用于抑制骨吸收含有二膦酸(阿侖膦酸)和維生素d(膽鈣化固醇)的組合物的制作方法

專利名稱：用于抑制骨吸收含有二膦酸(阿侖膦酸)和維生素d(膽鈣化固醇)的組合物的制作方法
背景技術：
發明領域本發明涉及包含二膦酸化合物和維生素D化合物的組合物。本發明也涉及使用這種組合物例如，用于在哺乳動物中治療、減少、抑制或預防異常骨吸收的方法。本發明進一步涉及制備二膦酸和維生素D組合物的方法。
相關技術人類和其它哺乳動物的各種障礙涉及或與異常骨吸收有關。在這些障礙中最常見的是骨質疏松，其是一種以低骨量和骨組織的微結構變性，隨后骨脆性增加和易骨折為特征的全身性骨骼疾病。骨質疏松正在成為全世界流行病，其發生顯著增加與全世界壽命的增加相一致。
負責骨吸收的主要的細胞類型是稱作破骨細胞的多核細胞。二膦酸是公知的破骨細胞骨吸收的選擇性抑制劑。認為二膦酸結合骨中的羥磷灰石并且通過它們的細胞內作用抑制破骨細胞的骨吸收活性。見，例如，H.Fleisch，Bisphosphonates In Bone Diseas，From TheLaboratory To The Patient，4th Edition，Academic Press(2000)。也已經報道了二膦酸結合骨并且然后在吸收期間被釋放到吸收腔隙。這之后，它們被破骨細胞攝取并隨后抑制法尼基二磷酸合酶。這種細胞內作用反過來阻止附著到膜小泡的信號蛋白質GTP酶的異戊二烯化(法尼基化和忙牛兒基忙牛兒基化)。忙牛兒基忙牛兒基化的小GTP酶的家族包括指導皺褶緣-活躍的骨吸收的細胞器形成的那些。見，A.A.Reszka和G.A.Rodan，“Bisphosphonate Mechanism ofAction，”Curr Rheumatol Rep.5(1)65-74(2月，2003)。
認為二膦酸可用于防止與許多情況有關的骨質丟失。例如，已知二膦酸可用于防止骨質丟失和治療疾病如，但不限于，骨質疏松、骨質稀少、轉移性骨病、多發性骨髓瘤、牙周病、牙齒喪失、甲狀旁腺機能亢進、類風濕性關節炎、Paget病、骨壞死、骨關節炎、假體周圍骨質丟失或骨質溶解，以及惡性腫瘤的高鈣血癥。所有這些情況都以骨質丟失為特征，由于骨吸收-即分解-和骨形成之間的不平衡所致。
阿侖膦酸鈉(Alendronate sodium)是當前可獲得的最有效的二膦酸之一，并且在最大抑制骨吸收的劑量時不損害骨礦化。也已經發現給予阿侖膦酸所觀察到的骨礦物密度增加是與脊椎骨和非脊椎骨(包括髖部)的骨折降低、脊柱變形降低和身高的保持正相關。這表明當施用相當長的時間，阿侖膦酸確實降低骨更新作用以產生強化的骨。阿侖膦酸鈉在超過90個國家中被批準用于治療絕經后婦女的骨質疏松。阿侖膦酸鈉也被批準用于治療男性骨質疏松、糖皮質激素誘導的骨質疏松以及骨的Paget病。證據提示其它二膦酸如伊本膦酸(ibandronate)、米諾膦酸(minodronate)、帕米膦酸(pamidronate)、利塞膦酸(risedronate)、替魯膦酸(tiludronate)和唑來膦酸(zoledronate)，與阿侖膦酸具有許多相同的特性，包括作為破骨細胞的骨吸收抑制劑的高效能。
盡管它們的治療益處，但是二膦酸從胃腸道吸收不良(約1％左右)。見，例如，B.J.Gertz等，Clinical Pharmacology ofAlendronate Sodium，Osteoporosis Int.，Suppl.3S 13-16(1993)和B.J.Gertz等，Studies of the oral bioavailability ofalendronate，Clinical Pharmacology & Therapeutics，vol.58，number 3，pp.288-298(September 1995)。已知食物，以及可能伴隨地被攝取的許多其它物質(包括飲料如礦泉水，甚至用于配制劑量載體的一些賦形劑)可能不利地影響二膦酸吸收。一直使用靜脈內施用以確保整個劑量到達循環。然而，靜脈內施用昂貴并且不方便，尤其是當必需反復給予受試者持續靜脈內輸注幾個小時時。不象口服施用，如果施用太快，二膦酸的靜脈內施用將與急性腎損害有關。
如果，代替靜脈內施用，期望二膦酸的口服施用，可施用更高的劑量以補償胃腸道的低生物利用率。為了抵消這種低生物利用率，通常建議受試者空腹服用二膦酸并在其后禁食至少30分鐘。然而，許多受試者發現這種每日禁食不方便。
二膦酸治療一直與低鈣血癥有關。在用二膦酸治療期間，骨吸收的早期抑制可誘導血清鈣降低，其發生在治療開始的幾個小時、幾天或幾周內。血清鈣降低可在治療開始后持續許多周到幾個月并且可能在患維生素D缺乏的患者中很顯著。對二膦酸治療的低鈣血癥反應可能有時很嚴重以至于出現癥狀并且批準進行臨床干預，特別是在患有甲狀旁腺機能減退的病人中(見，例如，Vasikaran，S.D.，編，BisphosphonatesAn Overview with Special Reference toAlendronate，Ann.Clin.Biochem.(2001)38608-623)。由于骨外沒有鈣的大量體內貯備，因此用阿侖膦酸的治療開始后，新骨形成所需的鈣必需從飲食-從食物或鈣補充劑中吸收。維生素D是正常鈣吸收所必需的。因此，適當的維生素D和鈣攝取量是使用二膦酸患者期望的。當在有效的骨質疏松治療期間由于二膦酸治療發生鈣凈流入骨而提高鈣需要時，適當的維生素D水平甚至更重要。結果，適當的維生素D和鈣攝入量是使用二膦酸患者期望的。
維生素D化合物包括一組幾乎不在食物中天然存在的脂溶性secosteriods，它們通過太陽紫外線輻射的作用在脊椎動物的皮膚中光合形成。雖然維生素D可有幾種類型，但是生理上最相關的類型是維生素D3(膽鈣化固醇)和維生素D2(麥角鈣化固醇)。當酵母和植物甾醇—麥角固醇暴露于UV輻射時形成后者，而前者來自7-脫氫膽固醇并且在皮膚中合成。維生素D3和維生素D2的代謝途徑相似，并且在人類中它們的生物學效能相似，它們的主要功能是維持血清鈣和磷濃度在正常范圍內。維生素D3是激素鈣三醇(也稱作1，25-二羥膽鈣化固醇或1，25-二羥維生素D3)的專性前體，其主要作用是提高小腸吸收鈣的能力，并且保留飲食的磷酸根。麥角鈣化醇的激素樣代謝產物是1，25-二羥麥角鈣化醇(1，25-二羥維生素D2)。當飲食鈣攝入量不足以滿足身體的需要時，甲狀旁腺素(PTH)，連同維生素D3的激素代謝產物鈣三醇，動員骨髓中的單核細胞干細胞成為成熟的破骨細胞。這些破骨細胞通過各種細胞因子和其它因子進行自我刺激以提高骨的鈣貯備的動員。
膽鈣化固醇和麥角鈣化醇的天然存在的類型是維生素D的羥化的有生物活性的代謝產物之無生物活性的前體。因為維生素D是脂溶的，因此其可被貯藏在體內的脂肪組織中或被代謝成主要的貯藏代謝產物25-羥基維生素D并貯藏在其它器官中。25-羥基維生素D在血漿中運輸并當需要時被身體代謝。特別是，如

圖1中的膽鈣化固醇的實例所示，一旦暴露于陽光，皮膚中的7-脫氫膽固醇轉變成前-維生素D3(維生素D3的異構體，圖1中沒有顯示)，然后轉變成D3(膽鈣化固醇)。膽鈣化固醇然后在肝臟代謝形成25-羥膽鈣化固醇，也稱作25-羥維生素D3，這進一步在腎臟代謝成激素型1，25-二羥膽鈣化固醇，也稱作鈣三醇。盡管沒有在圖1中描述，但是維生素D(D2或D3)的其它代謝產物包括1α-羥基維生素D、24，25二羥基維生素D和1α，24，25-三羥基維生素D。僅鈣三醇完全具有生物活性；膽鈣化固醇和上述所鑒別的代謝產物顯示小的或者無生物活性。
維生素D(D2和D3兩者)的主要生物功能是通過提高腸在吸收飲食鈣中的效率，幫助維持鈣穩態。其幫助以確保所吸收的鈣量足夠將血鈣維持在正常范圍并且足夠維持骨骼的礦化。適當的維生素D攝入量便于鈣的腸內吸收，并且在調控鈣代謝和在骨骼的礦化中起重要的作用。
公認維生素D不足和缺乏是成人中代謝性骨病的原因。維生素D不足的特征是鈣和磷酸鹽吸收削弱但正常的骨礦化沒有削弱，并且通常與血清25-羥基維生素D水平在約≤9-約30ng/mL之間有關。維生素D缺乏的特征是嚴重削弱的鈣吸收、繼發的甲狀旁腺機能亢進、低磷酸鹽血癥、低或低正常血鈣，以及削弱的骨礦化。血清25-羥維生素D水平通常約＜9ng/mL。維生素D不足和缺乏導致增加的甲狀旁腺激素(PTH)，其反過來導致增加的破骨細胞活性、尿磷酸鹽丟失和骨的鈣動員。這反過來加重骨質疏松，尤其是在年老成人中，由于削弱的骨礦化導致骨強度獨立的和額外的降低。認為持續的維生素D不足是逐漸骨丟失的重要原因。視維生素D和鈣缺乏的程度，組織學照片可能呈骨軟化、骨質疏松之一或是兩者的組合。
維生素D不足和缺乏的流行在易于或患如骨質疏松或骨質減少情況的患者群中以及在經歷這些情況的二膦酸治療的受試者中產生額外維生素D攝入量的需要。在經歷二膦酸治療的受試者中，特別是飲食鈣攝入量不充分或者不充分鈣吸收的那些受試者，當將維生素D不足的可能或發生降到最低時，需要足夠的維生素D以便于骨形成和礦化。增加維生素D攝入量的一些方式通常用于骨吸收化合物的臨床試驗并且在產品標簽上和在產品包裝紙上推薦。然而，例如，在美國大約30％骨質疏松的患者具有某種程度的維生素D不足并且隨著年齡流行增加。
