專利名稱：一種藥物殘留的檢測方法
技術領域：
本發明涉及藥物殘留的檢測方法。
背景技術：
所謂獸藥殘留是指動物產品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及/或其代謝物，以及與獸藥有關的雜質的殘留。獸藥殘留既包括原藥也包括藥物在動物體內的代謝產物。主要的殘留獸藥有抗生素類殘留、激素類殘留和驅蟲藥類殘留。獸藥通常是通過在預防和治療動物疾病用藥、在飼料添加劑中使用以及在食品保鮮中引入藥物而帶來對食品的污染。
獸藥殘留對人體的危害1.人長期攝入含獸藥殘留的動物源性食品后，獸藥殘留不斷在人體內蓄積，當積累到一定程度后，就會對人體產生毒性作用。如磺胺類藥物可引起腎損害，特別是乙酰化磺胺在尿中溶解度低，析出結晶后對腎臟損害更大。
2.經常食用一些含低劑量抗菌藥物的食品還能使易感個體出現過敏反應，這些藥物包括青霉素、四環素、磺胺類藥物及某些氨基糖苷類抗生素等。這些藥物具有抗原性，刺激機體內抗菌素體的形成，造成過敏反應，嚴重者可引起休克、喉頭水腫、呼吸困難等嚴重癥狀。呋喃類引起人體的不良反應主要是胃腸反應和過敏反應，表現在以周圍神經炎、藥熱、嗜酸性白細胞增多為特征的過敏反應。磺胺類藥物的過敏反應表現為皮炎、白細胞減少、溶血性貧血和藥熱。青霉素藥物引起的變態反應，輕者表現為接觸性皮炎和皮膚反應，嚴重者表現為致死性過敏性休克。
3.動物在經常反復接觸某一種抗菌藥物后，其體內的敏感菌株將受到選擇性的抑制，細菌產生耐藥性，產生大量耐藥菌株。如果耐藥菌株傳播到人類身上，將會產生嚴重后果。當人體發生疾病時，就給臨床上感染性疾病的治療帶來一定的困難，延誤正常的治療。已發現長期食用低劑量的抗生素能導致金黃色葡萄菌耐藥菌株的出現，也能引起大腸桿菌耐藥菌株的產生。至今為止，具有耐藥性的微生物通過動物性食品轉移到人體內時，對人體健康產生危害的問題尚未得到解決。
4.在正常條件下，人體內有非常多的有益菌，有益菌群能抑制其他菌群的過度繁殖，某些菌群能合成B族維生素和維生素K以供機體使用。過多應用藥物會使這種平衡發生紊亂，造成一些非致病菌死亡，使菌群的平衡失調，從而導致長期的腹瀉或引起維生素缺乏等反應，造成對人體的危害。
5.長期食用含低劑量激素動物性食品的后果也不可忽視。
除以上影響以外，獸藥殘留還具有致畸、致癌、致突變作用。
目前對于這些獸藥殘留的檢測方法有高效液相色譜分析法(HPLC)和氣象色譜/質譜聯用分析法(GC/MS)或液相色譜/質譜聯用分析法(LC/MS)。這些方法普遍存在著儀器昂貴，方法復雜，操作繁瑣，試劑消耗量大的局限性。酶聯免疫(ELISA)和放射免疫(RIA)技術以靈敏度高，特異性好，成本低，操作簡單在獸藥殘留檢測中廣泛應用。但ELISA試劑盒，價格昂貴，僅能對單一的獸藥檢測，通量較低，且操作費時，不便于進行大批量分析。
液相芯片系統是生物芯片領域已經發展成熟的一項技術。
液相芯片系統包括液相芯片工作站和不同熒光編碼的微球等。液相芯片工作站是一自動化程度極高的檢測和分析儀器，熒光編碼的微球目前共有100種，可檢測100種與之相偶聯的不同種類的目標分子。將這些微球懸浮于一個液相體系中，就構成了一個液相芯片系統，利用這個系統，可以對同一個樣品中的多個不同的檢測對象同時進行檢測，這種檢測技術稱之為xMAP(flexible Multi～AnalyteProfiling)技術。
在液相系統中，為了區分不同的探針，每一種用于標記探針的微球都帶有一個獨特的色彩編號。在微球的制造過程中，摻入了兩種不同的紅色分類熒光，根據這兩種紅色分類熒光的比例不同，可以把微球分為100種。利用這100種微球，可以標記上100種不同的探針分子，同時對一個樣本中的100種不同的目的分子進行檢測。
為了將不同特性的探針分子偶聯到微球表面，在微球的表面進行了一系列的化學修飾，可與各種蛋白，肽，核酸等生物分子進行偶聯固定。
將這種標記好探針的微球與樣品反應。探針可以與相應的目標分子特異性的結合，帶有綠色報告熒光的報告分子也與目的分子特異性的結合，本方法適用于定量和定性分析。
