專利名稱：磺胺藥多殘留聯檢試紙盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種快速檢測微量磺胺藥的器具，特別是涉及一種磺胺藥多殘留分析的金標層析檢測試紙盒。
二、技術背景磺胺藥是一類用于預防和治療細菌感染性疾病的化學藥物。具有抗菌譜廣、價廉、使用方便的特點，除廣泛用于獸醫臨床治療外，常常作為飼料添加劑在動物生產中應用，以便控制某些疾病。由于磺胺藥在動物生產中的不規范使用，使其在動物體內殘留，并通過肉、蛋、奶等食物鏈進入人體，在人體內蓄積，導致許多細菌產生抗藥性，造成過敏性反應，發生中毒，還可引起造血系統障礙、急性溶血性貧血、粒細胞缺乏癥、再生障礙性貧血等，有些還有致畸、致癌作用，嚴重危害人類的身體健康。
磺胺藥是近15～20年來在動物性食品中殘留超標現象非常嚴重的一類獸藥，因此，世界各國對磺胺藥的殘留極為關注，我國已把動物性食品中磺胺藥殘留列為重點監控對象之一。
檢測磺胺藥殘留的方法很多，如微生物學法、薄層層析法、高效液相色譜法、氣相色譜法、氣-質聯用分析法和毛細管電泳法等。但這些方法有的需要昂貴的儀器設備，需要熟練的專業人員操作，操作過程復雜，需要的時間較長，限制了其應用范圍，難以在生產實際中推廣應用。
發明內容
本發明的目的是研制出特異，敏感、快速、簡便的磺胺藥多殘留聯檢試紙盒。
本發明的技術方案是一種磺胺藥多殘留聯檢試紙盒，由塑料殼和試紙芯構成，塑料殼包含底座和面板，其中底座上設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和結果顯示窗，試紙芯由樣品墊、金標物結合墊、反應膜和吸水墊依次相互搭接粘貼在襯板上制成。反應膜用印制有隱形檢測線和對照線的硝酸纖維素膜，其特征為金標物結合墊用吸附2～5種混合金標抗體的玻璃纖維棉，金標抗體為膠體金標記的抗某種磺胺藥的單克隆抗體或多克隆抗體，反應膜上的檢測線為2～5條相應的磺胺藥-載體蛋白結合抗原，反應膜上的對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、或為羊抗兔IgG、或為兔抗載體蛋白IgG抗體印制，對照線和檢測線平行排列組合為“|||”，或為“||||”，或為“|||||”，或為“||||||”。
所述的金標抗體和相應的結合抗原形成下述的任意2～5種組合，金標抗磺胺甲基嘧啶(SM1)抗體，檢測線為SM1-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺二甲基嘧啶(SM2)抗體，檢測線為SM2-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺對甲氧嘧啶(SMD)抗體，檢測線為SMD-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺嘧啶(SD)抗體，檢測線為SD-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺二甲氧嘧啶(SDM)抗體，檢測線為SDM-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺間甲氧嘧啶(SMM)抗體，檢測線為SMM-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺甲噁唑(SMZ)抗體，檢測線為SMZ-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺異噁唑(SIZ)抗體，檢測線為SIZ-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺甲氧吡嗪(SMP)抗體，檢測線為SMP-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺喹噁啉(SQ)抗體，檢測線為SQ-載體蛋白結合抗原。
