾病的穩步上升和不斷增加的獸醫花銷。超重會成為發展多種失調(disorder)或疾病的危險因素。例如已將肥胖癥與心臟病、退行性關節病、糖尿病和癌癥等病癥關聯起來。此外，超重動物可能會因為活動性的減少和總生活質量的下降而體驗到諸多問題。超重狀況的預防會具有終生的效果，了解有關發展這種狀況的危險因素會導致產生出能優化總體健康的改進的預防和治療方案。已將包括例如血漿瘦蛋白在內的各種生物標志(biomarker)與食物攝取和體脂肪關聯起來。Shiiyaetal.(2002)J.Clin.Endocrinol.Metab.87(l):240-244報道說，肥胖人中的血漿生長素釋放肽濃度低于體瘦人。盡管人們知道超重狀況對健康的影響，但要治療這種狀況仍是一個難題，其原因中有一個是對維持這種狀況的生理系統中出現的內在生理機制或變化知之甚少。通過傳統技術測量體重是有用的，但這樣獲得的信息是粗糙的，可能不太有助于了解與體重狀況如肥胖癥有關的內在生理或生化過程。此外，在檢測或診斷體重正常的動物中肥胖癥或其他體重狀況的傾向方面，這種傳統技術的價值有限。例如，動物的"體況評分"(BCS)常規上被用作對動物的身體組成進行分類的手段。動物的BCS的測定是基于動物健康護理專業人員對動物的身體大小和形狀的視覺和觸覺分析。例如，根據這個方法，BCS"1"表示精痩(emaciated)的動物，"2"表示瘦小(thin)的動物，"3"表示動物的最佳體況(optimalbodycondition),"4"表示肥滿(fat)的動物，"5"表示肥胖(obese)的動物。動物的BCS的測定是本領域技術人員熟悉的；有幾種方法為技術人員所知道，例如在美國專利第6,691,639號和在標題為"SmallAnimalClinicalNutrition"的參考書(ISBN0-945837-05-4，第4版，第13章)中公開的方法。雖然BCS測定得到廣泛的使用，但這個方法不夠理想，因為它是相當主觀性的分析，不同的人員對相同的動物可能會確定出完全不同的BCS,這樣的結果并不少見。因此，仍需要有效的方法來診斷動物的體重狀況或傾向和準確地測定這種動物的體況評分。我們出乎意料地發現并在此報道基于從動物獲得的生物標志數據來定量動物的體況評分的方法。這種生物標志數據還可用來診斷動物的體重狀況和/或傾向，以及用來診斷動物的肥胖癥相關性健康失調或該失調的傾向。發明概述本發明提供診斷動物的體重狀況或其傾向的方法。所述方法包括測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較，其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向。本發明還提供定量動物的體況評分的方法，所述方法包括(a)分析所述動物的體重和至少一種生物標志的血清水平；和(b)將步驟(a)獲得到所述凄t據應用于本文描述的本發明算法I-IV中的任何一個。本發明還提供為動物選擇養生方案(regimen)的方法。所述方法包括(a)通過測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較，來診斷體重狀況或其傾向；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向；和(b)確定適于所-滲斷出的該體重狀況或傾向的養生方案。本發明另外還提供檢測動物的體重狀況或傾向的起始(onset)的方法。所述方法包括在一革殳時間內監測該動物的至少一種生物標志，做法是在該時間段內取多個時間點在每個時間點時都測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的該生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較；其中在任何時間點如果相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向，則才企測到起始。本發明另外還提供評估某養生方案管理動物的體重狀況或傾向的效果的方法。這個方法包括在執行該養生方案的時間段內監測該動物的至少一種生物標志，做法是在該時間段內取多個時間點在每個時間點時都測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的該生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示該養生方案管理體重狀況或傾向的效果。本發明另外還提供試劑盒，該試劑盒包含(a)—種或多種用以檢測來自動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的^L測水平的試劑；和(b)—種或多種攜帶信息的用戶可使用媒介(user-accessiblemedia),所述信息包括(i)該生物標志的參考水平；和(ii)將該觀測水平與該參考水平進行比較的算法；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示該動物的體重狀況或傾向。本發明另外還提供診斷動物的肥胖癥相關性健康狀況或其傾向的方法，所述方法包括測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的觀測水平，并將該7見測水平與該生物標志的參考水平進行比較；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向。具體的說，該方法可用于^^斷骨關節炎，其中該生物標志是堿性磷酸酶、骨4丐蛋白、氨基酸末端交聯端肽、II型軟骨合成、軟骨寡聚基質蛋白或者羧基末端交聯端肽。優選地，該生物標志是堿性磷酸酶或II型軟骨合成。本發明的另外的目標、特征和優點對本領域技術人員來說將會是顯而易見的。發明詳迷按照本發明已發現，來自動物的組織或生物流體樣品中的某些生物標志的水平出乎意料地能有效用來計算動物的體況評分。另外，生物標志數據還可用于診斷該動物的體重狀況的方法中。這種生物標志的水平可從餐前狀態到餐后狀態波動。但是，體重狀況不同的個體動物，例如體瘦(lean)和肥胖的動物，在這種波動的形式和/或程度方面以及在禁食狀態時的生物標志絕對水平方面都顯示差異。因此，一種或多種生物標志的譜型(profile)能指示體重狀況。此外，這種譜型能指示體重狀況的傾向，甚至在該狀況尚未得到表達的情況中也能指示，且還可用來診斷動物的肥胖癥相關性健康失調或其傾向。因此，這種譜型可用于管理動物的體重和健康后果，該健康后果可能與該動物中存在的或者該動物傾向發生的體重狀況有關聯。本發明的目的生物標志是這樣的生物標志，其相對于參考水平的觀測水平指示體重狀況或傾向。根據一些實施方案，參考水平可從獲自正常體重的健康動物的樣&建立，或者可以是公布的數值。通常，參考水平是以相同物種的動物為對象建立，如有可能的話以相同品種或品種類型的動物為對象建立。此外，通常優選的參考水平是以與該動物類似年齡組的動物為對象建立。這種參考水平的確定，包括確定動物的"正常"體重，會是本領域技術人員所熟悉的。在這個情況中，實質上差異于(例如高于或低于)參考水平的觀測水平能指示體重狀況或傾向。這種差異可以是但不必要是統計學上顯著的。或者，參考水平可以已知具有特定的體重狀況或傾向的動物為對象建立；在這種情況中類似于參考水平的觀測水平可指示該狀況或傾向。生物標志的水平能提供關于與特定現存的體重狀況(例如正常體重、超重、肥胖)有關的內在遺傳、生化或生理因素、機制或途徑的信息，但這樣未必提供足夠信息。在一些情況中，生物標志的水平與觀測到的體重狀況或傾向之間的統計學相關性，能足夠用于本發明的實施。但是，在生物標志提供關于遺傳、生化或生理相關性的信息的情況中，相對于僅依賴與體重有關的物理測量的傳統方法來說，優勢會是特別大的。動物可以是人或非人。在各個實施方案中，動物是脊推動物，例如魚、鳥、爬^f亍動物或哺乳動物。在哺乳動物當中，示例性的動物可以是食肉目(Carnivora)的成員，包括但不限于犬科和貓科動物物種。在一個實施方案中，動物是牛、馬、豬或其他形式的家畜，對于這些家畜來說體況評分和/或體章,況的測定是重要的。在一個實施方案中，動物是伴侶動物。"伴侶動物"在本文中是指任何物種的被護理人作為寵物來祠養的動物個體，或者多個物種的已被普遍馴養成寵物的動物個體，包括狗(家犬，Canisfamiliaris)和貓(家貓，Felisdomesticus),而不管該動物個體是否僅僅是或部分上是為了作為伴侶而^皮祠養。