檢測的原理是使微球呈單列高速通過檢測通道，并使用雙色激光同時對微球上的紅色分類熒光和報告分子上的綠色報告熒光進行檢測。紅色激光激發的是微球上的紅色分類熒光，根據微球的不同熒光編碼，可以將微球分類，從而將各個不同的分析反應區分開來。綠色激光激發的是報告熒光分子，目的是確定微球上結合的報告熒光分子的數量，從而確定微球上結合的目的分子的數量。因此，通過紅綠雙色激光的同時檢測，可以確定被結合的待測物的種類和數量。由于液相芯片系統檢測是的某種熒光編碼的群體信號，因此可信度更高。
發明內容
本發明針對食品安全中的獸藥殘留檢測種類繁多，檢測通量需求高的特點，為解決當前藥物殘留檢測中存在的價格昂貴、樣本需求量大、操作費時、檢測通量低等缺陷，利用藥物分子的單克隆抗體和偶聯抗原建立液相芯片競爭定量檢測方法，建立了一種全新的多種藥物殘留檢測方法。
本發明的具體技術方案如下本發明提供一種藥物殘留的檢測方法，包括如下步驟1)小分子-蛋白偶聯物與單克隆抗體的預處理；2)液相芯片系統中微球的活化；3)標準曲線的繪制；4)待測樣品信號值的測定；5)根據標準曲線，計算待測樣品中藥物殘留的含量。
步驟1)所述的小分子-蛋白偶聯物與單克隆抗體的預處理是指先將小分子-蛋白偶聯物和單克隆抗體分別進行純化、除鹽和除雜質，然后將抗體與D-生物素偶聯；所述的小分子是指呋哺唑酮代謝物、喹乙醇和金霉素。
步驟2)所述的液相芯片系統中的微球的活化是指用EDC活化微球上的羧基。
步驟3)所述的制定標準曲線是指用步驟1)預處理好的抗原標準品，通過濃度梯度實驗，測定在不同濃度抗原存在的情況下，液相芯片系統檢測到的信號值，利用抗原濃度和液相芯片系統檢測到的信號值繪制標準曲線。
步驟4)所述的測定待測樣品的信號值是指將待測樣品進行預處理后，加至檢測試劑中，利用液相芯片系統檢測其信號值。
作為優化方案，本發明所提供的藥物殘留的檢測方法包括如下步驟1).小分子-蛋白偶聯物和單克隆抗體的處理用緩沖液，除鹽柱(購自SIGMA公司)將小分子-蛋白偶聯物和單克隆抗體分別進行純化、除鹽和除雜質，再溶解于適量的pH7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)中；A.用30mL PBS 7.4的磷酸鹽緩沖液平衡除鹽柱；B.加入抗體，收集除鹽柱洗脫下的液體，前3mL棄掉；C.用離心管依次收集第4，5，6，7四個1mL的液體；D.測定OD280，估算蛋白的量；2).單克隆抗體偶聯生物素A.將D-BIONTIN(D-生物素)(SIGMA公司)加入第一步得到的抗體中，室溫輕搖1～2小時；B.生物素標記單克隆抗體后，檢測生物素偶聯的效率，將過量的D-BIONTIN用透析法除去，凍干；3).液相芯片檢測藥物殘留的試驗A.用漩渦振蕩器或者超聲波懸浮微球(luminex公司)，大約20s；B.取50μL微球于1.5mL的離心管中，8000g離心1～2min，去上清液；C.加入100μL雙蒸水，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s，8000g離心1～2min；D.吸棄上清，加入80μL的磷酸鹽緩沖液(100mM Monobasic Sodium Phosphate，pH 6.2)(配方及試劑來源見附表)用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s；E.加入10μL 50mg/mL Sulfo-NHS(diluted in dH2O)，用漩渦振蕩器混勻；F.加入10μL 50mg/mL EDC(diluted in dH2O)(sigma公司)。用漩渦振蕩器混勻；G.在室溫避光靜置20min，每10min用漩渦振蕩器輕輕的混勻；H.將已經活化的微球≥8000g離心1～2min；I.吸棄上清，加入250μL的50mM MES(配方及試劑來源見附表)，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s；J.將微球≥8000g離心1～2min；
