專利名稱：用膠體金標記clq做指示劑的蛋白芯片/微陣列檢測系統及檢測方法
技術領域：
本發明涉及醫療衛生領域，特別涉及膠體金標記clq做指示劑的蛋白芯片/微陣列檢測系統及檢測方法。
背景技術：
現有蛋白芯片或微陣列主要采用熒光素、酶和化學發光劑作為指示劑，需要嚴格的實驗條件和昂貴的檢測設備，限制了蛋白芯片/或微陣列的使用范圍。
近年來也有用膠體金/膠體銀作為蛋白芯片指示劑的報道，主要使用以下幾種方法(1)檢測物為抗原，以多克隆或單克隆抗體作為芯片探針，將生物素標記待測抗原，以抗生物素蛋白鏈菌素包裹的膠體金作為芯片雜交的指示劑，但該方法需要標記待測抗原，手續繁瑣，費時費力，只適合研究使用而不適合普及推廣；(2)檢測物為抗原，以多克隆抗體為芯片探針，以單克隆抗體(第二抗體)作為檢測抗體，用針對第二抗體的抗體包被膠體金作為芯片雜交指示劑；(3)檢測物為抗體，以純化的抗原或抗體作為芯片探針，以第二抗體、SPA或G蛋白包被的膠體金顆粒作為芯片雜交指示劑；但這兩種方法需要第二抗體，而且，針對每種不同的檢測目的物，就需要一種不同的第二抗體，因此試劑開發難度很大，成本也非常高；并且由于檢測抗原和抗體使用不同方案，在一張芯片上同時檢測抗原和抗體(特別是同一抗原抗體對)就非常復雜，甚至不可能實現。
發明內容
為克服上述現有技術存在的缺陷與不足，本發明的目地在于提供一種用膠體金標記clq做指示劑的蛋白芯片/微陣列檢測系統，該系統把膠體金clq作為指示劑，解決了膠體金免疫層析技術對每種把抗原都需要兩種特異性抗體的問題，不僅使新檢測項目的開發更容易、成本更低，利用該技術還可以在具有多個被檢抗體、抗原的檢測板上同時實現同一抗原、抗體對的檢測。
本發明的另一目地在于提供一種上述檢測系統的檢測方法，使用本發明的檢測方法，如果待測標本中含有蛋白芯片/微陣列的檢測目的物，將與芯片上相應位點的探針形成免疫復合物(IC)，膠體金標記的Clq/Clq+金標Clq復合物特異性地與結合，從而將膠體金固定到發生了免疫反應的芯片點陣上。用緩沖液洗滌后，未結合的膠體金被去除，未發生免疫反應的位點不呈色，發生了免疫反應的位點呈現膠體金顆粒聚集的黃紅色，因此，隨待測標本中含有檢測目的物的不同，芯片在于標本進行反應后的呈色位點所組成的圖案(芯片雜交模式)也不同，據此可以確定待測標本中含有何種檢測目的物。
為實現上述發明目地，本發明用膠體金標記clq做指示劑的蛋白芯片檢測系統由蛋白芯片及指示劑組成，所述指示劑為膠體金標記clq。
用膠體金標記clq做指示劑的蛋白芯片檢測系統的檢測方法，包括以下步驟a、制備溶血液按體積比，取待測標本20ul，溶于180ul含1％SDS和1mmol/L金標Clq的0.1mol/L，且pH值為7.4的PBS中，將溶血液加入到蛋白芯片表面，5-10min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗滌微陣列；b、結果判讀檢測芯片上發生了反應的位點將顯示膠體金的顏色，而未發生抗原抗體反應的位點則無色，從而可目測出或使用芯片檢測儀分析檢測標本中含有那種待測靶物質。
與現有技術比，本發明具有以下優點(1)與用熒光素、酶和化學發光劑作為蛋白芯片/微陣列的指示劑的方法相比，利用本發明的方法可以制作能目視檢測的芯片/微陣列，不依賴昂貴的熒光掃描儀最為檢測設備，特別適合獻血車這種沒有復雜裝備的簡易場合；(2)與現有蛋白芯片的膠體金/銀指示劑相比，利用本發明的方法的優點在于；①對抗原、抗體的檢測方案相同，蛋白芯片/微陣列的設計更簡單；②在一張蛋白芯片上可以同時檢測同一抗原抗體對，在血型鑒定和病原體的全程檢測中具有重要意義；③不需要對待測標本進行標記，簡化了檢測流程，節約了檢測時間；④不需要針對不同的檢測目的物去開發不同的二抗，蛋白芯片/微陣列的開發難度更小、成本更低，特別是使得那些難以制備二抗的目的物也可以實現蛋白芯片/微陣列的檢測。
具體實施例方式
下面結合優選的具體實施方式
對本發明做進一步說明，但不是限制本發明。