因此，本文中的"伴侶動物"包括工作犬、祠養來控制嚙齒動物的田貓等以及寵物狗和貓。在一些實施方案中，動物是犬科動物。在其他實施方案中，動物是貓科動物。本文還設想到，本發明的方法可應用到人，例如用以定量人的"體況評分"，該體況評分更通常稱為"體重指數"或BMI。由于BMI通常是指動物的體重(公斤)除以其身高(米)平方，可能需要對本文公開的算法進行轉換以計算BMI,。本領域技術人員可容易地完成這一點。根據本發明基于生物標志分析對照參考樣品而診斷出的"體重狀況"，可以是確定出動物是體重不足、正常體重、超重或肥胖。體重通常不僅僅是單單體重的問題，而是往往與體脂肪的數量或百分數有關。參見例如Burkholder&Toll(2000)在Handetal.(eds.)，SmallAnimalClinicalNutrition,4thEdition,Chapter13,pp402-430中的內容。本文所用的"體重傾向"是指動物增加、失去或保持體重(proneness)(即傾向性(propensity))。因此，體重傾向的實例包括增加體重的傾向性或該傾向性的缺乏及肥胖癥的傾向。本文所用的動物的"體況評分"(BCS)是指對動物的身體組成進行分類的手段。動物的BCS的確定傳統上是基于動物健康護理專業人員對動物的身體大小和形狀的視覺和觸覺分析。根據這個傳統方法，BCS'T，表示精瘦的動物，"2"表示瘦小的動物，"3"表示動物的最佳體況，"4"表示肥滿的動物，"5"表示肥胖的動物。動物的BCS的常規測定是本領域技術人員熟悉的；有幾種方法為技術人員所知道，例如在美國專利第6，691，639號和在標題為"SmallAnimalClinicalNutrition"的參考書(ISBN0-945837-05-4，第4版，第13章)中公開的方法。根據一個實施方案，體重傾向是在動物年幼時，例如在犬科動物或貓科動物的情況中最多約1歲，通過本發明的方法進行診斷的。超重或肥胖狀況可能是多種疾病和失調的關聯性原因或惡化性因素。這種肥胖癥相關性疾病和健康失調包括例如代謝改變、內分泌病、功能改變、退行性關節和整形外科疾病、心血管疾病、癌癥、睡眠障礙、生殖障礙和它們的組合。超重狀況還會因為活動性的減少或生活質量的下降而造成諸多問題。因此，在一個實施方案中，由實施本發明而診斷出的體重狀況或傾向，是增加動物發生肥胖癥相關性健康失調的風險的體重狀況或傾向。這種超重或肥胖癥相關性健康失調舉例說包括高脂血癥、血脂異常、胰島素抗性、葡萄糖不耐受、肝脂沉積、麻醉并發癥、腎上腺皮質功能亢進、甲狀腺機能減退、糖尿病、胰島瘤、垂體嫌色細胞腺瘤、垂體機能減退、下丘腦損害、關節壓迫(jointstress)、肌肉骨骼疼痛、呼吸困難、高血壓(hypertension)、難產、運動不耐受、熱不耐受、免疫功能下降、退行性關節和整形外科疾病(例如骨關節炎)、心血管疾病、過度緊張(hypertension)、呼吸窘迫、腎功能改變、胰腺炎、移行細胞癌、疲勞、睡眠障礙、生殖障礙和它們的組合。術語"生物標志"指能在組織或生物流體樣品中進行定量鑒定且能提供與特定表型或生理狀況的相關性的物質。舉例說，生物標志可以是細胞因子，例如炎性細胞因子；肽或蛋白質，例如肽YY、神經肽Y、胰高血糖素樣肽1(GLP-I)、堿性磷酸酶、生長素釋放肽；核酸，例如對應于肽或蛋白質生物標志的mRNA轉錄物、生化代謝物如葡萄糖；神經遞質；激動劑；拮抗劑；或者其他生物標志如曱狀腺素、甲狀腺刺激激素、胰島素樣生長因子-1、瘦蛋白、血管緊張素I和II、c-反應性蛋白、高密度脂蛋白l和2、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、乳糜微粒、睪酮、雌二醇、皮質醇、骨鈣蛋白、氨基末端交聯蛋白、II型軟骨合成或軟骨寡聚基質蛋白。在各個實施方案中，對至少一種以下生物標志的水平進行測定葡萄糖、GLP-1、生長素釋放肽、瘦蛋白、脂連蛋白、抗性蛋白(resistin)、抗性蛋白樣分子、c-反應性蛋白、曱狀腺刺激激素和胰島素。特別有用的生物標志包括葡萄糖、GLP-1、c-反應性蛋白、甲狀腺刺激激素和生長素釋放肽。術語"肥胖癥生物標志"在本文中是指能在組織或生物流體樣品中進行定量鑒定且能提供與肥胖癥的相關性的物質。肥胖癥生物標志的實例包括但不限于膽固醇、甘油三酯、胰高血糖素樣蛋白-1、胰島素樣生長因子-1、生長素釋放肽;瘦蛋白、GLP-1、血管緊張素I和II、高密度脂蛋白-1、高密度脂蛋白-2、低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白。本文所用的術語"關節炎生物標志"是指能在組織或生物流體樣品中進行定量鑒定且能提供與以身體關節損害為特征的病癥(例如關節炎或骨關節炎)的相關性的物質。關節炎生物標志的實例包括但不限于骨4丐蛋白、氨基末端交聯端肽、堿性磷酸酶、羧基末端交聯端肽、II型軟骨合成和軟骨寡聚基質蛋白。本文所用的術語"甲狀腺生物標志"是指能在組織或生物流體樣品中進行定量鑒定且能提供與曱狀腺疾病或失調的相關性的素。人、、、、'、、、''、、'通過本發明方法對體重狀況或傾向的診斷會涉及到一種以上的生物標志的測定。在一些情況中，單一的生物標志就能指示體重狀況或傾向；在其他情況中，包含兩種或多種生物標志的水平的生物標志譜型共同地指示該狀況或傾向。在其他情況中，包含至少一種生物標志和其他血液化學物質如鈉、鉀、氯化物、磷、膽紅素、肌酸酐或血清尿素氮的水平的譜型共同地指示該狀況或傾向。任何組織或生物流體樣品都可以是目的生物標志的來源。但是，在大多數情況中，優選的是能以最小的侵入性獲得的生物流體樣品。生物流體舉例說包括全血、血清、血漿、腦脊髓液、齦溝液、尿液、淋巴液、肌肉內液、鼻分泌液和唾液。生物標志的水平可用本領域公知的測定法進行測定。測定法可以是但不必要是可市售獲得的測定法。通常，根據生物標志的類型和樣品的類型來選擇測定法。例如，可使用市售的基于單克隆抗體的免疫測定法(其采用對多肽上一個或多個表位具有反應性的單克隆抗體)或者竟爭性結合測定法，來測定蛋白質生物標志如GLP-1或生長素釋放肽的血清水平；可使用基于鐵氰化物、己糖激酶或葡萄糖氧化酶方法的測定法，來測定葡萄糖的血清水平。在一些實施方案中，觀測水平和/或參考水平是用一種或多種獨立選自以下的測定法進行測定酶免疫測定(EIA)、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、免疫熒光測定(IFA)、放射免疫測定(RIA)、蛋白質印跡測定、生化測定、酶學測定和比色測定。有多種標記(label)和綴合技術是本領域技術人員公知的，它們可用于各種生化、核酸和氨基酸測定中。組織或生物流體樣品可例如在護理設施的場所收集以供進行評估和診斷，該場所就是動物能得到健康護理人員(例如醫生、獸醫、醫生助理、內科醫師助理、護士等)的看護的地點。護理設施的場所的非限制性實例包括醫院、內科醫師或獸醫的辦公室和獸醫診所。或者，可在飼養動物的動物住所、農場、廄棚或棚屋收集樣品。對樣品中的一種或多種目的生物樣品的分析，可在采集樣品的地點例如護理設施的場所進行。本文所述的試劑盒可用于這種分析。或者，可將樣品送到第二設施。術語"第二設施"指進行臨床樣品的評估的實驗室如商業測試實驗室，它可以是在護理設施的場所以外的地點(即在別的位置)。在一些實施方案中，一種或多種生物標志的觀測水平與參考水平的比較，是在護理設施或第二設施的場所進行。在樣品是在單個時間點采集的情況中，這可以在動物的飼養周期的任何階段進行，例如在臨進餐時(餐前)或在進餐后合適的時間間隔(餐后)進行。但是，通常優選的是，當診斷要基于單一樣品時，這種樣品要在動物處于禁食狀態時(例如在餐前時間點)進行采集。任選地，樣品在飼養周期中的多個時間點采集。在這種情況中，可采集至少一個(通常就是一個)餐前樣品和至少一個(通常超過一個)餐后樣品。合適的時間點舉例說是O分鐘(餐前)，餐后10、30、60、120和360分鐘。樣品例如血清樣品中的生物標志水平可不進行調整，或者可按動物的體重進行調整。不進行調整的水平可以用重量/體積濃度單位如mg/L、[ig/L或ng/L或者摩爾濃度單位如[imol/L、mmol/L或pmol/L表示。