檢測β-興奮劑類藥物的酶聯免疫試劑盒及其方法

            文檔序號:6101082閱讀:308來源:國知局
            專利名稱:檢測β-興奮劑類藥物的酶聯免疫試劑盒及其方法
            技術領域
            本發明涉及獸藥殘留檢測分析技術領域,具體地,涉及一種檢測尿液、動物組織(肌肉、肝臟)、飼料中β-興奮劑的酶聯免疫試劑盒及方法。
            背景技術
            沙丁胺醇(Salbutamol)和克侖特羅(Clenbuterol)均屬于β-受體激動藥,臨床主要用于治療支氣管哮喘;此類藥物還可以作為牛、羊、豬、禽等的促生劑,曾一度被廣泛應用于獸禽生產。但由于β-興奮劑容易在動物肝臟中積聚殘留,并可以通過食物鏈進入人體,嚴重危害人體的健康,所以歐共體國家已將此類藥物劃為禁用。因此加強對動物食品中β-興奮劑殘留的檢測是必要的。
            檢測β-興奮劑殘留量的化學方法主要有薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣-質聯機(GC/MS)、液-質聯機(HPLC/MS)等,由于復雜的儀器設備和繁瑣的過程,不適合現場監控和大量樣本篩查。

            發明內容
            (一)要解決的技術問題本發明的目的是提供一種結構簡單、使用方便、價格便宜、便于攜帶的用于動物源性食品中β-興奮劑的酶聯免疫試劑盒及方法。
            (二)技術方案本發明為一種檢測β-興奮劑類藥物的酶聯免疫試劑盒,其特征在于包括以下物質(1)包被了β-興奮劑類藥物抗原的酶標板;(2)酶標抗抗體;(3)克倫特羅標準品溶液;(4)底物顯色液;
            (5)β-興奮劑類藥物抗體工作液;(6)濃縮洗滌液;(7)終止液;(8)濃縮復溶液。
            本發明所述的酶聯免疫試劑盒中,酶標板在制備過程中,所用的包被原是將β-興奮劑類藥物半抗原和載體蛋白采用混合酸酐法進行偶聯得到的,載體蛋白為卵清蛋白、兔血清白蛋白或鼠血清白蛋白。
            本發明所述的酶聯免疫試劑盒中,酶標抗抗體是采用戊二醛法或過碘酸鈉法將標記酶交聯在抗抗體上得到的。
            本發明所述的酶聯免疫試劑盒中,標記酶可為辣根過氧化物酶或細菌提取堿性磷酸酯酶,所用的抗抗體為羊抗兔抗抗體。
            本發明所述的酶聯免疫試劑盒中,克倫特羅的標準品溶液濃度分別為0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L。
            本發明所述的酶聯免疫試劑盒中,當標記酶為辣根過氧化物酶時底物顯色液A液為過氧化氫或過氧化脲、底物顯色液B液為鄰苯二胺或四甲基聯苯胺、終止液為1~2mol/L的硫酸或鹽酸緩沖液;當標記酶為細菌提取堿性磷酸酯酶時底物顯色液為對硝基磷酸鹽緩沖液、終止液為2mol/L的氫氧化鈉;濃縮洗滌液為含有0.8-1.2%吐溫20的磷酸鹽緩沖液;濃縮復溶液為0.01M-0.05M含1%酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
            本發明所述的酶聯免疫試劑盒中,β-興奮劑類藥物抗體的濃度為0.5-5.0μg/L。
            本發明還提供了一種檢測樣品中殘留的β-興奮劑類藥物的方法,其特征在于包括以下步驟(1)樣品前處理;(2)用試劑盒進行檢測;(3)分析檢測結果。
            其中試劑盒檢測方法為向包被有β-興奮劑類藥物抗原的酶標板微孔中加入標準品溶液或樣品溶液和加入抗體工作液,溫育后洗滌拍干,然后加入酶標抗抗體,溫育后洗滌拍干,顯色、終止,用酶標儀測定吸光度值。
            所獲得的每個濃度標準溶液或樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標準(0標準)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
            百分吸光度值(%)=(B/B0)×100%公式中B為樣本溶液的平均吸光度值,B0為0μg/L標準溶液的平均吸光度值。以克倫特羅濃度的半對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖,相對應每一個樣品中殘留的克倫特羅的濃度可以從標準曲線上讀出,再根據樣本中殘留的克倫特羅實際濃度利用交叉反應率計算出其它β-興奮劑類藥物的實際濃度。