一種磺胺藥多殘留聯檢試紙盒，由塑料殼和試紙芯構成，塑料殼包含底座和面板，其中底座上設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和結果顯示窗，試紙芯由樣品墊、金標物結合墊、反應膜和吸水墊依次相互搭接粘貼在襯板上制成。反應膜用印制有隱形檢測線和對照線的硝酸纖維素膜，其特征為金標物結合墊用吸附2～5種金標磺胺藥-載體蛋白結合抗原的玻璃纖維棉，則反應膜檢測線為2～5條相應的抗某種磺胺藥的單克隆抗體或多克隆抗體，反應膜上的對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、或為羊抗兔IgG、或為兔抗載體蛋白IgG抗體印制，對照線和檢測線平行排列組合為“|||”，或為“||||”，或為“|||||”，或為“||||||”。
所述的金標磺胺藥-載體蛋白結合抗原和相應的磺胺藥抗體為下述的任意2～5種組合，金標SM1-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SM1抗體；金標SM2-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SM2抗體；金標SMD-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SMD抗體；金標SD-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SD抗體；金標SDM-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SDM抗體；金標SMM-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SMM抗體；金標SMZ-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SMZ抗體；金標SIZ-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SIZ抗體；金標SMP-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SMP抗體；金標SQ-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SQ抗體。
所述的襯板用硬質塑膠條，樣品墊為玻璃纖維棉；吸水墊為吸水能力較強的吸水濾紙。
所述的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA，或雞卵清白蛋白OVA，或人血清白蛋白HSA，或血藍蛋白KLH。
所述的顯示窗旁邊分別印有字母T1、T2…Tn和C，T表示檢測線，在靠近加樣孔側，C表示對照線，在遠離加樣孔側，其中n為1、2、3、4、5。
本發明的積極有益效果本發明的磺胺藥多聯金標層析檢測試紙盒具有以下突出優點，①試紙盒特異性強，敏感性高。最低檢出限可達到10ppb，低于我國目前限量標準。
②試紙盒實現了磺胺藥多殘留金標層析快速檢測，用同一試紙盒可一次加樣同時檢測多種磺胺藥物，克服以前的常規單項檢測試紙盒一次只能檢測一種藥物的不足；大大節省了檢測多種磺胺藥物的檢測時間，提高了工作效率。
③使用該試紙盒，無需其它試劑和儀器，可現場操作，在10分鐘內即可判定檢測結果，簡便、快速、時效性強。
④使用該試紙盒以棕紅色線條“|”顯示數量或有無，作為檢測結果判定依據，形象、直觀，簡單明了，不易出現人為誤判。
⑤節省費用，適用范圍廣，便于推廣。使用該試紙盒，比用儀器分析和常規單項檢測試紙條費用大幅下降。同時，試紙盒適用范圍廣，可滿足不同層次人員需要，包括專業檢驗、海關檢疫、衛生檢疫、質量監測、加工企業和養殖場戶等，便于推廣應用。
四
圖1、試紙芯側視結構示意圖。
圖2、試紙芯俯視結構示意圖。
圖3、二項聯檢試紙盒面板構造俯視圖。
圖4、試紙盒底座構造示意圖。
圖5、三項聯檢試紙芯俯視結構示意圖。
圖6、三項聯檢試紙盒面板構造俯視圖。
圖7、五項聯檢試紙芯俯視結構示意圖。
圖8、五項聯檢試紙盒面板構造俯視圖。
圖中，1襯板；2樣品墊；3金標物結合墊；4反應膜；5吸水墊；6對照線；7檢測線；8加樣孔；9顯示窗；10面板；11底座；12固定槽。