進行調整的水平可用類似的單位表示，但以體重(BW)作為除數，例如mg/L/kgBW、pmol/L/kgBW等。在一個實施方案中，動物是犬科動物，生物標志包括血清中的葡萄糖。根據這個實施方案，禁食動物中的觀測體重調整的血清葡萄糖水平比正常體重的犬科動物的體重調整的參考水平低至少約10%的話，指示該動物有增加體重的傾向。在另一個實施方案中，動物是犬科動物，生物標志包括血清中的GLP-1。根據這個實施方案，禁食動物中的觀測體重調整的血清GLP-1水平比正常體重的動物的體重調整的參考水平低至少約200/。的話，指示該動物有增加體重的傾向。在又一個實施方案中，動物是犬科動物，生物標志包括血清中的生長素釋放肽。根據這個實施方案，禁食動物中的觀測體重調整的血清生長素釋放肽水平比正常體重的犬科動物的體重調整的參考水平低至少約20%的話，指示該動物有增加體重的傾向。在又一個實施方案中，本發明涉及定量動物的體況評分的方法，所述方法包括(a)分析所述動物的體重和葡萄糖、鈉、氯化物、c-反應性蛋白和曱狀腺刺激激素的血清水平；和(b)將步驟(a)獲得的數據應用于以下算法體況評分=3.62352+(0.17443x體重(kg))+(0.01621x葡萄糖(mg/dL))+(0.06496x鈉(mmol/L))-(0.12439x氯化物(mmol/L))畫(0.05575xc-反應性蛋白(ng/mL))+(1.72392x曱狀腺刺激激素(ng/mL))。在具體的實施方案中，動物是犬科動物。在又一個實施方案中，本發明涉及定量動物的體況評分的方法，所述方法包括(a)分析所述動物的體重和尿素氮、鈉和氯化物的血清水平；和(b)將步驟(a)獲得的數據應用于以下算法體況評分=3.64120+(0.18614x體重(kg))-(0.05289x血清尿素氮(mg/dL))+(0.08935x鈉(mmol/L))-(0.14088x氯化物(mmol/L))。在具體的實施方案中，動物是犬科動物。在又一個實施方案中，本發明涉及定量動物的體況評分的方法，所述方法包括(a)分析所述動物的體重和鈉、鉀、氯化物、磷、膽紅素和生長素釋放肽的血清水平；和(b)將步驟(a)獲得的數據應用于以下算法體況評分=-3.20078+(0.4259x體重(kg))-(0.05508x鈉(mmol/L))+(0.69884x鉀(mmol/L))+(0.09472x氯化物(mmol/L))畫(0.15372x磷(mg/dL))+(1.31580x總膽紅素(mg/dL))-(0.35136x生長素釋放肽(ng/mL))。在具體的實施方案中，動物是貓科動物。在又一個實施方案中，本發明涉及定量動物的體況評分的方法，所述方法包括(a)分析所述動物的體重和血尿素氮:肌酸酐比、鉀、氯化物、磷和總膽紅素的血清水平；和(b)將步驟(a)獲得的數據應用于以下算法體況評分=-7.34191+(0.48335x體重(kg))+(0.03578x血尿素氮:肌酸酐比)+(0.58860x鉀(mmol/L))+(0.04683x氯化物(mmol/L))-(0.16894x磷(mg/dL))+(0.86613x總膽紅素(mg/dL))。在具體的實施方案中，動物是貓科動物。如上所述診斷出體況評分、體重狀況或傾向后，可選擇出適合于該體重狀況或傾向的養生方案。該養生方案可由動物或動物的護理者根據通過任何合適的傳達工具(communicationmeans)傳達的信息進行選擇，或者可由健康護理專業人員規定。該養生方案可包括膳食、鍛煉和藥物治療中的一種或多種。在一些實施方案中，養生方案包括供該動物消費的組合物。這種組合物舉例說可以是營養組合物如食物組合物、補充物、賞食(treat)或玩具，要指出的是有一些但不是所有的補充物、賞食和玩具本身是食物組合物。食物組合物可以是例如被動物攝取或者是通過飼喂而給與動物。在該動物是伴倡動物的情況中，可用于本發明方法的食物組合物通常是這樣的食物組合物，它在營養上適于飼喂這種動物(本文稱為"寵物食物")和適合于所診斷出的體重狀況或傾向。寵物食物可以更具體地適于犬科動物或貓科動物的特殊營養需求，或者適于犬科動物或貓科動物的某些亞群體如大品種狗、小狗(puppy)或小貓(kitten)、年幼的狗或貓、成年的狗或貓、年老的狗或貓和衰老的狗或貓。構成養生方案的一部分的食物組合物可以是能給該動物4是供基本上營養完全膳食(substantiallynutritionallycompletediet)的食物組合物。"營養完全膳食"是疼樣的膳食，它包含足以維持接受該膳食的健康動物的正常健康的足夠營養物。或者，組合物可以是補充物，即與另一食物組合物一起使用以改進膳食總體上的營養平衡或性能的組合物。這種補充物包括這樣的食物組合物，其作為其他食物的補充物未加稀釋地進行飼喂，使得可以自由選擇動物口糧(ration)中其它可單獨供給動物的部分，或者其加以稀釋并與動物的平常食物混合而生產出基本上營養完全膳食。補充物或者可以為食物組合物之外的形式，例如為藥物樣的劑型，包括例如散劑、液體劑、糖漿劑、丸劑等。組合物可以是賞食。賞食包括例如作為獎賞或者為了誘使動物在非進餐時間吃食而給予動物的組合物。本身為具有至少一些營養價值的食物組合物的狗賞食包括例如狗餅干。賞食也可以是基本上非營養性的。構成養生方案的一部分的組合物可以本身構成賞食、涂敷在現有賞食上或者上述兩種情況同時發生。組合物可以是適于動物口部-使用的玩具。玩具包括例如可咀嚼的玩具，如狗用人工骨。可用于本發明的組合物可在玩具的表面上或在玩具組件的表面上形成涂層，可部分或完全摻入到玩具當中，或者上述兩種情況同時發生。目前市場上有很多種合適的玩具銷售，包括部分可消費的玩具(例如包含塑料組件的玩具)和完全可消費的玩具(例如生牛皮和各種人造骨)。玩具既可供人用又可供非人用，具體的說供伴倡動物、農場動物和動物園動物使用，更具體的說供狗、貓或鳥使用。在其他實施方案中，養生方案包括某種形式的鍛煉。鍛煉可以采取任何適合該動物和適于所i貪斷出的體重狀況或傾向的形式。舉例說，訓練可包括但不限于行走、慢跑或奔跑。養生方案可以以這樣的頻率持續進行或者可以持續進行這樣的一段時間，該頻率或時間對于該體重狀況或傾向來說是必需的或適當的。舉例說，養生方案可以持續進行至少約1個月、至少約2個月、至少約6個月、至少約1年，或者持續進行一些其他的時間，該其他的時間是可由例如獸醫或其他健康護理專業人員確定為必需或適當的時間。本發明還提供檢測動物的體重狀況或傾向的起始的方法。根據這個方法，在一段時間內監測該動物的至少一種生物標志，在該段時間內的任何時間點如果相對于該生物標志的參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向，則檢測到起始。這種方法任選還包括在該段時間內的至少一部分時間中監測該動物的體重。可以使用任何適用于測定體重的技術，包括但不限于稱重、相對體重(RBW)的評估、體況評分(BCS)的評估、形態測量術和它們的組合。另外有用的與體重有關的信息可任選通過諸如以下的技術獲得磁共振成像(MRI)、計算機化斷層顯像(CT)、中子活化、水下稱重法(hydrodensitometry)、同位素稀釋法的總身體水分(totalbodywaterbyisotopedilution),總身體鉀、超聲、生物電阻抗、射線照片、聲譜儀、雙能X射線吸收法(DEXA)或者它們的組合。生物標志的監測和任選體重和/或其他相關參數的監測，可以以任何便利的時間間隔進行，例如以約每小時一次、每天兩次、每天一次、每周兩次、每周一次、每月一次、兩個月一次、每年兩次或每年一次的時間間隔。生物標志的監測還可提供用以評估某養生方案管理動物的體重狀況或傾向的效果的有用方法。根據這個方法，在執行該養生方案的時間內對生物標志和任選體重和/或其他相關參數進行監測。相對于該生物標志的參考水平的觀測水平能單獨地或共同地指示該養生方案管理體重狀況或傾向的效果。在本發明的另一個實施方案中，提供了適合根據本文描述的任何方法使用的試劑盒。這種試劑盒包括一種或多種用以檢測來自動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的觀測水平的試劑；和一種或多種攜帶信息的用戶可使用媒介，所述信息包括(i)該生物標志的參考水平；和(ii)將該觀剝水平與該參考水平進行比較的算法。如同在前述實施方案中，相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示該動物的體重狀況或傾向。