一種藥物組合物的質量控制方法

專利名稱：一種藥物組合物的質量控制方法
技術領域：
本發明是一種藥物組合物的質量控制方法，屬于藥物的技術領域。
技術背景本藥物組合物以燈盞花素、芍藥苷為原料制成，其特征在于按照重量份 數計算，它由燈盞花素1 10份、芍藥苷1 100份經精制而成；本藥物組合 物為綜合中醫藥理論與現代醫藥學原理組配而成，具有活血化淤、通脈舒絡、 改善血循環和代謝作用功效，適用于中風瘀血阻絡證之半身不遂，口眼歪斜， 言語謇澀，苔薄白或薄白膩，脈沉細等，以及腦梗塞有上述見癥狀者，臨床上 除用于治療冠心病、心絞痛、心律失常、腦血栓、老年性癡呆等心腦血管疾病 外，還用于肝腎綜合癥、心肺病、糖尿病及其并發癥等疾病。心腦血管疾病如 冠心病、腦血栓、老年性癡呆等均是當今世界最常見和危害最大的疾病之一， 在許多國家已成為人口死亡的主要原因之一。據調査，近年來該類疾病的發病 率有逐年增高趨勢，而且中、青年患者不斷增加，已成為危害我國人民健康的 常見病、多發病。為了更好的控制該藥物組合物的質量，保證用藥的安全性， 更好的指導生產，使工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地， 本申請人研究了該藥物組合物的質量控制方法。本申請人不僅提供了野黃芩 苷、芍藥苷等特征成分的鑒別方法與含量測定方法，更建立了指紋圖譜的技術 方案，對其物質群整體予以控制，從整體上有效的表征其質量。中藥指紋圖譜 是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數類成分的色譜或 光譜的圖譜。在現階段，中藥大多數的有效成分沒有明確的情況下，指紋圖譜 對于有效控制本藥物組合制劑的質量，具有有益的效果。鑒別、含量測定、指 紋圖譜聯合應用，覆蓋面廣，特異性強，是本質量控制方法突出的實質性特點。 發明內容本發明的目的在于提供一種藥物組合物的質量控制方法，這種方法向相 關的生產、檢測機構提供了檢測的指標、檢測的手段、技術方法等等；以便更 好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產，使生產工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地。本發明是這樣構成的 一種以燈盞花素、芍藥苷制成的藥物組合物的質量 控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內容
(1) 以燈盞花素、芍藥苷中全部或部分成分特征為主的指紋圖譜測試方法；(2) 野黃芩苷、芍藥苷中一種或兩種成分的鑒別測試方法；(3) 野黃芩苷、芍藥苷中一種或兩種成分的含量測試方法。 所述的以燈盞花素、芍藥苷制成的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內容(1) 供試品溶液的制備取待測藥物組合物適量，以水或甲醇或乙醇中 的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制備供試品溶液；(2) 參照物溶液的制備取野黃芩苷或芍藥苷，水或甲醇或乙醇中的一 種或幾種為溶劑，溶解至合適濃度，作為參照物溶液；(3) 色譜條件色譜柱采用垸基硅垸鍵合硅膠為填料流動相A為50 100%乙腈或50 100%甲醇，流動相B為0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉 溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0. 1% 3%冰醋酸或0.1 % 3%甲酸或0.03% 1%磷酸溶液，梯度洗脫，流動相A比例變化范圍為 12 85%，流速為0. 5 1. 5ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內的一個或幾 個，柱溫在20 50。C;(4) 標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、白芍或赤 芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所 測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準， 計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2 8 個；(5) 以(1) (3)所述方法作為待測藥物組合物中以燈盞花素、白芍 或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6) 待測藥物組合物的指紋圖譜，應符合下列要求中的部分或全部I. 待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80 1.00;II. 非共有峰面積不得超過總峰面積的10%;III. 除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時 間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20%;IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰 峰面積的比值相對偏差不得超過±30%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于 10%小于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過士 35%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5%小于10%的峰，與標準指紋圖譜 相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40%。所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內容(1) 供試品溶液的制備精密稱取待測藥物組合物適量，加水稀釋或溶 解，制成每lml含lmg的溶液,濾過，即得；(2) 參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每lml含 0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3) 色譜條件色譜柱釆用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填料；流動相A為 80%乙腈，流動相B為0.1X磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80 分鐘，流動相A的比例由15%升至70%，流動相B的比例由85X降至30X; 流速為1. Oml/min，檢測波長為230土2nm，柱溫為4(TC;(4) 標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、白芍或赤 芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試 品溶液各10 li 1，分別注入液相色譜儀，依據10批或10批以上供試品所測得 的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算 其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2 6個；(5) 以(1) (3)所述方法作為待測藥物組合物中以燈盞花素、白芍 或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6) 待測藥物組合物的指紋圖譜，應符合下列要求中的部分或全部-I. 待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90 1.00;II. 非共有峰面積不得超過總峰面積的5%;III. 除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時 間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過± 10%;IV. 共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10%小于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過土 25%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5%小于10%的峰，與標準指紋圖譜 相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30%。所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質量控制方法，其特 征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內容a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法-取待測藥物組合物適量，加乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾
