專利名稱：一種檢測人參皂苷總類成分含量的方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種檢測人參皂苷總類成分含量的方法。
背景技術：
人參總皂苷具有擴冠，強心，改善心功能，減輕心、腦缺血再灌注損傷，改善血液流變學參數，調節機體免疫功能等藥理作用，被廣泛應用于藥物制劑中。目前人參皂苷總類成分的含量測定方法主要是高氯酸-香草醛顯色法和硫酸-香草醛顯色法，上述方法專屬性差，部分雜質同樣可以被顯色，存在明顯干擾，同時顯色過程容易受外界條件影響，使測定結果缺乏準確性，不利于控制藥品質量。
發明內容
本發明的目的是提供一種檢測人參皂苷總類成分含量的方法，該方法專屬性強，可有效消除雜質干擾，獲得良好的檢測效果。
本發明解決其技術問題所采用的技術方案是按如下步驟實現(1)采用常規水解方法處理含人參總皂苷的樣品，制備人參皂苷元供試樣品。
(2)采用高效液相色譜法，檢測器為蒸發光散射檢測器，外標法測定樣品中人參皂苷元含量。
(3)分別根據人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權平均分子量與相對應的人參皂苷元分子量之比值，計算人參皂苷總類成分含量，即得。
本發明所述含量檢測方法適用于符合指紋圖譜相關技術要求的含人參皂苷的藥材、提取物和藥物制劑。
本發明所述人參皂苷總類成分可以是人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷、齊墩果酸組皂苷中的一類或任意兩類的混合物或三類的總混合物。
本發明所述常規水解方法可以是酸水解法，也可以是堿水解法，還可以是Smith法。酸水解法的試劑可以是鹽酸、硫酸、硝酸、高氯酸、醋酸、磷酸、氫溴酸中的一種或其中任意多種組合，堿水解法的試劑可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣中的一種或其中任意多種組合。
本發明所述人參二醇組皂苷的皂苷元可以是20(S)-原人參二醇，也可以是異構化產物人參二醇；人參三醇組皂苷的皂苷元可以是20(S)-原人參三醇，也可以是異構化產物人參三醇。
本發明所述加權平均分子量按如下步驟測定(1)采用高效液相色譜法，檢測器為蒸發光散射檢測器，根據人參二醇組中供含量測定用的人參皂苷對照品，外標法測定人參皂苷總類成分中相對應皂苷的含量和響應值，并計算平均響應值。
(2)根據屬于人參二醇組的其余人參皂苷對照品，鑒別人參皂苷總類成分的高效液相色譜圖中相對應的人參皂苷色譜峰。
(3)根據蒸發光散射檢測器對同系物的響應值基本相同的原理，利用步驟(1)中的平均響應值，計算屬于人參二醇組的其余皂苷的含量。
(4)按照步驟(1)～(3)，測定不少于10批符合指紋圖譜相關技術要求的含人參總皂苷的樣品，根據測定結果計算各種人參皂苷各自的平均含量。
(5)將人參二醇組皂苷中各種皂苷的組成比例設定為權數，按照下列公式計算加權平均分子量。
S＝aX+bY+…S代表加權平均分子量X、Y、…代表單體人參皂苷的分子量a、b、…代表權數，即對應單體人參皂苷的組成百分比(6)同法測定人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權平均分子量。
與現有技術相比，本發明的有益效果是①方法專屬性強，有效消除了雜質的干擾；②高效液相色譜響應值高，檢測誤差小，精密度、穩定性、回收率、重現性均較好，方法操作簡便，穩定可靠，實用性強，非常適合產品質量的控制。
具體實施例方式
下面結合具體實施方式
對本發明作進一步的詳細描述。
實施例紅參提取物中總皂苷的含量測定1.材料及試劑紅參標準提取物共十批，編號I～X。待測紅參提取物共三批，編號1～3，均符合根據編號I～X提取物建立的指紋圖譜的技術標準。
供含量測定用對照品Rb1、Rb2、Rb3、Rg3、Rh2、Re、Rg1、人參二醇、人參三醇；供鑒別測定用對照品Ra、Rc、Rd、Rh3、Rs1、Rg2、Rh1、Rf。
2.人參皂苷平均含量的測定采用高效液相色譜法，檢測器為蒸發光散射檢測器，流動相為乙腈(A)和H2O(B)按不同體積比混合，梯度洗脫程序0～30min，19％A；30～31min，19％A～30％A；31～70min，30％A。結果見表1～2。