本文所述的"用戶可使用"媒介包括所有的媒介，如報紙、磁盤、存儲芯片、卡片、計算機或網絡，在這些媒介上指令、信息、算法和/或數據可以可檢索地(retrievably)進行容納或存儲。算法通常是軟件算法。"用戶可使用媒介"的一個實例是SAS/STAT⑧軟件，它使用回歸方法來確定用于預測體況評分的算法。這種算法的實例是下述實施例中提供的算法I-IV，例如算法L體況評分=3.62352+(0.17443x體重(kg))+(0.01621x葡萄糖(mg/dL))+(0.06496x鈉(mmol/L))-(0.12439x氯化物(mmol/L))-(0.05575xc-反應性蛋白(ng/mL))+(1.72392x甲狀腺刺激激素(ng/mL》算法n-.體況評分=3.64120+(0.18614x體重(kg))陽(0.05289x血清尿素氮(11^/(^))+(0.08935x鈉(mmolZL))-(0.14088x氯化物(mmol/L))算法III:體況評分=-3.20078+(0.4259x體重(kg))-(0.05508x鈉(mmol/L))+(0.69884x鉀(mmol/L))+(0.09472x氯化物(mmol/L))-(0.15372xA,(mg/dL))+(1.31580x總膽紅素(mg/dL))-(0.35136x生長素釋放肽(ng/mL))算法IV:體況評分=-7.34191+(0.48335x體重(kg))+(0.03578x血清尿素氮:肌酸酐)+(0.58860x鉀(mmol/L))+(0.04683x氯化物(mmol/L))-(0.16894x磷(mg/dL))+(0.86613x總膽紅素(mg/dL))。試劑盒任選是獨立成套的，從而不需要實驗室設備。任選地，試劑盒還包括組織或生物流體樣品收集裝置。試劑盒可采用各種或多種。可包括標準品和標準添加劑(standardadditions),用以在定量樣品中的生物標志的水平時使用公知的技術進行校準。在一些實施方案中，試劑盒中的一種或多種試劑包含報道部分(moiety)或標記。才艮道部分或標記舉例_說可包括生物素、發色劑、發光劑或化學發光劑、輔因子、酶、熒光劑、抑制劑、金屬或磁性顆粒、放射性核素、底物或它們的組合，且可用本領域公知的方法進行檢測。舉例說，這種方法包括但不限于用以檢測染料(包括例如酶反應產物的比色檢測)、發光基團和熒光基團的光譜學方法；通過加入底物然后對反應產物進行光i普學分析、分光光度分析或其他分析來進行的酶報道基團的檢測；針對放射性基團的閃爍計數或放射自顯影方法；和針對金屬納米顆粒(例如金納米顆粒)的Raman散射技術。試劑盒中的一種或多種試劑可包含至少一種抗體，例如多克隆抗體或單克隆抗體。抗體可以固定化在固相載體上。例如，可采用ELISA來測定樣品中的生物標志的水平。ELISA會涉及到將抗體偶聯到固相載體如聚合物上。可將包含生物標志的樣品引入，讓該生物標志與該抗體發生相互作用，于是可進行信號(例如發色信號)產生過程以產生光學上可檢測的信號。在一個實施方案中，試劑盒包含能特異性結合樣品中的該生物標志的第一抗體和能特異性結合該第一抗體和該生物標志所產生的復合物的第二抗體。第二抗體可固定化到固相載體。例如，在第二抗體與第一抗體/生物標志復合物結合時，第二抗體會引發反應并例如導致產生可^r測的顏色變化。有多種標記和綴合技術為本領域技術人員所公知。用以產生供核酸序列檢測和定量用的標記的雜交或PCR探針的技術，包括寡標記(oligo-labeling)、切口平移、末端標記和使用標記核苷酸的PCR擴增。或者，可將生物標志的編碼序列或其任何部分克隆到用以產生mRNA探針的載體中。這種載體是本領域公知的，是可市售獲得的，且可用來通過加入適當的RNA聚合酶如T7、T3或SP6和標記核苷酸來體外合成RNA探針。試劑盒任選還包括用以傳達信息的工具，所述信息包括以下一種或多種(a)由相對于該生物標志的參考水平的觀測水平所指示的體重狀況或傾向的診斷結果；和(b)建議或規定的適合該診斷結果的養生方案。傳達工具可附到或裝入含有試劑盒的其他元素(element)的包裝中。任何合適形式的傳達工具都可采用，例如文檔如標簽、小冊子、廣告或包裝插頁、計算機可讀數字或光學介質如磁盤或CD、音頻顯示(例如在錄音磁帶或CD上)或視頻顯示(例如在錄像帶或DVD上)。傳達工具可以指位于別處(如在網站上)的更多信息。這種傳達工具，包括例如文檔如標簽、小冊子、廣告或包裝插頁、計算機可讀數字或光學介質如石茲盤或CD、音頻顯示(例如在錄音磁帶或CD上)、視頻顯示(例如在錄像帶或DVD上)和/或網站上的一個或多個頁面，本身是本發明的又一個實施方案。本發明并不局限于本文描述的具體方法、方案和試劑，因為它們可以變動。此外，本文使用的術語目的只在于描述具體的實施方案，并不意在限制本發明的范圍。本文和所附權利要求書使用到的單數形式名詞包括復數含義，除非上下文清楚表明并非如此。類似地，詞語"包含"要作包括涵義來解釋而不是作排他涵義來解釋。除非另外定義，否則所有本文使用到的技術和科學術語和任何首字母縮略詞，其含義與本發明
技術領域：
的普通技術人員通常理解的相同。雖然任何與本文所述的那些方法和材料類似或等同的方法和材料都可用于實施本發明，但優選的方法、裝置和材料為本文所述的那些方法、裝置和材料。所有本文提到的專利、專利申請和出版物通過引用結合到本文中，引用的程度為法律所允許的程度，引用的目的是描述和公開其中所公開的可能可用于本發明的化合物、工藝、技巧、程序、技術、文章和其它組合物和方法。但是，本文的所有內容都不能被解釋為承認本發明沒有權利作為在先發明而先于這些公開內容。實施例本發明可通過以下的其優選實施方案的實施例作進一步的說明，不過應認識到，加入這些實施例僅出于說明的目的，并不意在限制本發明的范圍，除非另外具體指明。實施例1體瘦和肥胖動物中的生物標志本實施例說明相對于參考水平的某些生物標志的水平能指示動物的體重狀況或傾向。在四天研究中使用了20只狗(IO只體瘦，IO只月巴胖)，以測定傾向于體瘦的狗和傾向于肥胖的狗之間血清代謝物的差異。是歸入體瘦組還是歸入肥胖組，由以下特征來決定(a)當隨意飼喂時增加體重(傾向于肥胖)或保持體重(傾向于體瘦)的傾向性；(b)用1-5的數字表示的體況評分(傾向于體瘦的狗平均體況評分約3,而傾向于肥胖的狗平均體況評分約4.1);和(c)之前參與減重研究(肥胖的狗之前有參與，而體瘦的狗沒有)。傾向于體瘦的狗的平均體重為12.06kg,而傾向于肥胖的狗為16.59kg。每天一次持續四天給各只狗飼喂維持食物(maintenancefood),該維持食物是配制成滿足或超過為維持體重(BW)所需的營養要求。在第四天，在飼喂前(餐前，時間O)和在飼喂后(餐后)10、60、120和360分鐘采集血清樣品。用標準的方法分析樣品的胰島素、甘油三酯、葡萄糖、GUM和生長素釋放肽濃度，所述標準的方法見于例如實驗室手冊，如Sambrooketal.(2001)MolecularCloning:ALaboratoryManual,3rded.ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY;Spectoretal.(1998)Cells:ALaboratoiyManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY和Hamptonetal.(1990)SerologicalMethods:ALaboratoryManual,APSPress,StPaul:MN。將生物標志的血清濃度按BW進行了調整。結果在表1-5中顯示。傾向于體瘦的狗和傾向于肥胖的狗之間在餐后血清胰島素濃度上沒有實質差異(表1)。表1血清胰島素水平<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>>同樣，傾向于體瘦的狗和傾向于肥胖的狗之間在血清甘油三酯濃度上沒有實質差異(表2)。表2血清甘油三酯水平<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>在六個采樣時間中的大多數或全部，傾向于體瘦的狗和傾向于肥胖的狗之間在葡萄糖(表3)、GLP-1(表4)和生長素釋放肽(表5)的血清濃度水平上有實質差異。