液或上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每lml 含lmg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述溶液適量，分別點 于同一硅膠薄層板或聚酰胺薄膜上，以甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋 酸丁酯-甲酸或乙酸=5 12: 0.5 5: 0.02 3為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以含三氯化鋁或三氯化鐵顯色劑，烘烤或不烘烤，供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上，應顯相同顏色斑點；b、 藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取 或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液 相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2% 3%冰醋酸水溶液或0.2% 3%甲酸水溶液或0.01% 1%磷酸水溶液或 0. O05mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀 溶液=16 70: 84 30為流動相，檢測波長為200 410nm中的一種或幾種； 采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜 儀，測試，供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、 藥物組合物中芍藥苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加乙醇或甲醇或正丁醇或水中的一種或幾種為溶 劑提取，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜 法試驗，分別吸取上述對照溶液及供試溶液適量，點于同一硅膠薄層板上，以 三氯甲垸或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-甲酸或乙 酸=2 8: 0.5 5: 0.5 5: 0.01 4為展開劑，展開，取出，晾干，先后或 分別噴以含三氯化鐵的顯色劑或含三氯化鋁的顯色劑或含硫酸的顯色劑或含 香草醛的顯色劑中的一種或幾種，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上， 應顯相同顏色斑點；d、 藥物組合物中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或 稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液 相色譜法，色譜柱用烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05% 3 %冰醋酸水溶液或0.05% 3%甲酸水溶液或0.001% 1%磷酸水溶液或 0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀 溶液=15 62: 85 38流動相，檢測波長為200 410nm中的一個或幾個；采 用液相色譜法試驗,分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量,注入液相色譜儀， 測試，供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質量控制方法，其特 征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內容a、 藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法-取待測藥物組合物適量，加甲醇提取，制備供試品溶液另取野黃芩苷對 照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液 各3U1，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸=7: 2: l為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中， 在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的條斑；b、 藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取 續濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜 法，色譜柱用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1%磷酸水溶液=50: 50 為流動相，檢測波長為335nm;分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入 液相色譜儀，測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、 藥物組合物中芍藥苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液； 另取芍藥苷對照品的甲醇溶液作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供 試溶液與對照溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙 酯-甲醇-甲酸=6: 1.5: 1.5: 0. 5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草 醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位 置上，顯相同顏色斑點；d、 藥物組合物中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取或稀釋，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用 十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1%甲酸溶液=40:60為流動相，檢 測波長為230nm;分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀， 測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質量控制方法，其特 征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內容a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測定取待測藥物組合物適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液 相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2% 3%冰醋酸水溶液或0.2% 3%甲酸水溶液或0.01% 1%磷酸水溶液或 0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀 溶液=16 70: 84 30為流動相，檢測波長為200 410nm中的一種或幾種； 采用液相色譜法試驗，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相 色譜儀，測試，以外標一點法或標準曲線法進行計算，藥物組合物中每日用劑 量含野黃芩苷的不得少于12mg;b、藥物組合物中芍藥苷的含量測定取待測藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或 稀釋至合適濃度，濾過，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液， 采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或 0.05% 3%冰醋酸水溶液或0.05% 3%甲酸水溶液或0.001% 1%磷酸水溶 液或O. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二 氫鉀溶液=15 62: 85 38流動相，檢測波長為200 410nm中的一個或幾個； 釆用液相色譜法試驗，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相 色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含芍 藥苷的不得少于15mg;所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質量控制方法，其特 征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內容a、 藥物組合物中野黃苓苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，加甲醇提取或稀釋至合適濃度， 搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以野黃苳苷對照品的甲醇溶液為對照， 采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇_0.1%磷酸 水溶液=50: 50為流動相，檢測波長為335nm;分別精密吸取供試品溶液與對 照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法進行計算，藥物組合物 中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于25mg;b、 藥物組合物中芍藥苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度， 搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照， 采用液相色譜法，色譜柱用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇_0.1%甲酸 溶液=40:60為流動相，檢測波長為230nm;分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法進行計算，藥物組合物中每 日用劑量含芍藥苷的不得少于30mg;所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質量控制方法，其特