            半抗原的合成以克倫特羅為中間體,用琥珀酸酐進行酰化反應,把克倫特羅分子結構上的醇羥基酰化成為含有4個碳的羧基間隔臂,制備成β-興奮劑類藥物半抗原。
            免疫原將β-興奮劑類藥物半抗原與甲狀腺蛋白(BCG)采用水溶性碳化二亞胺法(EDC)、混合酸酐法(氯甲酸異丁酯)或活性酯法(DCC、NHS)進行偶聯得到免疫原。
            包被原將β-興奮劑類藥物半抗原和兔血清白蛋白(RSA)、卵清蛋白或鼠血清白蛋白采用水溶性碳化二亞胺法(EDC)、混合酸酐法(氯甲酸異丁酯)、活性酯法(DCC、NHS)進行偶聯得到包被原。
            本發明的抗體制備過程如下a.β-興奮劑類藥物兔多克隆抗體制備采用新西蘭大白兔作為免疫動物,以β-興奮劑類藥物半抗原與載體蛋白偶聯物為免疫原,免疫劑量為1mg/kg,首次免疫時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合制成乳化劑,頸背部皮下多點注射,間隔3-4周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化,加強免疫一次,共免疫5次,最后一次不加佐劑。最后一次免疫7-10天后采血,測定血清抗體效價,心臟采血,經硫酸銨分級沉淀得到純化的多克隆抗體。
            b.抗抗體的制備以兔源抗體為免疫原對無病原體山羊進行免疫得到羊抗兔抗抗體。
            c.酶標抗抗體的制備酶標抗抗體的制備是將辣根過氧化物酶或細菌提取堿性磷酸酯酶采用過碘酸鈉法或戊二醛法與羊抗兔抗抗體偶聯并純化提取,得到酶標抗抗體。
            酶標板制備方法用包被緩沖液(pH9.6,0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液)將β-興奮劑類藥物半抗原和載體蛋白偶聯物稀釋成0.1-1μg/mL,每孔加入100μL,37℃溫育2h并4℃過夜,傾去包被液,用洗滌液洗滌3次,每次30秒,拍干,然后在每孔中加入150-200μL封閉液,37℃溫育1-2h,傾去孔內液體,干燥后用鋁膜真空密封保存。
            本發明的檢測原理為采用間接競爭ELISA的方法,在微孔條上預包被偶聯β-興奮劑類藥物半抗原和載體蛋白的偶聯物,向微孔中加入樣本溶液或系列標準品溶液和β-興奮劑類藥物抗體工作液,樣本中的殘留物克倫特羅將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭β-興奮劑類藥物抗體,加入酶標抗抗體后,顯色;顯色終止后用酶標儀測定每孔吸光度值(OD值),樣本吸光度值與其所含殘留物克倫特羅的含量呈負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物克倫特羅的含量,再根據得到的克倫特羅的含量利用交叉反應率將其他β-興奮劑類藥物計算出來。也可根據酶標板上的樣品顏色的深淺,與系列濃度的克倫特羅的標準品液顏色的比較可判斷樣品的濃度范圍。也可以用回歸方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機專業軟件,更便于大量樣品的快速分析。
            樣品前處理方法a.動物組織3.0g粉碎的組織樣品,加入15mL乙腈-HCl溶液混合,充分振蕩10min,以達到均質的目的,10-15℃,3000g以上離心10min。取上清5mL,加入0.1M HCl 5mL,混合后加入6mL正己烷充分混合2min,10-15℃3000g以上離心5min。去除正己烷相,加1mL 1M NaOH混合后加入6mL三氯甲烷,充分振蕩10min,10-15℃ 5000g離心10min。取下層相,減壓抽干或氮氣吹干,取1mL再加1mL復溶液溶解干燥殘留物,取20μL進行分析。
            b.飼料稱取2g勻漿后的樣品,再向樣品中加甲醇-乙醇6mL混合物,取上清液2mL加入二氯甲烷8mL混勻,靜置分層,取下層50℃減壓蒸干,用1mL復溶液溶解干燥殘留物,取20μL進行分析。
            c.尿樣直接取20μL清亮的尿液用試劑盒進行分析。
            (三)有益效果本發明的檢測β-興奮劑類藥物的酶聯免疫試劑盒主要采用間接競爭ELISA方法定性或定量檢測動物組織(肌肉、肌肝)、尿液及飼料等樣品中β-興奮劑類藥物的殘留量;對樣品的前處理要求低,樣品前處理過程簡單,能同時快速檢測大批樣品。