表3血清葡萄糖水平<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表5血清生長素釋放肽水平<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>參見各表，數據顯示了生物標志特別是血清葡萄糖、GLP-1和生長素釋放肽水平在區分具有伴瘦和肥胖傾向的動物方面的效用性。實施例2狗的體重傾向的預測確定了30只體瘦和30只超重的狗進行這個研究。出于本研究的目的，將體況評分(BCS)為4或5的狗歸為超重(評分尺度為1-5,其中1等于瘦小，5等于肥胖/超重)。BCS小于3的狗歸為體瘦。按照Hill機構動物護理和使用委員會(Hill'sInstitutionalAnimalCareandUseCommittee)的方案來照料狗。50%的狗為雌性(15只體瘦，15只超重)，另50%的狗為雄性(15只體瘦，15只超重)，以確定性別是否在任何標志差異方面起到作用。所有動物都切除卵巢或閹割，因為這些組的動物更傾向于發生肥胖癥。將動物稱重，給出體況評分，抽取血液樣品。收獲血清，以lmL等分試樣保藏在-20。C下。對血清進行化學篩選、肥胖癥標記、曱狀腺標志和關節炎標志的分析。化學篩選在Hill寵物營養中心(Hill'sPetNutritionCenter,Topeka,KS)進行。胰島素分析由密歇根州立大學(MichiganStateUniversity,Lansing,MI)進行。曱狀腺素、曱狀腺刺激激素、胰高血糖素樣蛋白-1、胰島素樣生長因子-1、生長素釋放肽、瘦蛋白、血管緊張素i和n、c-反應性蛋白、高密度脂蛋白l和2、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、乳糜微粒、睪酮、雌二醇、皮質醇、骨鈣蛋白、氨基末端交聯蛋白、II型軟骨合成和軟骨寡聚蛋白分析由MDBiosciences,Inc.(St.Paul,畫沐行。數據用SAS的一4殳線'li才莫型(GeneralLinearModels)方法(1989)進行分析，以確定處理平均值。實驗單位為狗。P〈0.05時，則認為差異顯著，P〈0.10時，則確定有趨向。表2-l體瘦和超重狗的平均測量值平均體瘦平均超重標準誤差體瘦與超重相測量項目(n=30)(n=^))__比*年齡，歲體況評分體重，kg葡為糖，mg/dLk烏素，pmol/L丙氨酸氨基轉移酶,U/L堿性褲酸酶,U/L膽固醇，mg/dL甘油三酯，mg/dL總膽紅素，mg/dL總蛋白質，g/dL肌酸酐，mg/dL血清尿素氮，mg/dL清蛋白:球蛋白清蛋白'g/dL曱狀腺素，ug/dL曱狀腺刺激激素，ng/mL鈣，mg/dL褲，mg/dL氯化物，mmol/L鉀，mmol/L鎂，mg/dL鈉,mmol/L鈉:鉀胰高血糖素樣蛋白-l，pM胰島素樣生長因子-l,iig/mL生長素釋放肽，ng/mL瘦蛋白，ng/mL血管緊張素I，ng/mL血管緊張素n,ng/mLC-反應性蛋白，ng/mL非酯化脂肪酸，mM高密度脂蛋白-1，占總量的％高密度脂蛋白-2，占總量的％低密度脂蛋白，占總量的％極低密度脂蛋白，占總量的％乳糜微粒，占總量的％華酮，pg/mL雌二醇，pg/mL皮質aj,ug/dL骨鉤蛋白，ng/mL氨基末端交聯端肽，nMBCE2型軟骨合成，pg/mL*NS=不顯著和PX).IO22.8617.62.130.08NSNSNSNSNS<0.0]NSG5cinsc4SO^JQO5seicinift5rt:5nsftiftsftinsGSCSC!nJn50Jlooc!5nsoo1-21001-0003o5忠^ssssssgsgssssssgs加MS6sss55的^砂^www-訴w^s化s吼^吼^NgggN吼g吼N4gN"g^NNNNa^awNN^NnJN4N表2-2雌性體瘦和超重狗的平均測量值雌性體瘦雌性超重體瘦與超重相測量項目_(n=15)(n=15)標準誤差比*年齡，歲體況評分體重，kg葡萄糖,mg/dL姨^素，pmol/L丙氨酸氨基轉移酶，U/L堿性褲酸醉，U/L膽固醇，mg/dL甘油三醋，mg/dL總膽紅素，mg/dL總蛋白質，g/dL肌酸酐，mg/dL血清尿素氮清蛋白球蛋白清蛋白，g/dL曱狀腺素，ug/dL曱狀腺刺激激素，ng/mL鈣，mg/dL碌,mg/dL氯化物，mmol/L鉀,mmol/L鎂,mg/dL鈉，mmol/Lr鈉:鉀胰高血糖素樣蛋白-l,pM胰島素樣生長因子-l，ng/mL生長條釋放肽，ng/mL.瘦蛋白，ng/mL血管緊張素1，ng/mL血管緊張素II,ng/niLC-反應性蛋白，ng/mL非酯化脂肪酸，mM高密度脂蛋白-1，占總量的％高密度脂蛋白-2，占總量的％低密度脂蛋白，占總量的％極低密度脂蛋白，占總量的％乳糜微粒，占總量的％華明，pg/mL雌二醇，pg/mL皮質醇，ug/dL骨鈣蛋白，ng/mL氨基末端交聯端肽，nMBCE2型軟骨合成，Hg/mL軟骨寡聚基質蛋白，U/L__*NS=不顯著和PX).IO23.523.9741.02.25MS,，一o力26-4.:soo1s^^g的gss的ss肌sws加ss^gwggggs力招力w犯你犯5^s,^g.必ggg表2-3雄性體瘦和超重狗的平均測量值雄性體瘦雄性超重^a.。^體瘦與超重相測量項目__(n=15)_(n=15)杯準妖差比**NS=不顯著和P〉0.10超重組和體瘦組的平均體況評分分別為4.7和2.5。體瘦組和超重組的平均體重分別為11.2和17.3kg。對血清進行了化學篩選、年齡，歲體況評分體重，kg葡萄糖,mg/dL肢島素，pmol/L丙氨酸氨基轉移酶,U/L堿性確酸酶,U/L膽固醇，mg/dL甘油三酯，mg/dL總膽紅素，mg/dL總蛋白質，g/dL肌酸酐，mg/dL血清尿素氮清蛋白球蛋白清蛋白，g/dL曱狀腺素，ug/dL曱狀腺刺激激素，ng/mL鈣，mg/dL褲，mg/dL氯化物,mmol/L鉀,mmol/L鎂，mg/dL鈉，mmol/L鈉:鐘胰高血糖素樣蛋白-l，pM胰島素樣生長因子-l，ng/mL生長素釋放肽，ng/mL瘦蛋白，ng/mL血管緊張素I,ng/mL血管緊張素II,ng/mLC-反應性蛋白，ng/mL非醋化脂肪酸,mM高密度脂蛋白-1，占總量的％高密度脂蛋白-2，占總量的％4氐密度脂蛋白，占總量的％極低密度脂蛋白，占總量的％乳糜微粒，占總量的％睪酮，pg/mL雌二SJ,pg/mL皮質醇，ug/dL骨鈣蛋白，ng/mL氛基末端交聯端肽，nMBCE2型軟骨合成，jig/mL軟骨寡聚基質蛋白，U/L218744.4Z2777SCS幼jBw748S941og5653SJS1-31*121lSs716,.w5nn7CJ3:-1"ft5么；；"s3su如J;;仏&osl-31-o.w4u425J^vt5310.n;0.60161-,.3ft554125;51sw加的股sssssgsgsMSS的gs^sssgM朋識s訴力想w呢s招犯s"^^1-2022SSSJC803700S9539139SO25V05397^5-S0339冷007:wi2s91:NO0o157-0o-c:1.Qi62D600lol2601-762.4;360481JJQi92lJ4-4.說s.化o34-2qo63911jJ肥胖癥標記、曱狀腺標志和關節炎標志的分析。相比于體痩組，超重組具有較高水平的堿性磷酸酶(P-0.04)、膽固醇(P:0.04)、甘油三酯(P=0.06)、總蛋白質(P〈0.01)、清蛋白(P〈0.01)、甲狀腺素(P:0.05)、4丐(P〈0.01)、磷(P-0.04)、葡萄糖(P〈0.01)、胰島素(P〈0.01)、胰島素樣生長因子-1(P<0.01)、低密度脂蛋白(P〈0.01)、瘦蛋白(P〈0.01)和2型軟骨合成(P〈0.01)。相比于體瘦組，超重組具有較低水平的肌酸酐(P-O.Ol)、血清尿素氮(P〈0.01)、氯化物(P〈0.01),且超重雄性具有較低水平的睪酮(P=0.04)。通過逐步回歸對這些詳細生物標志數據進行的分析表明，體重、葡萄糖、鈉、氯化物、c-反應性蛋白和甲狀腺刺激激素是特別有用的確定體況評分的參數。例如，體況評分可采用以下方程式進行定量體況評分=3.62352+(0.17443x體重(kg))+(0.01621x葡萄糖(mg/dL))+(0.06496x鈉(mmol/L))-(0.12439x氯化物(mmol/L))-(0.05575xc-反應性蛋白(ng/mL))、+(1.72392x甲狀腺刺激激素(ng/mL》。