一種飼用酶制劑特性的測定方法

專利名稱：一種飼用酶制劑特性的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種生物酶制劑，具體涉及一種采用圖表法對飼用酶制劑特性的測定方法。
背景技術：
我國是一個農業大國，養殖業非常發達，因此，生產制造含各種生物酶制劑的復合型飼料應用于畜牧業，對于促進動物生長、節約糧食、減少污染、保護環境具有深遠的意義。
現有技術中，生物酶制劑種類一般包括1.內源性酶，與消化道分泌的消化酶相似的酶(淀粉酶，蛋白酶，脂肪酶等)；2.外源性酶，消化道不能分泌的類似酶(如纖維素酶，果膠酶，半乳糖苷酶，β-葡聚糖酶，木聚糖酶和植酸酶等)。其中最重要的酶制劑，目前已得到充分肯定的酶制劑主要是阿拉伯木聚糖酶(戊聚糖酶)，β-葡聚糖酶和植酸酶.這三種酶制劑是通過消除日糧中的某些抗營養因子而改善動物的生產性能.阿拉伯木聚糖酶是研究最充分，并在當前已被廣泛地商業性用于飼養系統的酶制劑。飼料原料的非淀粉多糖小麥，燕麥，稻谷，麩皮，米糠，統糠等都含有較多的木聚糖.大麥，黑麥，啤酒糟等含有較多的β-葡聚糖酶.這類多聚糖統稱為水溶性非淀粉多糖(NSP).現有技術中，對酶制劑特性的測定往往僅限于對其活性(簡稱酶活)的測定，而缺乏對其綜合特性的復合測定。其中，現有技術公開的采用比色法對阿拉伯木聚糖酶酶活測定方法的步驟如下1、定義1克固體酶粉在40℃和pH值5.0條件下，每分鐘水解木聚糖生成相當于1微克木糖還原物質的量為1個酶活力單位，以u/g表示。
2、原理木聚糖酶催化木聚糖水解生成二糖、木糖等還原糖，二糖、木糖等還原糖能將3，5-二硝基水楊酸中的硝基還原成橙黃色的氨基化合物，利用比色法測定其還原物生成量來表示酶的活力。
3、試劑和溶液3.1 1％木聚糖溶液精確稱取木聚糖(美國Sigma公司出品)1.0000g，精確至0.0001g，溶于80ml蒸餾水中，水浴加熱至溶，冷卻后轉入100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度。此溶液貯存于冰箱內備用(3天內使用有效)。
3.2磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液(同β-葡聚糖酶酶活測定)
3.3 DNS試劑(同β-葡聚糖酶酶活測定)3.4 1％木糖標準溶液稱取預先于105℃干燥至恒重的木糖1.000g，精確至0.0001g，用蒸餾水溶解后定容至100ml，即為1％濃度的木糖標準溶液。
4 儀器和設備4.1 恒溫水浴鍋(40℃±0.2℃)4.2 分光光度計含10mm比色皿，可在550nm處測量吸光度。
5.測定步驟5.1 標準曲線繪制分別吸取1％木糖標準溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于50ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，制成每ml分別含木糖200、400、600、800、1000、1200mg的稀標準液。各取不同濃度的稀標準液0.5ml于試管中，加入pH5.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液1.5ml，再加入DNS試劑3.0ml，于沸水浴中沸騰7min，取出后立即加入蒸餾水10ml，搖勻。以蒸餾水0.5ml代替木糖稀標準液作為對照。冷卻后，用10mm比色皿，在波長550nm處用分光光度計分別測定其吸光度。以吸光度為縱坐標，相對應的木糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線或計算回歸方程。