K.吸棄上清，加入120μL的50mM MES，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s；L.加入0.1μg小分子-蛋白偶聯物到重懸浮的微球中，用50mM MES，pH 5.0將總體積調到500μL；M.用漩渦振蕩器混勻，室溫避光搖動2hr；N.將微球≥8000g離心1～2min；O.吸棄上清，用250～500μL的PBS-TBN用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s。室溫避光搖動30min；P.將微球≥8000g離心1～2min，吸棄上清，加入1mL的PBS-TBN，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s；Q.將微球在≥8000g離心1～2min，吸棄上清，用100μL的PBS-TBN重懸浮微球；R.在1.5mL的離心管中依次加入抗原標準品或被檢樣品的前處理產物，5μL偶聯抗原的微球、生物素標記的抗體、最后用PBS補足體積到100μL；S.把反應物混勻，避光室溫旋轉60min，將SA-PE(藻紅蛋白)(INVITROGEN公司)用PBS-1％OVA稀釋到4μg/mL；T.向每個反應里加25μL的稀釋的SA-PE，把反應物混勻，避光室溫旋轉30min，上樣50～75μL到LIQUIDCHIP WORK STATION中；U.根據不同濃度標準品所得到的信號值繪制標準曲線，在標準曲線上找到樣品對應的濃度值，得出樣品中藥物殘留的濃度。
本發明所提供的藥物殘留的檢測方法應用于藥物殘留的檢測。
本發明實現的有益效果如下真正實現了高通量，可以在一個流程中同時對幾種藥物的殘留情況進行檢測；簡化了操作程序，有效的降低了檢測成本，縮短了檢測時間；可以檢測到pg級的水平。
圖1呋喃唑酮代謝物殘留、喹乙醇殘留和金霉素殘留6個標準濃度的標準曲線圖。
具體實施例方式
實施例1實驗材料如下3-氨基-2惡唑酮(AOZ)單克隆抗體(晶美公司)，金霉素單克隆抗體(晶美公司)，3-甲基喹喔啉(MQCA)單克隆抗體(晶美公司)，卵清蛋白(OVA)與3-氨基-2惡唑酮偶聯的全抗原OVA-AOZ(晶美公司)卵清蛋白與金霉素偶聯的全抗原OVA-金霉素(晶美公司)卵清蛋白與3-甲基喹喔啉偶聯的全抗原OVA-MQCA(晶美公司)液相芯片儀QIAGEN LIQUIDCHIP WORK STATION及配套三種號碼的微球(QIAGEN公司)。
實驗設計1)在本實施例中，用33號微球偶聯OVA-AOZ，用34號微球偶聯OVA-金霉素，用35號微球偶聯OVA-MQCA，最后將偶聯了抗原的微球等比例混在一起，再加入抗體和樣品前處理的待檢物以及標準品。
2)同時依照同樣的方法作交叉試驗。
3)準備已知量的每種小分子的樣品2個(一個1ng，一個20ng)，做盲實驗。
實驗方法如下1)用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s。
2)取三種微球各50μL，分別轉移到三個1.5mL的離心管中，離心，去上清。
3)加入100μL的dH2O，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，約20s。
4)≥8000g離心1～2min。
5)吸棄上清，加入80μL的磷酸鹽緩沖液(100mM Monobasic Sodium Phosphate，pH 6.2)，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，約20s，用漩渦振蕩器混勻。
6)加入10μL 50mg/mL Sulfo-NHS(diluted in dH2O)，用漩渦振蕩器混勻。
7)向微球加入10μL 50mg/mL EDC(diluted in dH2O)(SIGMA公司)，用漩渦振蕩器混勻。
8)在室溫避光靜置20min，每10min用漩渦振蕩器輕輕的混勻。
9)將已經活化的微球≥8000g離心1～2min。
10)吸棄上清，用250μL的50mM MES(配方見后)，pH 5.0用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，約20s。