另外，體況評分還可用可在常規獸醫測定中獲得的生物標志數據進行定量。例如，通過逐步回歸對生物標志的水平進行的分析表明，動物的體重及尿素氮、鈉和氯化物的血清水平特別適用于確定體況評分。因此，體況評分可通過將所述數據應用到以下算法進行確定體況評分=3.64120+(0.18614x體重(kg))-(0.05289x血清尿素氮(mg/dL))+(0.08935x鈉(mmol/L))-(0.14088x氯化物(mmol/L))。實施例3減重研究中的狗的生物標志水平用20只狗進行減重研究。按照Hill機構動物護理和使用委員會的方案來照料狗。所有的狗^并始研究時有大于37%體脂肪(占總體重百分比)，并持續進行減重研究3個月。各只狗被分配到兩個處理組中的一個(表3-l)。每種食物都進行粗磨(kibbled)，按照美國飼料管理官員協會(AssociationofAmericanFeedControlOfficials)的狗營養物指南配制，并使其均衡(balanced)，以滿足成年狗維持需求。所有的狗都進行雙能X線吸收測定法(DXA;DXA-QDR-4500,Hologic，Inc.,Waltham,MA)掃描。在第0、1、2和3個月采集血液樣品。收獲血清，以1mL等分試樣保藏在-20。C下。另外，狗還得到充實生活的玩具(enrichmenttoy)，接受常規理毛，每日有機會與其他狗和人們交往。對血清進行化學篩選、肥胖癥標記、甲狀腺標志和關節炎標志的分析。化學篩選在Hill寵物、營養中心(Hill'sPetNutritionCenter,Topeka，KS)進行。胰島素分析由密歇根州立大學(MichiganStateUniversity,Lansing,MI)進行。曱狀腺素、曱狀腺刺激激素、胰高血糖素樣蛋白-1、胰島素樣生長因子-1、生長素釋放肽、痩蛋白、血管緊張素I和II、c-反應性蛋白、高密度脂蛋白l和2、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、乳糜微粒、睪酮、雌二醇、皮質醇、骨鈣蛋白、氨基末端交聯蛋白、2型軟骨合成和軟骨寡聚基質蛋白分析由MDBiosciences,Inc.(St.Paul,MN)進行。表3畫1減重研究中的狗食物的營養物組成營養物，基于100%干物質食物A*食物B粗蛋白，％25.624.9粗脂肪，％8.67.9粗纖維，％21.421.1灰分，％5.65.1鈣，％0.670.91磷，％0.540.64賴氨酸，％1.411.43甲硫氨酸+胱氨酸，％.0.730.79色氨酸，％0,290.24蘇氨酸，％0.91O.卯精氨酸，％1.431.53異亮氨酸，％0.831.05纈氨酸，％1.231.26亮氨酸，％1.812.03組氨酸，％0.720.57苯丙氨酸+酪氨酸，％1.701.64肉減，ppm300300可代謝能量，kcal/kg29922966*食物A=Hil產犬科動物處方膳食(Hill's⑧CaninePrescriptionDietr/d)，罐裝。成分水、豬肉副產品、豆粉下腳料、大米、豬肝、粉狀纖維素、大豆粉、雞肝香料、植物油、氧化鐵、牛磺酸、L-肉堿、礦物質(碳酸鈣、磷酸二鈣、鹽、氧化鋅、硫酸亞鐵、硫酸銅、氧化亞錳、碘酸4丐、亞硒酸鈉)、p-胡蘿卜素、維生素(氯化膽堿、維生素D3補充物、維生素E補充物、抗壞血酸、一硝酸-克胺、煙酸、泛酸鈣、鹽酸吡,辛、核黃素、葉酸、生物素、維生素B12補充物)。**食物B=Hilf犬科動物處方膳食(Hill's⑧CaninePrescriptionDietr/d)，干燥。成分玉米粉、花生殼28.2%(纖維來源)、雞肉副產品粉、大豆粉、豆粉下腳料、雞肝香料、干燥雞蛋制品、植物油、牛磺酸、L-肉堿(用BHT、BHA和乙氧喹啉防腐)、礦物質(鹽、硫酸亞鐵、氧化鋅、硫酸銅、氧化亞錳、碘酸4丐、亞硒酸鈉)、p-胡蘿卜素、維生素(氯化膽;威、維生素A補充物、維生素D3補充物、維生素E補充物、L-抗壞血酸-2-聚磷酸酯(維生素C來源)、煙酸、一硝酸硫胺、泛酸鉤、鹽酸吡噴辛、核黃素、葉酸、生物素、維生素B12補充物)。結果表明，飼喂食物A的狗在第90天時與第0天時相比，有顯著的減重(-4924g;PO.Ol)、體瘦損失(leanloss)(-721g;P<0.01)和脂肪損失(-4167g;P<0.01)。飼喂食物B的狗在第90天時與第0天時相比，有顯著的減重(-3466g;P<0.01)和脂肪損失(-3363g;P<0.01)。祠喂食物B的狗沒有觀測到在體瘦方面的差異。參見表3-2。血清化學篩選和電解質在表3-3中給出。飼喂食物A的狗在球蛋白(P〈0.01)、總蛋白質(P〈0.01)、堿性磷酸酶(P=0.03)、丙氨酸氨基轉移酶(？=0.02)、清蛋白(P〈0.01)、膽固醇(P〈0.01)、甘油三酯(P〈0.01)、磷(P〈0.01)、鈉(P〈0.01)、鈉鉀(P-0.02)方面下降，在鉤(P二0.02)、鉀(P二0.05)和氯化物(P〈0.01)方面增加。飼喂食物B的狗在清蛋白(P〈0.01)、總蛋白質(P〈0.01)、膽固醇(P〈0.01)、鈉(P<0.01)、鈉鉀(P〈0.01)方面下降，在鈣(P〈0.01)、氯化物(P〈0.01)、鉀(P〈0.01)、鎂(P〈0.01)和血清尿素氮(P-0.03)方面增加。參見下表3-2和3-3。表3-2.狗消費減重食物后的身體組成測量的身體參數體重第o天，g體重第30天，g體重一60天，g體重*90天，g體重變化第0-30天，g體重變化^0-60天，g體重變化^0-90天，g第O天與第30天相比51*O天與糸60天相比51第O天與糸卯天相比'食物A175691539413970食物B7257冊814715體瘦第0天，g體瘦第30天，g體瘦第60天，g體瘦第卯天，g體瘦變化第0-30天，g體瘦變化第0-60天，g體瘦變化第0-卯天，g第O天與第30天相比**O天與朵60天相比*一0天與*90天相比*肥胖第0天，g肥胖第30天，g肥胖第60天，g肥胖第卯天，g肥胖變化第0-30天，g肥胖變化第0-60天，g肥胖變化第0-卯天，g第O天與第30天相比**0天與^60天相比**0天與^卯天相比*f更大F值的概率gw"恥sssSMgw"MSSSS"加SW5柳旭M,加W表3-3.狗消費減重食物90天后的血液化學篩選和標志<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>本文公開的研究的一個目的是確定體瘦的狗和超重的狗在什么生物標志上有差異。通過鑒定體瘦動物和超重動物之間的生物標志差異，獸醫們不僅能明確地定量體況分析，而且還能診斷體重狀況或其傾向以及診斷肥胖癥相關性i^康失調或其傾向。獸醫們可利用這些標志通過血液分析以及體重減輕來管理減重養生方案。如實施例2所述，超重組的葡萄糖、胰島素、胰島素樣生長因子-l和胰高血糖素樣蛋白-l水平升高，這暗示胰島素抗性的征兆。這些結果并不意外，因為糖尿病和胰島素抗性常常伴隨肥胖癥出現。實施例3的數據顯示經歷了減重的狗在葡萄糖和胰島素方面得到降低，這表明減重能矯正肥胖癥相關性葡萄糖失調。超重的狗其甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白、乳糜微粒的水平升高，高密度脂蛋白-1的水平下降，這些指標是血脂異常的常見征兆。用狗進行的研究證明，血脂異常往往與胰島素抗性有關。胰島素抗性在高脂血癥的發展中起到重要作用。血液甘油三酯濃度的增加是由富含甘油三酯的脂蛋白的產生的增加和它們的代謝的減少所致。胰島素作用的異常可由脂肪細胞中脂解作用的增加所致，脂解作用能導致脂肪酸釋放增加和脂肪酸在肝臟被再裝配成甘油三酯。在實施例3中，進行減重方案的狗其膽固醇和甘油三酯下降，這表明血脂異常的征兆能通過食物和減重進行矯正。這與其他公布的犬科動物減重研究相一致。Die等，"Evolutionofbloodparametersduringweightlossinexperimentalobesebeagledogs(實馬企月巴胖小獵犬減重過程中血液參數的演變)"/Jm'w.尸/z;as/0/,a.JwVw.A^r.2004;88:166-171在超重小獵犬的減重方案中給它們飼喂高蛋白質(47.5%蛋白質和10.9%粗纖維)或高纖維(23.8%蛋白質和23.3%粗纖維)膳食。他們觀測到伺喂兩種減重食物的任一，的狗都減少了甘油三酯和膽固醇，這表明這些觀測到的變化與膳食不相關，而是與減重直接相關。