五具體實施例方式要制成磺胺藥多殘留聯檢試紙盒，首先需要制備某種磺胺藥-載體蛋白結合抗原，同時需要制備磺胺藥金標物，而且需要制備羊抗或兔抗小鼠IgG抗體或羊抗兔IgG抗體，或兔抗載體蛋白IgG抗體，進而制備試紙芯，并安裝在塑料殼底座的固定槽中，最后和面板嵌合在一起。
1、磺胺藥-載體蛋白結合抗原制備采用重氮化法或戊二醛法可制備任何一種磺胺藥-載體蛋白結合抗原。
采用的載體蛋白分別為牛血清白蛋白(BSA)，雞卵清白蛋白(OVA)，人血清白蛋白(HSA)，血藍蛋白(KLH)。
重氮化法以SMM為例，在冰浴條件下進行，稱取SMM40mg溶于5ml0.1mol/L稀鹽酸中，攪拌下滴加0.3～0.5ml10％的NaNO2，反應4～6h；稱取BSA20mg溶于3ml PBS液，并在攪拌下緩慢加入上液中，用1mol/L的NaOH調pH≈8.5，反應過夜。收集反應液裝入透析袋，在4℃下用0.1mol/L(pH7.4)的PBS透析3～5天，每天更換透析液2～3次。最后收集透析好的人工結合抗原SMM-BSA，保存于-20℃冰箱備用。
同法，用OVA或HSA或KLH替代BSA制得人工結合抗原SMM-OVA或SMM-HSA或SMM-KLH。
戊二醛法以SMM為例，將10mg BSA溶于2ml pH＝9.6的0.05mol/L碳酸緩沖液中，再緩緩滴加25％戊二醛溶液0.2mL，攪拌反應4～6h；稱取SMM20mg溶于2ml 0.1mol/L的NaOH溶液，并在攪拌下緩慢加入上液中，室溫反應過夜。收集反應液裝入透析袋，在4℃下用0.1mol/L(pH7.4)的PBS透析3～5天，每天更換透析液2～3次。最后收集透析好的人工結合抗原SMM-BSA，保存于-20℃冰箱備用。
同法，用OVA或HSA或KLH替代BSA制得人工結合抗原SMM-OVA或SMM-HSA或SMM-KLH。
采用上述兩種方法可制備的磺胺藥-載體蛋白結合抗原分別為SM1-BSA、SM2-BSA、SMD-BSA、SD-BSA、SDM-BSA、SMM-BSA、SMZ-BSA、SIZ-BSA、SMP-BSA、SQ-BSA；SM1-OVA、SM2-OVA、SMD-OVA、SD-OVA、SDM-OVA、SMM-OVA、SMZ-OVA、SIZ-OVA、SMP-OVA、SQ-OVA；SM1-HSA、SM2-HSA、SMD-HSA、SD-HSA、SDM-HSA、SMM-HSA、SMZ-HSA、SIZ-HSA、SMP-HSA、SQ-HSA；SM1-KLH、SM2-KLH、SMD-KLH、SD-KLH、SDM-KLH、SMM-KLH、SMZ-KLH、SIZ-KLH、SMP-KLH、SQ-KLH。
2、抗某種磺胺藥單克隆抗體或多克隆抗體的制備單抗制備以SM1為例，用SM1-載體蛋白結合抗原按50～100μg/只的劑量免疫8周齡BALB/c小鼠3～4次，每次免疫間隔時間3～5周，最后一次超強免疫后3～4天，無菌取其脾細胞并與NS0骨髓瘤細胞雜交融合，置37℃、5％CO2培養箱中培養。培養10～14天，用間接ELISA方法選擇強陽性、抑制率高、細胞生長旺盛的孔進行3次有限稀釋克隆化，而后擴大培養，建立雜交瘤細胞株，其分泌的單克隆抗體可特異地與SM1反應。以體內誘生法進行單抗制備，以辛酸-硫酸銨法提純單抗，置-20℃凍存備用。
多抗制備以SM1為例，用SM1-載體蛋白結合抗原免疫新西蘭白兔，免疫劑量為200～500μg/次，背部皮下分4～6點注射。首免，用無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)溶解SM1-載體蛋白結合抗原，與等量弗氏完全佐劑(FCA)混合，充分乳化；加強免疫，用無菌PBS溶解SM1-載體蛋白結合抗原，與等量弗氏不完全佐劑(FIA)混合，充分乳化，首免后2～3周進行，連續免疫4～5次，每次間隔2～3周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法測定其效價達到105以上時，采血并分離收集高免血清。以飽和硫酸銨鹽析法提取IgG抗體，置于-20℃凍存備用。
上述方法可用于任何一種磺胺藥單克隆抗體或多克隆抗體的制備。