當前，建議采用口服二膦酸并需要維生素D的受試者在兩個不同時間服用兩種單獨的產品。維生素D制劑是最常見的每日服用，而二膦酸可以每日、每周一次、每月一次或者在更長的時間間隔施用。結果，盡管建議這樣做，但是許多在骨質疏松或骨質減少治療的患者沒能服用維生素D。一般地，維生素D不能與二膦酸同時服用，僅僅由于如下事實二膦酸吸收不良，以至于絕大多數二膦酸口服劑量方案需要在二膦酸和其它物質(包括，但不限于維生素D)的攝取之間間隔30分鐘。結果，患者遵守劑量方案，需要在二膦酸施用不高之前或之后的某個時間間隔單獨服用維生素D化合物。(一些二膦酸化合物需要在食物攝取之前施用，因此任何維生素D施用將必需發生在二膦酸施用后的某個時間間隔)。盡管患者可在服用他們的二膦酸劑量之前或之后服用維生素D，然而有證據表明許多患者沒有這么做。1998年銷售研究顯示，盡管75-85％開了阿侖膦酸的醫生也建議補充維生素D，但是僅57％的骨質疏松患者實際上遵守了。
盡管也可以多種維生素的形式施用維生素D，但是在美國，例如，許多直接銷售的口服維生素D制劑不以通常低于每日服用所需的劑量單位出售。而且，如果患者自己將維生素D和它們的二膦酸劑量同時服用，那么可能所服用種類的維生素D將干擾并且進一步降低二膦酸吸收，因為為骨質疏松患者配制的許多維生素D化合物含有降低二膦酸吸收的鈣。
專利文獻包括公開維生素D3或維生素D2或它們的代謝產物或者與二膦酸結合的類似物的專利和公開的專利申請。見，例如，美國專利Nos.4,230,700、4,330,537和4,812,304；歐洲專利Nos.EP 0 381296和EP 0 162 510；國際專利公開Nos.WO90/01321、WO92/21355、WO01/28564、WO01/97788和WO03/086415；歐洲專利公開No.EP 1051976；日本專利公開Nos.7-330613和11-60489；美國專利申請Nos.US 2003/0139378 A1，和US 2003/0225039 A1。然而，這些專利和公開沒有公開或授予包含二膦酸化合物和維生素D化合物的組合物、產品或制劑(以及，最具體地，片劑)，其可用于在頻率小于每日一次和高于六個月或更長的時間間隔連續口服施用，如每周一次。這些專利和公開也沒有公開或授予通過在頻率小于每日一次和高于六個月的時間間隔施用如二膦酸/維生素D組合物，治療、抑制、減少或預防骨質疏松和與異常骨吸收有關的其它情況。
結果，需要包含二膦酸化合物和維生素D化合物的組合物產品，包括通過幫助以確保充分的維生素D攝入量以便于鈣吸收，提高二膦酸治療的全部效能。也需要維生素D和二膦酸產品以便于正常的骨形成和礦化，而減少或將與維生素D不足有關的并發癥，如低鈣血癥和骨軟化癥的可能或發生降到最低。需要二膦酸和維生素D產品以提供營養量的維生素D以便于經歷二膦酸治療的受試者中正常的骨形成和礦化。也需要根據連續的給藥時間表，在小于每日服藥的時間間隔和高于在6個月或更長的時間間隔的服藥間隔口服施用的二膦酸和維生素D組合。需要適于每周一次給藥的包含維生素D和二膦酸的一種產品，以提高維生素D攝入量的便利并且在二膦酸治療期間提高患者遵守所推薦的維生素D營養。此外，需要制備和施用這種維生素D/二膦酸組合物的方法。
發明概述本發明提供包含二膦酸化合物和維生素D化合物的藥物組合物。本發明的實施方案，例如，包括包含二膦酸、或二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物，以及維生素D化合物，如藥學級維生素D化合物的藥物組合物。在實施方案中，維生素D化合物包括膽鈣化固醇。在實施方案中，二膦酸包括，例如，阿侖膦酸、阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽(例如，鈉、鉀、鈣、鎂，或銨，或者那些鹽中任何一種的水合物)，如阿侖膦酸一鈉、阿侖膦酸一鈉一水合物，或者阿侖膦酸一鈉三水合物。在本發明的一個實施方案中，藥物組合物包含膽鈣化固醇和阿侖膦酸一鈉三水合物。(見圖2)本發明的組合物可以是壓縮的、包被的或未包被的片劑、膠囊、酏劑、乳劑或其它可接受的劑型的形式。
在本發明組合物的實施方案中，二膦酸(或其藥學上有效的鹽、衍生物或水合物，或其混合物)以藥學上有效的量存在，例如約0.05mg-約1120mg。在本發明組合物的相同的或其它實施方案中，維生素D化合物以藥學上有效的量存在，例如約100IU-約60,000IU的維生素D化合物(40IU維生素D具有大約1微克的質量)。在其它實施方案中，本發明涉及一種藥物組合物，包含約100IU-36,000IU維生素D化合物，以及根據二膦酸活性，約5mg-約560mg二膦酸、其藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。在其它實施方案中，本發明涉及一種藥物組合物，包含約100IU-28,000IU維生素D化合物，以及根據二膦酸活性，約5mg-約280mg二膦酸、其藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。在其它實施方案中，本發明涉及一種藥物組合物，包括約100IU-8,400IU維生素D化合物，以及根據二膦酸活性，約5mg-約280mg二膦酸、其藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。在其它實施方案中，本發明涉及一種藥物組合物，包含約100IU-5,600IU維生素D化合物，以及根據二膦酸活性，約5mg-約280mg二膦酸、其藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。在其它實施方案中，本發明涉及一種藥物組合物，包含約100IU-4,200IU維生素D化合物，以及根據二膦酸活性，約5mg-約280mg二膦酸、其藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。本發明的一個實施方案是一種藥物組合物，包括約2,800IU維生素D和根據二膦酸活性，約70mg二膦酸或二膦酸鹽的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。本發明的一個實施方案是一種藥物組合物，包括約2,800IU膽鈣化固醇和根據二膦酸活性，約70mg阿侖膦酸或阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。在另一個實施方案中，膽鈣化固醇是藥學級的。
本發明組合物的一個實例是包含阿侖膦酸鈉、膽鈣化固醇或含有適當等量膽鈣化固醇的膽鈣化固醇顆粒以及另外的賦形劑，如適當的填充劑、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、助流劑、崩解劑等的片劑。本發明組合物的另一個實例是包含阿侖膦酸鈉、膽鈣化固醇或含有適當等量膽鈣化固醇的膽鈣化固醇顆粒、乳糖、無水乳糖、微晶纖維素、膠體二氧化硅、交聯羧甲基纖維素鈉和硬脂酸鎂的片劑。可配制本發明的組合物以滿足各種純度和穩定性標準，例如，在約＜30℃和在約＜30％相對濕度貯藏24個月后包含膽鈣化醇的每種異構體按重量計算小于1％(相對于總膽鈣化固醇)。也可配制本發明的組合物以在約＜30℃和在約＜30％相對濕度貯藏24個月后包含膽鈣化固醇的總降解物小于約5％。為了貯藏目的，可通過使用適當的包裝，如鋁箔泡眼包裝或具有干燥劑的HDPE瓶消除環境濕度可能對組合物的純度和穩定性的影響。
另外，本發明包括制造本說明書中所公開的組合物和劑型的方法，以及根據那些方法所制備的產品。這種方法的一個實施方案包括制備包含二膦酸，如阿侖膦酸的粉劑混合物、將該粉劑混合物壓緊以形成混合物、碾磨并將混合物與維生素D化合物混合以形成最后的顆粒混合物，以及壓縮最后的顆粒混合物，例如，形成片劑。在另一個實施方案中，在壓縮前可潤滑最后的顆粒混合物。在一個實施方案中，粉末混合物包含阿侖膦酸、膠體二氧化硅、無水乳糖、微晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉和硬脂酸鎂。在另一個實施方案中，粉劑混合物的滾筒壓緊形成壓緊的帶狀物，其可被碾磨、與膽鈣化固醇顆粒混合、潤滑以及被壓縮成固體劑型。本發明制造方法的優點包括提高二膦酸/維生素D組合物中維生素D化合物的穩定性，以及提高本發明組合物中所用單個化合物的顆粒大小的一致性。
另外，阿侖膦酸粉劑混合物可首先與賦形劑中的一種或多種預混合，與剩余的賦形劑混合，以及然后滾筒壓緊。
制造二膦酸顆粒，如，例如阿侖膦酸顆粒的其它方法包括但不限于，預壓片法(slugging)，以及濕法制粒法。如果使用預壓片法制造二膦酸顆粒，接著可將二膦酸(如阿侖膦酸)粉劑混合物壓縮成緊密的非帶狀物以及然后碾磨成顆粒，其可能然后與維生素D化合物混合以形成顆粒混合物，其可能然后被壓縮成固體劑型(例如，片劑)。可選擇地，二膦酸和所有賦形劑可用成粒液(例如，水)濕法制粒，然后干燥、碾磨、與維生素D化合物混合，并加工成最終的劑型(例如，片劑)。
除了上述方法，也可使用直接的混合方法，通過將二膦酸、所有賦形劑、和維生素D化合物一同混合以及然后壓縮成片劑或裝入膠囊形成膠囊劑或其它固體劑型。在美國專利5,358,941；美國專利5,882,656和PCT公開WO 95/29679中描述了可能用于制造二膦酸顆粒方法的另外描述。
也可如上述制造二膦酸/維生素D組合以及然后為了降低組合物的含水量水平進行干燥步驟。另外，為了減少含水量水平可將組合物與干燥劑一起包裝。
