專利名稱：一種用于檢測人abo血型的反定型用紅細胞試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物化學領域，尤其涉及鑒定血型的試劑，特別是一種用
于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試劑盒。
背景技術：
由于ABO血型系統是臨床輸血、器官移植中最重要的血型系統，因此 對獻血者和受血者ABO血型的預先確認也是輸血工作中最為重要的實驗， 錯誤的ABO血型定型導致的輸血反應將給受血者帶來十分嚴重的后果，因 此ABO血型的鑒定必須以正、反定型試驗結果相互參照來確定。所述的正 定型檢測是用已知的抗A和抗B血型定型試劑來測定紅細胞上有無相應的A 抗原或/B抗原。反定型檢測是用己知的ABO血型來測定血清中有無相應的 抗A抗體/或B抗體。
ABO試劑紅細胞是體外診斷試劑，用于ABO血型鑒定的反定型檢測，是 血型定型的常規試劑，在臨床上有著極為廣泛的使用，過去由于存在體外 長期保存時間短、運輸不方便等許多問題，使得試劑的難以商品化生產和 銷售。基本是由各使用單位自行配制，基本上是現用現配。
發明內容
本發明的目的是提供一種用于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試劑 盒，所述的用于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試試劑盒要解決現有技 術中試劑盒體外保存時間短、運輸不方便的技術問題。
本發明的一種用于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試劑盒，由盒體
和試劑組成，試劑設置在盒體中，試劑由A型試劑、B型試劑和O型試劑 組成，所述的A型試劑由紅細胞保存液和A型壓積紅細胞組成、所述的B 型試劑由紅細胞保存液和B型壓積紅細胞組成，所述的O型試劑由紅細胞 保存液和O型壓積紅細胞組成，所述的紅細胞保存液由葡萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成，其
中，所述的葡萄糖占所述的紅細胞保存液的質量百分比為1.7—2.1%，所述 的枸櫞酸三鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為2.0—2.2%，所述的枸 櫞酸占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.030—0.040%，所述的磷酸二 氫鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.20—0.30%,所述的乙二胺四 乙酸二鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.08—0.12%，所述的核苷 酸占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.040—0.045%，所述的抗生素占 所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.001—0.002%，余量為蒸餾水；所述 的抗生素可以采用氯霉素、西力欣等醫用的其它抗生素。
所述的A型壓積紅細胞通過如下方法制備,首先將至少三人份的A型血 液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細胞至少兩次， 再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞至少一次，在3 — 5'C洗滌離心，3000 一4000轉/分10—20分鐘，最后一次離心后，3000—4000轉/分15—25分
鐘，棄血清，沉淀即為A壓積紅細胞；
所述的B型壓積紅細胞的制備方法同所述的A型壓積紅細胞的制備方
法；
所述的O型壓積紅細胞的制備方法同所述的A型壓積紅細胞的制備方
法；
在所述的A型試劑中，所述的A型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃 度為2 —5%，余量為所述的紅細胞保存液；
在所述的B型試劑中，所述的B型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃 度為2 — 5%，余量為所述的紅細胞保存液；
在所述的O型試劑中，所述的O型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃 度為2 —5%，余量為所述的紅細胞保存液。
進一步的，所述的一種用于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試劑盒， 所述的葡萄糖占所述的紅細胞保存液的質量百分比為1.9%，所述的枸櫞酸
三鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為2.1 % ，所述的枸櫞酸占所述的 紅細胞保存液的質量百分比為0.035%,所述的磷酸二氫鈉占所述的紅細胞 保存液的質量百分比為0.25%，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述的紅細胞 保存液的質量百分比為0.1%，所述的核苷酸占所述的紅細胞保存液的質量 百分比為0.043%,所述的抗生素占所述的紅細胞保存液的質量百分比為 0.0015%，余量為蒸t留水。
進一步的，所述的A型壓積紅細胞通過如下方法制備,首先將至少三 人份的A型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅 細胞三次，再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4。C洗滌離心， 3500轉/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉淀 即為壓積紅細胞。
進一步的，所述的B型壓積紅細胞通過如下方法制備,首先將至少三人 份的B型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細 胞三次，再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4t:洗滌離心，3500 轉/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉淀即為 壓積紅細胞。