征在于所迷藥物組合物的含量測走結果，按照重量百分比計算，野黃苳苷與 芍藥苷的總量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的50%以上。與現有技術相比，本發明能更加完善的控制以燈盞花素、芍藥苷制成的藥 物組合物的質量。中藥成分復雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內在質 量，具有一定的片面性，更無法判斷其藥效的指標成分。因此本申請人從指紋 圖譜、鑒別和含量測定三個方面來全面控制注射劑的質量。由于藥物組合物原 料中的化學成分經制劑成型后相互干擾，對鑒別、含量測定、指紋圖譜均會造 成較大影響。原來曾適用于單個原料的鑒別、含量測定或指紋圖譜測試方法， 在用于測試含有該原料的的藥物組合物時往往無法實施。因此，藥物組合物的 質量控制方法必須在原單個原料相應方法的基礎上作以較大改進，或放棄原方 法而建立完全不同的新方法。也就是說，本發明所述的質控方法并非是組合物 中單個原料質控方法的簡單疊加，而是經大量試驗研究后發明的。而只有采用本發明的條件，才能得到理想的鑒別、含量測定和指紋圖譜質 控效果。通過實驗證明，本發明質量控制方法對以燈盞花素、芍藥苷或芍藥苷制成 的藥物組合物產品的質量控制更為有效，方法精密度、穩定性均較高。實驗例l注射用無菌粉末中以燈盞花素、芍藥苷成分特征為主的指紋圖 譜的制備1. 色譜柱的選擇-研究過程中，選用了常規的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了 Inertsil 0DS-3 (250mmX4.6mm ， 5 u m) Kromasil U (200mmX4.6mm, 5um)、 Diamonsil CIH (250mmX4. 6mm， 5um)三種牌號的色 譜柱，結果顯示三種牌號的色譜柱均可達到較好的分離效果，其中Diamonsil Cw色譜柱分離效果最好，柱效最高。故選用Diamonsil C1H (250mmX4. 6mm， 5 um)為實驗研究柱。2. 流動相的選擇研究過程中分別考察了 (1)乙腈一水(18: 82)， (2)甲醇一水(40: 60);(3)甲醇一0.05moL/L磷酸二氫鈉(10: 90); (4)乙腈溶液-O. 5%磷酸(梯 度洗脫)；(5)甲醇溶液-0.08moL/L磷酸二氫鉀(梯度洗脫)；(6)乙腈溶液 -1%冰醋酸(梯度洗脫)等6種流動相系統；結果顯示流動相(1)條件下，峰 形拖尾，分離不好；流動相(2)條件下，峰形拖尾，峰與峰重疊較多；流動 相(3)條件下，1小時內出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(4)、(5)、 (6)條件下，50 100%乙腈或50 100%甲醇-0. 005mol/L 0. 3mol/L
磷酸二氫鈉溶液或O. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0. 1% 3%冰醋 酸或O. 1% 3%甲酸或0.03% 1%磷酸溶液=12 85: 88 15范圍內，梯度 洗脫，可獲較佳效果；最佳條件為流動相A為8096乙腈，流動相8為0.1% 磷酸，梯度洗脫，從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15%升至70%,流 速為1.0ml/min，在該條件下，峰形好，出峰快而完全且分布均勻。3. 檢測波長的確定在上述最佳流動相條件下，分別考察了 190 410nm下的色譜峰情況，結 果表明，230nm檢測時能兼顧各成分色譜峰的峰度、分離度和基線，效果最佳， 故選擇230nm為本品指紋圖譜檢測波長。4. 儀器參數選用了液相色譜分析領域主流配置和性能良好的LC-10Avp 高效液相色譜儀，WML-2010色譜工作站，柱溫40。C。5. 供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每lml含lmg的溶液，即得。6. 參照物溶液的制備稱取野黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每lml約含0. 15mg的溶液，搖勻， 即得。7. 指紋圖譜及技術參數7根據10批樣品制定標準指紋圖譜，并制定待測藥物組合物的指紋圖標 準如下I. 待測藥物組合物的的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90 1.00;II. 非共有峰面積不得超過總峰面積的5%;III. 除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時 間的比值相對偏差不得超過± 10%;IV. 共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰 峰面積的比值相對偏差不得超過±20%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10%小于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過土 25%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5%小于10%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過± 30%;實驗例2注射液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法為了突出燈盞化素的特征，選擇了野黃芩苷作為其特征斑點，只有排除制 劑中芍藥苷等成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優劣的 關鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，
部分展開條件與結果如下注射液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法 條件苯-甲酸乙酯-甲酸(5: 3: 0.5)硅膠G薄層板醋酸乙酯-苯-乙酸(5: 4: 3)聚酰胺薄膜 醋酸乙酯-苯-甲酸(8: 4: 3)硅膠G薄層板 氯仿-醋酸乙酯-丙酮(7: 2: 4)硅膠H薄層板 甲苯-醋酸乙酯(8: 1)硅膠H薄層板 乙醇-丙酮-甲酸(10: 3: 1)聚酰胺薄膜甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7: 2: 1)聚酰胺薄膜問題 分離不清晰 分離不清晰，陰性有干擾 分離不清晰 分離不清晰 分離不清晰 對照品展開至前沿 分離清晰，Rf值適中，陰性無干擾經過篩選，確定了最佳展開條件以聚酰胺薄膜為固定相，以甲醇醋酸 乙酯甲酸(7: 2: 1)為展開劑，在此條件下，野黃芩苷的Rf值適中，和其 它斑點分離清晰，陰性無干擾。實驗例3注射用濃溶液芍藥苷的薄層色譜鑒別方法試驗選擇了芍藥苷為特征斑點，但只有排除野黃芩苷等成分的干擾，才能 獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優劣的關鍵因素為展開條件，特別是展 開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結果如下注射用濃溶液芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別條件問題對照品展開至前沿 陰性有干擾 分離不清晰，陰性有干擾 分離不清晰 分離不清晰， 分離不清晰二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇(9: 6: 5)硅膠G薄層板 醋酸乙酯-甲醇-甲酸(7: 6: 5)硅膠GF胸薄層板 三氯甲垸-乙醇-冰醋酸(7: 2: 2)硅膠H薄層板 三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸(7: 1: 2)硅膠G薄層板 丙酮-醋酸乙酯-冰醋酸(7: 1: 2)硅膠H薄層板 正己烷-醋酸丁酯-乙醇-甲酸(8: 3: 3: 2)硅膠H薄層板 三氯甲垸-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6: 1.5: 1.5: 0.5)硅膠G薄層分離清晰，Rf值適中，陰性無板 干擾 經過篩選，確定了最佳展開條件以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷 醋酸乙酯甲醇甲酸(6: 1.5: 1.5: 0.5)為展開劑，在此條件下，芍藥苷、 沒食子酸的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。 實驗例4注射用無菌粉末中野黃芩苷的含量測定 1儀器與試藥1. 1主要儀器高效液相色譜儀 LC-2010AHT SHIMADZU紫外/可見分光光度儀TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限公司 電子分析天平 BP211D SARTORIUS超聲波清洗機 KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司1.2試藥野黃芩苷中國藥品生物制品檢定所 甲 醇分析純 北京化工廠 乙 腈色譜純 迪馬公司 磷 酸分析純 北京化學試劑公司 2野黃芩苷純度測定由中國藥品生物制品檢定所提供野黃芩苷，經高效 液相色譜法(歸一化法)測定純度為96.40%,符合含量測定用對照品要求(在 測定中，按照96.40%的純度進行折算)。3檢測波長的選擇取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 lml含0.0463mg的溶液，在190 400nm波長范圍內掃描。結果表明，野黃芩 苷在284nm及335nm處有最大吸收，根據《衛生部藥品標準中藥成方制劑》相 關品種并結合文獻報道，選擇335rnn作為野黃芩苷含量測定的檢測波長。 4色譜條件色譜儀SHIMADZU LC-2010AHT;色譜柱Diaraonsil ODS 250鵬X4. 6mm 5tim;流動相甲醇-0. 1%磷酸(50: 50);流 速1.0ml/min;柱 溫30'C; 進樣量10Ul;檢測波長335nm。對照品溶液的制備精密稱取野黃苳苷對照品適量，加甲醇制成每lml 含0.05mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末約20mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加 甲醇適量超聲處理(功率250W,頻率33KHz) 5min，取出，放至室溫，加甲醇 定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45iim)濾過，取續濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10nl，注入液相色譜 儀，測定，即得。根據上述色譜條件得到野黃芩苷對照品、供試品色譜圖，其理論板數n