本發明也包括預防、減少、抑制或治療代謝性骨病的方法。代謝性骨病包括，但不限于，骨質疏松、絕經后骨質疏松、類固醇誘導的骨質疏松、男性骨質疏松、其它疾病誘導的骨質疏松、原發性骨質疏松以及糖皮質激素誘導的骨質疏松。本發明也包括預防、減少、抑制或治療骨質疏松、與骨質疏松有關的情況，以及與異常骨吸收有關的其它疾病和情況的方法。這種其它疾病和情況可包括，如更多的實例，代謝性骨病、惡性腫瘤的高鈣血癥、假體周圍的骨質溶解、炎性關節炎，以及這里在人或其它哺乳動物中鑒定的其它疾病和情況。另外，本發明涉及在哺乳動物中引起修改對關節炎病癥影響的疾病的方法，其包括向哺乳動物施用治療有效量的維生素D/二膦酸組合物。本發明也涉及在哺乳動物中引起修改對軟骨下骨硬化影響的疾病、預防骨贅形成或進展以及預防關節破壞的方法，其包括向哺乳動物施用治療有效量的維生素D/二膦酸組合物。本發明也包括降低哺乳動物骨折風險的方法，其包括施用單位劑量的維生素D/二膦酸組合物。
這種方法的實施方案包括向哺乳動物，包括人施用本發明的組合物。這種組合物可以每周一次、每兩周一次、每月一次、每月兩次以及每兩月一次的時間間隔施用。在這種方法中，在二膦酸治療期間通過本發明的組合物提供維生素D，將與維生素D不足有關的并發癥的發生或可能降到最低。因此，本發明的組合物和方法可用于被鑒定為具有或易受維生素D不足或缺乏影響，或期望足夠維生素D量的哺乳動物。在一個實施方案中，在連續時間表中維持每周一次的劑量，以治療骨質疏松或者與異常骨吸收有關的其它疾病或情況以及將維生素D不足的風險或并發癥降到最低，直到達到期望的治療效果。本發明方法的一個實施方案包括向患骨質疏松的哺乳動物每周施用一次包括約2,800IU膽鈣化固醇和約70mg阿侖膦酸或阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物的片劑。在實施方案中，每周施用一次本發明組合物的維生素D化合物的治療效果基本上與所推薦的維生素D的每日劑量，例如，每日400IU、600IU或800IU維生素D的治療效果類似。
本發明另外包括用于測量包含膽鈣化固醇和二膦酸的藥物組合物中膽鈣化固醇(例如，穩定性)的方法。這種方法的一個實施方案包括從這種組合物中提取膽鈣化固醇到第一溶液中以形成第二溶液，從第二溶液中分離含有膽鈣化固醇的樣本，以及檢測樣本中膽鈣化固醇的量，例如，使用反相高效液相層析。這種方法的實施方案提供提高的測量靈敏度以及可有利地用本發明的組合物用于區別膽鈣化固醇和前膽鈣化固醇，或膽鈣化固醇的異構體和前膽鈣化固醇，或者用于檢測膽鈣化固醇或前膽鈣化固醇酯加合物。
本發明進一步包括施用本發明的二膦酸/膽鈣化固醇組合物后測量血漿中膽鈣化固醇的方法。這種方法的實施方案包括向哺乳動物施用包括阿侖膦酸和膽鈣化固醇的組合物、從哺乳動物中獲得血漿樣本、從血漿樣本中提取膽鈣化固醇以形成第一溶液、將第一反應溶液中的膽鈣化固醇與親雙烯體反應以形成一個或多個膽鈣化固醇的狄耳斯-阿德耳加成產物、使用高效液相層析(HPLC)分離法分離鈣化固醇的狄耳斯-阿德耳加成產物，以及使用質譜分析檢測樣本中膽鈣化固醇的量。這種方法的實施方案提供提高的測量靈敏度并且可有利地用本發明的組合物用于，例如，測量施用本發明組合物的藥代動力學效應。
本發明也提供測量隨施用本發明組合物的時間的藥代動力學效應的方法，包括，例如，如通過總尿排泄、血清濃度對時間曲線下的面積(AUC)、穩態最大血清濃度(Cmax)、Cmax的時間(Tmax)，以及包括約70mg阿侖膦酸和約2,800IU膽鈣化固醇的片劑的血漿濃度中位表觀半衰期(t1/2)反映。
本發明可包括、由或者基本上由必需的以及這里所描述的或所要求的可選擇的成分、組分、步驟和方法構成。本發明的另外特征、優點和實施方案、其性質和各種優點將從下列詳細描述和從本發明的實踐中變得更顯而易見。
附圖簡述圖1描述維生素D3的代謝。
圖2描述膽鈣化固醇和阿侖膦酸一鈉三水合物的化學結構。
圖3描述維生素D2和維生素D3的化學結構。
圖4顯示總結制備本發明組合物方法的實施方案的示意圖。
圖5描述維生素D3的熱和光化學異構化以及酯基轉移。
圖6顯示維生素D3降解的放射性標記研究的結果。
發明詳述術語“異常骨吸收”，如這里所使用的，意思是超過骨形成程度的骨吸收的程度，局部地，或者在骨骼中作為整體，或者可選擇地，可能與具有異常結構的骨的形成有關。
“關節炎病癥”或“關節炎病狀”指一種疾病其中損害(其中的一些是炎性的)限于關節或關節的任何炎性情況，最顯著地是類風濕性關節炎。(Academic Press Dictionary of Science Technology；Academic Press；1st edition，January 15，1992)。關節炎病癥可由炎癥、創傷或感染所致。本發明的組合物也可，單獨的或聯合的，用于治療或預防關節炎病癥或涉及關節炎的癥狀/疾病，如淀粉樣變性；關節強直性脊椎炎；細菌性關節炎；堿性磷酸鈣晶體沉積病；Behcet病；滑囊炎和腱炎；CPPD沉積病；鈣化腱炎；腕管綜合征；Ehlers-Danlos綜合征；腸炎性(enteropathic)關節炎；Felty綜合征；纖維肌痛；痛風；真菌性關節炎；血紅蛋白病；血友病性關節病；肥大性骨關節病；傳染性關節炎；炎性腸病；幼年關節炎；幼年類風濕性關節炎；紅斑狼瘡；lyme病；marfan綜合征；混合性結締組織病；多中心性網狀組織細胞瘤病，肌病；肌炎；骨關節炎；骨壞死；骨壞死軟骨營養障礙；多動脈炎；多肌痛風濕病；銀屑病性關節炎；Raynaud現象；反射交感神經營養障礙綜合征；Reiter綜合征；復發性多軟骨炎；類風濕性關節炎；風濕熱；結節病；膿毒性關節炎；硬皮病；Sjogren綜合征；脊柱骨骺發育不良；系統性紅斑狼瘡；以及病毒性關節炎。不像類風濕性關節炎，骨關節炎是結締組織病，具有由機械損傷誘導的關節軟骨變性、軟骨下骨重建和有限的滑膜炎癥反應引起的病理。這些活動的凈結果是繼發于關節軟骨侵蝕的關節變性、關節周圍軟骨內骨化/骨贅病、軟骨下的骨硬化和囊腫形成。見，Oettmeier，R.，和K.Abendroth，1989，″Osteoarthritis and boneosteologic types of osteoarthritis of the hip，″Skeletal Radiol.18165-74；Cutolo M，Seriolo B，Villaggio B，Pizzorni C，Craviotto C，Sulli A.Ann.N.Y.Acad.Sci.2002 Jun；966131-42；Cutolo，M.Rheum Dis Clin North Am2000 Nov；26(4)881-95；Bijlsma JW，Van den Brink HR.Am J Reprod Immunol 1992Oct-Dec；28(3-4)231-4；Jansson L，Holmdahl R.；Arthritis Rheum2001 Sep；44(9)2168-75；和Purdie DW.Br Med Bull 2000；56(3)809-23；也見Merck Manual，17th edition，pp.449-451。本發明的實施方案包括關節炎病癥的治療、減少、抑制或預防，其包括施用治療有效量的本發明的組合物。另一個實施方案是骨關節炎的治療、減少、抑制或預防，其包括施用治療有效量的本發明的組合物。
術語“二膦酸”，如這里所使用的，相當于化學式 其中R1獨立地選自H、OH和Cl，R2獨立地選自CH3、Cl、CH2CH2NH2、(CH2)3NH2、CH2-3-吡啶基、CH2-S-苯基-Cl、CH2CH2N(CH3)(戊基)、CH2-咪唑、CH2-2-咪唑并-吡啶基、N-(環庚基)、CH2CH(CH3)2、(CH2)5NH2、和CH2-1-吡咯烷基，及其組合。在本發明的實施方案中，R1是OH和R2是3-氨丙基部分，因此所得的化合物是4-氨基-1-羥基丁烯基-1，1-二膦酸，即，阿侖膦酸。
本發明的化合物和方法也包括二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物，和水合物。鹽的非限制性的實例包括選自堿金屬、堿性金屬、銨和單、二、三、或四-C1-C30-烷基取代的銨的那些，包括鈉、鉀、鈣、鎂和銨鹽。衍生物的非限制性的實例包括選自酯和酰胺的那些。在本發明的范圍內也包括的是二膦酸的各種水合物和其它溶劑化合物，以及它們的藥學上可接受的鹽。在本發明的范圍內也包括的是阿侖膦酸的水合物，包括但不限于，水含量在約1-12％之間的水合物，以及它們的晶體型。阿侖膦酸和其它二膦酸的水合物的非限制性的實例包括一水合物、二水合物、三水合物、半水合物、1/4水合物、1/3水合物、2/3水合物、3/4水合物、5/4水合物、4/3水合物和3/2水合物。
在本發明中有用的二膦酸的非限制性的實例包括下列阿侖膦酸(酸式)，4-氨基-1-羥基丁烯基-1，1-二膦酸。
阿侖膦酸鈉(也稱作阿侖膦酸鈉或阿侖膦酸一鈉三水合物，或者由商標FOSAMAX_表示)，4-氨基-1-羥基丁烯基-1，1-二膦酸一鈉三水合物。(阿侖膦酸和阿侖膦酸鈉描述于，例如，1990年5月1日授予Kieczykowski等的美國專利4,922,007，和1991年5月28日授予Kieczykowski的美國專利5,019,651)。
環庚氨基亞甲基-1，1-二膦酸，YM175，Yamanouchi(因卡膦酸鈉(incadronate)或英卡膦酸鈉(cimadronate))，如描述于，例如，1990年11月13日授予Isomura等的美國專利4,970,335。