進一步的，所述的0型壓積紅細胞通過如下方法制備，首先將至少三 人份的0型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅 細胞三次，再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4。C洗滌離心， 3500轉/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉 淀即為壓積紅細胞。
本發明的工作原理是AB O血型系統是以人體紅細胞上的抗原與血 清中抗體而定型的。凡紅細胞上含有A抗原，而血清中含有抗B抗體的稱 為A型；紅細胞上含有B抗原，而血清中含有抗A抗體的稱為B型；紅細 胞上含有A和B抗原，而血清中無抗A、抗B抗體的稱為AB型；紅細胞 上不含有A、 B抗原，而血清中含有抗A和抗B抗體稱為O型。反定型檢
測是用已知的ABO血型來測定血清中有無相應的抗A抗體/或B抗體。具體^ 可見下表
正定型 抗A 抗B
受檢者血型
A B 0
反定型
A細胞 B細胞 O細胞
A B
本發明與已有技術相對照，其效果是積極和明顯的。本發明因為將葡 萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和 抗生素按一定的配比制成紅細胞保存液，由該紅細胞保存液保存的壓積紅 細胞，可以更好的保存壓積紅細胞，使得壓積紅細胞能夠較長時間的保持 穩定，增加長距離運輸的可行性，使得本發明可以進行商品化的生產和銷 售。
具體實施例方式
實施例1
本發明的一種用于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試劑盒，由盒體 和試劑組成，試劑設置在盒體中，試劑由A型試劑、B型試劑和O型試劑
組成，所述的A型試劑由紅細胞保存液和A型壓積紅細胞組成、所述的B 型試劑由紅細胞保存液和B型壓積紅細胞組成，所述的O型試劑由紅細胞 保存液和O型壓積紅細胞組成，所述的紅細胞保存液由葡萄糖、枸櫞酸三 鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成，其 中，所述的葡萄糖占所述的紅細胞保存液的質量百分比為1.9%，所述的枸 櫞酸三鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為2.1%,所述的枸櫞酸占所 述的紅細胞保存液的質量百分比為0.035%，所述的磷酸二氫鈉占所述的紅
細胞保存液的質量百分比為0.25%，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述的紅 細胞保存液的質量百分比為0.1%，所述的核苷酸占所述的紅細胞保存液的 質量百分比為0.043%，所述的抗生素占所述的紅細胞保存液的質量百分比 為0.0015%，余量為蒸餾水；所述的抗生素可以采用氯霉素、西力欣等醫 用的其它抗生素。
所述的A型壓積紅細胞通過如下方法制備,首先將至少三人份的A型 血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細胞三次， 再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4'C洗滌離心，3500轉/分 15分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅 細胞；
所述的B型壓積紅細胞通過如下方法制備，首先將至少三人份的B型 血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細胞三次， 再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4t:洗滌離心，3500轉/分 15分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅 細胞；
所述的0型壓積紅細胞通過如下方法制備，首先將至少三人份的0型血 液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細胞三次，再 分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4t:洗滌離心，3500轉/分15 分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅細 胞；
在所述的A型試劑中，所述的A型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃 度為2—5%，余量為所述的紅細胞保存液；
在所述的B型試劑中，所述的B型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃 度為2_5%，余量為所述的紅細胞保存液；
在所述的O型試劑中，所述的O型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃 度為2—5%,余量為所述的紅細胞保存液。
實施例2
采用試管法檢測血型
1. 取被檢者血清(或血漿)各一滴分別加于標記好的小試管中；
2. 分別各加1滴A型、B型、O型試劑；
3. 搖動試管，離心，速度和時間可選擇以下任意一種
轉速1000RPM,時間1分鐘； 轉速3400RPM，時間15秒；
4. 先觀察是否溶血(溶血可能是陽性結果，或者是細菌污染)，然 后輕輕搖晃，使細胞再懸浮起來；
5. 觀察凝集狀況，并立即記錄結果。參照表1可知血型。
實施例3
微量板法檢測血型
1. 在U型板三個孔內分別加入25 — 35ul的被檢者血清(血清)；
2. 每孔內分別加入與血清等量的A、 B、 0型試劑；
3. 混勻；
4. 離心，轉速2000RPM，時間30秒；
5. 檢測溶血情況(溶血可能是陽性結果，或者是細菌污染)；
6. 用振蕩儀振動微量板，振動能使陽性反應出現凝集的細胞扣，若 是陰性反應，細胞扣很快消除；
7. 記錄結果，參照表l可知血型。
權利要求