由本研究的和Diez等的減重所導致的觀測到的甘油三酯和膽固醇減少，是可由獸醫在日常化學篩選中測量的事情。為肥胖癥問題測量膽固醇和甘油三酯和監測減重情況，可能是討論肥胖癥的要害而又不冒犯寵物主人的一個辦法。要著重指出的是，在Diez等的研究和本研究中，升高的甘油三酯和膽固醇都在正常公布的狗范圍值內。因此，尋找異常高的甘油三酯和膽固醇值可能不是肥胖癥的良好指標，應更多地對正常范圍內的升高水平加以關注。超重組在關節炎標志的水平上也提高，盡管它們沒有顯示任何關節炎征兆(即跛行)。雖然在超重組中所有的關節炎標志都升高，但只有堿性磷酸酶和II型軟骨合成是統計學上顯著的。堿性磷酸酶和II型軟骨合成的增加可作為超重狗中骨關節炎的早期指標。當狗患有骨、膽管和/或肝臟疾病時，堿性磷酸酶通常會升高。本研究中升高的堿性磷酸酶很可能與骨有關，因為兩組之間在丙氨酸氨基轉移酶上沒有差異，而超重組的清蛋白較高，因此排除了任何潛在的肝臟疾病。當出現軟骨損害時，n型軟骨合成通常會增加。軟骨基質由II型軟骨和聚集蛋白聚糖(aggrecan，一種蛋白聚糖)這兩種主要成分組成。軟骨原纖維提供有助于保持組織完整性的拉伸強度。聚集蛋白聚糖與軟骨原纖維交織在一起，對軟骨基質壓縮勁度作出貢獻。II型軟骨的損害和聚集蛋白聚糖的損失是骨關節炎中關節軟骨損害的基本特征。已將這個損害與軟骨細胞和滑膜細胞分泌的蛋白水解酶關聯起來。基質金屬蛋白酶家族(即MMP'-13)負責II型軟骨的三股螺旋的一級切割。在實施例3中，經歷減重的狗其堿性磷酸酶減少，這表明管理肥胖癥可幫助/防止關節炎的起始。由于這些食物沒有添加有益關節的東西來減少/治療關節炎(即n-3脂肪酸、葡糖胺和/或軟骨素)，顯然是減重單獨降低了堿性磷酸酶水平。這可能是因為當動物減少體重時就減少了施加在關節上的負荷的結果。因此，本文還設想到，關節炎生物標志如堿性磷酸酶和II型軟骨合成的水平，可用作生物標志來預測動物發生骨關節炎的傾向。在實施例2和3中也測量了瘦蛋白、生長素釋放肽和GLP-1濃度，因為已知它們對食欲抑制和刺激有影響。超重組的瘦蛋白水平升高，同時生長素釋放肽水平較低。這些結果與Jeusetteetal.,"Influenceofobesityonplasmalipigandlipoproteinconcentrationsindogs(肥胖癥對狗血漿脂質和脂蛋白濃度的影響)"/Fa.i仏2005;66:81-86和Sagawaetal.，"Correlationbetweenplasmaleptinconcentrationandbodyfatcontentindogs(狗血漿瘦蛋白；農度和體月旨肪含量之間的相關性)，Mw./Fd.2002;63(1):7-10相一致。在該兩個研究中，超重小獵犬的瘦蛋白濃度與體脂肪質量直接相關。在本研究中，在減重過程中瘦蛋白濃度隨著脂肪質量的減少而減少。Jeusette等還觀測到在超重狗中生長素釋放肽濃度下降，并認為是因為過量能量儲藏導致生長素釋放肽被下調的結果。如本文所公開，似乎當狗飼喂干燥食物時生長素釋放肽水平不受減重的影響。但是，當狗飼喂減重用的罐裝食物時生長素釋放肽的確增加了。這可能是因為攝入4交多罐裝產品造成腸道飽滿度(gUtflll)增加的結果。GLP-1通過其對胃腸傳輸和胃排空的抑制作用在控制營養物從胃部流向小腸方面也起到作用。這個GLP-1機制據認為能對食欲施加其作用。超重狗與體瘦狗相比GLP-1水平增加。這些結果表明，這些激素可能在試圖減少超重狗組的攝入；但是它們對攝入的作用沒有被引發。這些研究的結果表明，肥胖癥與狗的其他疾病狀態直接相關。實施例2的標志表明超重狗顯示了血脂異常、關節炎和糖尿病的早期征兆。實施例3證明許多這些差異可通過減重來減輕。實施例4貓體重狀況的預測確定了30只體瘦和30只超重的貓進行本研究。出于本研究的目的，將體況評分(BCS)為4或5的貓歸為肥胖/超重(評分尺度為1-5，其中1等于瘦小，5等于肥胖)。BCS小于3的貓歸為體瘦。將動物稱重，給出體況評分，抽取血液樣品。收獲血清，以1mL等分試樣保藏在-20。C下。對血清進行化學篩選、肥胖癥標記、曱狀II4示志和關節炎標志的分析。化學篩選在Hill寵物營養中心(Hill'sPetNutritionCenter,Topeka，KS)進行。胰島素分析由密歇根州立大學(MichiganStateUniversity,Lansing,MI)進行。曱狀腺素、曱狀腺刺激激素、生長素釋放肽、瘦蛋白、血管緊張素I和II、骨鈣蛋白、氨基末端交聯蛋白、骨特異性堿性磷酸酶和羧基末端交聯端肽分析由MDBiosciences,Inc.(St.Paul,MN)進行。數據用SAS的一般線性模型(GeneralLinearModels)方法(1989)進行分析，以確定處理平均值。實驗單位為貓。P〈0.05時，貝'J認為差異顯著，P〈0.10時，則確定有趨向。表4-l體瘦和肥胖的貓的平均測量值雄性體瘦雄性超重體瘦與測量項目____(n=30)_(n=30)杯禪妖左超重相比*超重組和體瘦組的平均體況評分分別為4.2和2.5。超重組和體瘦組的平均體重分別為5.8±0.2和3.2±0.2kg。對血清進行了年齡，歲體況評分體重，kg一般代謝標記葡萄糖，mg/dL跌島素，pmol/L器官功能標記丙氨酸氨基轉移酶，U/L堿性磷酸酶，U/L膽固醇，mg/dL甘油三酯,mg/dL總膽紅素，mg/dL總蛋白質，g/dL肌酸酐，mg/dL血清尿素氮,mg/dL血清尿素氮:肌酸酐清蛋白:球蛋白清蛋白，g/dL球蛋白，g/dL曱狀腺素，ug/dL曱狀腺刺激激素，ng/mL電解質鈣,mg/dL確，mg/dLIL化物，mmol/L鉀，mmol/L鎂,mg/dL鈉,mmol/L鈉.鉀肥胖癥標志生長素釋放肽，ng/mL瘦蛋白，ng/mL血管緊張素I，ng/mL血管緊張素n，ns/mL關節炎和香標志骨鈣蛋白,ng/mLi基未端交聯端肽，nMBCE骨特異性堿性磷酸酶，ng/mL氣基末端交聯端肽，Hg/L*NS=不顯著和PX).IO111^咖柳瓜巧s^gw招^ss化化w化瓜^^頂化犯g5瓜加§化33<0o76o-n31oo9119w77JOWJiSj7!3:IS2B犯訴沒打Jw0d4vsSSS5Mnw07ic5203420942J42i531:521o1785ooi44707:8299032654199872,wwc/;1JwSSw￡jiSS化學篩選、肥胖癥標記、曱狀腺標志和關節炎標志的分析。超重組具有較高水平的堿性磷酸酶(P=0.07)、甘油三酯(P=0.05)、總蛋白質(P<0.01)、清蛋白(P〈0.01)、鉀(P:0.03)、4美(P〈0.01)、鈉鉀(P:0.02)、葡萄糖(P:0.02)、瘦蛋白(P〈0.01)和甲狀腺素(P:0.02)。超重組具有較低水平的曱狀腺刺激激素(P=0.02)和生長素釋放肽(P=0.06)。通過逐步回歸對這些詳細生物標志數據進行的分析表明，體重及鈉、鉀、氯化物、磷、膽紅素和生長素釋放肽的血清水平是特別有用的定量貓的體況評分(即體重狀況)的參數。例如，體況評分可采用以下方程式進行定量體況評分=-3.20078+(0.4259x體重(kg))-(0.05508x鈉(mmol/L))+(0.69884x鉀(mmol/L))+(0.09472x氯化物(mmol/L))-(0.15372x*mg/dL))+(1.31580x總膽紅素(mg/dX))-(0.35136x生長素釋放肽(ng/mL))。另外，體況評分還可用常規獸醫測定中可獲得的生物標志數據進行定量。例如，通過逐步回歸對生物標志的水平進行的分析表明，體重及血液尿素氮:肌酸酐、鉀、氯化物、磷和膽紅素的血清水平特別適用于確定貓的體況評分。因此，體況評分可通過將所述數據應用到以下算法進行確定體況評分=-7.34191+(0.48335x體重(kg))+(0.03578x血尿素氮肌酸酐)+(0.58860x鉀(mmol/L))+(0.04683x氯化物(mmol/L))-(0.16894x磷(mg/dL))+(0.86613x總膽紅素(mg/dL))。在本說明書中公開的是本發明典型的優選實施方案，而且雖然采用了特定的術語，但它們只是以一般的和非限制的意義使用而不是出于限制目的使用，故本發明的范圍由以下權利要求書闡明。顯然，根據以上教導，有可能作出本發明的許多修改和變化。因此應認識到，本發明除可按具體的描述進行實施外，還可以在所附權利要求書的范圍內以其它方式進行實施。