含量(mg/瓶) 27.61 27.54 27.63均大于5000，野黃芩苷色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5,溶 劑無干擾。5提取時間的選擇取本品粉末約40mg(共6份)，精密稱定，分置25ml 量瓶中，加甲醇適量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz) 5、 10、 20min， 取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45ixm)濾過，精密 吸取續濾液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。提取時間考察提取時間(min) 510 20結果表明，超聲處理5min即可提取完全。6線性關系考察精密量取野黃芩苷對照品溶液(C=0.978mg/ml) 0.0、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 l.Oml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻， 分別從中精密吸取lOu l，注入液相色譜儀,照高效液相色譜法(中國藥典2000 年版一部附錄VI D)測定。以峰面積為縱坐標，野黃芩苷的量(ug)為橫坐 標作圖，繪制標準曲線。野黃芩苷標準曲線測定結果 編號 野黃芩苷量(yg) 折算后(ug) 峰面積1 0.0000 0.0000 02 0.1956 0.1886 6037223 0.3912 0.3771 12240784 0.5868 0.5657 18353745 0.7824 0.7542 25056786 0.9780 0.9428 3038182 回歸方程Y-3259091. 50x-1830. 06相關系數Y =0.9999結果表明野黃芩苷在0. 1886 u g 0. 9428" g范圍內線性良好。 經計算，野黃芩苷的標準曲線過原點，因此選用外標一點法測定野黃芩苷 的含量。7精密度實驗精密吸取同一份野黃芩苷對照品溶液lOnl,注入液相色 譜儀，測定5次，考察對照品溶液精密度，測定結果見下表。精密度試驗
試驗次數 1 2 3 4 5 平均值RSD (%)峰面積 1572015 1570202 1566206 1559384 1557017 1564965 0.42結果表明，對照品溶液精密度良好。 8供試品溶液穩定性實驗精密吸取同一供試品溶液10nl，注入液相色譜儀，分別在0、 2、 4、 8、 24小時進樣測定。供試品溶液穩定性實驗時間(h) 0 2 4 8 24均值 RSD含量(mg/瓶) 27.46 26.94 26.88 27.19 26.07 26.91 1.94 結果表明，供試品溶液24小時內穩定性良好。9重復性實驗取本品，按正文供試品溶液的制備和測定法項下進行操作。重復性實驗編號 1 2 3 4 5平均值 RSD (%)含量(mg/瓶) 27.35 27.12 27.64 26.95 27.05 27.22 1.01 10加樣回收率實驗采用加樣回收法，取本品粉末約10mg (共6份)， 精密稱定，分置100ml量瓶中，分別精密加入野黃芩苷對照品溶液 (C=l. 107mg/ml) 1. 6ml、 2. 0ml和2. 4ml (各兩份)，加甲醇適量超聲處理(功 率250W，頻率33KHz) 5min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔 濾膜(0.45um)濾過，精密吸取續濾液lOul,注入液相色譜儀，測定，即 得。(藥物組合物中野黃芩苷的含量為22.85%。)加樣回收率實驗編號供試品稱樣供試品中純品野黃芩苷加入量折算后測量值回收率量(mg)量(mg)(mg)(mg)(mg)(%)110. 082. 30331.77121. 70743. 961597.1229. 442.15701.77121. 70743. 807196. 64311.262. 57292.2142.13434. 618295.83410. 942. 49982.2142.13434.554996. 29512.052. 75342. 65682. 56125. 240997.12610. 242.33982. 65682.56124.815096. 64平均回收率=96.61%， RSD=0.51%11樣品含量測定取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定 法項下的操作。 樣品含量測定批號 野黃芩苷含量(mg/瓶)1 27. 122 26.543 29.73實驗例5注射用無菌粉末中芍藥苷含量測定 1儀器與試藥儀器JASC0 1580型高效液相色譜儀鉆石C18色譜柱 250X4.6mm 5um迪馬公司SARTARIUS BP211D電子分析天平試劑乙腈 色譜純 Fisher公司甲醇 分析純 北京化工廠磷酸二氫鈉 分析純 北京化學試劑公司2方法與結果2.1色譜分析條件固定相十八垸基硅垸鍵合硅膠250X4.6mm 5um流動相甲醇-0.1%甲酸(40: 60)流 速lml/min柱 溫室溫進樣量10ul檢測波長230nm2.2系統適用性試驗根據上述色譜條件得到芍藥苷對照品、樣品色譜 圖(見附

圖12、 13)，理論板數n均大于3000。2.3 測定波長的選擇經紫外掃描，芍藥苷在230 nm波長處有最大吸 收，故選定230 mn為測定波長。2.4對照品溶液的制備精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器干燥36小 時的芍藥苷對照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度， 搖勻，即得(每lml中含芍藥苷O. lmg)。2.5供試品溶液的制備取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻， 取約O. lg,精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率250W， 頻率33KHz) IO分鐘使溶解，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過， 精密量取續濾液lml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾 膜(0.45um)濾過，取續濾液，即得。
2.6陰性對照試驗為考察其它輔料是否干擾芍藥苷的測定，除芍藥苷 或芍藥苷外，按處方比例稱取其它輔料與供試品溶液同法制成陰性對照溶液并 測定。結果表明，陰性樣品對芍藥苷的含量測定無干擾。3線性關系的考察精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器干燥36小時的芍 藥苷對照品11.48mg，置10ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并定容至刻度，搖 勻，精密量取0.4、 0.8、 1.2、 1.6、 2.0ml,分別置10ml量瓶中，用甲醇稀 釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10ul注入高效液相色譜儀，按上述色譜 條件測定。以峰面積為縱坐標，芍藥苷量(ug)為橫坐標作圖，繪制標準曲 線。回歸方程為 Y=1270296. 82X+2219. 70 Y =0. 9999芍藥苷在0. 4592 2. 2960ug范圍內線性良好。標準曲線測定數據 編號 芍藥苷量(ug) 峰面積1 0.4592 565516.52 0.9184 11714903 1.3776 17838854 1.8368 23443005 2.2960 28957134供試品溶液穩定性試驗精密吸取供試品溶液lOlU,注入液相色譜 儀，每隔l小時重復測定l次，結果表明在4小時之內，供試品溶液穩定。供試品溶液穩定性試驗 時間(h) 0 1 2 3 4 平均 RSD%芍藥苷(mg/瓶) 47.1445.2646.9447.0846.9746.66 1.69 5精密度試驗精密稱取經五氧化二磷干燥器干燥36小時的芍藥苷對照 品11.56mg,按正文對照品溶液的制備和測定法項下操作，重復測5次，結果如下精密度試驗編號 1 2 3 4 5 平均 RSD%峰面積 1374344 1376226 1378443 1375983 1376550 1376309 0.11 6重復性試驗取本品5份，精密稱定，按正文供試品溶液的制備和測定 法項下操作，結果如下重復性試驗試驗編號 1 2 3 4 5 X平均 RSD%
芍藥苷(mg/瓶) 46.52 45.85 46.23 46. 14 45.96 46.14 0.56 7回收率試驗采用加樣回收法，精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器干燥 36小時的芍藥苷約42. 46mg，置25ml量瓶中，加入甲醇適量使溶解并稀釋至 刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密稱取本品內容物約9mg，再精密量取對照 品溶液2ml，共置50ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理使溶解，取出，放冷， 加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，精密吸取續濾液10ul注 入液相色譜儀，測定，即得。(藥物組合物中芍藥苷含量為27.09%)回收率試驗編號內容物稱量 (mg)內容物中芍藥 苷量(mg)芍藥苷加入 量(mg)測量值(mg)回收率(％)19. 722. 63313. 39686. 000199.1229.032.44623.39685. 775398.01310.012.71173. 39686. 028797. 6549.252. 50583.39685. 873499.14510. 362. 80653.39686. 144298.26平均回收率=98. 44%,RSD=0. 68%。8樣品的含量測定按正文供試品溶液的制備和測定法項下操作,測定三 批樣品，結果如下-樣品的含量測定 批號 芍藥苷含量(mg/瓶)1批 46. 252批 47. 923批 48. 2具體實施方式
實施例1采用液相色譜法測定注射用無菌粉末中以燈盞花素、芍藥苷特征 為主的指紋圖譜。(1) 供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末適量，加甲醇制成每lml含 lmg的溶液,搖勻，用微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液；(2) 參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每lml含 0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3) 色譜條件色譜柱采用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為 80%乙腈，流動相B為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80 分鐘，流動相A的比例由15%升至70%，流速為1.0ml/min，檢測波長為230