1，1-二氯亞甲基-1，1-二膦酸(氯屈膦酸(clodronic acid))，和二鈉鹽(氯屈膦酸二鈉，Procter和Gamble)，描述于，例如，比利時專利672,205(1966)和J.Org.Chem 32，4111(1967)。
1-羥基-3-(1-吡咯烷基)-亞丙基-1，1-二膦酸(EB-1053)。
1-羥基乙烷-1，1-二膦酸(羥乙二膦酸)。
1-羥基-3-(N-甲基-N-戊基氨基)亞丙基-1，1-二膦酸，也稱作BM-210955，Boehringer-Mannheim(伊本膦酸鈉(ibandronate))，描述于，例如，1990年5月22日授予的美國專利No.4,927,814。-二膦酸鹽(米諾膦酸鈉)。
6-氨基-1-羥基亞乙基-1，1-二膦酸(neridronate)。
3-(二甲氨基)-1-羥基亞丙基-1，1-二膦酸(奧帕磷酸鈉(olpadronate))。
3-氨基-1-羥基亞丙基-1，1-二膦酸(帕米膦酸(pamidronate))-1，1-二膦酸(piridronate)描述于，例如，美國專利No.4,761,406。
1-羥基-2-(3-吡啶基)-亞乙基-1，1-二膦酸(利塞膦酸鈉(risedronate))(4-氯苯基)硫甲烷-1，1-二膦酸(替魯膦酸鈉(tiludronate))描述于，例如，1989年10月24日授予Breliere等的美國專利4,876,248。
1-羥基-2-(1氫-咪唑-1-基)亞乙基-1，1-二膦酸(唑來膦酸(zoledronate))。
在本發明的實施方案中，二膦酸選自阿侖膦酸、其藥學上可接受的鹽、衍生物和水合物，以及它們的混合物。阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽可選自阿侖膦酸的鈉、鉀、鈣、鎂和銨鹽，并且可以是阿侖膦酸一鈉或其水合物，包括例如阿侖膦酸鈉一水合物或阿侖膦酸鈉三水合物。
在一個實施方案中，本發明的組合物包括阿侖膦酸鈉(4-氨基-1-羥基亞丁基-1，1-二膦酸的一鈉鹽)，其是含氮二膦酸類藥物的一員。
應當注意到，術語“二膦酸”和“二膦酸類”，如這里所使用的在提及本發明的治療劑時，意思是也包括二膦酸酯、二膦酸(酸式)、和雙膦酸(酸式)，以及這些材料的鹽、衍生物和水合物。在提及二膦酸或二膦酸類時特殊命名法的使用不意味著限制本發明的范圍，除非有特殊說明。由于本領域普通技術人員當前使用混合命名法，因此提及本發明二膦酸化合物的特定重量或百分率是根據酸活性重量，除非這里有其它說明。二膦酸在本發明的劑量范圍內所包括的它們的鹽、衍生物或水合物型的基礎上根據它們的二膦酸酸式活性重量計算。另外，阿侖膦酸的所有水合物型的劑量根據阿侖膦酸酸式活性重量計算。例如，阿侖膦酸和其鹽的一水合物、三水合物、半水合物以及所有其它水合物型的劑量，根據它們的阿侖膦酸酸式活性重量計算。如另一個實例，短語“約70mg抑制骨吸收的二膦酸選自阿侖膦酸、其藥學上可接受的鹽、衍生物和水合物，以及它們的混合物，根據阿侖膦酸活性重量”意思是根據70mg阿侖膦酸酸式計算所選的二膦酸化合物的量。
如整個本說明書和權利要求書中所使用的，術語“二膦酸酸式”和“阿侖膦酸酸式”包括相關的二膦酸型、藥學上可接受的鹽形式和平衡混合物。該術語包括阿侖膦酸酸式和其藥學上可接受的鹽的結晶的、水合結晶的以及無定形型。術語“阿侖膦酸酸式”特別包括，但不限于，無水阿侖膦酸一鈉、阿侖膦酸一鈉半水合物、阿侖膦酸一鈉一水合物、阿侖膦酸一鈉三水合物、無水阿侖膦酸二鉀，以及阿侖膦酸二鉀五水合物。美國專利No.6,281,381中公開了阿侖膦酸一鈉一水合物和阿侖膦酸鈉的其它結晶型。國際專利公開WO 99/20635中公開了阿侖膦酸的鉀鹽及其水合物。
雖然便于根據二膦酸活性重量給藥和計算二膦酸的劑量，但是可根據其它鹽或水合物型計算并施用二膦酸劑量。例如，可根據無水利塞膦酸鈉(risedronate)鹽的重量計算二膦酸利塞膦酸鈉(risedronate)的劑量。根據Physician′s Desk Reference(第55版，2664頁，(2001))，例如，每個利塞膦酸鈉(risedronate)片劑含有5mg或30mg無水利塞膦酸(risedronate)鈉，以具有少量一水合物的半五水合物的形式。
如這里所使用的術語“膽鈣化固醇顆粒”指含有膽鈣化固醇的顆粒并也可含有前維生素D3、維生素D3的異構體、轉酯化的維生素D3或其異構體和/或另外的賦形劑。
術語“連續的時間表”或“連續的給藥時間表”，如這里所使用的，意思是重復給藥方案直到達到期望的治療效應。連續的時間表或連續的給藥時間表不同于周期性的或間歇性的施用。
術語“Dry維生素D3100顆粒”，如這里所使用的，指由BASF在商業上銷售的，明膠包被的，藥物級顆粒的Dry維生素D3100。
術語“普遍地骨丟失”，如這里所使用的，意思是在多個骨骼部位或整個骨骼系統中的骨丟失。術語“局限化的骨丟失”，意思是在一個或多個特定的、明確的骨骼部位的骨丟失。
術語“需要治療的人”，“需要預防的人”，“需要其的人”，和“有其風險的人”，如這里所使用的，指由臨床醫生或研究者所決定的需要治療疾病情況，需要預防、減輕、抑制或減少疾病情況，或者有發展疾病情況的風險的人。
術語“IU”，如這里所使用的，意思是國際單位。當敘述維生素D的效能和劑量時習慣使用國際單位(IU)。將一個國際單位(IU)定義為0.025μg晶狀國際標準或純的維生素D的特定的生物活性。以另一種方式敘述，1毫克維生素D是大約40國際單位。
術語“需要治療的哺乳動物”、“需要預防的哺乳動物”、“需要其的哺乳動物”、和“有其風險的哺乳動物”，如這里所使用的，指由臨床醫生或研究者所決定的需要治療疾病情況，需要預防、減輕、抑制或減少疾病情況，或者有發展疾病情況的風險的哺乳動物。
“每周一次劑量”，如這里所使用的，意思是單位劑量，例如一周施用一次單位劑量的二膦酸和維生素D化合物，即，在7天周期中施用一次，優選地在每周的同一天。在每周一次的劑量方案中，通常約每7天施用單位劑量。每周一次劑量方案的非限制性的實例將需要每個星期日施用單位劑量的二膦酸和維生素D化合物。習慣上建議不連續幾天施用每周一次施用的單位劑量，但每周一次的劑量方案可包括在兩個不同的每周一次周期內的連續兩天施用單位劑量的劑量方案。
如這里所使用的“骨贅”指位于關節邊緣的新形成的骨結構，它們的發生與骨關節炎進展的晚期非常有關。當前的假說是骨贅起源于導致產生新軟骨的活化的骨膜，最后通過軟骨內骨形成的過程變成骨。
如這里所使用的，對于二膦酸(如阿侖膦酸)的鹽、酯、水合物和衍生物，“藥學上可接受的”意思是二膦酸的鹽、衍生物或水合物具有與從其衍生的游離酸形式相同的一般藥學特性并且從毒性觀點上是可接受的。
術語“藥學上有效的量”，如這里所使用的，意思是當根據治療方案施用時將引起期望的治療效應或反應的化合物，例如二膦酸化合物或維生素D化合物的量。二膦酸的藥學上有效的量，例如，是根據治療方案所施用的足以引起例如，異常骨吸收的預防、減少、抑制或治療的量。
術語“藥物級”，如這里所使用的，意思是足夠的品質和效能以至于符合生效的美國藥典(USP)和歐洲藥典(Ph.Eur.)大綱級的要求。盡管現在沒有配制的維生素D3產品的USP專論，但是已經公開了生性的歐洲藥典專論。“藥學級”膽鈣化固醇，例如，通常是優于常用于營養補充物的維生素D的等級。
術語“預防、抑制、減少或治療”，如這里所使用的，包括通過破骨細胞形成或活性的直接或間接改變解決異常骨吸收(和產生的生理情況，例如骨質疏松)，以及包括骨丟失的預防、抑制、減少或治療，尤其是通過破骨細胞形成或活性的直接的或間接的改變，抑制從礦化階段和/或有機基質階段除去存在的骨質。這些術語也意味著以這種方式解決其它疾病狀態或情況以至于促進疾病或情況的緩解。
術語“直到達到期望的治療效果”，如這里所使用的，意思是根據所選的給藥時間表施用組合物，例如，二膦酸和膽鈣化固醇組合物，或者隨后的治療過程，直到臨床醫生或研究者觀察到疾病或情況所尋找的臨床或醫學效應的時候。對于本發明的治療方法，可以連續地施用二膦酸化合物直到觀察到骨量或結構的期望的改變。在這種情況中，達到骨量增加、預防骨量進一步減少或者用更多的正常的骨結構取代異常的骨結構是期望的目標之一。對于本發明的方法，可連續施用必要長時間的二膦酸化合物以預防不期望的情況。在這種情況中，骨量密度的維持常常是目的。施用周期的非限制性的實例可從約2周到哺乳動物的剩余壽命。對于人，施用周期可從約2周到人的剩余壽命，優選地從約2周到約40年，更優選地從約1個月到約35年，更優選地從約6個月到約30年，最優選地從約1年到約20年。
術語“維生素D”，如這里所使用的，意思是具有圖3所示化學結構的維生素D2和維生素D3。短語“維生素D的代謝產物”和“維生素D的衍生物”，如這里所使用的，意思是維生素D2和維生素D3的代謝產物和衍生物。術語“維生素D化合物”，如這里所使用的，意思是維生素D2(麥角鈣化固醇)和維生素D3(膽鈣化固醇)、7-脫氫膽固醇和前維生素的D2和前維生素D3，以及7-脫氫膽固醇、維生素D2、維生素D3、前維生素D2、或前維生素D3中任何一種的異構體或酯，或者它們的混合物。在相應的生理溫度時，維生素D2和維生素D3與它們各自的前維生素異構體處于平衡，盡管改變該平衡有利于維生素D2和維生素D3。在本發明中，術語“維生素D化合物”不包括維生素D的代謝產物，如，例如，25-羥膽鈣化固醇或鈣三醇或它們的類似物，該術語也不包括活性激素鈣三醇或其類似物。術語維生素D3和膽鈣化固醇，這里可交換地使用，除非有其它清楚地說明。