            所用免疫原的載體蛋白為甲狀腺蛋白,那是因為非自身產生的抗體,即越是和機體(被免疫的動物)本身差異越大得非自身大分子物質越能很好得產生抗體。采用β-興奮劑類藥物多克隆抗體,主要試劑以工作液形式提供,使用方便,具有高特異性、高靈敏度、高精確度、高準確度等特點,將在食品和飼料β-興奮劑類藥物殘留量的檢測中發揮重要作用。


            圖1β-興奮劑檢測標準曲線圖。
            具體實施例方式
            以下實施例用于說明本發明,但不用來限制本發明的范圍。
            實施例1試劑盒組分的制備1、抗原制備a.半抗原的合成 以克倫特羅為中間體,用琥珀酸酐進行酰化反應,把克倫特羅分子結構上的醇羥基酰化成為含有4個碳的羧基間隔臂制備成β-興奮劑類藥物半抗原。
            b.免疫原 將β-興奮劑類藥物半抗原和甲狀腺蛋白(BCG)采用混合酸酐法(氯甲酸異丁酯)進行偶聯得到免疫原。
            免疫原的制備過程取β-興奮劑類藥物半抗原2g溶于20mL,0.5M的氫氧化鈉溶液中,再取1.5g碳化二亞胺溶于5mL純水中加到β-興奮劑類藥物半抗原溶液中室溫攪拌反應2小時,取載體蛋白20g溶于75mL pH9.6碳酸鹽緩沖液中,再將甲狀腺蛋白(BCG)滴加到β-興奮劑類藥物半抗原溶液中4℃攪拌過夜。將反應完的人工抗原對0.1M的磷酸鹽緩沖液透析7天,每天換液3次。最后將抗原濃縮或凍干保存。
            c.包被原 將β-興奮劑類藥物半抗原和人血清白蛋白(HSA)采用混合酸酐法(氯甲酸異丁酯)進行偶聯得到包被原。
            2、抗體制備a.β-興奮劑類藥物兔多克隆抗體制備采用新西蘭大白兔作為免疫動物,以β-興奮劑類藥物半抗原與甲狀腺蛋白(BCG)偶聯物為免疫原,免疫劑量為1mg/kg,首次免疫時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合制成乳化劑,頸背部皮下多點注射,間隔4周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化,加強免疫一次,共免疫5次,最后一次不加佐劑。最后一次免疫10天后采血,測定血清抗體效價,心臟采血,用硫酸銨分級沉淀得到純化的多克隆抗體。
            b.抗抗體的制備 以兔源抗體為免疫原對無病原體山羊進行免疫得到羊抗兔抗抗體。
            c.酶標抗抗體的制備 將辣根過氧化物酶采用戊二醛法與羊抗兔抗抗體偶聯并純化提取,得到酶標抗抗體。
            酶標抗抗體的制備過程(1)稱取辣根過氧化物酶25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室溫靜置過夜。
            (2)反應后的酶溶液經Sephadex G-25層析柱,用生理鹽水洗脫。流速控制在1mL/分鐘,收集棕色流出液,以聚二乙醇濃縮至5mL。放置25mL小燒杯中,緩慢攪拌。
            (3)稱取12.5mg用生理鹽水稀釋至5mL,攪拌下逐滴加入酶溶液中。
            (4)用1M pH9.5碳酸緩沖液0.25mL,繼續攪拌3小時。
            (5)加0.2M賴氨酸0.25mL,混勻后,置室溫2小時。
            (6)在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨,置4℃1小時。
            (7)3000rpm離心半小時,棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15M pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中。
            (8)將溶液裝入透析袋中,對0.15M pH 7.4的磷酸鹽緩沖液水透析,去除銨離子后(用萘氏試劑檢測),10,000rpm離心30分鐘去除沉淀,上清液即為酶結合物,分裝后,冰凍保存。
            3、酶標板的制備用包被緩沖液(pH9.6,0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液)將β-興奮劑類藥物和人血清白蛋白偶聯物稀釋成1μg/mL,每孔加入100μL,37℃溫育2h或4℃過夜,傾去包被液,用洗滌液洗滌3次,每次30秒,拍干,然后在每孔中加入200μL封閉液(含有2%山羊血清、5%牛血清的溶液),37℃溫育2h,傾去孔內液體,干燥后用鋁膜真空密封保存。