土2nm，柱溫為40。C;(4) 以燈盞花素和芍藥苷特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸 取參照物溶液與供試品溶液各lOul，分別注入液相色譜儀，依據IO批供試 品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基 準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2 個；(5) 以上述方法作為藥物組合物中以燈盞花素、芍藥苷特征為主的指紋 圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6) 待測藥物組合物的指紋圖譜，應符合下列要求-I. 待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90 1.00;II. 非共有峰面積不得超過總峰面積的5%;III. 除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10%;IV. 共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰 峰面積的比值相對偏差不得超過±20%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10%小于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過士 25%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5%小于10%的峰，與標準指紋圖譜 相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30%。實施例2采用液相色譜法測定注射用濃溶液中以燈盞花素、芍藥苷特征為 主的指紋圖譜。(1) 供試品溶液的制備精密量取樣品適量，加乙醇稀釋10倍,搖勻， 用微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液；(2) 參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加959&乙醇制成每lml 含0.05mg的溶液，作為參照物溶液；(3) 色譜條件色譜柱采用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填料；流動相A為 50%甲醇，流動相B為0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0 分鐘至60分鐘，流動相A的比例由20X升至85X,流速為1.4ml/min，檢測 波長為375士2nm,柱溫為50。C;(4) 以燈盞花素和芍藥苷特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸 取參照物溶液與供試品溶液各5ul，分別注入液相色譜儀，依據10批供試品 所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準， 計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有6個；
(5) 以上述方法作為藥物組合物中以燈盞花素、芍藥苷特征為主的指紋 圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6) 待測藥物組合物的指紋圖譜，應符合下列要求I. 待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80 1.00;II. 非共有峰面積不得超過總峰面積的5%;III. 除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時 間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10%;實施例3釆用液相色譜法測定注射液中以燈盞花素、芍藥苷成分特征為主 的指紋圖譜。(1) 供試品溶液的制備取樣品，用甲醇稀釋5倍，用0.45um的微孔 濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液；(2) 參照物溶液的制備精密稱取芍藥苷適量，加50%乙醇制成每lml含 0.05mg的溶液，作為參照物溶液；(3) 色譜條件色譜柱采用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填料；流動相A為 甲醇，流動相B為0.1X甲酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至40分鐘， 流動相A的比例由12%升至50%，從40分鐘至60分鐘，流動相A的比例由 50%升至80%，從60分鐘至65分鐘，流動相A的比例由80X降至12X，流 速為0.8ml/min，檢測波長為190土2nm，柱溫為20。C;(4) 以燈盞花素和芍藥苷成分特征為主的標準指紋圖譜的制定:分別精 密吸取參照物溶液與供試品溶液各10ul，分別注入液相色譜儀，依據10批 供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間 為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰 有2個；(5) 以上述方法作為藥物組合物中以燈盞花素、芍藥苷成分特征為主的 指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6) 待測藥物組合物的指紋圖譜，應符合下列要求I. 待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80 1.00;II. 非共有峰面積不得超過總峰面積的10%;III. 除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過± 20%;IV. 共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰
峰面積的比值相對偏差不得超過±30%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10%小于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過士 35%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5%小于10%的峰，與標準指紋圖譜 相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40%。實施例4采用液相色譜法測定注射用無菌粉末中以燈盞花素、芍藥苷成分 特征為主的指紋圖譜。(1) 供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末適量，加809&甲醇制成每lml 含O.lmg的溶液,搖勻，用0.45lim的微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶 液；(2) 參照物溶液的制備精密稱取芍藥苷適量，加8096甲醇制成每lml含 0.05mg的溶液，作為參照物溶液；(3) 色譜條件色譜柱采用八垸基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙 腈，流動相B為0. 005mol/L磷酸二氫鈉溶液，梯度洗脫，溶劑比例從O分鐘 至60分鐘，流動相A的比例由12%升至70%,流速為1.2ml/min，檢測波長 為410土2nm,柱溫為40'C;(4) 以燈盞花素和芍藥苷成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精 密吸取參照物溶液與供試品溶液各lOul，分別注入液相色譜儀，依據10批 供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間 為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰 有8個；(5) 以上述方法作為藥物組合物中以燈盞花素、芍藥苷成分特征為主的 指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6) 待測藥物組合物的指紋圖譜，應符合下列要求非共有峰面積不得 超過總峰面積的5%;除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比 值相對偏差不得超過±20%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10%小于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5%小于10%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積 的比值相對偏差不得超過± 30%。實施例5注射用無菌粉末中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品0.05g,加甲醇20ml提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品， 加甲醇制成每lml含lmg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3u 1,分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸=7: 2: l為展 開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與 對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的條斑。實施例6注射用無菌粉末中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品0. lg,加50%乙醇20ml提取，制備供試品溶液；另取野黃茶苷對 照品，加50%乙醇制成每lml含lmg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述 溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙醇-甲酸乙酯-甲酸=8: 4: l為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，105'C烘5分鐘， 供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。