5.2待測酶液的制備稱取酶粉2.000g，精確至0.0001g，先加蒸餾水40ml，于40℃水浴中浸提30min(期間攪動2～3次)。然后轉入50ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。用新華1號濾紙過濾(棄去初濾液)，濾液根據酶活力再經適當稀釋，供測試用(稀釋至被測試液吸光值在0.2～0.4范圍內為宜)。
5.3比色測定精確吸取待測稀釋酶液0.5ml(每個樣品3支平行試管)，加入1.0ml pH5.0磷酸二氫鈉-檸檬酸緩沖液，置于40℃水浴預熱5min。同時取適量1％木聚糖溶液進行40℃水浴預熱。吸取經預熱的1％木聚糖溶液0.5ml，加入到經預熱的上述酶液試管中，立即開始計時，于40℃水浴精確反應10min，立即加入3.0mlDNS液終止反應，然后在沸水浴中沸騰7min，以后按標準曲線步驟測定樣品吸光度。同時進行空白對照測定，其步驟為吸取待測稀釋酶液0.5ml。加入1.0ml pH5.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，然后先加入3.0ml DNS液使酶失活，40℃水浴預熱，再加入同樣經預熱的1％木聚糖溶液0.5ml，40℃水浴10min，然后在沸水浴中沸騰7min，以后步驟同于樣品測定。
6.計算
X＝cn/(0.5*10)式中X-樣品的酶活力，u/g；c-由樣品的平均吸光度從標準曲線或回歸方程求得的相對應的木糖的量，mg；n-樣品的稀釋倍數(制備成的酶液ml數/2g酶粉)，0.5-參與反應的酶液量，ml；10-反應時間，min。
在上述資料及其他已經公開的現有技術中，僅公開了對生物單酶酶活的測定方法，而沒有公開對該生物酶其他特性的測定方法，特別是現有技術中，均沒有公開飼用生物單酶的其他特性的測試方法，因而實踐中不能更為全面地了解該單酶的綜合特性，因而無法為畜禽、魚蝦等飼料用復合酶制劑的單酶品種的選擇、組配及生產加工過程中各環節的合理控制，為獲得和保存飼用生物單酶的優良特性，提高含酶飼料效能，提供科學有效的依據。

發明內容
針對現有生物酶技術存在的上述不足，本發明的目的在于，提供一種通過對單酶、混合酶溶液酶活等多項性能測定并繪制相應圖表，并通過對所得圖表的對比分析，選取最優特性或組配區間，從而為飼料用復合酶制劑的組配及生產加工提供科學有效依據的飼用酶制劑特性的測定方法。
本發明實現上述目的所采用的技術方案是1、一種飼用酶制劑特性的測定方法，其特征在于，其包括如下步驟1)制備一種飼用單酶溶液；2)測試并記錄該單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪制圖表；3)測試并記錄該單酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪制圖表；4)測試并記錄底物濃度對該單酶活性的影響，根據測試結果繪制圖表；5)制備第二種飼用單酶溶液，并重復步驟1)～4)；6)制備第3～第N種飼用單酶溶液，并分別重復步驟5)；7)將前述步驟2)～6)所得圖表，對其中任兩個或多個圖表，采用圖表對比法進行對比分析，選取最優特性或組配區間。
所述步驟2)～4)的順序不分先后。
前述的飼用酶制劑特性的測定方法，其特征在于，所述的步驟4)，還包括測試并記錄加工工藝對該單酶活性的影響，并根據測試結果繪制圖表。
前述的步驟4)，還可以包括測試并記錄其它酶制劑相互混合后對該單酶的影響，并根據測試結果繪制圖表。
