專利名稱：：一種測定血清中鎂含量的方法
技術領域：
：本發明涉及血清中鎂含量的測定，具體的說是一種血清中鎂含量測定的方法。
背景技術：
：鎂是生命過程所必需的元素，對動植物的許多生理機能起著重要的作用，主要表現在①鎂對心臟活動具有重要的調節作用它通過對心肌的抑制，使心臟的節律和興奮傳導減弱，從而有利于心臟的舒張與休息；②鎂對心血管系統亦有很好的保護作用它可減少血液中膽固醇的含量，防止動脈硬化，同時還能擴張冠狀動脈，增加心肌供血量，進而有利于預防高血壓及心肌梗塞；③鎂也具有使神經和肌肉正常運作的功能，因此能協助抵抗憂郁癥，解除肌肉痙攣；④鎂離子是許多酶的激活劑如生命賴以生存的氧化磷酸化酶的代謝就必須有鎂的參與才能進行；⑤在生物學上，鎂的作用也極為重要因為它是葉綠素分子的核心原子，葉綠素結構以鎂原子鋏狀結合為其分子的母核，此鎂原子鋏狀結合具有強力催化作用。鎂元素含量的分析測定除了經典的靜態平衡體系測定方法外，目前比較集中的領域是流動態非平衡體系的測定方法。非平衡態測定體系的誕生顛覆了支撐化學學科的四大平衡理論，使科研工作者重新審視評價化學反應以及化學學科，同時也豐富了化學學科。流動態非平衡體系是指在流動注射(文獻1:RuzickaJ，HansenEH，Flowinjectionanalyses:PartI.Anewconceptoffastcontinuousflowanalysis,AnalyticaChimicaActa，78(1975):145-157)分析技術，以及在其基礎上發展起來的第二代順序注射(文獻2:RuzickaJ，MarshallGD，Sequentialinjection:anewconceptforchemicalsensors,processanalysisandlaboratoryassays,AnalyticaChimicaActa,237(1990):329-343)和第三代順序注射-"閥上實驗室"(文獻3:WangJH，HasenEH，Sequentialinjectionlab-on-valve:thethirdgenerationofflowinjectionanalysis,TrACTrendsinAnalyticalChemistry,22(2003):225-231)分析技術。例如使用流動注射-原子吸收光譜法(文獻4:ZikriArslan，JulianF.Tyson,Determinationofcalcium,magnesiumandstrontiuminsoilsbyflowinjectionflameatomicabsorptionspectrometry,Talanta，50(1999):929-937)和順序注射-熒光光度法(文獻5:ArmasG,CladeraA,BecerraE，EstelaJM,CerdSV，Fluorimetricsequentialinjectiondeterminationofmagnesiumusing8-hydroxiquinoline-5-sulfonicacidinamicellarmedium,，Talanta,52(2000):77-82)測定水中的鎂。查閱大量文獻可以發現，使用流動注射進樣系統與監測器聯用測定血清和全血中鎂含量的研究有一些，而使用順序注射進樣系統和順序注射-"閥上試驗室"進樣系統則一篇沒有。本發明就是利用順序注射進樣系統與熒光分光光度計聯用，探索出順序注射體系下測定血清中鎂含量的最佳實驗條件，人血清樣品回收率實驗以及牛血清標準參考物對照實驗都取得了良好的結果，為順序注射流動體系下測定血清中鎂元素含量開辟了新的道路。
