專利名稱：一種診斷細菌性陰道病的方法
技術領域：
本發明涉及一種診斷細菌性陰道病的方法，屬于醫學臨床診斷領域。
背景技術：
細菌性陰道病是婦產科最常見的疾病之一，由于臨床表現較輕，常常不為人們所注意，有近半數患者可無癥狀且治療后易于復發，但近年來國外學者發現本病是造成不孕癥、宮外孕、妊娠失敗、早產、盆腔炎和泌尿系感染的主要原因，BV診斷的傳統方法是Amsel臨床診斷標準，但在臨床實踐中上述診斷方法實際操作較為煩瑣、費時且要借助大量的主觀判斷，影響了細菌性陰道病的準確診斷，檢測十分有限。為此人們曾進行一些改進，公開號CN1401789，曾公開了一種通過檢測陰道的加德納菌來診斷細菌性陰道病診斷的方法；公開號CN1405562A，公開了一種通過測定唾液酸酶來診斷細菌性陰道病的方法。
上述專利所披露的分別局限于陰道的加德納菌及產生唾液酸酶的陰道厭氧菌，均忽視了產H2O2乳酸桿菌在診斷細菌性陰道病的作用，隨著對BV發病機制的不斷深入了解，認為陰道中產H2O2乳桿菌的缺失是造成細菌性陰道病的主要原因之一，陰道分泌物中H2O2濃度過低，致使陰道內厭氧菌過度生長，導致細菌性陰道病的發生。由于細菌性陰道病為多種厭氧菌過度繁殖引起的復合感染，并不是單一細菌引起，通過上述專利檢測會出現一些假陰性的結果(如過度生長的厭氧菌是不產生唾液酸酶的菌株或者是產酶量少的厭氧菌)。目前在診斷細菌性陰道病中往往忽視了乳桿菌代謝產物-H2O2濃度的變化，影響了細菌性陰道病的準確檢測。本發明目的在于避免上述現有的技術的不足之處，提供一種診斷細菌性陰道病的方法，該方法是測定唾液酸酶活性同時測定陰道分泌物中H2O2濃度變化。
發明內容
本發明提供了一種診斷細菌性陰道病的方法，該方法包括測定唾液酸酶活性和測定陰道分泌物中H2O2濃度變化。
本發明的方法包括測定唾液酸酶活性和測定陰道分泌物中H2O2濃度變化，包括本發明的唾液酸酶活性測定方法根據文獻報道(R.Wiggins，T.Crowley，P.J.Horner，et al.Use of 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid ina Novel Spot Test To Identify Sialidase Activity in Vaginal Swabs from Womenwith Bacterial Vaginosis Journal of Clinical Microbiology，2000，383096-3097.)，具體方法如下將患者的陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經氨酸類(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid)底物及顏色反應活性的結合物的玻璃管中，于37℃保溫10min，加入顯色劑，由顏色判定結果。加入1mol/L的NaOH 1～2滴，呈變色，判定為陽性。反之唾液酸酶缺乏時，遇NaOH后呈不變色，判定為陰性。不變色表示結果為陰性，變色表示結果為陽性。
本發明的測定陰道分泌物中H2O2濃度的方法如下采用高效液相色譜法(HPLC)測量陰道分泌物中H2O2濃度1.儀器島津LC-3A高效液相色譜儀，UVD-2紫外檢測器。
2.化學品(1)標準樣品H2O2。
(2)甲醇、乙醇和乙酸均為分析純(3)水Millipore-Q超純水3.色譜條件(1)色譜柱YWGC18，250mm×4.5mm，10μm(大連依利特公司)。
(2)流動相為甲醇∶水0-85∶15-100(3)流速0.8ml/min(4)波長254nm陰道分泌物中唾液酸酶活性陽性，同時陰道分泌物中H2O2濃度＜正常值，判定細菌性陰道病。陰道分泌物中唾液酸酶活性陰性，同時陰道分泌物中時H2O2濃度≥正常，判定非細菌性陰道病。陰道分泌物中唾液酸酶活性陰性，同時陰道分泌物中H2O2濃度＜正常，判定亞非細菌性陰道病。
具體實施例方式為了進一步詳細描述本發明，如下提供診斷細菌性陰道病的方法的實施例。然而應當理解，本發明的范圍不因這些實施例而受到限制。
1、檢測步驟(1)用消毒拭子盡可能多的收集病人的陰道分泌物(采樣前病人不得在24小時內使用陰道乳狀藥劑，不能收集宮頸外的陰道分泌物)。將樣品平均分為兩份，一份用作檢測唾液酸酶活性，另一份用作檢測H2O2濃度。
(2)將患者的陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經氨酸類(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid)底物及顏色反應活性結合物的玻璃管中，置于37℃，溫浴10分鐘。
(3)取出顯色瓶，加1～2滴顯色劑至瓶有拭子的測試管中，輕搖均勻。
(4)加入顯色劑三分鐘之內，立即觀察顏色反應。
(5)采用高效液相色譜法(HPLC)測量陰道分泌物中H2O2濃度。
2、結果判定當陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經氨酸類的底物及顏色反應活性結合物的玻璃管中，發生顏色改變，同時樣本中H2O2濃度低于正常值，判定細菌性陰道病。當陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經氨酸類的底物及顏色反應活性結合物的玻璃管中，不發生顏色改變，同時H2O2濃度≥正常，判定非細菌性陰道病。當陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經氨酸類的底物及顏色反應活性結合物的玻璃管中，不發生顏色改變，H2O2濃度＜正常，判定亞BV，需進一步檢查。
權利要求
1.一種根據陰道分泌物中唾液酸酶活性和H2O2濃度變化作為診斷細菌性陰道病的方法。
2.根據權利要求1的方法，其特征在于，陰道分泌物中唾液酸酶活性陽性，同時陰道分泌物中H2O2濃度＜正常值，判定細菌性陰道病。
3.根據權利要求1的方法，其特征在于，陰道分泌物中唾液酸酶活性陰性，同時陰道分泌物中時H2O2濃度≥正常，判定非細菌性陰道病。
4.根據權利要求1的方法，其特征在于，陰道分泌物中唾液酸酶活性陰性，同時陰道分泌物中H2O2濃度＜正常，判定亞細菌性陰道病。
全文摘要
本發明涉及一種診斷細菌性陰道病的方法。通過測定陰道分泌物中唾液酸酶活性和H
文檔編號G01N21/78GK1825116SQ200510053328
公開日2006年8月30日 申請日期2005年2月27日 優先權日2005年2月27日
發明者樓永良 申請人:溫州醫學院