本發明的優點在于本發明通過各單酶制劑的PH穩定性、熱穩定性、底物濃度影響、加工過程影響等酶學性質的測定及對所得圖表的對比分析，可以確定飼用單酶制劑是否符合飼料加工、動物日糧以及動物消化生理等方面需求的程度，達到篩選高效飼料轉化用單酶、并使其在加工等過程中保存其優良特性的目的，為畜禽、魚蝦等飼料用復合酶制劑的配方及生產提供科學有效的依據。


圖1是本發明實施例1中，溫度對木聚糖酶活性的影響圖。
圖2pH對木聚糖酶活性影響圖；圖3底物濃度對木聚糖酶活性的影響；圖4是經不同溫度處理后木聚糖酶活性存留情況圖；圖5是木聚糖酶貯存期間酶活存留情況圖；圖6是木聚糖酶在不同加工階段酶活變化情況圖；圖7是本發明實施例2中，溫度對蛋白酶活性的影響圖；圖8是pH對中性蛋白酶活性的影響圖；圖9是底物濃度對中性蛋白酶活性的影響圖；圖10是中性蛋白酶經不同溫度處理后酶活變化圖；圖11是中性蛋白酶貯存期間酶活存留情況圖；圖12是加工工藝對中性蛋白酶活性的影響圖。
具體實施例方式
因飼用酶制劑品種及組配方案數目龐大，本發明實施例無法一一列舉，本發明所提供的一般步驟為一種飼用酶制劑特性的測定方法，其包括如下步驟1)制備一種飼用單酶溶液；2)測試并記錄該單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪制圖表；3)測試并記錄該單酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪制圖表；4)測試并記錄底物濃度對該單酶活性的影響，根據測試結果繪制圖表；測試并記錄加工工藝對該單酶活性的影響，并根據測試結果繪制圖表；測試并記錄其它酶制劑相互混合后對該單酶的影響，并根據測試結果繪制圖表；5)制備第二種飼用單酶溶液，并重復步驟1)～4)；6)制備第3～第N種飼用單酶溶液，并分別重復步驟5)；7)將前述步驟2)～6)所得圖表，對其中任兩個或多個圖表，采用圖表對比法進行對比分析，選取最優特性或組配區間。
實施例1具體的，采用本發明方法，對飼用單酶內切阿拉伯木聚糖酶的特性進行測定與對比分析。
本實施例所使用的內切阿拉伯木聚糖酶(EC 3.2.1.8)和內切中性蛋白酶(EC 3.4.21.62)是分別由Trichoderma longibrachiatum和Bacillussubtilis經液體深層發酵，分離、提純、濃縮、干燥后制成的飼料專用單酶制品，其具有活性高，抗逆性強，底物專一性等特點。
為了更有效地應用該木聚糖酶，現分別對其pH穩定性、熱穩定性、底物濃度等酶學性質進行研究。
首先制備待測內切阿拉伯木聚糖酶溶液，然后進行下列測試并記錄測試結果、繪制圖表。
首先測試并記錄該單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪制圖表，所得圖表見附圖1。經測試，溫度對酶反應速度有很大的影響，并且每種酶都有自己的最適溫度。因此，在不同溫度(20℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃、70℃、80℃和90℃)其它條件相同的情況下(pH5.3、底物濃度1％)，測定木聚糖酶的活性。
由圖1看到木聚糖酶在不同的反應溫度下測定的酶活，其活性變化較大，40℃時酶活大于82％，在30℃時酶活仍然大于55％，反應溫度在高于60℃后，酶活急劇下降，在60℃到70℃之間酶活從94％下降到60％，這說明，木聚糖酶的活性對反應溫度的變化有些敏感。因此，此產品提供的酶活的最適范圍溫度在40～60℃間，最佳反應溫度為55℃，本試驗的測定結果基本反應了此產品的的酶活隨溫度變化的特性。
在實際應用中，由于動物胃腸道內的溫度在38～40℃間，從結果來看，此時木聚糖酶活性在80％左右。一方面，雖然動物胃腸道內酶的作用效果可因酶的作用時間較長從而可彌補酶活低的不足，另一方面，可以通過適當提高木聚糖酶在飼料中的添加量來解決這一問題。