發明內容本發明的目的是找到在順序注射-熒光光度分析體系中測定鎂含量的最佳條件。以鎂與8-羥基喹啉-5-磺酸(HQS)在堿性溶液中反應可以產生熒光為基礎，乙二醇-雙-(2-氨基乙基)四乙酸(EGTA)作為掩蔽劑，十六烷基三甲基氯化銨(HTAC)為增敏劑，將順序注射分析與熒光光度檢測技術聯用，建立了測定血清樣品中鎂含量的靈敏的自動分析方法。為實現上述目的，本發明采用的試驗技術方案如下一種測定血清中鎂含量的方法，采用順序注射的方式與熒光分光光度計聯用測定血清中鎂含量，1)a.順序注射的進樣順序為先吸入十六烷基三甲基氯化銨(HTAC)/乙二醇-雙-(2-氨基乙基)四乙酸(EGTA)溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入8-羥基喹啉-5-磺酸(HQS)/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC溶液質量濃度0.1-0.25%，EGTA溶液3-10><l(r3mol/l，HQS溶液0.5-2.5x10—3mol/l，緩沖體系為pH=10.0的硼砂-硼酸-KCl溶液；進樣體積均為150pl;系統流速為1.75-2.5ml/min;b.對血清樣品進行測定；血清樣品按1-20倍的體積稀釋比例逐級稀釋，進行實驗操作；c.采用步驟a的操作條件對質量濃度為8-1200ng/ml鎂標準溶液進行測定，以相對熒光強度對鎂質量濃度進行線性擬合，得到一條標準曲線；2)從該曲線上找到所測血清樣品的相對熒光強度對應的鎂質量濃度；以鎂質量濃度在45-75ng/ml范圍內的測定結果為實驗結果，其值準確可靠。本發明具有如下優點①本方法引入了順序注射進樣系統，使樣品和試劑的混合完全由軟件控制，操作簡單方便，大大減少了操作中的人為干擾。②本方法試樣和試劑的消耗量很小，適用于長期監測和試劑或試樣昂貴或來源受到限制的分析。③本方法靈敏、準確、簡單、快速。在采樣頻率為60樣/小時的分析速度下，對500ng/ml的M^+標準溶液進行11次平行測定的相對標準偏差為0.2%，對20ng/ml的Mg^標準溶液進行11次平行測定的相對標準偏差為0.7%。④本方法實現了熒光分光光度法與順序注射進樣技術相結合用于血清中鎂離子濃度的測定，為測定血清中的鎂元素含量建立了新的分析方法。圖1為1號人血清樣品鎂含量與回收率的關系圖；圖2為2號人血清樣品鎂含量與回收率的關系圖。具體實施方式發明綜述1)順序注射是在流動注射的基礎上發展起來的，雖然它們都是在流動非平衡體系中依靠儀器的穩定性，高重現性完成對樣品的測定過程，但不同的是，流動注射機理是試樣區帶和試劑區帶在蠕動泵的驅動下來回往復運動，于管道中完成混合和反應過程，可以說使用流動注射進樣，溶液區帶之間的混合和重疊非常充分，稀釋過程也非常充分，同樣使用流動注射在線完成試樣的稀釋目前也在廣泛的應用中。而由于順序注射硬件特點不能像流動注射一樣采用匯合流的方式完成試樣與試劑的混合和反應過程，而是需要順序的吸入試樣與試劑，再反方向推向監測器，使試樣和試劑區帶在管道中停留的時間很短，因此使用順序注射進樣時，試樣與試劑區帶的混合、反應以及稀釋程度都較流動注射要小很多，測定黏度比較大的樣品時比較難。而順序注射一"閥上實驗室"進樣系統中，試樣與試劑區帶流經的管道距離更小，更不利于反應的發生和血液的稀釋，測定難度更大。這也是為什么目前使用流動注射結合監測裝置測定血清以及全血中鎂含量的文章有一些，但是使用順序注射和順序注射一"閥上實驗室"測定血清以及全血中鎂含量的文章卻沒有。2)血清中含有大量的蛋白質等有機物，粘度大，雖然順序注射進樣技術對樣品有稀釋作用，但是如果樣品本身的稀釋程度不夠，測定結果依舊不理想。如果稀釋程度小，血清黏度很大，在較短的反應時間內不易被顯色劑區帶滲透，反應程度受到抑制，測定結果偏小；另外，稀釋倍數小，血清中鎂含量增大，干擾物質的濃度也很大，在它們同時與顯色劑發生化學反應的過程中，由于各反應反應動力學的差異，使得干擾離子對結果的影響影響很大，測定結果偏小很多，且有隨著稀釋倍數減小，測定值偏離參考值越嚴重的情況。但是如果稀釋倍數過大，血清黏度很小，但是鎂含量也很小，在固定進樣量的情況下，掩蔽劑對鎂的掩蔽作用就不能忽略掉，況且各干陽離子與顯色劑反應的動力學條件不盡相同，也會使測定偏離正常值。因此可以看出，使用該方法對血清中鎂含量進行測定，一定會存在一個最佳稀釋倍數或范圍，使得血清黏度適當，與試劑區帶的滲透充分，其中的干擾離子對測定不產生干擾，測定結果準確。偏離該點或該范圍都會使測定結果較參考值低。3)對血清樣品的逐級稀釋發現，只有稀釋一定倍數，才能得到令人滿意的測定結果。對人血清樣品來說，稀釋倍數在200-240和200-250倍，稀釋后鎂離子濃度在45-60ng/ml和60-75ng/ml范圍內測定結果良好。