11)將微球≥8000g離心1～2min。
12)吸棄上清，用120μL的50mM MES，pH 5.0用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s。
13)分別將加入0.1μg的三種小分子-蛋白偶聯物到相應的三種懸浮的微球中.用50mM MES將總體積調到500μL。
14)用漩渦振蕩器混勻，在室溫下避光輕搖2hr。
15)將微球在大于等于8000g離心1～2min。
16)吸棄上清，加入250～500μL的PBS-TBN(配方見附表)，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s.在室溫搖30min。
17)將微球≥8000g離心1～2min。
18)吸棄上清，加入1mL到250μL的PBS-TBN用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，約20s。
19)將微球≥8000g離心1～2min。
20)用100μL的PBS-TBN重懸浮微球。
21)將3套微球等體積混合在一起，并分配到6個試管中。10μL/管。同時另取四個試管，做兩份盲樣試驗。
22)每個試管各加入偶聯了生物素的3種抗體各50ng，和不同濃度的1種或者3種標準抗原(例如0ng，1ng，5ng，10ng，20ng，50ng，具體濃度視情況而定)到6個管中，用PBS-TBN調整體積到75μL混勻。
23)避光室溫輕搖60min。
24)將SA-PE(藻紅蛋白)用PBS-1％OVA(卵清蛋白)稀釋到4μg/mL。向每個反應里加25μL的稀釋的SA-PE。用槍上下打幾次把反應物混勻。避光室溫輕搖30min。
25)上樣50-75μL到LIQUIDCHIP WORK STATION(液芯工作站)中。
26)檢測結果如表1、表2所示。
5.檢測盲樣的實驗根據表2結果，繪制三種小分子作信號值與濃度的標準曲線(見附圖1)。將檢測到的信號與標準曲線比較，得出盲樣品的量，做比較。
實驗結果抗體梯度和交叉反應如表1所示，液相芯片上三種小分子-蛋白偶聯物和抗體有比較好的特異性反應，每種小分子-蛋白偶聯物與其他抗體的交叉反應較低。微球本身的背景值也比較低。
間接競爭如表2A，2B，2C，2D可見，三種微球同時檢測三種標準品，在每種微球上所得到的信號值(代表此種標準品的量)和三種微球同時檢測一種標準品在此種微球上所得到的信號值(代表此種標準品的量)是比較相近的，樣品之間的干擾性較低。
檢測樣品的盲實驗按照表2結果，繪制信號值對小分子量的標準曲線。表3顯示了盲樣品的信號值和從標準曲線推出的他們的濃度，與實際濃度比較，偏差比較小。
表1液相芯片上三種小分子-蛋白偶聯物和抗體的特異性實驗和交叉實驗
表2A 表2B 表2C
表2D
表3
結果分析呋喃唑酮，喹乙醇，金霉素等在動物性產品中的殘留，對人體具有明顯的急慢性毒性，包括癌癥和染色體突變等特殊毒性，直接危害國民的身體健康及生命。這些藥物的大量使用對畜禽健康也構成直接威脅。目前對于這些獸藥殘留的檢測方法有高效液相色譜分析法(HPLC)和氣象色譜/質譜聯用分析法(GC/MS)或液相色譜/質譜聯用分析法(LC/MS)。這些方法普遍存在著儀器昂貴，方法復雜，操作繁瑣，試劑消耗量大的局限性。酶聯免疫(ELISA)和放射免疫(RIA)技術以靈敏度高，特異性好，成本低，操作簡單在獸藥殘留檢測中廣泛應用。但我國的免疫試劑盒的研究與開發大部分處在研發階段，目前主要依靠國外進口的ELISA試劑盒，價格昂貴，且僅能對單一的獸藥檢測，對樣本的需求量大，且操作費時，不便于進行大批量分析。
與傳統的ELISA分析相比，流式液相芯片技術比ELISA的靈敏度高10倍左右，準確性好，需要的樣本量和試劑少，監測過程操作比現有方法更簡便，不需要洗板步驟；流式液相芯片的穩定性，可重復性好，批間差異非常少；液相環境更有利于探針和被檢測物的反應；流式液相芯片的定量線性范圍廣，比ELISA多兩個數量級；可同時檢測多個指標，真正具備高通量的特點，有效降低成本60％以上，大大縮短檢測時間。所以流式液相芯片技術更具有實用價值，因此我們開展此項研究。