            實施例2檢測β-興奮劑的酶聯免疫試劑盒的組建組建檢測β-興奮劑的酶聯免疫試劑盒,使其包含下述組分(1)包被了克倫特羅與人血清白蛋白(HSA)偶聯物的酶標板;(2)辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗抗體;(3)克倫特羅標準品溶液,濃度分別為0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L;(4)底物顯色液A液為過氧化氫,底物顯色液B液為鄰苯二胺;(5)β-興奮劑類藥物兔多克隆抗體工作液的濃度為0.5μg/L;(6)濃縮洗滌液0.8%吐溫20的磷酸鹽緩沖液(0.01M,PH7.4);(7)終止液為1mol/L鹽酸;(8)濃縮復溶液為0.01M含有1%酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
            實施例3檢測β-興奮劑的酶聯免疫試劑盒的組建組建檢測β-興奮劑的酶聯免疫試劑盒,使其包含下述組分(1)包被了β-興奮劑類藥物半抗原與人血清白蛋白(HSA)偶聯物的酶標板;(2)辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗抗體;
            (3)克倫特羅標準品溶液,濃度分別為0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L;(4)底物顯色液A液為過氧化脲,底物顯色液B液為四甲基聯苯胺;(5)β-興奮劑類藥物兔多克隆抗體工作液的濃度為5.0μg/L;(6)濃縮洗滌液是1.2%吐溫20的磷酸鹽緩沖液;(7)終止液為2mol/L硫酸;(8)濃縮復溶液為0.05M含有1%酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
            實施例3檢測β-興奮劑的酶聯免疫試劑盒的組建組建檢測β-興奮劑的酶聯免疫試劑盒,使其包含下述組分(1)包被了β-興奮劑類藥物半抗原與人血清白蛋白(HSA)偶聯物的酶標板;(2)堿性磷酸酯酶標記的羊抗兔抗抗體;(3)克倫特羅標準品溶液,濃度分別為0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L;(4)底物液為對硝基磷酸鹽緩沖液;(5)β-興奮劑類藥物抗體工作液的濃度為5.0μg/L;(6)濃縮洗滌液是1.2%吐溫20的磷酸鹽緩沖液;(7)終止液為2mol/L NaOH緩沖液;(8)濃縮復溶液為0.05M含有1%酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
            實施例4檢測豬肉中殘留的β-興奮劑類藥物(1)樣品前處理動物組織3.0g粉碎的組織樣品(低脂),加入15mL乙腈-HCl溶液混合,充分振蕩10min,以達到均質的目的,10℃,4000g離心10min。取上清5mL,加入0.1MHCl 5mL,混合后加入6mL正己烷充分混合2min,15℃ 4000g離心5min。去除正己烷相,加1mL 1M NaOH混合后加入6mL三氯甲烷,充分振蕩10min,10-15℃ 5000g離心10min。取下層相,減壓抽干或氮氣吹干,加1mL復溶液溶解干燥殘留物,取20μL用試劑盒進行分析。
            (2)用試劑盒檢測向β-興奮劑類藥物半抗原與人血清白蛋白(HSA)偶聯物包被的酶標板微孔中加系列標準溶液或樣品溶液(各2孔)20μL,然后加入β-興奮劑類藥物抗體工作液80μL,用蓋板膜封板,37℃恒溫箱中反應30min。倒出孔中液體,每孔加入250μL洗滌液,30秒后倒出孔中液體,如此重復操作共洗板5次,用吸水紙拍干。加入辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗抗體工作液100μL,用蓋板膜封板,37℃恒溫箱中反應30min。取出酶標板,如前述洗板5次。每孔加入底物顯色液A液50μL,再加B液50μL,輕輕振蕩混勻,37℃恒溫箱避光顯色15min。每孔加入終止液50μL,輕輕振蕩混勻,用酶標儀測定每孔吸光度值(OD值)。