牛血清標準品是固體樣品，和液體樣品的稀釋概念不同，以其被定容的體積作為稀釋倍數。當牛血清被稀釋750-1000倍時，其中鎂離子濃度在44-60ng/ml范圍內，測定結果良好。無論是人血清還是牛血清，雖然稀釋倍數有差別，但是鎂離子含量卻相差不大，這也驗證了在測定血清過程中會存在一個最好稀釋范圍或鎂離子濃度范圍的論證，為流動非平衡體系中，相對較短時間內測定血清中鎂含量提供了借鑒依據。4)血清中鎂含量的測定為了驗證所建立方法的可靠性，申請人做了測定人血清中鎂離子的回收率試驗以及牛血清標準品中鎂離子含量的測定實驗。實施例l在最優化實驗條件下，即進樣順序為先吸入HTAC/EGTA溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入HQS/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC溶液0.15%(w/w)，EGTA溶液7x10—3mol/l，HQS溶液1.0xl(r3mol/l;進樣體積均為15(Hil;系統流速為2.5ml/min;以60樣/h的實驗頻率對血清樣品進行測定，包括測定人血清樣品中鎂離子的回收率以及牛血清標準品中鎂離子的含量。(pH40.0的緩沖體系根據按照克拉克-魯布斯緩沖溶液的配制方法配制，即0.2mol/l的NaOH溶液43.9ml，0.2mol/l的硼酸(12.405克H3BO3+14.912克KCl/升)50.00ml定容至200ml容量瓶中。)①人血清中鎂離子回收率的測定人血清樣品采自東北大學醫院，均為當日采集，處理和離心的血清。測定血清中鎂離子回收率的試驗過程是先做一條標準曲線，然后測定血清中鎂離子含量，另取一份血清樣品，向該樣品中加入一定濃度的鎂標準溶液，測定該混合溶液的總的鎂離子含量，兩相相減的差值與加入的鎂標準溶液含量的比值，就是該樣品中鎂的回收率。制作標準曲線的步驟是在上述最優化實驗條件下，對一系列濃度的鎂標準溶液進行測定，鎂標準溶液的濃度分別為10ng/ml，50ng/ml，100ng/ml，500ng/ml，750ng/ml，1000ng/ml，1200ng/ml。以測得的相對熒光強度對鎂質量濃度進行線性擬合，得到回歸方程為AF=1.403+0.0123xC，相關系數11=0.9994(11=7)。通過測定血清中鎂離子回收率發現，血清樣品稀釋倍數對樣品回收率有很大影響，結果見圖1和圖2。稀釋倍數偏大偏小都不能得到很好的回收率結果，只有稀釋倍數在一定范圍內，回收率結果誤差才能小于5%。通過實驗發現，1號人血清樣品稀釋倍數在200-250倍之間，回收率結果為97-99%，2號人血清樣品稀釋倍數在200-240倍之間，回收率結果為99-102%。具體操作步驟如下1)優化試驗使用單因素優化試驗方法對試驗所需參數進行優化，得到各項參數的最佳值，結果見表l。表l單因素優化結果對照表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2)共存物質的影響在測定結果允許誤差不超過一5%的范圍內，對lpg/ml的Mg"進行測定，各物質允許存在倍數如表2所示。表2各中共存物質的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3)分析性能在上述經優化的實驗條件，即進樣順序為先吸入HTAC/EGTA溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入HQS/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC溶液0.15%(w/w)，EGTA溶液7x10—3mol/l，HQS溶液1.0xl(T3mol/l;進樣體積均為15(Hil;系統流速為2.5ml/min;以相對熒光強度對Mg^質量濃度進行線性擬合，回歸方程為AF=1.403+0.0123xC，相關系數R=0.9994(n=7)，線性響應范圍為8-1200ng/ml。