高通量，穩定性和靈敏度是對所有檢測方法的要求。流式液相芯片技術采用熒光編碼的微球為包被基質，解決了在同一反應體系中同時識別多個不同的探針的問題，從而實現了檢測的高通量。在本試驗中，我們用衍生合成的抗原包被微球，保證了捕獲被檢測物的探針的特異性。在抗體的制備中，我們用蛋白A柱加親和層析的方法純化抗體。最后的抗體的純度在95％以上。經驗證三種抗體和四環素，土霉素，強力霉素及呋喃他酮的交叉反應率小于3％，并且在交叉試驗中得到了三種抗體與三種抗原之間的交叉反應率小于5％，從而保證了三種反應在同一體系中進行。試驗中我們同時做了直接競爭和間接競爭兩套方案，經對比發現間接競爭的效果更好一些。所以最后我們采取了用抗原偶聯微球，再加入被檢測物和抗體，用偶聯微球的抗原和被檢測物同時競爭抗體的間接競爭法。通過三種小分子-蛋白偶聯物濃度的篩選，封閉液等條件的優化，進一步提高了反應的靈敏度。可以檢測到pg級的水平。
為了檢驗本方法的可行性，我們做了大量的盲樣及與ELISA檢測方法的對比，通過試驗可以看出，液態芯片的靈敏度更高，在更低的蛋白質濃度下，曲線即呈現線性趨勢。并且實現了一個反應可以同時檢測三種獸殘的目的。同時縮短了檢測時間，2hr內即可完成樣品處理和檢測，得出精確的結果。為大批量的樣品檢驗縮短了時間，提供了保證。
本方法的建立為解決如何更快，更精確地檢測獸藥殘留找到了一條新的途徑，相信在這個平臺上我們將會開發出更多新的產品，以解決目前在獸藥殘留檢測領域所存在的問題和不足。
附表各種試劑的配方0.1M NaH2PO4pH 6.2 (Activation Buffer) 250mL
附表各種試劑的配方0.1M NaH2PO4pH 6.2 (Activation Buffer) 250mL
Filter Sterilize and store at 4℃0.05M MES，pH 5.0 (Coupling Buffer)* 250mL
Filter Sterilize and store at 4℃PBS pH 7.4 (Alternate Coupling Buffer)**1000mL
Filter Sterilize and store at 4℃PBS，1％OVA，0.05％Azide pH 7.4 (PBS-TONBlocking/Storage Buffer) 1000mL
Filter Sterilize and store at 4℃
PBS，0.1％BSA，0.02％TWEEN，0.05％Azide pH 7.41000mL(PBS-TN Blocking/Storage Buffer)
Filter Sterilize and store at 4℃PBS.1％OVA (Assay Buffer)1000mL
Filter Sterilize and store at 4℃
權利要求
1.本發明提供一種藥物殘留的檢測方法，其特征在于包括如下步驟1)小分子-蛋白偶聯物與單克隆抗體的預處理；2)液相芯片系統中微球的活化；3)標準曲線的繪制；4)待測樣品信號值的測定；5)根據標準曲線，計算待測樣品中藥物殘留的含量
2.根據權利要求1所述的藥物殘留的檢測方法，其特征在于步驟1)所述的小分子-蛋白偶聯物與單克隆抗體的預處理是指先將小分子-蛋白偶聯物和單克隆抗體分別進行純化除鹽和除雜質，然后將抗體與D-生物素偶聯
3.根據權利要求1所述的藥物殘留的檢測方法，其特征在于步驟1)所述的小分子是指呋喃唑酮代謝物喹乙醇和金霉素
4.根據權利要求1所述的藥物殘留的檢測方法，其特征在于步驟2)所述的液相芯片系統中的微球的活化是指用EDC活化微球上的羧基
5.根據權利要求1所述的藥物殘留的檢測方法，其特征在于步驟3)所述的制定標準曲線是指用步驟1)預處理好的抗原標準品，通過濃度梯度實驗，測定在不同濃度抗原存在的情況下，液相芯片系統檢測到的信號值，利用抗原濃度和液相芯片系統檢測到的信號值繪制標準曲線
6.根據權利要求1所述的藥物殘留的檢測方法，其特征在于步驟4)所述的測定待測樣品的信號值是指將待測樣品進行預處理后，加至檢測試劑中，利用液相芯片系統檢測其信號值