實施例1目視膠體金標記Clq血液檢測a制作血液檢測微陣列以抗A抗體、抗B抗體、抗HBsAg、HCV重組抗原、HIVP24、HIVgp36和梅毒重組抗原作為檢測探針，以羊抗人IgG作為陽性對照，以胎牛血清白蛋白作為陰性對照，分別固定在微陣列基片上，形成3×3的微陣列，陣列內每個點直徑1mm，間隔2mm，然后以小牛血清白蛋白封閉、干燥；b血液檢測與結果判讀檢測操作取20ul獻血者血液，溶于180ul含1％SDS和0.1mmol/L金標Clq的0.1mol/L pH值為7.4PBS中，將溶血液加入到微陣列表面，5min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗滌微陣列。結果判讀；羊抗人IgG位點呈色表明檢測結果有效，否則應更換檢測陣列再次檢測；抗A位點呈色而抗B位點不呈色，表明獻血者為A型；抗B位點呈色而抗A位點不呈色，表明獻血者為B型；抗A位點呈色且抗B位點呈色，表明獻血者為AB型；抗A位點和抗B位點都不呈色，表明獻血者為O型；血型A物質位點呈色，表明獻血者可能是B型或O型；血型B物質位點呈色，表明獻血者可能是A型或O型；血型A物質、B物質位點都呈色，獻血者為O型；血型A物質、B物質位點都不呈色，獻血者為AB型；抗D位點呈色，表明獻血者Rh(D)陽性，不呈色為陰性；抗HBsAg呈色表明獻血者HBsAg陽性；HCVAb抗抗體位點呈色表明獻血者HCVAb陽性；HIVP24/gp36嵌合抗原位點呈色表明獻血者HIV抗體陽性；抗HIVp24位點呈色表明獻血者HIV-1病毒陽性；抗HIVgp36位點呈色表明獻血者HIV病毒陽性；抗HCMV位點呈色表明獻血者HCMV病毒陽性；抗EBV位點呈色表明獻血者HCMV病毒陽性；梅毒抗抗體位點呈色表明獻血者梅毒抗體陽性。
實施例2自動膠體金標記Clq血液檢測a制作膠體金標記Clq血液檢測微陣列將血型A物質、B物質、血型A抗體、B抗體、D抗體、抗HBsAg、HCV重組抗原、HCV抗體、HIVp24、HIVgp36、HIVp24抗體、HIVgp36抗體、TP重組抗原作為檢測探針，以羊抗人IgG作為陽性對照，以胎牛血清白蛋白作為陰性對照，分別固定在制作好的微陣列基片上，形成5×3的微陣列，陣列內每個點直徑0.2mm，間隔0.5mm，然后以小牛血清白蛋白封閉、干燥；b封裝血液檢測微陣列將蓋片密封地扣蓋在帶有上述檢測探針微陣列的基片上，在蓋片的條形碼區域印上或貼上標識該微陣列信息(檢測內容、探針排列方式等)的條碼，即制得血液檢測微陣列；c血液檢測與結果判斷檢測操作取20ul獻血者血液，溶于180ul含1％SDS、0.1-5mmol/L膠體金標記Clq和1-5mmol/L Clq的0.1mol/L pH7.4PBS中，將溶血液加入到微陣列表面，5min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗滌微陣列，將檢測微陣列。結果判讀微陣列掃描儀對檢測微陣列進行掃描，從閱讀窗讀取微陣列的雜交模式，從條碼區讀取微陣列檢測內容與探針排列方式等信息，并據此調用內置軟件對檢測結果進行判斷，檢測結果可以打印也可以存入計算機。
權利要求
1.用膠體金標記clq做指示劑的蛋白芯片檢測系統，由蛋白芯片及指示劑組成，其特征在于所述指示劑為膠體金標記clq。
2.用膠體金標記clq做指示劑的蛋白芯片檢測系統的檢測方法，其特征在于包括以下步驟a、制備溶血液按體積比，取待測標本20ul，溶于180ul含1％SDS和1mmol/L金標Clq的0.1mol/L，且pH值為7.4的PBS中，將溶血液加入到蛋白芯片表面，5-10min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗滌微陣列；b、結果判讀檢測芯片上發生了反應的位點將顯示膠體金的顏色，而未發生抗原抗體反應的位點則無色，從而可目測出或使用芯片檢測儀分析檢測標本中含有那種待測靶物質。
全文摘要
本發明公開了用膠體金標記c1q做指示劑的蛋白芯片檢測系統及其檢測方法，該檢測系統由蛋白芯片及指示劑組成，所述指示劑為膠體金標記c1q；所述檢測方法包括將待測標本與膠體金標記c1q同時加入到檢測芯片上，然后采用洗滌的方法去除未結合的金標c1q，可通過目視或芯片檢測儀檢測芯片/微陣列判斷待測標本中是否含有芯片/微陣列的檢測靶物質；采用本發明的指示劑及檢測方法在一張蛋白芯片上可同時檢測同一抗原抗體對，無需針對不同的檢測目的物去開發不同的二抗，且蛋白芯片/微陣列的開發難度更小、成本更低，特別適合獻血車這種沒有復雜裝備的簡易場合。
文檔編號G01N33/52GK1766616SQ20051005732
公開日2006年5月3日 申請日期2005年10月17日 優先權日2005年10月17日
發明者趙樹銘, 蔣天倫, 菅強, 張玲, 府偉靈, 黎儒青, 肖瑞卿 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院