專利名稱：沙田柚hplc指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜的制作方法
技術領域：
本發明涉及沙田柚〔Citrus grandis(L.)0sbeck var.shatinyu Hort.〕HPLC指紋圖譜的構建方法，以及由此方法得到的沙田柚標準指紋圖譜。
背景技術：
中藥色譜指紋圖譜質量控制技術是中藥現代化的一個重要方面。中藥色譜指紋圖譜在實現物質群體整體控制方面具有明顯的優勢，得到了國際社會的認可。英國草藥典、印度草藥典、德國藥用植物學會、加拿大藥用及芳香植物學會均接收指紋圖譜的質控方法。
沙田柚是蕓香科柑桔屬植物Citrus grandis(L.)Osbeck var.shatinyu Hort.的果實，具有清熱潤肺、止咳化痰的功效。本發明用HPLC法構建了沙田柚的指紋圖譜，利用HPLC指紋圖譜可全面監控沙田柚的質量。
發明內容
本發明的目的是提供沙田柚〔Citrus grandis(L.)Osbeck var.shatinyu Hort.〕指紋圖譜的構建方法，以及由此方法得到的沙田柚標準指紋圖譜。
本發明的沙田柚HPLC指紋圖譜的構建方法，包括如下步驟(1)供試品溶液的制備精密稱取沙田柚樣品粉末(過40目篩)1.0g～5.0g，煎煮1～3次，每次加水5～30倍量，每次煎煮10min～2h，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.05～1.20，加乙醇使醇濃度達到50％～90％，靜置6～48h，濾取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。
(2)HPLC分析精密吸取供試品溶液20μl進樣，色譜條件如下色譜柱為MerckLichrospher RP-18e(5μm，250×4.0mm)；流動相為甲醇-36％醋酸水混合液(80∶1，調pH至3.0)；采用線性梯度洗脫方式0min→50min，甲醇30％→60％，36％醋酸水混合液70％→40％；流速1ml/min；檢測波長320nm；得到沙田柚HPLC指紋圖譜。
按照上述本發明的方法，通過對18批沙田柚樣品構建HPLC指紋圖譜并進行分析比較，找出其共有特征峰(共13個峰)，得到沙田柚的標準指紋圖譜。13個共有峰的保留時間(tR)分別為7.28min、10.38min、12.11min、17.11min、21.74min、23.05min、25.91min、27.95min、28.85min、32.36min、34.51min、35.95min、44.25min。它們構成了沙田柚的指紋特征。
本發明通過吸收曲線的比較及加入法定性，確定主要峰的歸屬如下tR＝10.38min的峰為柚皮素、tR＝17.11min的峰為柚皮苷、tR＝21.74min的峰為新橙皮苷、tR＝23.05min的峰為野漆樹苷、tR＝25.91min的峰為橙皮內酯水合物、tR＝27.95min的峰為異橙皮內酯、tR＝35.95min的峰為香柑內酯、tR＝44.25min的峰為佛手柑亭。
本發明具有如下優點和用途通過指紋圖譜中共有峰的有無，能有效地監控沙田柚的質量，保證其質量的穩定、均一、可控。
下面結合實施例和附圖對本發明做進一步的說明。
圖1是本發明的沙田柚標準指紋圖譜。圖中的數字表示各共有峰的保留時間(tR)。
具體實施例方式
本發明的優選實施例如下1儀器、樣品、試藥1.1儀器DIONEX高效液相色譜儀(ASI-100自動進樣器、ATH-585柱溫箱、P680四元梯度泵、PDA-100檢測器)；HP1100高效液相色譜儀(四元泵、在線脫氣機、柱溫箱、自動進樣器、DAD檢測器)。色譜柱Merck Lichrospher RP-18e(5μm，250×4.0mm)。
1.2樣品18批沙田柚樣品，分別來自廣東梅縣、廣西超平、廣西蒼梧、廣西榮縣等地，經鑒定均為蕓香科柑桔屬植物沙田柚Citrus grandis(L.)Osbeck var.shatinyu Hort.的果實。
1.3試藥柚皮素對照品、柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供)；新橙皮苷對照品、野漆樹苷對照品、香柑內酯對照品(Sigma公司提供)；橙皮內酯水合物、異橙皮內酯、佛手柑亭(中山大學廣州現代中藥質量研究開發中心提供，純度高于99.5％)。液相色譜分析用試劑為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。