在采樣頻率為60樣/小時的分析速度下，對500ng/ml的Mg^標準溶液進行11次平行測定的相對標準偏差為0.2%，以二次去離子水代替Mg^標準溶液，進行ll次平行測定，以測定結果的3倍標準偏差所對應的濃度作為檢出限，結果為4ng/ml。4)人血清樣品中鎂離子的回收率試驗先以相對熒光強度對鎂質量濃度進行線性擬合，得到一標準曲線△F=1.762+0.0129xC，相關系數R=0.9989(n=6)，線性區間上限為1200ng/ml，將血清樣品的測定結果帶入到方程中，求出該樣品所對應的濃度。將血清樣品稀釋200倍進行測定，另取一份樣品向其中加入一定量鎂標準溶液，再進行測定，將兩濃度的差值除以加入的鎂標準的濃度，得到該樣品鎂含量的回收率，結果見表4。回收率結果誤差在5%范圍內，說明該實驗條件下干擾離子對測定鎂含量不產生影響。表3人血清樣品中鎂含量的的回收率實驗人血清樣品測得量(ng/ml)(n=3)加標(ng/ml)測得總量(ng/ml)(n=4)回收(%)血清中含量(嗎/ml)人血清樣叩1人血清樣品274.9±14.0100172.7±10.597.814.98±2.8055.4±2.4200258.2±7.1101.411.08±0.48②牛血清標準品鎂含量的測定實驗本文采用標準參考物(牛血清(凍干)成分分析標準物質[GBW(E)090006])對照實驗來驗證該方法測定血清中Mg"含量的準確性。1)牛血清標準品的前處理過程將凍干血清(2ml/瓶)轉移至小燒杯中，加少許硝酸(0.5mol/l)后，于恒溫電熱板(6(TC)加熱30min，待溶解成均勻無沉淀的液體后，用適量NaOH顆粒調節pH值至中性，定容至100ml容量瓶。對溶液進行逐級稀釋然后測定。2)測定條件上述最優化試驗條件即順序注射系統進樣順序為先吸入HTAC/EGTA溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入HQS/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC溶液0.15Q/。(w/w)，EGTA溶液7xl(T3mol/l，HQS溶液1.0xl(T3mol/l;進樣體積均為150^1;系統流速為2.5ml/min。對牛血清標準品進行的鎂含量測定實驗發現了同樣的問題，實驗結果見表3。標準參考物對照實驗顯示了同樣的結果，稀釋倍數在750-1000倍，樣品的測定結果與參考值相符，稀釋倍數在該區間外，測定結果與參考值不符。表4牛血清樣品鎂離子濃度與鎂含量測定結果關系稀釋倍數參考濃度(ng/ml)測定濃度(ng/ml)400011.2±0.98.4±0.4200022.3±1.819.5±0.5100044.6±3.646.5±1.075059.5±4.861.6±0.850089.2±7.247.9±0.9400111.5±9.057.0±1.2其中稀釋1000倍，得到結果與參考值相符，說明該方法測定血清中Mg^結果見表5。表5牛血清標準品中鎂的分析結果含量結果準確可靠樣品編號測定值^g/ml)參考值(Mg/ml)[GBW(E)090006]23.3±0.522.3±1.8實施例2在改變的實驗條件下，即進樣順序為先吸入HTAC/EGTA溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入HQS/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC溶液0.25%(質量濃度)，EGTA朵液7xl(T3mol/l，HQS溶液1.0x1(T3mol/l;進樣體積均為150h1;系統流速為2.5ml/min;以60樣/h的實驗頻率對血清樣品進行測定，包括測定人血清樣品中鎂離子的回收率以及牛血清標準品中鎂離子的含量。①人血清中鎂離子回收率的測定改變增敏劑HTAC的溶液濃度，其他條件不改變，測定血清中鎂離子含量的回收率。結果發現，增加增敏劑的濃度，僅增大了相對熒光強度，況且標準溶液的相對熒光強度與樣品的測定值相應增大，對樣品中鎂離子濃度的測定沒有影響。具體操作步驟如下先以相對熒光強度對鎂質量濃度進行線性擬合，得到一標準曲線AF=1.971+0.0127xC，相關系數R=0.9991(n=7)。