本發明提供包括二膦酸，或者二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物，以及維生素D化合物的組合物。在示例性的實施方案中，二膦酸化合物選自阿侖膦酸鈉、阿侖膦酸鈉一水合物或阿侖膦酸鈉三水合物，以及維生素D化合物是膽鈣化固醇。
二膦酸和維生素D化合物的精確劑量將隨給藥時間表、所選的特定二膦酸的口服效能、哺乳動物或人的年齡、大小、性別和情況、將要治療的障礙的性質和嚴重性，以及其它相關的醫學和身體因素而變化。因此，不能預先指定精確的藥學上有效的量，但是可很容易地由照顧人(caregiver)或醫生確定。可通過動物模型和人類臨床研究的常規實驗確定適當的量。通常，根據連續的給藥時間表選擇藥學上有效量的二膦酸，直到達到期望的治療效果。對于人，二膦酸的有效的口服劑量對于75公斤受試者一般地約0.0001mg/kg-約100mg/kg體重，優選地約0.0005-約20mg/kg體重。
在本發明的實施方案中，選自適當量的維生素D化合物以便在給藥間隔期間提供足夠的維生素D營養而不干擾二膦酸獲得骨吸收抑制效應的能力。對于包括阿侖膦酸，阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或它們的混合物，以及維生素D化合物的本發明的口服組合物，維生素D化合物的量包括約100IU-約60,000IU。本發明的實施方案中的維生素D化合物的口服量的非限制性實例包括，但不限于，700、1,400IU、2,800IU、4,200IU、5600IU、7,000IU、8,400IU、14,000IU、28,000IU、36,000IU和60,000IU劑量的維生素D化合物。
對于包括維生素D化合物和藥學上有效量的阿侖膦酸，或者阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或它們的混合物的口服組合物，阿侖膦酸的口服的藥學上有效的量一般地包括根據阿侖膦酸重量的約0.05mg-約1120mg阿侖膦酸化合物。本發明實施方案中的口服的藥學上有效量的阿侖膦酸的非限制性的實例包括，但不限于，約2.5mg、5mg、8.75mg、10mg、17.5mg、35mg、40mg、70mg、140mg、280mg、560，和1120mg劑量的阿侖膦酸，每一劑量都是根據阿侖膦酸重量。
一般地以具有根據口服施用的劑型適當地選擇的，合適的藥學稀釋劑、賦形劑或載體的混合物施用本發明的二膦酸和維生素D組合物。口服劑型的實例包括片劑(包括壓縮的、包被的或未包被的)、膠囊(其中的每一個包括持續釋放或定時釋放制劑)、硬的或軟的明膠膠囊、丸、丸劑、粉劑、顆粒、酏劑、酊劑、漿液、泡騰劑組合物、軟片、無菌溶液或懸浮液、糖漿和乳劑等等。同樣地，也可以以藥學領域普通技術人員公知的所有使用靜脈內(推注或輸注)、腹膜內、局部(例如，眼淚)、鼻內、吸入、皮下、肌肉內或經皮(例如，膜片)形式，計量氣霧劑或液體噴霧、滴劑、安瓿、自動注射器裝置或栓劑的形式施用。可使用有效的但無毒量的期望的組合物。組合物打算用于口服、腸胃外、鼻內、舌下或直腸施用，或者用于通過吸入或吹入施用。可方便地通過本領域的已知方法，例如，如在Remington′sPharmaceutical Sciences，第17版，1995中所描述的方法影響根據本發明的組合物制劑。
例如，對于以片劑、膠囊、丸或粉劑形式的口服施用，可將活性成分結合口服的，無毒的，藥學上可接受的惰性載體如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨醇、交聯羧甲基纖維素鈉，等等；對于以液體形式的口服施用，例如，酏劑、糖漿、漿液、乳劑、懸液、溶液和泡騰劑組合物，可將口服藥物成分結合任何口服的，無毒的，藥學上可接受的惰性載體如，乙醇、甘油、水，等等。此外，當期望或必要時，也可摻入適當的粘合劑、填充物、潤滑劑、壓縮助劑、崩解劑、緩沖液、包衣，以及著色劑。適當的粘合劑可包括但不限于淀粉、明膠、天然糖如葡萄糖、無水乳糖、自由流動乳糖、β乳糖，以及玉米增甜劑、天然的和合成的樹膠，如阿拉伯樹膠、西黃蓍糖或藻酸鈉、羥甲基纖維素、聚乙二醇、蠟，等等。用于這些劑型中的潤滑劑可包括，但不限于油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉，等等。適當的崩解劑可以是幾種修飾的淀粉或修飾的纖維素聚合物之一，包括交聯羧甲基纖維素鈉。稀釋劑，其可用作壓縮助劑，包括，但不限于，乳糖、磷酸二鈣、纖維素、微晶纖維素，等等。本發明中也可利用改善粉劑混合物的流動特性的助流劑(glidant)。助流劑的實例包括，但不限于，膠體二氧化硅、滑石粉，等等。也可將本發明中所使用的組合物與作為可定向的藥物載體的可溶性聚合物偶聯。這種聚合物可包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、多羥基丙基甲基丙烯酰胺，等等。也可利用另外的賦形劑，如在美國專利5,358,941；美國專利5,882,656和PCT公開WO 95/29679中所描述的那些。
本發明的實施方案，例如，是80mg-1500mg片劑，包括約0.5％-約90％重量的阿侖膦酸鈉、約1％-約70％重量的膽鈣化固醇顆粒(等于約0.0005％-約20％重量的膽鈣化固醇)、約10％-約80％重量的無水乳糖、約5％-約50％重量的微晶纖維素、約0.1％-約5％重量的膠體二氧化硅、約0.5％-約10％重量的交聯羧甲基纖維素鈉，以及約0.5％-約5％重量的硬脂酸鎂。
Dry維生素D3100顆粒的重量范圍是確保每個片劑中2800IU效能，因為該顆粒含有每克100,000IU-110,000IU維生素D3的效能范圍。為了維持最終片劑的重量為325mg，根據添加到片劑中的Dry維生素D3100顆粒的量調整無水乳糖的量。這里，包括在下面實例中描述本發明的包括二膦酸化合物，如阿侖膦酸和維生素D化合物的口服組合物的其它非限制的實例。Dry維生素D3100顆粒每克顆粒含有重量約100,000IU維生素D3。因此，28mg Dry維生素D3100顆粒含有約2800IU維生素D3，其等于約70μg維生素D3。
本發明，包括這里所描述的實施方案的二膦酸/維生素D組合物，可在每周一次、每兩周一次、每月一次、每月兩次，以及每兩月一次的間隔施用。對于每周一次服用的本發明的組合物，阿侖膦酸的口服的藥學上有效的量包括約0.05mg-約1120mg阿侖膦酸化合物，根據阿侖膦酸的重量。提供每周一次口服的藥學上有效量的阿侖膦酸的本發明的實施方案包括，但不限于，用于預防骨質疏松的單位劑量，包括維生素D化合物和約35mg-約70mg阿侖膦酸化合物；用于治療骨質疏松的單位劑量，包括維生素D化合物和約70mg阿侖膦酸化合物；用于治療Paget病的單位劑量，包括維生素D化合物和約280mg阿侖膦酸化合物；以及用于治療轉移性骨病的單位劑量，包括維生素D化合物和約280mg阿侖膦酸化合物。
對于每周一次給藥，本發明的二膦酸/維生素D組合物中藥學上有效量的維生素D化合物包括約100IU-約60,000IU維生素D。因此，在本發明的一個實施方案中，組合物包括約100IU-約5,600IU維生素D化合物，以及藥學上有效量的阿侖膦酸，阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。在另一個實施方案中，阿侖膦酸的藥學上可接受的量包括約0.05mg-約1120mg的阿侖膦酸，根據阿侖膦酸活性，阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。
對于每兩周一次或每兩月一次給藥，本發明的二膦酸/維生素D組合物中藥學上有效量的維生素D化合物包括約100IU-約60,000IU維生素D。在本發明的一個實施方案中，組合物包括約100IU-約8,400IU維生素D化合物，以及藥學上有效量的阿侖膦酸，阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。在另一個實施方案中，阿侖膦酸的藥學上可接受的量包括約0.05mg-約1120mg的阿侖膦酸，根據阿侖膦酸活性，阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。
對于每月一次給藥，本發明的二膦酸/維生素D組合物中藥學上有效量的維生素D化合物包括約100IU-約36,000IU維生素D。在本發明的一個實施方案中，組合物包括約100IU-約11,200IU維生素D化合物，以及藥學上有效量的阿侖膦酸，阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。在另一個實施方案中，阿侖膦酸的藥學上可接受的量包括約0.05mg-約1120mg的阿侖膦酸鈉，根據阿侖膦酸活性，阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或者它們的混合物。