2方法與結果2.1供試品溶液的制備精密稱取沙田柚樣品粉末(過40目篩)2.0g，煎煮3次，每次加水15倍量，每次煎煮1h，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.12，加乙醇使醇濃度達到80％，靜置24h，濾取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。
2.2HPLC分析精密吸取供試品溶液20μl進樣，色譜條件如下色譜柱為MerckLichrospher RP-18e(5μm，250×4.0mm)；流動相為甲醇-36％醋酸水混合液(80∶1，調pH至3.0)；采用線性梯度洗脫方式0min→50min，甲醇30％→60％，36％醋酸水混合液70％→40％；流速1ml/min；檢測波長320nm；得到沙田柚HPLC指紋圖譜。
2.3共有峰的確定將上述得到的18批沙田柚樣品HPLC指紋圖譜進行分析比較，找出其共有特征峰(共13個峰)，得到沙田柚的標準指紋圖譜。13個共有峰的保留時間(tR)分別為7.28min、10.38min、12.11min、17.11min、21.74min、23.05min、25.91min、27.95min、28.85min、32.36min、34.51min、35.95min、44.25min。它們構成了沙田柚的指紋特征。
2.4主要峰的鑒定通過吸收曲線的比較及對照品加入法定性，確定了主要峰的歸屬如下tR＝10.38min的峰為柚皮素、tR＝17.11min的峰為柚皮苷、tR＝21.74min的峰為新橙皮苷、tR＝23.05min的峰為野漆樹苷、tR＝25.91min的峰為橙皮內酯水合物、tR＝27.95min的峰為異橙皮內酯、tR＝35.95min的峰為香柑內酯、tR＝44.25min的峰為佛手柑亭。
權利要求
1.一種沙田柚HPLC指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟(1)供試品溶液的制備精密稱取沙田柚樣品粉末(過40目篩)1.0g～5.0g，煎煮1～3次，每次加水5～30倍量，每次煎煮10min～2h，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.05～1.20，加乙醇使醇濃度達到50％～90％，靜置6～48h，濾取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液；(2)HPLC分析精密吸取供試品溶液20μl進樣，色譜條件如下色譜柱為MerckLichrospher RP-18e(5μm，250×4.0mm)；流動相為甲醇-36％醋酸水混合液(80∶1，調pH至3.0)；采用線性梯度洗脫方式0min→50min，甲醇30％→60％，36％醋酸水混合液70％→40％；流速1ml/min；檢測波長320nm；得到沙田柚HPLC指紋圖譜；(3)測定18批沙田柚樣品HPLC指紋圖譜并進行比較，得到由其共有峰構成的沙田柚HPLC標準指紋圖譜，該指紋圖譜具有的13個共有特征峰的保留時間(tR)分別為7.28min、10.38min、12.11min、17.11min、21.74min、23.05min、25.91min、27.95min、28.85min、32.36min、34.51min、35.95min、44.25min。
2.按照權利要求1所述的沙田柚HPLC指紋圖譜，其特征是tR＝10.38min的峰為柚皮素、tR＝17.11min的峰為柚皮苷、tR＝21.74min的峰為新橙皮苷、tR＝23.05min的峰為野漆樹苷、tR＝25.91min的峰為橙皮內酯水合物、tR＝27.95min的峰為異橙皮內酯、tR＝35.95min的峰為香柑內酯、tR＝44.25min的峰為佛手柑亭。
全文摘要
本發明涉及沙田柚〔Citrus grandis(L.) Osbeckvar.shatinyu Hort.〕HPLC指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜。首先，取沙田柚樣品粉末，用水煎煮，濾過，濃縮，加乙醇靜置，取上清液作為供試品溶液。進行HPLC分析精密吸取供試品溶液進樣，色譜柱為Merck Lichrospher RP－18e(5μm，250×4.0mm)；線性梯度洗脫方式0min→50min，甲醇30％→60％，36％醋酸水混合液70％→40％；；檢測波長320nm；得到沙田柚HPLC指紋圖譜。對18批沙田柚樣品HPLC指紋圖譜比較，確定其共有指紋特征，得到沙田柚的標準指紋圖譜。利用指紋圖譜可有效地監控沙田柚的質量，保證其質量的穩定、均一、可控。
文檔編號G01N30/86GK1959407SQ20061012292
公開日2007年5月9日 申請日期2006年10月20日 優先權日2006年10月20日
發明者蘇薇薇, 田珩, 譚穗懿, 王永剛, 彭維, 李沛波, 吳忠 申請人:中山大學