將血清樣品的測定結果帶入到方程中，求出該樣品所對應的濃度。將血清樣品稀釋200倍進行測定，另取一份樣品向其中加入一定量鎂標準溶液，再進行測定，將兩濃度的差值除以加入的鎂標準的濃度，得到該樣品鎂含量的回收率，結果見表4。回收率結果誤差在5°/。范圍內，說明該實驗條件下干擾離子對測定鎂含量不產生影響。表4人血清樣品中鎂含量的的回收率實驗人血清樣品(ng/ml)(n=3)加標量(ng/ml)測得總量(ng/ml)(n=4)回收率血清中含量(Hg/ml)人血清樣人血清樣品274.4士10.355.5±2.6100200173.7士7.9253.4士7.499.314.88±2.0696.21U0士0.52②牛血清標準品鎂含量的測定實驗使用上述條件及擬合方程測定稀釋1000倍的牛血清標準品，得到結果23.1士0.6與參考值相符，說明改變增敏劑HTAC溶液濃度，測定血清中Mg2+含量結果依舊準確可靠。說明只減小增敏劑HTAC溶液濃度(質量濃度1%)也不會改變血清樣品的測定結果，所以改變增敏劑HTAC溶液濃度不會改變血清樣品的測定結果。雖然目前對增敏劑的增敏劑的增敏機理尚處于研究階段，但是可以肯定的是，增敏劑無論是從改變外部環境改變熒光強度還是從參與化學組成改變絡合物本身的熒光效率，其對絡合物的增敏效果都有一適應范圍，在該范圍內測定血清中鎂含量都可行。實施例3改變掩蔽劑EGTA濃度，其他試驗條件不變，即進樣順序為先吸入HTAC/EGTA溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入HQS/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC溶液0.15%(w/w)，EGTA溶液3xl(T3mol/l，HQS溶液1.0xl(T3mol/l;進樣體積均為150^1;系統流速為2.5ml/min;以60樣/h的實驗頻率對血清樣品進行測定，包括測定人血清樣品中鎂離子的回收率以及牛血清標準品中鎂離子的含量。①人血清中鎂離子回收率的測定改變掩蔽劑EGTA濃度，其他試驗條件不變，測定人血清樣品中鎂離子的回收率。試驗結果顯示減小掩蔽劑的濃度，相對熒光強度稍微減小，對測定血清中鎂離子的回收率也沒有影響。具體操作步驟如下先以相對熒光強度對鎂質量濃度進行線性擬合，得到一標準曲線AF=1.535+0.0128xC，相關系數R=0.9992(n=7)。將血清樣品的測定結果帶入到方程中，求出該樣品所對應的濃度。將血清樣品稀釋200倍進行測定，另取一份樣品向其中加入一定量鎂標準溶液，再進行測定，將兩濃度的差值除以加入的鎂標準的濃度，得到該樣品鎂含量的回收率，結果誤差在5%范圍內，說明該實驗條件下干擾離子對測定鎂含量不產生影響。②牛血清標準品鎂含量的測定實驗使用上述條件及擬合方程測定稀釋1000倍的牛血清標準品，得到結果22.9±0.8與參考值相符，說明改變掩蔽劑EGTA溶液濃度，測定血清中Mg2+含量結果依舊準確可靠。說明本方法使用乙二醇-雙-(2-氨基乙基)四乙酸(EGTA)掩蔽Ca2+，兩種離子與EGTA的絡合常數差6個數量級，符合掩蔽劑的選擇性滴定原理。在優化掩蔽劑濃度時發現，掩蔽劑濃度在3-10xl(^mol/l時，掩蔽劑對Ca"的掩蔽效果都非常理想，選擇7xl(T3mol/l作為最佳濃度，因為在該濃度兩種絡合物相對熒光強度差值達到最大。而3xl(T3mol/l和10xl(^mol/l的濃度不會影響血清中鎂的測定結果。實施例4減小系統流速，其他試驗條件不變，即進樣順序為先吸入HTAC/EGTA溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入HQS/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC溶液0.15%(w/w)，EGTA溶液7xl(T3mol/l，HQS溶液1.0xl(T3mol/l;進樣體積均為150nl;系統流速為1.75ml/min;以40樣/h的實驗頻率對血清樣品進行測定，包括測定人血清樣品中鎂離子的回收率以及牛血清標準品中鎂離子的含量。