3、金標物結合墊的制備①金標抗體結合墊的制備采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金溶液，即在沸騰的200ml 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鮮配制的1％檸檬酸鈉8ml，獲得直徑約15nm的膠體金溶液，用0.1mol/L K2CO3調pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存備用。以1∶2000的標記比將待標記的單克隆抗體或多克隆抗體加入pH8.5～9.5的金溶膠中，標記10min后，加入20％的PEG10000至終濃度為0.05％，4℃、1500～2000rpm離心20min，除去未結合的膠體金顆粒，4℃、15000rpm離心1h，棄上清，獲初步純化的金標抗體蛋白，再用丙烯葡聚糖S一400柱層析進行分離純化，獲得膠體金標記抗體。將1∶100～500稀釋的膠體金標記抗體(單克隆抗體或多克隆抗體)吸附于精制玻璃纖維棉中，4℃低溫真空干燥，制備金標抗體結合墊。
上述方法可用于任何一種磺胺藥金標抗體結合墊的制備。
②金標抗原結合墊的制備參照金標抗體結合墊的制備方法進行，以磺胺藥-載體蛋白結合抗原替代抗磺胺藥抗體，將膠體金pH值調為6.0～7.0即可。
4、羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗體的制備以飽和硫酸銨鹽析法提取磺胺藥陰性小鼠血清IgG(或陰性兔血清IgG)，用小鼠血清(或兔血清)IgG以50～100μg/kg體重的劑量經皮下和肌肉注射健康山羊或家兔3～4次，末次注射10天后，測定其血清瓊擴效價達到1∶40以上時，心臟或動脈采血，分離收集高免血清，以飽和硫酸銨鹽析法提取羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗體(方法與提取小鼠血清IgG相同，不再重述)，置于-20℃凍存備用。
5、兔抗載體蛋白IgG抗體的制備用載體蛋白BSA免疫新西蘭白兔，免疫劑量為200～500μg/次，背部皮下分4～6點注射。首免，用無菌PBS溶解BSA，與等量FCA混合，充分乳化；加強免疫，用無菌PBS溶解BSA，與等量FIA混合，充分乳化，首免后2～3周進行，連續免疫3～4次，每次間隔2～3周，末次免疫后10～15天，測定其血清瓊擴效價達到105以上時，采血并分離收集高免血清。以飽和硫酸銨鹽析法提取抗BSA抗體，置一20℃凍存備用。
同法制備抗OVA抗體、抗HSA抗體、抗KLH抗體。
6、試紙盒檢測反應原理由于膠體金標記對象不同，其檢測反應原理稍有差異。
當膠體金標記物是抗體時，加入待測樣品溶液后，待測溶液通過虹吸作用帶動待測物及金標物結合墊中的金標抗體一起向反應膜擴散，在擴散過程中，待測藥物可與金標抗體相結合，從而封閉了金標抗體上的結合位點，阻止金標抗體被反應膜上的結合抗原檢測線攔截，檢測線不顯示，而羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗體則可攔截金標抗體，顯示一條棕紅色對照線“|”，為陽性表示；否則，樣品溶液中無待測藥物時，不能阻止金標抗體被反應膜上的結合抗原檢測線攔截，顯示棕紅色檢測線“|”，但羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗體也攔截金標抗體，顯示棕紅色對照線“|”，為陰性表示；如果反應膜上沒有棕紅色線顯示，則表明試紙條已失效。
當膠體金標記物是結合抗原時，加入待測樣品溶液后，樣品溶液通過虹吸作用帶動待測藥物及金標物結合墊中的金標結合抗原一起向反應膜擴散，樣品中的游離待測藥物分子量小移動速度快，先到達反應膜檢測線，先與檢測線上的抗體相結合，封閉了檢測線上抗體的結合位點，阻止金標結合抗原與反應膜上的抗體檢測線結合，檢測線不顯示，而抗載體蛋白抗體則可攔截金標結合抗原，顯示一條棕紅色對照線“|”，為陽性表示；否則，樣品溶液中無待測藥物時，金標結合抗原到達反應膜上的檢測線時即被相應的檢測線抗體攔截，顯示棕紅色檢測線“|”，同時抗載體蛋白抗體也可攔截金標結合抗原，顯示棕紅色對照線“|”，為陰性表示；如果反應膜上沒有棕紅色線顯示，則表明試紙條已失效。