再來測試pH對木聚糖酶活性的影響pH也對酶反應速度有很大影響。分別將底物和對應的緩沖稀釋液的pH調整到3.0、4.0、5.0、5.3、6.0、6.5、7.0、8.0和9.0，然后在其它條件相同的情況下(溫度55℃、底物濃度1％)分別測其酶活，所得圖表見附圖2。
由圖2看出，木聚糖酶在pH＝4～6之間保持較高的活性，平均90％以上，在之外的范圍酶活急劇下降，pH＝4的時候，酶活接近80％，但pH＝3時酶活儀為15％，在pH＝6.5時，酶活為55％，在pH＝7時，酶活為23％左右，當pH＝9時，基本上檢不出酶的活性。
此酶的酶活最適的pH范圍在4～6之間，最佳反應pH的為5.3，本試驗的測定結果反應了此酶的酶活隨pH變化的特性，說明此酶在偏酸性的條件下有較好的表現。在實際應用中，由于動物胃腸道內的pH偏酸性，所以此木聚糖酶在動物胃腸道內的條件下能夠發揮較好的作用。
第三步測試底物濃度對木聚糖酶活性的影響將木聚糖底物分別配制成0.2％、0.4％、0.6％、0.8％和1.0％五個濃度，在保證底物過飽和其它條件相同的情況下(溫度55℃、pH5.3)，加入相應量的酶稀釋液測定酶活，所得圖表見附圖3。
由圖3可以看出，木聚糖酶的活性隨底物濃度的提高活性逐漸增強，在底物濃度達到0.6％(相當于最高活性時底物濃度的60％)時，木聚糖酶的活性基本穩定，并接近了酶活的最高值。這說明，木聚糖酶實際應用中，底物濃度較低時就有可能發揮出最高的活性。
第四步測試經不同溫度加工處理后酶活存留情況將固體木聚糖酶在從55℃～100℃(水分含量≤8％)，每間隔5℃的條件下分別處理5分鐘，然后測定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其酶活，所得圖表見附圖4。
由圖4可以看到，木聚糖酶在干燥的狀態下經過累積溫度處理后，在不同溫度下的酶活表現是先升高后下降，在70℃以前木聚糖酶的活性基本沒有損失，70℃以后酶活開始損失，到85℃時酶活存留大于88％，100℃時酶活存留在75％左右。酶活在60-70℃間有升高的現象待進一步驗證。
第五步測試其它酶制劑相互混合后對木聚糖酶的影響將木聚糖酶(X1222)分別與蛋白酶(P1222)和淀粉酶(A1222)按表1體積比混合后，常溫下放置一個月后測定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其中木聚糖酶活性，結果表明蛋白酶和淀粉酶對木聚糖酶的活性并無影響。測試木聚糖酶在貯存期間酶活存留情況將固體木聚糖酶產品(水分含量≤8％)常溫下保存，然后每隔兩個月取樣測定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其酶活，結果如圖5。
由圖5可看出，木聚糖酶在一年內酶活下降不到15％，尤其在前4個月內，酶活下降緩慢不到7.0％，隨著時間的延長，酶活會逐漸下降，但速度較平緩。
表1其它酶制劑與木聚糖酶混合后木聚糖酶活性表

注1、表中X1222為固體木聚糖酶，P1222為固體蛋白酶，A1222為固體淀粉酶。2、水分含量小于8％。
第六步測試加工工藝對木聚糖酶活性的影響按照設計標準將1.0公斤活性為25,000U/g的木聚糖酶按1kg/噸的添加量加入小豬飼料后制粒，制粒的條件及溫度(75℃左右)與商業飼料廠一致，在不同生產階段(混合后、調制后、制粒后及打包口)分別取樣并測定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)木聚糖酶的活性，其測試結果見圖6。