實施例7注射液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品2ml，蒸干，殘渣加甲醇10ml提取，制備供試品溶液；另取野黃芩 苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述 溶液各2ul，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以乙醇-醋酸丁酯-甲酸=5: 0.5: 3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以4%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色 譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的條斑。實施例8注射用濃液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品lml，用5倍量乙醇稀釋，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品， 加甲醇制成每lml含lmg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各IOWl，分別點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸丁酯-冰醋酸=12: 5: 0.02為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。實施例9注射用無菌粉末中野黃零苷的液相色譜鑒別方法 取樣品20mg，加甲醇20ml提取，用微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品 溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每lml含0.1mg的對照溶液，采用液相 色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1%磷酸水溶液=50: 50為流動相，檢測波長為335nrn;分別吸取供試品溶液與對照品溶液10u 1, 注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色 譜峰；實施例10注射用濃溶液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法 取樣品0.5ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取野黃苳苷對照品， 加甲醇制成每lml含0.05mg的對照溶液，釆用液相色譜法，色譜柱用十八垸 基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-3%冰醋酸水溶液=70: 30為流動相，檢測波 長為200rnn;分別吸取供試品溶液與對照品溶液20u 1，注入液相色譜儀,測
試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰； 實施例11注射液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法
取樣品2ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加 乙醇制成每lml含0. 05mg的對照溶液，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅 垸鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.005mol/L磷酸二氫鉀溶液^6: 84為流動相， 檢測波長為410nm;分別吸取供試品溶液與對照品溶液5 n 1，注入液相色譜儀， 測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰； 實施例12注射用無菌粉末中芍藥苷的薄層色譜鑒別方法 取樣品0.2g,加甲醇20ml提取，制備供試品溶液；另取芍藥苷對照品， 加甲醇制成每ml含芍藥苷lmg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供 試溶液與對照溶液1 5u 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋 酸乙酯-甲醇-甲酸=6: 1.5: 1.5: 0. 5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位 置上，顯相同顏色斑點；
實施例13注射用濃溶液中芍藥苷的薄層色譜鑒別方法
取樣品0.5ml，加甲醇20ml稀釋，制備供試品溶液；另取芍藥苷對照品， 加甲醇制成每ml含芍藥苷2mg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供 試溶液與對照溶液3ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-醋酸乙 酯-甲醇-甲酸=8: 0.5: 5: 4為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；
實施例14注射液中芍藥苷的薄層色譜鑒別方法
取樣品2ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加 乙醇制成每ml含芍藥苷lmg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供試 溶液與對照溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲垸-醋酸丁酯-甲醇-冰醋酸=2: 5: 5: 0. 01為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；
實施例15注射用無菌粉末中芍藥苷的液相色譜鑒別方法 取樣品5mg，加甲醇20ml提取，用微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶 液；取芍藥苷對照品加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜 法，色譜柱用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇_0.1%甲酸溶液=40:60 為流動相，檢測波長為230nm;分別吸取供試品溶液與對照品溶液5 u 1，注入
液相色譜儀，測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。 實施例16注射用濃溶液中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取樣品0.2ml，加甲醇30ml稀釋，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品加 甲醇制成每ml含0. lmg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基 硅垸鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.001%磷酸=15:85為流動相，檢測波長為 200nm;分別吸取供試品溶液與對照品溶液20ul，注入液相色譜儀，測試， 供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。實施例17注射液中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取樣品lml,加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品加95% 乙醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用二烷基硅 烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液-62:38為流動相，檢測 波長為410nm;分別吸取供試品溶液與對照品溶液1 20 u 1，注入液相色譜儀， 測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。實施例18注射用無菌粉末中野黃芩苷的含量測定取樣品20mg，精密稱定，加甲醇50ml提取，制備供試品溶液；取野黃芩 苷對照品，加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜 柱用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0. 1%磷酸水溶液=50: 50為流動 相，檢測波長為335mn;分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液10u 1，注入 液相色譜儀，測試，以外標一點法進行計算，制劑中每日用劑量含野黃芩苷的 不得少于12mg;實施例19注射用濃溶液中野黃芩苷的含量測定精密量取樣品0.2ml，加甲醇醇50ml稀釋，用微孔濾膜過濾，取續濾液作 為供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每ml含0. 05mg的對照品溶液， 采用液相色譜法，色譜柱用二烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.005mol/L 磷酸二氫鈉溶液=70: 30為流動相，檢測波長為200nm;分別精密吸取供試品 溶液與對照品溶液15u 1，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法進行計算， 制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于20mg;實施例20注射液中野黃芩苷的含量測定精密量取樣品0.5ml，加乙醇50ml稀釋，用微孔濾膜過濾，取續濾液作為 供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加乙醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液， 采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，乙腈-3%甲酸水 溶液=16: 84為流動相，檢測波長為410mn;分別精密吸取供試品溶液與對照 品溶液10ul，注入液相色譜儀，測試，以標準曲線法進行計算，制劑中每日 用劑量含野黃芩苷的不得少于25mg;實施例21注射用無菌粉末中芍藥苷的含量測定取樣品20mg,精密稱定，加甲醇50ml提取，用微孔濾膜過濾，取續濾液 作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含O. lmg的對照品溶液, 采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1%甲酸 溶液=40:60為流動相，檢測波長為230nm;分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液10ul，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法進行計算，制劑中每日用 劑量含芍藥苷的不得少于30mg;實施例22注射用無菌粉末中芍藥苷的含量測定取樣品100mg，精密稱定，加甲醇100ml提取，用微孔濾膜過濾，取續濾 液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.02mg的對照品溶 液，采用液相色譜法，色譜柱用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.05 。