實施例一磺胺藥二項聯檢金標層析試紙盒試紙盒塑料殼的構造含底座(11)和面板(10)，底座設有安裝試紙芯的固定槽(12)，面板設有加樣孔(8)和顯示窗(9)，顯示窗旁邊設有T1、T2和C標示。試紙芯的構造是襯板(1)用硬質塑膠條制成；樣品墊(2)用玻璃纖維棉制成；金標物結合墊(3)，根據上述具體實施方式
“3”所述的制備方法，制備吸附有膠體金標記的抗SDM和抗SM2單克隆抗體的玻璃纖維棉；反應膜(4)用硝酸纖維素膜，其上分別用偶聯SDM-載體蛋白和SM2-載體蛋白結合抗原制備隱形檢測線“|”，由樣品端依次排列并與面板上T1、T2相對應，用羊抗小鼠IgG抗體制備隱形對照線“|”，3條線平行排列組合成“|||”；吸水墊(5)用吸水濾紙制成。將樣品墊、金標物結合墊、反應膜、吸水墊依次相互搭接粘貼固定在襯板上，組裝成SDM和SM2聯檢試紙芯。將試紙芯安裝在底座(11)上的固定槽(12)內，試紙芯的樣品墊和反應膜分別與面板上加樣孔和顯示窗相對應，反應膜上的2條檢測線和1條對照線分別與顯示窗旁邊的T1、T2和C相對應，嵌合面板后制成試紙盒。
檢測樣品檢測樣品可為組織樣、血樣、奶樣、蛋樣、尿樣和蜂蜜樣品。
檢測樣品制備①組織樣和蛋樣將樣品勻漿后，取樣與乙腈水溶液按1∶3的比例混合，3000rpm離心10min，取上清液分別按1∶0.5～1和1∶1～2的比例加入水和乙酸乙酯混合，3000rpm離心5min，取上層液用氮氣吹干，用PBS溶解干燥物，1∶1加入異辛烷混勻，3000rpm離心5min，棄上層液，取下層液作為待測樣品。
②血樣、奶樣和尿樣檢測血樣，提取血清并用生理鹽水將其稀釋制成1∶1～10待測樣品；檢測奶樣，直接用生理鹽水將奶樣稀釋制成1∶2～10待測樣品懸液；檢測尿樣，直接取尿液作為待測樣品。
③蜂蜜樣取蜂蜜加入1～2倍生理鹽水溶解稀釋后，再按1∶1～5的比例加入乙酸乙酯，震蕩10min，3000rpm離心10min，取上層液氮氣吹干，干燥物用生理鹽水復溶作為待測樣品。
操作方法檢測時，將試紙盒平放，從加樣孔滴加待測樣品液，5～10分鐘從顯示窗判定檢測結果。
結果判定如只有C位置顯示一條棕紅色線“|”時，表示SDM和SM2檢測結果均為陽性，說明在待測樣品中含這2種待測藥物；如在T1和C位置顯示2條棕紅色線“||”時，表示SM2檢測結果為陽性，SDM檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含SM2而不含SDM；如在T2和C位置顯示2條棕紅色線“||”時，表示SDM檢測結果為陽性，SM2檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含SDM而不含SM2；如在T1、T2和C位置顯示3條棕紅色線“|||”時，表示SDM和SM2檢測結果均為陰性；如在反應膜上沒有棕紅色線顯示，則表明試紙盒已失效。
實施例二磺胺藥二項聯檢金標層析試紙盒試紙盒構造和實施例一基本相同，不同之處在于用抗SDM和抗SM2的多克隆抗體替代抗SDM和抗SM2的單克隆抗體，制備金標結合墊；用羊抗兔IgG抗體替代兔抗鼠IgG抗體在反應膜上制備隱形對照線“|”。
其它包括檢測樣品制備、操作方法和結果判定等均同實施例一，不再重述。
實施例三磺胺藥二項聯檢金標層析試紙盒試紙盒構造和實施例一基本相同，不同之處在于用SDM-載體蛋白和SM2-載體蛋白結合抗原替代抗SDM和抗SM2的單克隆抗體，制備金標結合墊；用兔抗載體蛋白IgG抗體替代兔抗鼠IgG抗體在反應膜上制備隱形對照線“|”。
其它包括檢測樣品制備、操作方法和結果判定等均同實施例一，不再重述。
實施例四磺胺藥三項聯檢金標層析試紙盒試紙盒塑料殼的構造含底座和面板，底座設有安裝試紙芯的固定槽，面板設有加樣孔和顯示窗，顯示窗旁邊設有T1、T2、T3和C標示。試紙芯的構造是襯板用硬質塑膠條制成；樣品墊用玻璃纖維棉制成；金標物結合墊，根據上述具體實施方式