該木聚糖酶與飼料原料混合后其活性與設計標準相比有明顯的下降，只有45％的活性保留下來，但此時并沒有經過高溫及壓力的處理，說明此木聚糖酶與飼料混合后有55％的活性是在實驗室的條件下不能檢出的。經過高溫(75℃左右)調制后，與設計標準相比，此木聚糖酶在飼料中的活性保留率只有37％左右，下降幅度較大，但與混合后相比，此木聚糖酶的活性保留率為82％(45.2對37.2％)，下降幅度僅為18％左右，說明高溫(75℃左右)調制對此木聚糖酶的影響不大。制粒過程是高溫及壓力的結合，此過程對一般的木聚糖酶的活性影響巨大，但此木聚糖酶經過高溫及高壓的制粒過程后，與調制后相比，酶活的保留率僅下降了12％左右(37.2對32.8％)，與混合后相比，酶活在飼料中的保留率也只下降了27％左右(45.2對32.8％)。打包口的酶活保留率與制粒后的保留率基本一致(32.8對33.5％)。
采用圖表對比法進行對比圖1、圖6分析，說明本實驗飼料加工過程中的高溫及高壓的制粒過程對該木聚糖酶的影響是有限的，整個調制、制粒過程對此木聚糖酶酶活保留率的影響不大于26％(45.2對33.5％)，但此木聚糖酶與飼料原料混合的過程會影響在實驗室用現有的方法測定酶活保留率(100對45.2％)，影響酶活測定的原因有諸多，如金屬離子的干擾、酶與底物的作用、測定方法的靈敏度等因素。
最后分別對圖1～圖6進行兩兩或多幅對比分析阿拉伯木聚糖酶的綜合特性；本發明實施例1所使用的內切阿拉伯木聚糖酶(EC 3.2.1.8)的酶學特性具有以下特點(1)酶活反應的最適溫度在40～60℃間，最佳溫度為55℃，在實際應用中，由于動物胃腸道內的溫度在38～40℃間，從結果來看，此時木聚糖酶活性在80％左右；(2)pH在4～6之間，酶活平均在90％以上，最佳反應pH為5.3，在實際應用中，由于動物胃腸道內的pH偏酸性，所以此酶在動物胃腸道內能夠發揮較好的作用；(3)酶的活性在底物濃度達到0.6％時活性已基本穩定，并接近最高值，說明此酶在底物濃度較低時就可能發揮出最高的活性；(4)此酶在干燥的狀態下經過累積溫度處理后，在70℃以前活性沒有損失，到85℃時酶活存留大于88％，100℃時酶活存留在75％左右；(5)此木聚糖酶與蛋白酶和淀粉酶按比例混合后儲存，測其樣品中的木聚糖酶活性，結果表明蛋白酶和淀粉酶對木聚糖酶的活性沒有影響；(6)在室溫條件下儲存半年，其酶活比較穩定，但隨著時間的延長，酶活會逐漸下降，酶活平均月下降率為7.3％；(7)此木聚糖酶與飼料原料混合后其活性有明顯的下降(100對45.2％)，但飼料加工過程中的制粒過程對該酶酶活的影響有限(45.2對33.5％)，說明此木聚糖酶具有耐高溫抗高壓，并能在體溫下良好發揮作用等特點。影響酶活測定的原因有諸多，如金屬離子的干擾、酶與底物的作用、測定方法的靈敏度等因素。
實施例2采用本發明的方法對對中性蛋白酶酶學性質的進行測試。
首先測試溫度對中性蛋白酶活性的影響分別在30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、60℃、70℃和80℃，而其它條件相同(pH7.5、底物濃度1％)的情況下測中性蛋白酶的酶活，結果作圖如圖7所示。
由圖7看出，中性蛋白酶的隨反應溫度的變化其酶活變化較大，反應溫度在40℃左右時，酶活表現最好，反應溫度在35～45℃之間酶活表現達到了90％左右，反應溫度超過50℃后，其酶活呈現直線下降趨勢，且下降幅度較大。這說明，此中性蛋白酶的最適反應溫度在35～45℃之間，且反應活性對反應溫度的變化較為敏感。
其次測試pH對中性蛋白酶活性的影響分別配制pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、7.5、8.0和9.0的底物及相應的緩沖液，在其它條件相同(溫度40℃、底物濃度1％)的情況下分別測定中性蛋白酶的活性，其結果如圖8所示。