①人血清中鎂離子回收率的測定改變系統流速，其他試驗條件不變，測定人血清樣品中鎂離子的回收率。試驗結果顯示減小系統流速，相對熒光強度增強，但對測定血清中鎂離子的回收率也沒有影響。具體操作步驟如下先以相對熒光強度對鎂質量濃度進行線性擬合，得到一標準曲線AF=2.013+0.0128xC，相關系數R=0.9997(n=7)。將血清樣品的測定結果帶入到方程中，求出該樣品所對應的濃度。將血清樣品稀釋200倍進行測定，另取一份樣品向其中加入一定量鎂標準溶液，再進行測定，將兩濃度的差值除以加入的鎂標準的濃度，得到該樣品鎂含量的回收率，結果誤差在5%范圍內，說明該實驗條件下干擾離子對測定鎂含量不產生影響。②牛血清標準品鎂含量的測定實驗使用上述條件及擬合方程測定稀釋1000倍的牛血清標準品，得到結果22.7±0.5與參考值相符，說明改變掩蔽劑EGTA溶液濃度，測定血清中Mg2+含量結果依舊準確可靠。說明系統流速會影響試樣與試劑在管道中的停留時間，近而影響試樣與試劑的反應程度。系統流速小，試樣與試劑在管道中的停留時間長，試樣與試劑的反應更加徹底，熒光強度增加，反之亦然。從試驗頻率與測定精度綜合考慮，本方法選擇2.5ml/min，因為該流速是系統所能承受的最大流速，而且在該流速下試驗頻率最大，最省時，況且熒光強度也不會減小很多。減小系統流速，雖然可以使測定精度增加，可是會減小測定頻率，但是對測定結果并不會產生影響。權利要求1.一種測定血清中鎂含量的方法，其特征在于采用順序注射的方式與熒光分光光度計聯用測定血清中鎂含量，1)a.順序注射的進樣順序為先吸入十六烷基三甲基氯化銨/乙二醇-雙-(2-氨基乙基)四乙酸溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入8-羥基喹啉-5-磺酸/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC溶液質量濃度0.1-0.25％，EGTA溶液3-10×10-3mol/l，HQS溶液0.5-2.5×10-3mol/l，緩沖體系為pH＝10.0的硼砂-硼酸-KCl溶液；進樣體積均為150μl；系統流速為1.75-2.5ml/min；b.對血清樣品進行測定；血清樣品按1-20倍的體積稀釋比例逐級稀釋，進行實驗操作；c.采用步驟a的操作條件對質量濃度為8-1200ng/ml鎂標準溶液進行測定，以相對熒光強度對鎂質量濃度進行線性擬合，得到一條標準曲線；2)從該曲線上找到所測血清樣品的相對熒光強度對應的鎂質量濃度；以鎂質量濃度在45-75ng/ml范圍內的測定結果為實驗結果，其值準確可靠。2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于其中，步驟a.順序注射的進樣順序為先吸入HTAC/EGTA溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入HQS/緩沖溶液；各溶液的濃度分別為HTAC^溶液重量濃度0.15%，EGTA溶液7xl(r3mo1/1，HQS溶液1.0x10'3mol/l，緩沖體系為pH=10.0的硼砂-硼酸-KCl;進樣體積均為150pl;系統流速為2.5ml/min。全文摘要本發明涉及血清中鎂離子濃度的測定，1)a.順序注射的進樣順序為先吸入HTAC/EGTA溶液，再吸入樣品溶液，最后吸入HQS/緩沖溶液；b.對血清樣品進行測定；血清樣品按體積稀釋比例逐級稀釋，進行實驗操作；c.采用步驟a的操作條件對鎂標準溶液進行測定，以相對熒光強度對鎂質量濃度進行線性擬合，得到一條標準曲線；2)從該曲線上找到所測血清樣品的相對熒光強度對應的鎂質量濃度；以鎂質量濃度在45-75ng/ml范圍內的測定結果為實驗結果，其值準確可靠。結果驗證了在測定血清過程中會存在一個最好稀釋范圍的論證，為流動非平衡體系中，相對較短反應時間內測定血清中鎂含量提供了借鑒依據。文檔編號G01N33/84GK101210930SQ20061013510公開日2008年7月2日申請日期2006年12月27日優先權日2006年12月27日發明者樺周,宇萬太,璐張,強馬申請人:中國科學院沈陽應用生態研究所