權利要求1.一種診斷動物的體重狀況或體重狀況的傾向的方法，所述方法包括測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向。2.權利要求l的方法，其中所述動物是犬科動物或貓科動物。3.權利要求l的方法，其中所述動物最大約一歲，相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示該動物在之后壽命中的體重狀況的傾向。4.權利要求1的方法，其中所述狀況或傾向是肥胖癥或者是增加體重的傾向性。5.權利要求1的方法，其中所述狀況或傾向增加該動物的肥胖癥相關性健康失調的風險。6.權利要求5的方法，其中所述肥胖癥相關性健康失調選自高脂血癥、血脂異常、胰島素抗性、葡萄糖不耐受、肝脂沉積、麻醉并發癥、腎上腺皮質功能亢進、甲狀腺機能減退、糖尿病、胰島瘤、垂體嫌色細胞腺瘤、垂體機能減退、下丘腦損害、關節壓迫、肌肉骨骼疼痛、呼吸困難、高血壓、難產、運動不耐受、熱不耐受、免疫功能下降、退行性關節和整形外科疾病、心血管疾病、過度緊張、呼吸窘迫、腎功能改變、胰腺炎、移行細胞癌、疲勞、睡眠障礙、生殖障礙和它們的組合。7.權利要求l的方法，其中所述生物標志選自葡萄糖、GLP-1、生長素釋放肽、c-反應性蛋白、曱狀腺刺激激素和它們的組合。8.權利要求1的方法，其中對至少兩個生物標志進行觀測水平的測定。9.權利要求1的方法，其中所述組織或生物流體樣品是在動物處于禁食狀態下獲得的。10.權利要求1的方法，其中所述組織或生物流體樣品是在飼喂周期中的多個時間點獲得，包括至少一個餐前時間點和至少一個餐后時間點。11.權利要求1的方法，其中所述組織或生物流體是全血、血漿或血清。12.權利要求1的方法，其中所述觀測水平和參考水平是用一種或多種獨立選自以下的測定法進行測定酶免疫測定、酶聯免疫吸附測定、免疫熒光測定、放射免疫測定、蛋白質印跡測定、生化測定、酶學測定和比色測定。13.權利要求l的方法，其中(a)所述動物是犬科動物，(b)所述生物標志包含血清中的葡萄糖，和(c)當禁食動物中的觀測體重調整血清葡萄糖水平比正常體重的犬科動物的體重調整參考水平低至少約10%時，則診斷該動物有增加體重的傾向。14.權利要求l的方法，其中(a)所述動物是犬科動物，(b)所述生物標志包含血清中的GLP-l,和(c)當禁食動物中的觀測體重調整血清GLP-1水平比正常體重的犬科動物的體重調整參考水平低至少約20%時，則診斷該動物有增加體重的傾向。15.權利要求l的方法，其中(a)所述動物是犬科動物，(b)所述生物標志包含血清中的生長素釋放肽，和(c)當禁食動物中的觀測體重調整血清生長素釋放肽水平比正常體重的犬科動物的體重調整參考水平低至少約20%時，則i貪斷該動物有增加體重的傾向。16.—種為動物選擇養生方案的方法，所述方法包括(a)通過測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較，來診斷體重狀況或傾向；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向；和(b)確定適于所-〖貪斷出的該體重狀況或傾向的養生方案。17.權利要求16的方法，其中所述養生方案包括供該動物消費的組合物。18.權利要求16的方法，其中所述養生方案包括針對該動物的鍛煉形式。19.一種4企測動物的體重狀況或傾向的起始的方法，所述方法包括在一段時間內監測該動物的至少一種生物標志，做法是在該時間段內取多個時間點在每個時間點時都測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的該生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較；其中在任何時間點如果相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向，則檢測到起始。20.權利要求19的方法，所述方法還包括通過選自以下的技術監測動物的體重稱重、相對體重的評估、體況評分的評估、形態測量術和它們的組合。21.—種評估養生方案管理動物的體重狀況或傾向的效果的方法，所述方法包括在執行該養生方案的時間段內監測該動物的至少一種生物標志，做法是在該時間段內取多個時間點在每個時間點時都測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的該生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示該養生方案管理體重狀況或傾向的效果。22.—種試劑盒，所述試劑盒包括(a)—種或多種用以檢測來自動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的^L測水平的試劑；和(b)—種或多種攜帶信息的用戶可使用媒介，所述信息包括(i)該生物標志的參考水平；和(ii)將該觀測水平與該參考水平進行比較的算法；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示該動物的體重訝大況或傾向。23.權利要求22的試劑盒，其中所述一種或多種試劑包含至少一種才艮道部分或標記。24.權利要求22的試劑盒，其:中所述一種或多種試劑包含至少一種抗體。25.權利要求22的試劑盒，所述試劑盒還包括用以傳達信息的工具，所述信息包括以下一種或多種(a)由相對于參考水平的觀測水平所指示的體重狀況或傾向的診斷；和(b)建議或規定的適合該診斷的養生方案。26.—種診斷動物的肥胖癥相關性健康失調的傾向的方法，所述方法包括測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示所述傾向。27.權利要求26的方法，其中所述動物是犬科動物或貓科動物。28.權利要求26的方法，其中所述動物最大約一歲，相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示該動物在之后壽命中的體重狀況的傾向。29.權利要求26的方法，其中所述肥胖癥相關性健康失調選自高脂血癥、血脂異常、胰島素抗性、葡萄糖不耐受、肝脂沉積、麻醉并發癥、腎上腺皮質功能亢進、曱狀腺機能減退、糖尿病、胰島瘤、垂體嫌色細胞腺瘤、垂體機能減退、下丘腦損害、關節壓迫、肌肉骨骼疼痛、呼吸困難、高血壓、難產、運動不耐受、熱不耐受、免疫功能下降、退行性關節和整形外科疾病、心血管疾病、過度緊張、呼吸窘迫、腎功能改變、胰腺炎、移行細胞癌、疲勞、睡眠障礙、生殖障礙和它們的組合。30.權利要求26的方法，其中所述生物標志選自葡萄糖、GLP-1、生長素釋放肽、c-反應性蛋白、曱狀腺刺激激素和它們的組合。31.權利要求26的方法，其中對至少兩個生物標志進行觀測水平的測定。32.權利要求26的方法，其中所述組織或生物流體樣品是在動物處于禁食狀態下獲得的。33.權利要求26的方法，其中所述組織或生物流體樣品是在祠喂周期中的多個時間點獲得，包括至少一個餐前時間點和至少一個餐后時間點。34.權利要求26的方法，其中所述組織或生物流體是全血、血漿或血清。35.權利要求26的方法，其中所述觀測水平和參考水平是用一種或多種獨立選自以下的測定法進行測定酶免疫測定、酶:f關免疫吸附測定、免疫熒光測定、放射免疫測定、蛋白質印跡測定、生化測定、酶學測定和比色測定。36.權利要求26的方法，其中所述超重相關性健康失調是骨關節炎。37.權利要求26的方法，其中所述生物標志是堿性磷酸酶。38.—種定量動物的體況評分的方法，所述方法包括(a)分析所述動物的體重和至少一種生物標志的血清水平；和(b)將步驟(a)獲得的所述數據應用于本發明的算法I-IV中的任何一個。全文摘要一種診斷動物的體重狀況或體重狀況的傾向的方法，所述方法包括測定來自該動物的組織或生物流體樣品中的至少一種生物標志的觀測水平，并將該觀測水平與該生物標志的參考水平進行比較；其中相對于參考水平的觀測水平單獨地或共同地指示體重狀況或傾向。文檔編號G01N33/50GK101427134SQ200680053484公開日2009年5月6日申請日期2006年11月30日優先權日2005年12月28日發明者C·C·米勒,K·G·弗里森,P·W·托爾,R·M·揚卡,W·D·舍恩赫爾申請人:希爾氏寵物營養品公司