％冰醋酸溶液=15:85為流動相，檢測波長為200nm;分別精密吸取供試品溶液 與對照品溶液15yl，注入液相色譜儀，測試，以標準曲線法進行計算，制劑 中每日用劑量含芍藥苷的不得少于15mg;實施例23注射液中芍藥苷的含量測定精密量取樣品lml,加甲醇稀釋至10ml，制備供試品溶液；取芍藥苷對照 品，加甲醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十 八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液:62:38為流動 相，檢測波長為410nm;分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液5ul，注入液 相色譜儀，測試，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得 少于20mg;實施例24注射用濃溶液中芍藥苷的含量測定精密量取樣品0.2ml，加甲醇稀釋至25ml，用微孔濾膜過濾，取續濾液作 為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液， 釆用液相色譜法，色譜柱用八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-3%甲酸水溶 液二30:70為流動相，檢測波長為330mn;分別精密吸取供試品溶液與對照品溶 液20ul，注入液相色譜儀，測試，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑 量含芍藥苷的不得少于30mg;
權利要求
1、一種以燈盞花素、芍藥苷制成的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內容(1)以燈盞花素、芍藥苷中全部或部分成分特征為主的指紋圖譜測試方法；(2)野黃芩苷、芍藥苷中一種或兩種成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、芍藥苷中一種或兩種成分的含量測試方法。
2、按照權利要求1所述的以燈盞花素、芍藥苷制成的藥物組合物的質量控 制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內容(1) 供試品溶液的制備取待測藥物組合物適量，以水或甲醇或乙醇中的 一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制備供試品溶液；(2) 參照物溶液的制備取野黃芩苷或芍藥苷，水或甲醇或乙醇中的一種 或幾種為溶劑，溶解至合適濃度，作為參照物溶液；(3) 色譜條件色譜柱采用烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為50 100%乙腈或50 100%甲醇，流動相B為0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉 溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0. 1% 3%冰醋酸或0.1 % 3%甲酸或0.03% 1%磷酸溶液，梯度洗脫，流動相A比例變化范圍為 12 85%，流速為0. 5 1. 5ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內的一個或幾 個，柱溫在20 50。C;(4) 標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、白芍或赤芍 成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測 得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計 算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2 8個；(5) 以(1) (3)所述方法作為待測藥物組合物中以燈盞花素、白芍或 赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6) 待測藥物組合物的指紋圖譜，應符合下列要求中的部分或全部I. 待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80 1.00;II. 非共有峰面積不得超過總峰面積的10%;III. 除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時 間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過± 20%;IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰 峰面積的比值相對偏差不得超過±30%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于 10%小于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過土 35%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5%小于10%的峰，與標準指紋圖譜 相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40%。
3、 按照權利要求2所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質 量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內容(1) 供試品溶液的制備精密稱取待測藥物組合物適量，加水稀釋或溶解，制成每M含lmg的溶液,濾過，即得；(2) 參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每lml含 0. 15mg的溶液，作為參照物溶液；(3) 色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為 80%乙腈，流動相B為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80 分鐘，流動相A的比例由15%升至70%，流動相B的比例由85X降至30X; 流速為1. Oml/min,檢測波長為230士2nm，柱溫為40。C;(4) 標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、白芍或赤芍 成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品 溶液各10 U 1，分別注入液相色譜儀，依據10批或10批以上供試品所測得的 圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有2 6個；(5) 以(1) (3)所述方法作為待測藥物組合物中以燈盞花素、白芍或 赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6) 待測藥物組合物的指紋圖譜，應符合下列要求中的部分或全部I. 待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90 1.00;II. 非共有峰面積不得超過總峰面積的5%;III. 除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時 間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10%;IV. 共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰 峰面積的比值相對偏差不得超過±20%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10%小于20%的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過士 25%;共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5%小于10%的峰，與標準指紋圖譜 相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過± 30%。