            (3)結果分析計算百分吸光度值,繪制標準曲線所獲得的每個濃度標準溶液或樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標準(0標準)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
            百分吸光度值(%)=(B/B0)×100%公式中B為標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值,B0為0μg/L標準溶液的平均吸光度值。以克倫特羅濃度的自然對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖,如附圖1所示,相對應每一個樣品中殘留的克倫特羅的濃度可以從標準曲線上讀出,再根據克倫特羅的殘留量利用交叉反應率計算其他β-興奮劑類藥物的殘留量。
            實施例5檢測飼料中的β-興奮劑1、樣品前處理飼料稱取2g勻漿后的樣品,再向樣品中加甲醇-乙醇6mL混合物,取上清液2mL加入二氯甲烷8mL混勻,靜置分層,取下層50℃減壓蒸干,用1mL復溶液溶解干燥殘留物,取20μL進行分析。
            2、用試劑盒檢測向β-興奮劑類藥物半抗原與人血清白蛋白(HSA)偶聯物包被的酶標板微孔中加系列標準溶液或樣品溶液(各2孔)20μL,然后加入β-興奮劑類藥物多克隆抗體工作液80μL,用蓋板膜封板,37℃恒溫箱中反應30min。倒出孔中液體,每孔加入250μL洗滌液,30秒后倒出孔中液體,如此重復操作共洗板5次,用吸水紙拍干。加入辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗抗體工作液100μL,用蓋板膜封板,37℃恒溫箱中反應30min。取出酶標板,如前述洗板5次。每孔加入底物顯色液A液50μL,再加B液50μL,輕輕振蕩混勻,37℃恒溫箱避光顯色30min。每孔加入終止液50μL,輕輕振蕩混勻,用酶標儀測定每孔吸光度值(OD值)。
            (3)結果分析同實施例4(3)。
            實施例6檢測尿液中的β-興奮劑樣品前處理直接取20μL尿樣本用試劑盒進行分析。
            試劑盒檢測及結果分析方法同實施例4。
            實施例7試劑盒精密度、準確度和保存期試驗(1)試劑盒精密度試驗標準可重復性試驗分別從三批試劑盒中抽取10個試劑盒,每個試劑盒取出20微孔,測定4.5μg/L標準溶液的吸光度值并計算變異系數,測定結果見表1。
            表1標準可重復性試驗(CV%)

            三批試劑盒10次標準變異系數測定范圍在6.5%~11.6%之間,因此符合精密度小于或等于20%的規定,說明本試劑盒標準品精密度達到了《農業部文件》農醫發 17號附件2試劑盒備案參考評判標準中第4點精密度和準確度的精密度標準。
            樣本可重復性試驗取克倫特羅標準品對樣本進行添加,分別取三個不同批次的試劑盒各三個,每個濃度重復5次,分別計算變異系數。
            表2豬肉樣品可重復性試驗

            表3豬尿樣品可重復性試驗


            表4飼料樣品可重復性試驗

            結果表明豬肉樣品的變異系數均小于20%,豬尿樣品的變異系數均小于21%,飼料樣品的變異系數均小于22%,符合了變異系數小于35%的規定,說明本試劑盒樣本測定的精密度達到了《農業部文件》農醫發 17號附件2試劑盒備案參考評判標準中第4點精密度和準確度的精密度標準。
            (2)準確度的試驗取兩個濃度的克倫特羅標準品溶液,分別為1μg/kg(L)和2μg/kg(L),分別對樣品進行添加回收試驗,每個濃度做4個平行,分別計算回收率。
            表5試劑盒的準確度

            結果表明豬尿添加的回收率在65.8%~108.5%之間,蜂蜜添加回收率在76.5%~123.1%之間,雞肉中添加回收率在79.3%~116.3%之間。
            (3)特異性特異性用交叉反應率來表示,交叉反應率是指抗體與結構不同的抗原決定簇發生結合的能力。交叉反應率小,可證明抗體的特異性高。
            選擇與克倫特羅同類似結構和類似功能的四種藥物,將不同濃度的克倫特羅類似物,替代克倫特羅標準溶液,測定其標準曲線,并計算IC50抑制濃度,計算交叉反應率。

            表6交叉反應