由圖8看出，中性蛋白酶的活性在pH＝5～8間較好，pH＝6～7.5間最好。pH≤4時，中性蛋白酶活下降較快，pH≤3時已檢測不出酶的活性。因此，此中性蛋白酶的最適pH為6～7.5。
第三步測試底物濃度對蛋白酶活性的影響將底物酪素分別配制成0.2％、0.4％、0.6％、0.8％和1.0％五個濃度，在保證底物過飽和并且其它條件相同的情況下(pH7.5、溫度40℃)，加入酶稀釋液測定酶活；測試結果如圖9所示。
由圖9看出，蛋白酶的活性隨著底物濃度的升高逐漸增強，在底物濃度為0.4％時活性就已達到了最高活性的80％，0.6％時就基本接近了最高活性，這說明蛋白酶對底物的濃度比較敏感，在較低的濃度下就可以表現現較高的活性。
第四步測試經不同溫度處理后中性蛋白酶活存留情況將固體蛋白酶(水分含量≤8％)從55℃～100℃，每間隔5℃的條件下分別處理5分鐘后，測定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)其酶活，結果如圖10所示。
由圖10可以看到，中性蛋白酶分別經過55℃到90℃處理后，酶活均處于較穩定狀態，平均酶活在90％以上，90℃以后才急劇下降，酶活降到20％左右。
第五步測試中性蛋白酶在貯存期間酶活存留情況將固體中性蛋白酶產品(水分含量≤8％)常溫下保存，然后每隔兩個月取樣測定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)其酶活，結果如圖11所示，中性蛋白酶產品在貯存的前6個月內酶活下降非常少，不到5％；隨著時間延長酶活會逐漸降低，一年左右酶活下降約10％。說明此中性蛋白酶在常溫下非常穩定。
第六步測試加工工藝對中性蛋白酶活性的影響按照設計標準，將2.5千克活性為40,000U/g的中性蛋白酶按2.5kg/噸的添加量加入小豬飼料后制粒，制粒的條件及溫度(75℃左右)與商業飼料廠一致，在不同生產階段(混合后、調制后、制粒后及打包口)分別取樣并測定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)中性蛋白酶的活性，其結果見圖12。
與實施例1中木聚糖酶有相似的結果，采用圖表對比法對比圖1與圖12，此中性蛋白酶與飼料原料混合后其活性與設計標準相比有明顯的下降(100對65％)，在實驗室的條件下，此中性蛋白酶只有65％的活性能測定，即在沒有經過高溫及壓力處理的情況下，45％的酶活已測不到，說明混合過程會影響酶活的測定，影響酶活測定的原因有很多，未來應注重這方面的研究。經過高溫調制后，與設計標準相比，此中性蛋白酶在飼料中的活性保留率只有47％左右，下降幅度較大，但與混合后相比，此中性蛋白酶的活性保留率為68％(65對47％)，下降幅度為30％左右，說明高溫調制對此中性蛋白酶的一定的影響，但不大。此中性蛋白酶經過高溫及高壓的制粒過程后，與調制后相比，酶活的保留率僅下降了19％左右(47對38％)，與混合后相比，酶活在飼料中的保留率也只下降了41％左右(65對38％)。打包口的酶活保留率與制粒后的保留率都為38％。
本實驗說明飼料加工過程中的高溫及高壓的制粒過程對該中性蛋白酶的影響是有限的，整個調制、制粒過程對此中性蛋白酶活保留率的影響在40％左右，但此中性蛋白酶與飼料原料混合的過程會影響酶活保留率。
最后分別對圖7～圖12進行兩兩或多幅對比分析中性蛋白酶酶學特性，可以得到如下總結本實施例使用的內切中性蛋白酶(EC 3.4.21.62)的酶學特性具有以下特點