4、 按照權利要求1所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質 量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內容a、 藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法-取待測藥物組合物適量，加乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾 液或上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每lml 含lmg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述溶液適量，分別點 于同一硅膠薄層板或聚酰胺薄膜上，以甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋 酸丁酯-甲酸或乙酸=5 12: 0.5 5: 0.02 3為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以含三氯化鋁或三氯化鐵顯色劑，烘烤或不烘烤，供試品色譜中，在與對照 品色譜相應的位置上，應顯相同顏色斑點；b、 藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取 或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液 相色譜法，色譜柱用垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2% 3 %冰醋酸水溶液或0.2% 3%甲酸水溶液或0.01% 1%磷酸水溶液或 0. O05mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀 溶液=16 70: 84 30為流動相，檢測波長為200 410nm中的一種或幾種；采 用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀， 測試，供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、 藥物組合物中芍藥苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加乙醇或甲醇或正丁醇或水中的一種或幾種為溶 劑提取，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品，制成對照品溶液；釆用薄層色譜 法試驗，分別吸取上述對照溶液及供試溶液適量，點于同一硅膠薄層板上，以 三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-甲酸或乙 酸=2 8: 0.5 5: 0.5 5: 0.01 4為展開劑，展開，取出，晾干，先后或 分別噴以含三氯化鐵的顯色劑或含三氯化鋁的顯色劑或含硫酸的顯色劑或含 香草醛的顯色劑中的一種或幾種，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上， 應顯相同顏色斑點；d、 藥物組合物中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或 稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液 相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05% 3 %冰醋酸水溶液或0.05% 3%甲酸水溶液或0.001% 1%磷酸水溶液或 0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀 溶液=15 62: 85 38流動相，檢測波長為200 410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀， 測試，供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
5、 按照權利要求4所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內容-a、 藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取，制備供試品溶液；另取野黃零苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3lil，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸=7: 2: 1 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中， 在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的條斑；b、 藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取 續濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜 法，色譜柱用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-O. 1%磷酸水溶液=50: 50 為流動相，檢測波長為335nm;分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入 液相色譜儀，測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、 藥物組合物中芍藥苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液； 另取芍藥苷對照品的甲醇溶液作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供 試溶液與對照溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲垸-醋酸乙 酯-甲醇-甲酸=6: 1.5: 1.5: 0. 5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；d、 藥物組合物中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取或稀釋，濾過，取續濾液作為供試品 溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1%甲酸溶液=40:60為流動相，檢測 波長為230mn;分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測 試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
6、 按照權利要求1所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質 量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內容a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測定取待測藥物組合物適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液 相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2% 3 %冰醋酸水溶液或0.2% 3%甲酸水溶液或0.01% 1%磷酸水溶液或 0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鉀 溶液=16 70: 84 30為流動相，檢測波長為200 410nm中的一種或幾種；釆 用液相色譜法試驗，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色 譜儀，測試，以外標一點法或標準曲線法進行計算，藥物組合物中每日用劑量 含野黃芩苷的不得少于12mg;b、藥物組合物中芍藥苷的含量測定取待測藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或 稀釋至合適濃度，濾過，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液， 采用液相色譜法，色譜柱用垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或 0.05% 3%冰醋酸水溶液或0. 05% 3%甲酸水溶液或O. 001。％ 1%磷酸水溶液 或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0. 005mol/L 0. 3mol/L磷酸二氫 鉀溶液=15 62: 85 38流動相，檢測波長為200 410nm中的一個或幾個；采 用液相色譜法試驗，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色 譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含芍藥 苷的不得少于15mg;
7、按照權利要求6所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質 量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內容a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，加甲醇提取或稀釋至合適濃度， 搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照， 采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-o. 1%磷酸 水溶液=50: 50為流動相，檢測波長為335nm;分別精密吸取供試品溶液與對 照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法進行計算，藥物組合物 中每日用劑量含野黃苓苷的不得少于25mg;b、藥物組合物中芍藥苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度， 搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照， 采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1%甲酸 溶液=40:60為流動相，檢測波長為230mn;分別精密吸取供試品溶液與對照品 溶液適量，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含芍藥苷的不得少于30mg;
8、按照權利要求6或7所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物 的質量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的含量測定結果，按照重量百 分比計算，野黃芩苷與芍藥苷的總量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的 50°%以上。
全文摘要
本發明涉及一種由燈盞花素和芍藥苷制成的藥物組合物的質量控制方法，該質量控制方法包括該組方制劑中燈盞花素、芍藥苷的指紋圖譜測試方法和/或鑒別測試方法和/或含量測定方法，本發明為該組方制劑的質量控制提供了一種可靠、穩定、全新的方法，使該制劑的工藝控制更加嚴格合理，質量更加穩定，同時為大生產提供了可靠穩定的檢測方法，為確保患者用藥的有效性、安全性提供了數字化的說明。
文檔編號G01N30/88GK101158670SQ20061015297
公開日2008年4月9日 申請日期2006年9月22日 優先權日2005年9月22日
發明者于文風 申請人:北京奇源益德藥物研究所