            (4)試劑盒保存期試驗試劑盒保存期條件為2-8℃,經過6個月的測定,試劑盒的最大吸光度值(零標準)、50%抑制濃度、克倫特羅藥物添加實際測定值均在正常范圍之內。考慮在運輸和使用過程中,會有非正常保存條件出現,將試劑盒在37℃保存的條件下放置6天,進行加速老化實驗,結果表明該試劑盒各項指標完全符合要求。考慮到試劑盒冷凍情況發生,將試劑盒放入-20℃冰箱冷凍5天,測定結果也表明試劑盒各項指標完全正常。從以上結果可得出試劑盒可以在2-8℃保存6個月以上。
            權利要求
            1.一種檢測β-興奮劑類藥物的酶聯免疫試劑盒,其特征在于它包括(1)包被了β-興奮劑類藥物抗原的酶標板;(2)酶標抗抗體;(3)克倫特羅標準品溶液;(4)底物顯色液;(5)β-興奮劑類藥物抗體工作液;(6)濃縮洗滌液;(7)終止液;(8)濃縮復溶液。
            2.如權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒,其特征在于所述的酶標板在制備過程中,所用的包被原是將β-興奮劑類藥物半抗原和載體蛋白采用混合酸酐法進行偶聯得到的,載體蛋白可為卵清蛋白、兔血清白蛋白或鼠血清白蛋白。
            3.如權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒,其特征在于所述的酶標抗抗體是采用戊二醛法或過碘酸鈉法將標記酶交聯在抗抗體上得到的。
            4.如權利要求3所述的酶聯免疫試劑盒,其特征在于所述的標記酶可為辣根過氧化物酶或細菌提取堿性磷酸酯酶。
            5.如權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒,其特征在于所述的克倫特羅的標準品溶液濃度分別為0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L。
            6.如權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒,其特征在于當標記酶為辣根過氧化物酶時,底物顯色液A液為過氧化氫或過氧化脲、底物顯色液B液為鄰苯二胺或四甲基聯苯胺、終止液為1~2mol/L的硫酸或鹽酸緩沖液;當標記酶為細菌提取堿性磷酸酯酶時,底物顯色液為對硝基磷酸鹽緩沖液、終止液為2mol/L的氫氧化鈉;濃縮洗滌液為含有0.8-1.2%吐溫20的磷酸鹽緩沖液;濃縮復溶液為0.01M-0.05M含1%酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
            7.如權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒,其特征在于所述的β-興奮劑類藥物抗體的濃度為0.5-5.0μg/L。
            8.一種檢測樣品中殘留的β-興奮劑類藥物的方法,其特征在于包括以下步驟(1)樣品前處理;(2)任一權利要求1-7所述的試劑盒進行檢測;(3)分析檢測結果。
            9.如權利要求8所述的方法,其中試劑盒檢測方法為向包被有β-興奮劑類藥物抗原的酶標板微孔中加入標準品溶液或樣品溶液和加入抗體工作液,溫育后洗滌拍干,然后加入酶標抗抗體,溫育后洗滌拍干,顯色、終止,用酶標儀測定吸光度值。
            全文摘要
            本發明涉及一種檢測β-興奮劑類藥物的酶聯免疫試劑盒,它包括包被了β-興奮劑類藥物抗原的酶標板、酶標抗抗體、克倫特羅的標準品溶液、底物顯色液、β-興奮劑類藥物抗體工作液、濃縮洗滌液、終止液和濃縮復溶液。本發明還公開了一種應用上述酶聯免疫試劑盒檢測β-興奮劑類藥物的方法,它包括以下步驟首先進行樣品前處理,然后用試劑盒進行檢測,最后分析檢測結果。本發明的檢測β-興奮劑類藥物的酶聯免疫試劑盒能同時快速檢測大量樣品,檢驗方法方便易行,具有高特異性、高靈敏度、高精確度、高準確度等特點。
            文檔編號G01N33/535GK1766617SQ200510086769
            公開日2006年5月3日 申請日期2005年11月3日 優先權日2005年11月3日
            發明者沈建忠, 何方洋, 馮才偉, 萬宇平, 吳小平, 馮才茂, 汪善良, 李軍, 趙正苗, 張照亮, 史為民, 張素霞, 丁雙陽, 羅曉琴, 孫倩 申請人:北京望爾生物技術有限公司
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