(1)此酶酶活隨反應溫度的變化而變化，在40℃時，酶活表現最好，在35-45℃間酶活表現可達90％左右，說明此酶在動物胃腸道內的溫度下能表現良好；(2)中性蛋白酶的活性在pH＝5～8間較好，pH＝6～7.5間最好。pH≤4時，中性蛋白酶活下降較快，此酶在偏酸性由于動物胃腸道內能夠發揮較好的作用；(3)此酶在底物濃度為0.4％時即可達到最高活性的80％，0.6％時接近最高活性，說明此酶對底物的濃度比較敏感，在較低的濃度下可以表現較高的活性；(4)中性蛋白酶在干燥的狀態下分別經過55℃到90℃處理后，平均酶活在90％以上，90℃以后急劇下降，90℃時酶活降底到20％左右；(5)中性蛋白酶在常溫下貯存非常穩定，前3個月酶活下降不到5％；半年后酶活的保存率仍大于65％；(6)與木聚糖酶的結果相似，此酶與飼料混合后其活性有明顯的下降(100對65％)，即在沒有經過高溫及壓力處理的情況下，35％的酶活已測不到，說明混合過程會影響酶活的測定。經過高溫調制后，與混合后相比，此酶的活性保留率為72％(65對47％)，經過高溫高壓制粒后，酶活在飼料中的保留率在60％左右(65對38％)。高溫高壓的制粒加工過程對該酶酶活的影響有限，說明此酶具有耐高溫抗高壓，并能在體溫下良好發揮作用等特點。
綜上所述，內切阿拉伯木聚糖酶和內切中性蛋白酶具有活性高，抗逆性強，底物專一性等特點，是符合飼料專用單酶要求的制品。
如本發明上述實施例所述的相同或近似的其他飼用酶制劑特性的測定方法，及采用本發明相同或近似方法的直接啟示所得到其他飼用酶制劑特性的測定方法，均在本發明保護范圍之內。
權利要求
1.一種飼用酶制劑特性的測定方法，其特征在于，其包括如下步驟1)制備一種飼用單酶溶液；2)測試并記錄該單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪制圖表；3)測試并記錄該單酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪制圖表；4)測試并記錄底物濃度對該單酶活性的影響，根據測試結果繪制圖表；5)制備第二種飼用單酶溶液，并重復步驟1)～4)；6)制備第3～第N種飼用單酶溶液，并分別重復步驟5)；7)將前述步驟2)～6)所得圖表，對其中任兩個或多個圖表，采用圖表對比法進行對比分析，選取最優特性或組配區間；所述步驟2)～4)的順序不分先后。
2.如權利要求1所述的飼用酶制劑特性的測定方法，其特征在于，所述的步驟4)，還包括測試并記錄加工工藝對該單酶活性的影響，并根據測試結果繪制圖表。
3.如權利要求1或2所述的飼用酶制劑特性的測定方法，其特征在于，所述的步驟4)，還包括測試并記錄其它酶制劑相互混合后對該單酶的影響，并根據測試結果繪制圖表。
全文摘要
本發明公開了一種飼用酶制劑特性的測定方法，其包括如下步驟1)制備一種飼用單酶溶液；2)測試并記錄該單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪制圖表；3)測試并記錄該單酶溶液的pH穩定性，根據測試結果繪制圖表；4)測試并記錄底物濃度對該單酶活性的影響，根據測試結果繪制圖表；5)制備第二種飼用單酶溶液，并重復步驟1)～4)；6)制備第3～第N種飼用單酶溶液，并分別重復步驟5)；7)將前述步驟2)～6)所得圖表，對其中任兩個或多個圖表，采用圖表對比法進行對比分析，選取最優特性或組配區間；所述步驟2)～4)的順序不分先后。本發明可達到篩選高效飼料轉化用單酶、并使其在加工等過程中保存其優良特性的目的。
文檔編號G01N33/00GK1975433SQ20061012388
公開日2007年6月6日 申請日期2006年12月1日 優先權日2006年12月1日
發明者于鋒, 林春寧 申請人:東莞泛亞太生物科技有限公司