本發明也包括預防、減少、抑制和治療與異常骨吸收有關的疾病和情況的方法，如骨質疏松。患骨質疏松的患者，即，具有低于絕經前婦女標準的至少約2個或2.5個標準差的骨礦物密度(BMD)，將是根據本發明方法施用本發明組合物的候選者。已發現以每周一次劑量到高于每日劑量的7倍或更多倍劑量施用的維生素D3，可同時與二膦酸，如阿侖膦酸共同施用，不相反地影響二膦酸的生物利用率。見，例如，實施例7。本發明的方法沒有當前在二膦酸治療期間需要笨重的、無規律的，或復雜的給藥方案以提供充分的維生素D的治療方法的缺點。
結果，本發明的組合物，如包含二膦酸化合物(例如，阿侖膦酸鈉)和維生素D化合物的組合物將對所有對包括阿侖膦酸或其它二膦酸而無維生素D化合物的組合物有效的適應征有效。本發明的方法和組合物可用于減少或抑制骨吸收，以及用于治療、減少、抑制或預防異常骨吸收，和與其有關的情況。本發明的組合物可因此用于人類和其它動物以提高骨量以及預防、抑制、減少和治療下列情況和疾病狀態骨丟失；骨質疏松，包括但不限于，絕經后的骨質疏松、類固醇誘導的骨質疏松、男性骨質疏松、疾病誘導的骨質疏松、原發性骨質疏松，以及糖皮質激素誘導的骨質疏松；骨壞死、Paget病；骨關節炎；類風濕性關節炎、其它關節炎病癥、異常增加的骨更新；與假體周圍骨質丟失或骨質溶解有關的局部骨丟失；骨折；轉移性骨病；Gaucher病；無血管的壞死；多骨纖維性結構不良；Charcot關節；寄生物障礙；成骨不全；高胱氨酸尿；賴氨酸尿性蛋白不耐受癥；Turner綜合征；固定術；進行性骨化性纖維性結構不良；骨不完全性纖維發生；牙周病；牙齒丟失；惡性腫瘤的高鈣血癥；多發性骨髓瘤；骨質減少，包括但不限于，固定術誘導的骨質減少和由于骨轉移瘤引起的骨質減少；以及可能與異常骨吸收有關的其它骨病和情況。
本發明涉及本發明的組合物用于制備可用于治療、減少、抑制或預防關節炎病癥的藥物的用途。本發明也涉及本發明的組合物和選自雄激素受體調節劑；破骨細胞質子ATP酶的抑制劑；HMG-CoA還原酶的抑制劑；破骨細胞合成代謝劑；降鈣素；維生素K2或藥學上可接受的鹽和它們的組合的試劑用于制備可用于治療關節炎病癥的藥物的用途。
在本發明的實施方案中，關節炎病癥是淀粉樣變性；強直性脊柱炎；細菌性關節炎；堿性鈣磷晶體沉積病；Behcet病；滑囊炎和腱炎；CPPD沉積病；鈣化腱炎；腕管綜合征；Ehlers-Danlos綜合征；腸炎性(enteropathic)關節炎；Felty綜合征；纖維肌痛；痛風；真菌性關節炎；血紅蛋白病；血友病性關節病；肥大性骨關節病；傳染性關節炎；炎性腸病；幼年關節炎；幼年類風濕性關節炎；紅斑狼瘡；lyme病；marfan綜合征；混合性結締組織病；多中心性網狀組織細胞瘤病，肌病；肌炎；骨關節炎；骨壞死；骨壞死軟骨營養障礙；多動脈炎；多肌痛風濕病；銀屑病性關節炎；Raynaud現象；反射交感神經營養障礙綜合征；Reiter綜合征；復發性多軟骨炎；類風濕性關節炎；風濕熱；結節病；膿毒性關節炎；硬皮病；Sjogren綜合征；脊柱骨骺發育不良；系統性紅斑狼瘡；以及病毒性關節炎。
本發明的一個實施方案是在需要其的哺乳動物中治療、減少、抑制或預防骨關節炎進展的方法，包括向哺乳動物施用治療有效量的本發明的組合物。在文獻中已知骨關節炎伴隨關節的明確改變，包括關節軟骨表面的腐蝕、關節周圍軟骨內骨化/骨贅病，以及軟骨下的骨硬化和囊腫形成。見Oettmeier R，Abendroth，K，“Osteoarthritis andboneosteologic types of osteoarthritis of the hip，”SkeletalRadiol.1989；18165-74。最近，已提出軟骨下骨硬化對骨關節炎的引起和發展的潛在作用。作為對重復沖擊負荷的關節反應的變硬的軟骨下骨，較少能減弱和分配通過關節的壓力，使穿過關節軟骨表面的機械壓力更大。這反過來加速軟骨磨損和形成原纖維。見Radin，EL和Rose RM，“Role of subchondral bone in the initiation andprogression of cartilage damage，”Clin.Orthop.1986；21334-40。通過本發明組合物抑制過度的關節下骨的吸收可導致抑制軟骨下骨更新，并且因此可對骨關節炎進展產生有利的影響。
本發明的另一個實施方案是在需要其的哺乳動物中治療、減少、抑制或預防類風濕性關節炎病癥的方法，包括向哺乳動物施用治療有效量的本發明的組合物。在文獻中已知關節周圍骨的進行性破壞是患類風濕性關節炎患者關節機能障礙和殘疾的主要原因。見Goldring SR，“Pathogenesis of bone erosions in rheumatoid arthritis”Curr.Opin.Rheumatol.2002；14406-10。另外，普遍地骨丟失是與嚴重的類風濕性關節炎有關的病態(morbility)的主要原因。在患慢性類風濕性關節炎的患者中髖部和脊椎骨折的頻率基本上增加。見Gould A，Sambrook，P，Devlin J等，“Osteoclastic activationis the principal mechanism leading to secondary osteoporosisin rheumatoid arthritis，”J.Rheumatol.1998；251282-9。在關節下骨的吸收和普遍骨丟失的治療或預防中使用抗吸收劑，代表對類風濕性關節炎進展的合理的藥理學干預的方法。因此，可使用包括二膦酸化合物和維生素D化合物的本發明的組合物用于治療、減少、抑制或預防與類風濕性關節炎和其它骨關節炎病癥有關的骨丟失。
更普遍地，認為可在同一制劑中與維生素D一起給予二膦酸，無不利地影響二膦酸的生物利用率。此外，認為可在同一制劑中與二膦酸一起給予更低劑量的維生素D和更高劑量的維生素D，不反向影響二膦酸的生物利用率。作為實例，認為當在本發明的組合物中與二膦酸聯合施用時，每周一次2800IU劑量的維生素D是有效的。也已知可用維生素D2替換維生素D3，具有與維生素D3類似的結果。因此，在同一制劑中與二膦酸化合物一起施用維生素D化合物將消除在二膦酸治療期間單獨服用維生素D的需要并且提供維生素D營養，不反向影響二膦酸的生物利用率和效能。
患者將從維生素D和二膦酸組合中受益，因為其提供額外的維生素D營養以便于正常的骨形成和礦化并且提高二膦酸治療的效能。從患者生活方式和順從觀點看，本發明的方法也將比具有每日另外施用維生素D的二膦酸的每日或周期性給藥方案更方便。由于本發明，患者可不再需要每日單獨服用維生素D以從額外的維生素D營養中獲益，因為本發明提供每周一次劑量的維生素D。患者將不必進行單獨施用二膦酸和維生素D的復雜的給藥方案。最后，患者將較少頻繁地經歷必需在空腹服用二膦酸化合物并且在服藥前或后必需禁食至少30分鐘的不便。本發明的方法因此可能具有提高更好的患者順從，并且其反過來可轉化成更好的治療效能的優點。
也認為二膦酸/維生素D組合物也將較少刺激食管，以及胃腸系統。由于阿侖膦酸可潛在地穿透分層的鱗狀上皮的基底層(例如，通過其自身的穿透或者通過穿透到由粗糙的食物或其它試劑所致的局部損傷的部位)，其可能導致角質形成細胞生長的抑制，如通過其在體外對角質形成細胞生長的影響所提示的。見，A.A.Reszka等，Mol.Pharmacol.，2001；59(2)193-202。生長的抑制將減緩上皮修復的過程，因此導致局部刺激或潰瘍。用放射性1，25(OH)2維生素D3喂養的大鼠的放射自顯影圖的確顯示在食管的上皮中維生素D受體表達的證據。見Stumpf，WE，等，Histochemistry，1987；87(1)53-8。水平低于在甲狀旁腺中所見到的。
因此，認為活性維生素D3代謝產物(例如，1，25(OH)2-膽鈣化固醇或鈣三醇)與阿侖膦酸的共同施用可通過其對角質形成細胞的分化的影響加劇食管的刺激。已觀察到鈣三醇和25-OH-膽鈣化固醇通過抑制生長和誘導分化，影響角質形成細胞。見K.Matsumoto等，Biochem.Biophys.Acta.，1991；1092(3)311-8。角質形成細胞分化與細胞周期停滯(生長停滯)有關，因此阿侖膦酸與活性維生素D代謝產物的結合將對抑制基底層的生長具有協同效應。這可能反過來導致更大的刺激效應。因為口服維生素D3(膽鈣化固醇)需要在肝臟以及然后在腎臟中活化，因此認為其可能不引起與活性代謝產物相同的局部刺激效應。
另外，可能活性維生素D3激素的正常生理水平可幫助身體力圖修復由急性暴露于阿侖膦酸所誘導的局部刺激的部位。因為與阿侖膦酸聯合施用口服的維生素D3，以及因為老年人群的大部分是維生素D3缺陷的，因此這可更好地使身體加速康復過程。
也認為維生素D/二膦酸組合物可用于搖擺的預防或治療。另外，認為維生素D/二膦酸組合物可用于減少跌倒。認為維生素D/二膦酸組合物將在老年人中增加肌肉強度，改善神經肌肉功能，減少身體搖擺并改善身體機能。這將導致減少跌倒的風險并且因此有助于減少骨折的風險。流行病學研究證明在美國在老年人中維生素D缺乏非常普遍。見A.N.Exton-Smith等，Lancet 1966；2999-1001；RP Heaney等，Osteoporos Int 2000；11553-5；MJ McKenna，Am J Med1992；9369-77；ST Haden等，Calcif Tissue Int 1999；64275-9。有維生素D對骨骼外組織影響的證據。見Latham等，2003；511219-1226。另外，已經在肌肉組織鑒定了維生素D受體，肌肉虛弱、四肢疼痛和身體機能削弱是公認的嚴重的維生素D缺乏的表現。