1.一種用于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試劑盒，由盒體和試劑組成，試劑設置在盒體中，試劑由A型試劑、B型試劑和O型試劑組成，所述的A型試劑由紅細胞保存液和A型壓積紅細胞組成、所述的B型試劑由紅細胞保存液和B型壓積紅細胞組成，所述的O型試劑由紅細胞保存液和O型壓積紅細胞組成，其特征在于所述的紅細胞保存液由葡萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成，其中，所述的葡萄糖占所述的紅細胞保存液的質量百分比為1.7-2.1％，所述的枸櫞酸三鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為2.0-2.2％，所述的枸櫞酸占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.030-0.040％，所述的磷酸二氫鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.20-0.30％，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.08-0.12％，所述的核苷酸占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.040-0.045％，所述的抗生素占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.001-0.002％，余量為蒸餾水，所述的A型壓積紅細胞通過如下方法制備，首先將至少三人份的A型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細胞至少兩次，再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞至少一次，在3-5℃洗滌離心，3000-4000轉/分10-20分鐘，最后一次離心后，3000-4000轉/分15-25分鐘，棄血清，沉淀即為A壓積紅細胞，所述的B型壓積紅細胞的制備方法同所述的A型壓積紅細胞的制備方法，所述的O型壓積紅細胞的制備方法同所述的A型壓積紅細胞的制備方法，在所述的A型試劑中，所述的A型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃度為2-5％，余量為所述的紅細胞保存液，在所述的B型試劑中，所述的B型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃度為2-5％，余量為所述的紅細胞保存液，在所述的O型試劑中，所述的O型壓積紅細胞占所述的A型試劑的濃度為2-5％，余量為所述的紅細胞保存液。
2. 如權利要求1所述的用于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試劑盒，其特 征在于所述的葡萄糖占所述的紅細胞保存液的質量百分比為1.9%，所述 的枸櫞酸三鈉占所述的紅細胞保存液的質量百分比為2.1%，所述的枸櫞酸 占所述的紅細胞保存液的質量百分比為0.035%，所述的磷酸二氫鈉占所述 的紅細胞保存液的質量百分比為0.25%，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述 的紅細胞保存液的質量百分比為0.1%，所述的核苷酸占所述的紅細胞保存 液的質量百分比為0.043%，所述的抗生素占所述的紅細胞保存液的質量百 分比為0.0015%，余量為蒸餾水。
3. 如權利要求1所述的用于檢測人AB0血型的反定型用紅細胞試劑盒，其 特征在于所述的A型壓積紅細胞通過如下方法制備，首先將至少三人份的 A型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細胞三 次，再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4t:洗滌離心，3500 轉/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉淀即為 壓積紅細胞。
4. 如權利要求1所述的用于檢測人AB0血型的反定型用紅細胞試劑盒，其 特征在于所述的B型壓積紅細胞通過如下方法制備，首先將至少三人份的 B型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細胞三 次，再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4。C洗滌離心，3500 轉/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉淀即為 壓積紅細胞。
5. 如權利要求1所述的用于檢測人AB0血型的反定型用紅細胞試劑盒，其 特征在于所述的O型壓積紅細胞通過如下方法制備，首先將至少三人份的 O型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細胞三 次，再分別用適量紅細胞保存液洗滌紅細胞一次，在4。C洗滌離心，3500 轉/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅細胞。
全文摘要
本發明的一種用于檢測人ABO血型的反定型用紅細胞試劑盒，試劑盒由A型試劑、B型試劑和O型試劑組成，A型試劑由紅細胞保存液和A型壓積紅細胞組成、B型試劑由紅細胞保存液和B型壓積紅細胞組成，O型試劑由紅細胞保存液和O型壓積紅細胞組成，紅細胞保存液由葡萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成；本發明因為將葡萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素按一定的配比制成紅細胞保存液，由該紅細胞保存液保存的壓積紅細胞，可以更好的保存壓積紅細胞，使得壓積紅細胞能夠較長時間的保持穩定，增加長距離運輸的可行性，使得本發明可以進行商品化的生產和銷售。
文檔編號G01N33/80GK101178410SQ20061011802
公開日2008年5月14日 申請日期2006年11月7日 優先權日2006年11月7日
發明者丁蘇鄂, 劉劍榮, 包于勤, 沈軼明, 曄 王, 詹申宏, 顧桂玲 申請人:上海血液生物醫藥有限責任公司