7.根據權利要求1-6任意一項所述的藥物殘留的檢測方法，其特征在于包括如下步驟1).小分子-蛋白偶聯物和單克隆抗體的處理A.用30mL PBS 7.4的磷酸鹽緩沖液平衡除鹽柱；B.加入抗體，收集除鹽柱洗脫下的液體，前3mL棄掉；C.用離心管依次收集第4，5，6，7四個1mL的液體；D.測定OD280，估算蛋白的量；2).單克隆抗體偶聯生物素A.將D-BIONTIN加入第一步得到的抗體中，室溫輕搖1～2小時；B.生物素標記單克隆抗體后，檢測生物素偶聯的效率，將過量的D-BIONTIN用透析法除去，凍干；3).液相芯片檢測藥物殘留的試驗A.用漩渦振蕩器或者超聲波懸浮微球，大約20s；B.取50μL微球于1.5mL的離心管中，8000g離心1～2min，去上清液；C.加入100μL雙蒸水，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s，8000g離心1～2min；D.吸棄上清，加入80μL的磷酸鹽緩沖液用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s；E.加入10μL 50mg/mL Sulfo-NHS，用漩渦振蕩器混勻；F.加入10μL 50mg/mL EDC，用漩渦振蕩器混勻；G.在室溫避光靜置20min，每10min用漩渦振蕩器輕輕的混勻；H.將已經活化的微球≥8000g離心1～2min；I.吸棄上清，加入250μL的50mM MES，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s；J.將微球≥8000g離心1～2min；K.吸棄上清，加入120μL的50mM MES，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s；L.加入0.1μg小分子-蛋白偶聯物到重懸浮的微球中。用50mM MES，pH5.0將總體積調到500μL；M.用漩渦振蕩器混勻，室溫避光搖動2hr；N.將微球≥8000g離心1～2min；O.吸棄上清，用250～500μL的PBS-TBN用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s室溫避光搖動30min；P.將微球≥8000g離心1～2min，吸棄上清，加入1mL的PBS-TBN，用漩渦振蕩器或者超聲波重懸浮微球，大約20s；Q.將微球在≥8000g離心1～2min，吸棄上清，用10μL的PBS-TBN重懸浮微球；R.在1.5mL的離心管中依次加入抗原標準品或被檢樣品的前處理產物，5μL偶聯抗原的微球生物素標記的抗體最后用PBS補足體積到100μL；S.把反應物混勻，避光室溫旋轉60min，將SA-PE用PBS-1％OVA稀釋到4μg/mL；T.向每個反應里加25μL的稀釋的SA-PE，把反應物混勻，避光室溫旋轉30min，上樣50～75μL到LIQUIDCHIP WORK STATION中；U.根據不同濃度標準品所得到的信號值繪制標準曲線，在標準曲線上找到樣品對應的濃度值，得出樣品中藥物殘留的濃度。
全文摘要
本發明涉及藥物殘留的檢測方法，針對食品安全中的獸藥殘留檢測種類繁多，檢測通量需求高的特點，為解決當前藥物殘留檢測中存在的價格昂貴、樣本需求量大、操作費時、檢測通量低等缺陷，利用藥物分子的單克隆抗體和偶聯抗原建立液相芯片競爭定量檢測方法，建立了一種全新的多種藥物殘留檢測方法，包括如下步驟1).小分子－蛋白偶聯物與單克隆抗體的預處理；2).液相芯片系統中微球的活化；3).標準曲線的繪制；4).待測樣品信號值的測定；5).根據標準曲線，計算待測樣品中藥物殘留的含量。真正實現了高通量，可以在一個流程中同時對幾種藥物的殘留情況進行檢測；簡化了操作程序，有效的降低了檢測成本，縮短了檢測時間。
文檔編號G01N33/543GK1825118SQ200610067180
公開日2006年8月30日 申請日期2006年4月5日 優先權日2006年4月5日
發明者王蕾, 陳書琨, 琴智鋒, 汪朝暉, 崔志君, 林明祥, 陳大軍 申請人:北京盈九思科技發展有限公司