3.加權平均分子量計算根據表1～2結果，設定各種皂苷的組成比例設定為權數，計算得人參二醇組皂苷加權平均分子量為1062，人參三醇組皂苷加權平均分子量為840。
4.皂苷元的含量測定紅參提取物加含10％硫酸的50％乙醇液，于90℃水浴4h，放冷，用氫氧化鈉溶液中和至pH5～6，減壓回收乙醇，并用氯仿萃取，回收氯仿至干，殘渣用甲醇溶解定容，制得供試品溶液。采用高效液相色譜法，檢測器為蒸發光散射檢測器，流動相為甲醇-水(92∶8)，測定人參二醇和人參三醇的含量，結果見表3。
5.人參總皂苷含量計算根據人參二醇組皂苷和人參三醇組皂苷各自的加權平均分子量與相對應的人參皂苷元分子量之比值，計算人參總皂苷含量，結果見表3。
表1 人參二醇組皂苷的平均含量
表2 樣品人參三醇組皂苷的平均含量
表3 人參總皂苷的含量
權利要求
1.一種檢測人參皂苷總類成分含量的方法，其特征是按如下步驟測定(1)采用常規水解方法處理含人參總皂苷的樣品，制備人參皂苷元供試品。(2)采用高效液相色譜法，檢測器為蒸發光散射檢測器，外標法測定樣品中人參皂苷元含量。(3)分別根據人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權平均分子量與相對應的人參皂苷元分子量之比值，計算人參皂苷總類成分含量，即得。
2.根據權利要求1所述的檢測人參皂苷總類成分含量的方法，其特征是適用于符合指紋圖譜技術要求的含人參皂苷的藥材、提取物和藥物制劑。
3.根據權利要求1所述的檢測人參皂苷總類成分含量的方法，其特征是人參皂苷總類成分可以是人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷、齊墩果酸組皂苷中的一類或任意兩類的混合物或三類的總混合物。
4.根據權利要求1所述的檢測人參皂苷總類成分含量的方法，其特征是常規水解方法可以是酸水解法，也可以是堿水解法，還可以是Smith法，酸水解法的試劑可以是鹽酸、硫酸、硝酸、高氯酸、醋酸、磷酸、氫溴酸中的一種或其中任意多種組合，堿水解法的試劑可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣中的一種或其中任意多種組合。
5.根據權利要求1所述的檢測人參皂苷總類成分含量的方法，其特征是人參二醇組皂苷的皂苷元可以是20(S)-原人參二醇，也可以是異構化產物人參二醇；人參三醇組皂苷的皂苷元可以是20(S)-原人參三醇，也可以是異構化產物人參三醇。
6.根據權利要求1所述的檢測人參皂苷總類成分含量的方法，其特征是加權平均分子量按如下步驟測定(1)采用高效液相色譜法，檢測器為蒸發光散射檢測器，根據人參二醇組中供含量測定用的人參皂苷對照品，外標法測定人參皂苷總類成分中相對應皂苷的含量和響應值，并計算平均響應值。(2)根據屬于人參二醇組的其余人參皂苷對照品，鑒別人參皂苷總類成分的高效液相色譜圖中相對應的人參皂苷色譜峰。(3)根據蒸發光散射檢測器對同系物的響應值相同的原理，利用步驟(1)中的平均響應值，計算屬于人參二醇組的其余皂苷的含量。(4)按照步驟(1)～(3)，測定不少于10批符合指紋圖譜相關技術要求的含人參總皂苷的樣品，根據測定結果計算各種人參皂苷各自的平均含量。(5)將人參二醇組皂苷中各種皂苷的組成比例設定為權數，按照下列公式計算加權平均分子量。S＝aX+bY+…S代表加權平均分子量X、Y、…代表單體人參皂苷的分子量a、b、…代表權數，即對應單體人參皂苷的組成百分比(6)同法測定人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權平均分子量。
全文摘要
本發明公開了一種檢測人參皂苷總類成分含量的方法，屬于醫藥技術領域。現有技術檢測方法專屬性差，雜質干擾明顯，檢測誤差較大。本發明先采用高效液相色譜方法測定人參皂苷元含量，后分別根據人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權平均分子量與相對應皂苷元分子量之比值，計算人參皂苷總類成分含量。該方法專屬性強，可有效消除雜質干擾，獲得良好的檢測效果。
文檔編號G01N33/15GK1963494SQ200610022399
公開日2007年5月16日 申請日期2006年12月4日 優先權日2006年12月4日
發明者羅益民, 蔡煒 申請人:羅益民