許多預期的、隨機的干預研究證明維生素D改善肌與骨骼的功能并減少跌倒風險的效能。已證明用維生素D，以及鈣的治療減少非椎骨骨折的發生率和減少姿式搖擺以及可能減少跌倒的發生率。見J.K.Dhesi等，Age and Aging 2002；31267-271。另外，已經證明通過用阿法骨化醇(alfacalcidol)(1-α-羥基維生素D3)，和最低的鈣攝入量的治療可顯著減少住在老年社區患者的跌倒的次數。見L.Dukas等，JAGS 2004；52230-236。
也認為維生素D/二膦酸組合物將提高鈣的吸收。已經有在絕經后婦女中利用維生素D的活性代謝產物檢查對部分鈣吸收的陽性影響的研究。見M.L.Holzherr等，Osteoporosis Int 2000；1143-51；J.C.Gallagher等，J.Clin.Endocrinol.Metab.，1980；51(5)1359-64。也已經在大鼠模型中證明二膦酸提高腸的鈣吸收。見P.Ammann等，J Bone Miner Res1993；8(12)1491-8；H.FleischOsteoporos Int 1996；6166-70；J-P Bonjour Endocrinol Metab1988；17E260-E264。然而，認為維生素D化合物和二膦酸的組合物將提高鈣的吸收，高于維生素D或二膦酸每種單獨施用的相加效應。另外，認為膽鈣化固醇和阿侖膦酸的組合物將比維生素D的活性型和不同二膦酸的組合更高地提高鈣的吸收。鈣吸收的這種提高將與骨折風險減少相關。
本發明也提供由維生素D化合物和二膦酸化合物組成的組合物用于制造在哺乳動物如人中治療、減少、抑制或預防上面所鑒定的情況和疾病狀態的藥物的用途，其中二膦酸化合物包括藥學上有效量的至少一種二膦酸，或者二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物，以及一種或多種活性成分。
在另一個實施方案中，本發明的方法和組合物也可包括組胺H2受體阻滯劑(即，拮抗劑)和/或質子泵抑制劑，其是公知的用于提高胃pH的治療劑。見，例如，L.J.Hixson，等，Current Trends inthe Pharmacotherapy for Peptic Ulcer Disease，Arch.Intern.Med.，vol.152，pp.726-732(April 1992)。發現在本發明中按順序口服組胺H2受體阻滯劑和/或質子泵抑制劑，隨后口服二膦酸和維生素D組合物可幫助將不利的胃腸影響降到最低。在本發明的一個實施方案中，在施用二膦酸和維生素D組合物前約30分鐘-約24小時，或者在約30分鐘-約12小時前施用組胺H2受體阻滯劑和/或質子泵抑制劑。組胺H2受體阻滯劑和/或質子泵抑制劑的劑量將取決于所選的特定化合物和與將要治療的哺乳動物有關的因素，即，大小、健康，等等。組胺H2受體阻滯劑和/或質子泵抑制劑的非限制性的實例包括選自西咪替丁(cimetidine)、法莫替丁(famotidine)、尼扎替丁(nizatidine)、雷尼替丁(ranitidine)、奧美拉唑(omprazole)和蘭索拉唑(lansoprazole)的那些。
本發明進一步包括制造本發明組合物的方法，包括例如包括二膦酸化合物和維生素D化合物的藥物組合物。在一個實施方案中，制備阿侖膦酸鈉-膽鈣化固醇制劑的方法，包括制備包括阿侖膦酸的粉劑混合物；壓緊粉劑混合物以形成阿侖膦酸混合物；碾磨并將阿侖膦酸混合物與膽鈣化固醇顆粒混合以形成混合物；以及潤滑并壓縮混合物。在另一個實施方案中，制備阿侖膦酸-膽鈣化固醇固體劑型的方法包括將阿侖膦酸、膠體二氧化硅、無水乳糖、微晶纖維和交聯羧甲基纖維素鈉混合以形成預混合物；將預混合物和硬脂酸鎂混合以形成第一潤滑的混合物；滾筒壓緊第一潤滑的混合物以形成壓緊的帶狀物；碾磨壓緊的帶狀物以形成潤滑的混合物；將潤滑的混合物與膽鈣化固醇顆粒混合以形成第二潤滑的混合物；以及壓縮第二潤滑的混合物形成固體劑型。
圖4描述本發明的用于制造本發明二膦酸/維生素D組合物方法的實施方案的流程圖。在該實施方案中，通過包括滾筒壓緊阿侖膦酸鈉制劑以形成帶狀物、碾磨從滾筒壓緊步驟所產生的帶狀物以及然后與維生素D3制劑的顆粒外(extragranular)添加劑混合的方法制備組合物。使用，例如，實施例1中所鑒定的活性成分和賦形劑，該制劑和方法導致滿足產品釋放以及阿侖膦酸和維生素D3的穩定性的控制要求的產品。如在圖4中所示，在該實施方案中，在步驟301中制備膠體二氧化硅、無水乳糖和阿侖膦酸鈉的預混合物。如步驟302所描述的，然后將預混合物與微晶纖維素和交聯羧甲基纖維素鈉混合。在步驟303中，添加硬脂酸鎂以形成潤滑的混合物。將潤滑的混合物通過滾筒壓緊器(compactor)并且碾磨壓緊的帶狀物，如在步驟304中所示。在圖4所描述的實施方案中，然后在步驟305中添加含有約2800IU(或約70μg的等同物)維生素D3的維生素D3顆粒并與碾磨的顆粒混合，具有根據進入的顆粒分析和從滾筒壓緊/碾磨步驟的產量所調整的維生素D3顆粒電荷數量。然后在步驟306中壓縮所得的混合物以形成片劑并將壓縮的片劑除塵。可將所得的片劑包裝在適當的包裝中，包括例如防潮和避光泡眼包裝或瓶。
維生素D3(膽鈣化固醇)和維生素D2(麥角鈣化固醇)是不溶于水、疏水的化合物，熔點分別是約84℃和約115℃。這些化合物也非常易于氧化并且不耐光，分解成各種降解產物。維生素D顆粒也易于分離。維生素D的穩定性因此受維生素D/二膦酸組合物的加工的程度和性質以及貯藏條件(例如，接觸光、高溫，以及高相對濕度)的影響。結果，渴望在本發明的組合物中包括維生素D，在涉及發展制造和貯藏含維生素D組合物的方法的范圍提出了特殊的挑戰。因此，在加工期間和在貯藏期間需要配制維生素D/二膦酸組合物以便減少維生素D的降解。也需要制造這些穩定組合物的方法。另外，需要發展檢測或測量含維生素D的組合物，如本發明的那些中維生素D降解的方法。另外，因為特定維生素D降解物(degradant)的水平可能非常小(在納克級)，所以需要發展測量或檢測含維生素D的組合物，如本發明的那些中維生素D降解的方法，具有足以檢測維生素D降解物量的定量限度(LOQ)。
因此，本發明也提供制造包括二膦酸化合物和維生素D化合物的組合物的方法，其將制造期間維生素D化合物的丟失降到最低。通過控制制造期間的濕度、維生素D形成期間存在的溫度和光或者提供適當的成品劑型包裝，可減少維生素D的丟失而充分維持其效能。在本發明的一個實施方案中，制造過程期間的溫度小于或等于約35℃。在另一個實施方案中，溫度在約20℃-約30℃之間。在一個實施方案中，制造過程期間的相對濕度小于或等于約60％RH。在另一個實施方案中，相對濕度是在約20％-約40％之間。另外，可能不僅控制制劑的維生素D成分的起始濕度水平，而且也控制可能存在的任何賦形劑的起始濕度水平。在另一個實施方案中，相對濕度是在約25％-約35％之間。
本發明也包括制造的方法，其包括另外的干燥步驟。因此，作為另一個實施方案，可在與上述不同的條件(溫度和/或相對濕度)下制造本發明的組合物，可通過干燥組合物減少所制造的組合物的含水量。在一個實施方案中，干燥可包括在產生固體劑型后干燥(用，例如，熱)本發明的組合物。在另一個實施方案中，干燥可包括本發明組合物的固體劑型(例如，片劑)的薄膜包被。在另一個實施方案中，干燥可包括用適當量的干燥劑或其它部分包裝本發明的組合物以減少含水量。在另一個實施方案中，干燥可包括以減少濕度和/或光的貯藏形式(例如，鋁泡眼包裝、防潮瓶)儲存本發明的組合物。
在本發明的實施方案中，用作起始材料的維生素D化合物可包括維生素D的自由流動的、穩定的顆粒。在實施方案中，在本發明的制造方法中用作起始材料的維生素D顆粒是由BASF銷售的，明膠包被的，藥物級的，Dry維生素D3100。將維生素D的顆粒溶于包埋在明膠和蔗糖的淀粉包被的基質中的1-2μm液滴的中等鏈甘油三酯。然后可用叔丁基羥基甲苯(BHT)穩定溶解的維生素D。維生素D顆粒含有硅酸鋁鈉作為助流劑。本領域普通技術人員將懂得，可根據維生素D的來源和/或添加的維生素D的效能需要調節添加到組合物中的維生素D的量。例如，如果利用明膠包被的，藥物級，Dry維生素D3100(BASF)，那么普通技術人員將會理解，顆粒可具有不同的效能(例如，100,000IU/g或105,000IU/g或110,000IU/g)，為了達到組合物中2800IU或5600IU的維生素D，將需要調整添加到組合物中的顆粒的量。
本發明實施方案中所含有的維生素D符合歐洲藥典(Ph.Eur.)膽鈣化固醇濃度(粉劑)專論認可的標準。盡管直到這時沒有配制的維生素D3產品的USP專論，但是已經公開了生效的歐洲藥典專論。在本發明組合物的實施方案中所使用的維生素D化合物的組合物中的非活性成分(例如，中等鏈甘油三酯、丁基化的羥基甲苯、蔗糖、明膠、改性淀粉以及硅酸鋁鈉)是大綱級(compendial)或食品級的材料。
在本發明的方法和組合物的實施方案中，用作起始材料的阿侖膦酸是購自Merck & Co.，Inc.的大綱級阿侖膦酸鈉一水合物，或者大綱級阿侖膦酸鈉三水合物。
另外，通過可商業途徑獲得的維生素D顆粒可用于本發明的組合物，如可從Roche、BASF或Solvay獲得的那些。