“3”所述的制備方法，制備吸附有膠體金標記的抗SDM、抗SM2和抗SD單克隆抗體的玻璃纖維棉；反應膜用硝酸纖維素膜，其上分別用偶聯SDM-載體蛋白、SM2-載體蛋白和SD-載體蛋白結合抗原制備隱形檢測線“|”，由樣品端依次排列并與面板上T1、T2、T3相對應，用兔抗小鼠IgG抗體制備隱形對照線“|”，4條線平行排列組合成“||||”；吸水墊用吸水濾紙制成。將樣品墊、金標物結合墊、反應膜、吸水墊依次相互搭接粘貼固定在襯板上，組裝成SDM、SM2和SD聯檢試紙芯。將試紙芯安裝在底座的固定槽內，試紙芯的樣品墊和反應膜分別與面板上加樣孔和顯示窗相對應，反應膜上的3條檢測線和1條對照線分別與顯示窗旁邊的T1、T2、T3和C相對應，嵌合面板后制成試紙盒。
其它包括檢測樣品制備和操作方法均同實施例一，不再重述。
結果判定如只有C位置顯示1條棕紅色線“|”時，表示SDM、SM2和SD檢測結果均為陽性，說明在待測樣品中含這3種待測藥物；如顯示1條棕紅色T線和1條棕紅色C線“||”時，表示2種藥物檢測結果為陽性，另外1種藥物檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含2種藥物而不含另外1種藥物；如顯示2條棕紅色T線和1條棕紅色C線“|||”時，表示1種藥物檢測結果為陽性，另外2種藥物檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含12種藥物而不含另外2種藥物；如顯示3條棕紅色T線和1條棕紅色C線“||||”時，表示3種藥物檢測結果均為陰性；如在反應膜上沒有棕紅色線顯示，則表明試紙盒已失效。
實施例五磺胺藥三項聯檢金標層析試紙盒試紙盒構造和實施例四基本相同，不同之處在于用抗SD、抗SDM和抗SM2的多克隆抗體替代抗SD、抗SDM和抗SM2的單克隆抗體，制備金標結合墊；用羊抗兔IgG抗體替代兔抗鼠IgG抗體在反應膜上制備隱形對照線“|”。
其它包括檢測樣品制備、操作方法和結果判定等均同實施例四，不再重述。
實施例六磺胺藥三項聯檢金標層析試紙盒試紙盒構造和實施例四基本相同，不同之處在于用SD-載體蛋白、SDM-載體蛋白和SM2-載體蛋白結合抗原替代抗SD、抗SDM和抗SM2的單克隆抗體，制備金標結合墊；用兔抗載體蛋白IgG抗體替代兔抗鼠IgG抗體在反應膜上制備隱形對照線“|”。
其它包括檢測樣品制備、操作方法和結果判定等均同實施例四，不再重述。
實施例七磺胺藥五項聯檢金標層析試紙盒試紙盒塑料殼的構造含底座和面板，底座設有安裝試紙芯的固定槽，面板設有加樣孔和顯示窗，顯示窗旁邊設有T1、T2、T3、T4、T5和C標示。試紙芯的構造是襯板用硬質塑膠條制成；樣品墊用玻璃纖維棉制成；金標物結合墊，根據上述具體實施方式
“3”所述的制備方法，制備吸附有膠體金標記的抗SDM、抗SM2、抗SD、抗SM1和抗SMD單克隆抗體的玻璃纖維棉；反應膜用硝酸纖維素膜，其上分別用偶聯SDM-載體蛋白、SM2-載體蛋白、SD-載體蛋白、SM1-載體蛋白和SMD-載體蛋白結合抗原制備隱形檢測線“|”，由樣品端依次排列并與面板上T1、T2、T3、T4、T5相對應，用羊抗兔IgG抗體制備隱形對照線“|”，6條線平行排列組合成“||||||”；吸水墊用吸水濾紙制成。將樣品墊、金標物結合墊、反應膜、吸水墊依次相互搭接粘貼固定在襯板上，組裝成SDM、SM2、SD、SM1和SMD聯檢試紙芯。將試紙芯安裝在底座的固定槽內，試紙芯的樣品墊和反應膜分別與面板上加樣孔和顯示窗相對應，反應膜上的5條檢測線和1條對照線分別與顯示窗旁邊的T1、T2、T3、T4、T5和C相對應，嵌合面板后制成試紙盒。
其它包括檢測樣品制備和操作方法均同實施例一，不再重述。
結果判定如只有C位置顯示1條棕紅色線“|”時，表示SDM、SM2、SD、SM1和SMD檢測結果均為陽性，說明在待測樣品中含這5種待測藥物；如顯示1條棕紅色T線和1條棕紅色C線“||”時，表示4種藥物檢測結果為陽性，另外1種藥物檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含4種藥物而不含另外1種藥物；如顯示2條棕紅色T線和1條棕紅色C線“|||”時，表示3種藥物檢測結果為陽性，另外2種藥物檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含3種藥物而不含另外