專利名稱：巖藻糖苷酶診斷試劑盒及巖藻糖苷酶活性測定方法
技術領域：
本發明涉及一種巖藻糖苷酶診斷試劑盒，同時本發明還涉及測定 巖藻糖苷酶活性的方法，屬于醫學檢驗測定技術領域。
背景技術：
1980年法國學者Deugnier等研究發現，原發性肝癌患者血清巖藻 糖苷酶升高，并被眾多的研究所證實。故有人提出巖藻糖苷酶可作為 原發性肝癌的腫瘤標志物，與甲胎蛋白聯合或參照應用大大提高了診 療價值。近年來研究發現，巖藻糖苷酶對某些疾病的發生、發展均具 有重要意義。
血清巖藻糖苷酶測定主要有熒光法和比色法。比色法以4-硝基苯a 丄-巖藻吡喃糖苷或4-硝基苯(1丄-巖藻糖苷為底物顯色，本法簡便，設 備要求不高，國內外廣泛采用。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提出一種利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)技術，連續監測色原在410或366nrn波長處吸 光度的變化，得以測定巖藻糖苷酶活性的方法，同時，本發明還將給 出用以實現該方法的巖藻糖苷酶診斷試劑盒，采用該試劑盒不僅可以 在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行巖藻糖苷酶活性 測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。
本發明巖藻糖苷酶活性測定方法原理如下-
合成色原巖藻糖苷底物巖藻糖苷酶色原+相應巖藻糖苷 這種方法應用巖藻糖苷酶酶促反應連續監測法，巖藻糖苷酶酶解合
成色原巖藻糖苷底物釋放出色原(在410或366nrn處有吸收峰)， 從而得以測定410或366nrn處吸光度上升的速度，可以測算巖藻 糖苷酶的活性大小。 實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合 考慮，無論是單劑或雙劑，如下成分關系的本發明巖藻糖苷酶診斷試
劑盒較為理想
緩沖液 500 mmol/L
穩定劑 10 mmol/L
合成色原巖藻糖苷底物 3 mmol/L
本發明的巖藻糖苷酶診斷試劑盒可以是單劑，包括
緩沖液、穩定劑、合成色原巖藻糖苷底物。 試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液 體試劑，直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑-試劑1
緩沖液 。 試劑2
緩沖液、穩定劑、合成色原巖藻糖苷底物。 合成色原巖藻糖苷底物在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體 試劑，直接使用。
無論是單劑或雙劑，本發明測定巖藻糖苷酶活性的方法，其合成色 原巖藻糖苷底物可以是對硝基苯基-2-o- (oc-L-吡喃巖藻糖苷)-卩-D-吡 喃半乳糖、對硝基苯基-巖藻糖苷、對硝基苯基-ot-L-吡喃巖藻糖苷或 4-甲基傘形酮-a-L-巖藻糖苷中的 一種。
具體實施例方式
下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。 實施例一
本實施例的巖藻糖苷酶診斷試劑為單試劑，包括
檸檬酸鈉緩沖液 pH6.0 500 mmol/L
穩定劑 10mmol/L 對硝基苯基-2-o- (a-L-吡喃巖藻糖苷)-p-D-吡喃半乳糖
3 mmol/L
試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進行冷凍干燥，制成千粉試劑； 使用前，加入純凈水，復溶后使用。
在全自動生化分析儀上設定溫度37'C，反應時間IO分鐘，起 始吸光度《0.1，測試主波長410nm，測試副波長505nm，被測巖藻糖 苷酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應方向為正反應(上升反應)， 延遲時間大約1分鐘左右，檢測時間2分鐘左右。
加入樣品和試劑后，使之混合并發生反應，最終將反應物置于生 化分析儀下，檢測主波長410nm吸光度上升的速度，從而測算出巖藻
糖苷酶的活性大小。 實施例二
本實施例的巖藻糖苷酶診斷試劑為雙試劑，包括:
試劑l
檸檬酸鈉緩沖液 pH6.0
500 mmol/L
試劑2
檸檬酸鈉緩沖液 pH6.0 穩定劑
4-甲基傘形酮-a-L-巖藻糖苷
500 mmol/L 10 mmol/L 3 mmol/L
試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，制成液體雙試劑，可以直接使用。 在全自動生化分析儀上設定溫度37。C，反應時間10分鐘，起始 吸光度《0.1，測試主波長366nm，測試副波長505nm,被測巖藻糖苷 酶樣品與試劑1、試劑2的體積比例為2/20/5，反應方向為正反應(上 升反應)，延遲時間大約1分鐘左右，檢測時間2分鐘左右。
加入樣品和試劑后，使之混合并發生反應，最終將反應物置于生化 分析儀下，檢測主波長366nm吸光度上升的速度，從而測算出巖 藻糖苷酶的活性大小。 總之，實驗證明，采用本發明的測定方法完全可以通過一般生化分析 儀器得出所需的測定結果，并且靈敏度高、精確度好、不受內外源物 質的污染，便于推廣應用。
權利要求
1.一種巖藻糖苷酶(EC 3.2.1.51)活性測定方法，其方法原理如下id="icf0001" file="A2006100972140002C1.gif" wi="130" he="6" top= "38" left = "40" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>將最終反應物置于可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長410或366nm吸光度上升的速度，測算出巖藻糖苷酶的活性大小測定結果。合成色原-巖藻糖苷底物可以是下列底物中之任何一種對硝基苯基-2-o-(α-L-吡喃巖藻糖苷)-β-D-吡喃半乳糖(p-Nitrophenyl-2-o-(α-L-fucopyranosyl)-β-D-galactopyranoside)對硝基苯基-巖藻糖苷(p-Nitrophenyl-α-L-fucoside)對硝基苯基-α-L-吡喃巖藻糖苷(p-Nitrophenyl-a-L-fucopyranoside)以上三種底物其吸收波長皆為410nm4-甲基傘形酮-α-L-巖藻糖苷(4-Methylumbelliferyl-α-L-fucoside)吸收波長366nm。
2. —種巖藻糖苷酶診斷試劑盒，主要成分包括緩沖液 20——500 mmol/L穩定劑 1——50 mmol/L合成色原-巖藻糖苷底物 0.3——12 mmol/L其特征在于試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
3. 根據權利要求2所述巖藻糖苷酶診斷試劑盒，其特征在于 由緩沖液、穩定劑、合成色原-巖藻糖苷底物組成單劑試劑。
4.根據權利要求2所述巖藻糖苷酶診斷試劑盒，其特征在于由緩沖液、穩定劑、合成色原-巖藻糖苷底物組成雙劑試劑；試劑1， 由緩沖液組成；試劑2，由緩沖液、穩定劑、合成色原-巖藻糖苷底 物組成。
全文摘要
本發明涉及一種巖藻糖苷酶(EC 3.2.1.51)診斷試劑盒，同時本發明還涉及測定巖藻糖苷酶活性的方法原理、試劑的組成及成分，屬于醫學檢驗測定技術領域。本發明的試劑盒主要成分包括緩沖液、合成色原-巖藻糖苷底物及穩定劑，這些成分可以配成單劑試劑盒及雙劑試劑盒；通過將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發生一系列的酶促反應，再將反應物置于可見光分析儀下，檢測主波長410nm或366nm處吸光度上升的速度，從而測算出巖藻糖苷酶的活性大小。采用本發明完全可以通過可見光分析儀器得出所需的測定結果，便于推廣應用。
文檔編號G01N21/25GK101169366SQ20061009721
公開日2008年4月30日 申請日期2006年10月24日 優先權日2006年10月24日
發明者王爾中 申請人:蘇州艾杰生物科技有限公司