2種藥物；如顯示3條棕紅色T線和1條棕紅色C線“||||”時，表示2種藥物檢測結果為陽性，另外3種藥物檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含2種藥物而不含另外3種藥物；如顯示4條棕紅色T線和1條棕紅色C線“|||||”時，表示1種藥物檢測結果為陽性，另外4種藥物檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含1種藥物而不含另外4種藥物；如顯示5條棕紅色T線和1條棕紅色C線“||||||”時，表示5種藥物檢測結果均為陰性；如在反應膜上沒有棕紅色線顯示，則表明試紙盒已失效。
實施例八磺胺藥五項聯檢金標層析試紙盒試紙盒構造和實施例七基本相同，不同之處在于用抗SDM、抗SM1、抗SM2、抗SD和抗SMD的多克隆抗體替代抗SDM、抗SM1、抗SM2、抗SD和抗SMD的單克隆抗體，制備金標結合墊；用羊抗兔IgG抗體替代兔抗鼠IgG抗體在反應膜上制備隱形對照線“|”。
其它包括檢測樣品制備、操作方法和結果判定等均同實施例七，不再重述。
實施例九磺胺藥五項聯檢金標層析試紙盒試紙盒構造和實施例七基本相同，不同之處在于用SDM-載體蛋白、SM1-載體蛋白、SM2-載體蛋白、SD-載體蛋白和SMD-載體蛋白結合抗原替代抗SDM、抗SM1、抗SM2、抗SD和抗SMD的單克隆抗體，制備金標結合墊；用兔抗載體蛋白IgG抗體替代兔抗鼠IgG抗體在反應膜上制備隱形對照線“|”。
其它包括檢測樣品制備、操作方法和結果判定等均同實施例七，不再重述。
權利要求
1.一種磺胺藥多殘留聯檢試紙盒，由塑料殼和試紙芯構成，塑料殼包含底座和面板，其中底座上設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和結果顯示窗，試紙芯由樣品墊、金標物結合墊、反應膜和吸水墊依次相互搭接粘貼在襯板上制成，反應膜用印制有隱形檢測線和對照線的硝酸纖維素膜，其特征為金標物結合墊用吸附2～5種混合金標抗體的玻璃纖維棉，金標抗體為膠體金標記的抗某種磺胺藥的單克隆抗體或多克隆抗體，反應膜上的檢測線為2～5條相應的磺胺藥-載體蛋白結合抗原，反應膜上的對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、或為羊抗兔IgG、或為兔抗載體蛋白IgG抗體印制，對照線和檢測線平行排列組合為“|||”，或為“||||”，或為“|||||”，或為“||||||”。
2.根據權利要求1所述的試紙盒，其特征是所述的金標抗體和相應的結合抗原形成下述的任意2～5種組合，金標抗磺胺甲基嘧啶SM1抗體，檢測線為SM1-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺二甲基嘧啶SM2抗體，檢測線為SM2-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺對甲氧嘧啶SMD抗體，檢測線為SMD-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺嘧啶SD抗體，檢測線為SD-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺二甲氧嘧啶SDM抗體，檢測線為SDM-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺間甲氧嘧啶SMM抗體，檢測線為SMM-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺甲噁唑SMZ抗體，檢測線為SMZ-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺異噁唑SIZ抗體，檢測線為SIZ-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺甲氧吡嗪SMP抗體，檢測線為SMP-載體蛋白結合抗原；金標抗磺胺喹噁啉SQ抗體，檢測線為SQ-載體蛋白結合抗原。
3.一種磺胺藥多殘留聯檢試紙盒，由塑料殼和試紙芯構成，塑料殼包含底座和面板，其中底座上設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和結果顯示窗，試紙芯由樣品墊、金標物結合墊、反應膜和吸水墊依次相互搭接粘貼在襯板上制成，反應膜用印制有隱形檢測線和對照線的硝酸纖維素膜，其特征為金標物結合墊用吸附2～5種金標磺胺藥-載體蛋白結合抗原的玻璃纖維棉，則反應膜檢測線為2～5條相應的抗某種磺胺藥的單克隆抗體或多克隆抗體，反應膜上的對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、或為羊抗兔IgG、或為兔抗載體蛋白IgG抗體印制，對照線和檢測線平行排列組合為“|||”，或為“||||”，或為“|||||”，或為“||||||”。
4.根據權利要求3所述的試紙盒，其特征是所述的金標磺胺藥-載體蛋白結合抗原和相應的磺胺藥抗體為下述的任意2～5種組合，金標SM1-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SM1抗體；金標SM2-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SM2抗體；金標SMD-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SMD抗體；金標SD-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SD抗體；金標SDM-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SDM抗體；金標SMM-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SMM抗體；金標SMZ-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SMZ抗體；金標SIZ-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SIZ抗體；金標SMP-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SMP抗體；金標SQ-載體蛋白結合抗原，檢測線為抗SQ抗體。
5.根據權利要求1或3所述的試紙盒，其特征為襯板用硬質塑膠條，樣品墊為玻璃纖維棉；吸水墊為吸水能力較強的吸水濾紙。
6.根據權利要求1或3所述的試紙盒，其特征是所述的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA，或雞卵清白蛋白OVA，或人血清白蛋白HSA，或血藍蛋白KLH。
7.根據權利要求1或3所述的試紙盒，其特征是所述的顯示窗旁邊分別印有字母T1、T2…Tn和C，T表示檢測線，在靠近加樣孔側，C表示對照線，在遠離加樣孔側，其中n為1、2、3、4、5。
全文摘要
本發明公開了一種磺胺藥多殘留分析的金標層析檢測試紙盒。該試紙盒由塑料殼和試紙芯構成，面板上設有加樣孔和結果顯示窗，反應膜用印制有隱形檢測線和對照線的硝酸纖維素膜，金標物結合墊用吸附2～5種混合金標抗體的玻璃纖維棉，反應膜上的檢測線為2～5條相應的磺胺藥－載體蛋白結合抗原，或者金標物結合墊用吸附2～5種金標磺胺藥－載體蛋白結合抗原的玻璃纖維棉，則反應膜檢測線為2～5條相應的抗某種磺胺藥的抗體，反應膜上的對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、或為羊抗兔IgG、或為兔抗載體蛋白IgG抗體印制。本發明的試紙盒一次加樣同時檢測多種磺胺藥物，大大節省檢測時間，具有特異性強，靈敏度高，簡便，直觀，準確，適用范圍廣，成本低，易于推廣應用。
文檔編號G01N33/52GK1888905SQ200610017998
公開日2007年1月3日 申請日期2006年6月23日 優先權日2006年6月23日
發明者鄧瑞廣, 張改平, 李學伍, 肖治軍, 刑廣旭, 楊繼飛, 柴書軍, 李青梅, 盧曉翠 申請人:河南省農業科學院生物技術研究所