在另一個實施方案中，本發明提供用于方便地和有效地進行本發明方法的試劑盒。這種試劑盒尤其適合給予固體口服劑型如片劑或膠囊并且在實施方案中包括許多具有朝向它們期望用途的劑量的單位劑量卡片。這種試劑盒的一個實例是“泡眼包裝”。泡眼包裝是包裝工業中公知的并且廣泛用于包裝藥物單位劑型。如果期望的話，可提供記輔助物，例如以數字、字母或其它標記的形式或者用日歷插頁，標明治療時間表中的可施用劑量的時間。可選擇地，可包括安慰劑劑量，或者鈣或飲食補充物，以與二膦酸和維生素D單位劑量類似的或不同的形式，以提供每天服用劑量的試劑盒。在包括組胺H2受體和/或質子泵抑制劑的那些實施方案中，可包括這些試劑作為試劑盒的一部分。
本發明也提供為了測量本發明的維生素D3化合物的降解產物而發展的檢測方法。具體地，測量藥物組合物的降解的方法可包括從組合物中提取膽鈣化固醇到第一溶液中以形成第二溶液，從第二溶液中分離含有膽鈣化固醇的樣本，以及通過將樣本進行反相HPLC分離檢測樣本中膽鈣化固醇的量。進行本發明的檢測方法以檢測每個藥物組合物中約2800IU-約5600IU膽鈣化固醇。另外，檢測方法具有小于約9ng/mL膽鈣化固醇的膽鈣化固醇的定量限度(LOQ)。
在一個實施方案中，該方法利用包括水、醇、乙腈或它們的混合物的第一溶液。在一個具體的實施方案中，第一溶液含有約5％水和約95％甲醇。可從每片含有2800IU維生素D的15個片劑中提取示例性的樣本制劑到50mL約5％水和約95％甲醇中。也在一個實施方案中，可將所得的溶液攪拌約10分鐘，超聲處理約30分鐘，然后再攪拌3小時。在一個實施方案中，可通過離心進行樣本的分離，其可約5,000rpm-約15,000rpm。在一個實施方案中，柱是PhenomenexPhenosphere 80_ODS(1)柱(150×4.6mm，3μm)，注射體積是100μL。將樣本沿柱洗脫并且然后檢測。在該方法的一個實施方案中，可使用65分鐘梯度。也可使用約260nm-約265nm的檢測波長。在該方法的一個實施方案中，在約25℃的反相HPLC柱溫度完成檢測步驟。可使用約5℃的樣本盤溫度。在一個實施方案中，檢測步驟包括反相HPLC分離，使用約99％乙腈和約1％的0.025％磷酸的洗脫液。
在一個實施方案中，可在本發明的方法中使用的反相HPLC柱包括僅部分末端加帽(endcapped)或沒有末端加帽的柱。末端加帽過程減少固定相上的游離硅烷醇基，因此，其影響前維生素D和維生素D峰之間的分離。嘗試使用末端加帽柱在提供對本發明的分析方法充分的峰分辨率中不成功，因為將不能分辨并定量兩個活性分子之間的任何洗脫的降解物。的確，在用于本發明方法的鑒別柱中，觀察到維生素D3異構體(0.96RRT)作為在制劑中所發現的兩個活性分子之間的洗脫。更多的使用其它末端加帽柱的方法發展都顯示前維生素D3和維生素D3峰之間有限的分辨率。
柱碳負荷對四種維生素D3酯加合物的洗脫有影響，其是前維生素D3或維生素D3和中等鏈甘油三酯(C8和C10脂肪酸酯存在于可在本發明的組合物和方法中使用的BASF維生素D顆粒)之間酯基轉移的產物。這些酯可通過酯基轉移機理與維生素D3的羥基反應以形成C8-D3和C10-D3酯。由于長脂肪酸鏈，因此這些酯非常疏水并且與C18固定相相互作用。具有更高碳負荷的柱具有更高的C18固定相；因此，其與酯的相互作用更強并且將酯更長時間地保留在柱上。因此，在本發明方法的實施方案中，可使用具有小于約10％碳負荷的HPLC柱。使用具有更低碳負荷的柱降低固定相和酯之間的相互作用，導致這些峰的更早的洗脫。結果顯示，例如，使用具有低碳負荷(5％)的Platinum EPSC18柱，當使用含有95％乙腈/5％水的流動相時，所有酯都在10分鐘前被洗脫。類似地，當使用另一個柱，Phenosphere ODS(1)柱(7％碳負荷)時，所有四種酯都在26分鐘內被洗脫。
下面列出了可在本發明的方法中使用的示例性的層析條件
梯度時間表
使用本發明的檢測方法，可定量前維生素D和維生素D峰以計算樣本中維生素D的總量。特別是，本發明的方法足夠靈敏和有選擇性，以至于對約2800IU膽鈣化固醇的樣本可區別膽鈣化固醇、前膽鈣化固醇和它們的異構體，以及可檢測一個或多個膽鈣化固醇酯加合物，或者一個或多個前膽鈣化固醇酯加合物。
已經在本發明的藥物組合物的穩定性研究中觀察到三種可能的維生素D3降解產物，其在下面進行描述(包括在實施例6中)。在下述穩定性研究中，研究的片劑組合物包括約91.4mg阿侖膦酸鈉、約26.7mg膽鈣化固醇顆粒、約131.0mg微晶纖維素、約62.4mg無水乳糖、約9.7mg交聯羧甲基纖維素鈉、約0.8mg膠體二氧化硅以及約3.1mg硬脂酸鎂。
如在圖5中所描述的，維生素D3的結構包括共軛三烯，其經歷各種熱和光化學異構化。已經在本發明的示例性的藥物組合物中鑒定了五種維生素D3異構體(在該實例中，使用維生素D3(膽鈣化固醇))前維生素D3、反式維生素D3以及在0.78RRT、0.96RRT和1.09RRT的三種另外的異構體(其是如下所述通過高效液相層析的化合物的保留時間的測量值)。一些這些維生素D3異構體的結構顯示于圖5。結構結論是基于UV、MS，以及在一些情況中是NMR光譜學。
已知維生素D和其異構體前維生素D通過δ1，7-氫遷移熱互變。在體內，已經證明前維生素D是維生素D的直接前體，并且發現在生理溫度下兩種物質處于平衡濃度，盡管該平衡似乎主要有利于維生素D。因為認為維生素D和前維生素D起相同的生理功能，因此當常規報道時維生素D試驗包括兩種物質的總和。這與含有維生素D3產品的USP和Ph.Eur.專論一致，例如。可獲得的穩定性數據表明在適當的包裝中在25℃/60％RH貯藏24個月，沒有一種其它異構體將接近1.0％重量的ICH數量測定閾值。
在本發明組合物所用的維生素D3顆粒中，最突出的降解產物似乎是通過維生素D3與中等鏈甘油三酯(MCT)的酯基轉移反應所形成的維生素D3酯。一些這些維生素D3酯加合物的結構也顯示于圖5。主要的物質對應于維生素D3的n-辛酸酯(C8)和n-癸酸(C10)酯。可通過前維生素D3與維生素D3化合物中的甘油三酯的反應或者通過維生素D3酯的熱轉變產生前維生素D3酯加合物。可定量的降解產物中，在穩定性研究中僅C8和C10維生素D3酯加合物似乎提高到任何可估計的程度。
可獲得的穩定性數據表明在低于約30℃和小于約30％相對濕度(RH)貯藏24個月，這些種類不應當接近1.0％重量的ICH數量測定閾值并且在本發明的組合物和方法的實施方案中，預計它們不會在任何事件中引起安全考慮。研究進一步表明，當在低于約30℃和小于約30％RH貯藏24個月后，本發明組合物的總降解物小于約5％。
也應當理解，維生素D可通過自由基引發劑的誘導或者在固相或液相中自發地進行自動氧化以形成各種產物，已經鑒定了其中的一些。本發明組合物的實施方案中維生素D降解(以及，具體地，在本情況中維生素D3)的典型特征證實維生素D3的自動氧化的不穩定性，其中將維生素D3轉變成油或無定形固體并暴露于20-40℃的溫度。在幾個小時內，HPLC分析顯示維生素D3的廣泛破壞和出現許多顯示非常低的紫外線(UV)吸收的無法分辨的降解物。在更長的暴露時間，隨著反應的進一步發生這些吸收繼續降低。
使用自由基引發劑，偶氮二異丁腈(AIBN)進行維生素D3自動氧化的更詳細的分析。在該實驗中，使用AIBN引起溶液中維生素D3的自動氧化。通過使用UV的HPLC、質譜分析(MS)和蒸發光散射(ELS)檢測表征所得產物的分布圖。結果顯示(a)溶液相自動氧化也可導致多個降解產物，(b)自動氧化可導致UV發色團的逐漸破壞，導致表面材料丟失，而ELS檢測，在另一方面，提供顯著更好的質量恢復，以及(c)質譜m/z比和在一些情況中所觀察到的UV/vis譜證實這些反應產物的氧化性質。
在表征本發明組合物的實施方案中所使用的包括約70mg阿侖膦酸和約2,800IU(70μg)維生素D3的顆粒制劑中維生素D3降解的嘗試中，進行放射性標記研究。利用氚標記的維生素D3作為跟蹤降解的維生素D3的工具，不依賴UV吸收特征的改變。將放射性標記的維生素D3摻入到模擬在本發明組合物的實施方案中所用的維生素D顆粒的制劑中，然后分析穩定性。為了在合理的時間框內發生降解，模型制劑中的抗氧化劑水平處于對于商業制劑來說被認為是期望的抗氧化劑水平的降低的水平。在40℃/75％RH和70℃14周后使用液體閃爍計數器(LSC)和具有同時UV和在線放射檢測的反相高效液相層析(RP-HPLC)分析樣本。對于在40℃/75％RH條件貯藏的樣本，觀察到大約40％的維生素D3丟失，而低溫控制顯示良好的穩定性。這種分析的結果顯示于圖6的降解樣本的放射性色譜圖，其顯示大片區域的無法分辨的降解產物，其中沒有一個似乎是主要的產物。這些結果提供進一步的證據，當不完全穩定時，維生素D3氧化降解成多個具有降低的UV吸收的產物并且這些產物可解釋維生素D3的丟失。基于這些穩定性分析，在本發明組合物的片劑實施方案中不期望單個自動氧化降解產物接近安全考慮的水平。
本發明也包括在施用本發明的組合物后測量哺乳動物中藥代動力學參數的方法。可測量的藥代動力學參數包括，例如，總尿排泄、尿排泄、血清濃度對時間曲線下的面積(AUC)、穩態的最大血漿濃度(Cmax)、Cmax的時間(Tmax)，以及片劑的血清濃度中位表觀半衰期(t1/2)，如，例如，包括約70mg阿侖膦酸和約2,800IU膽鈣化固醇的片劑。
這些測量值證實本發明的組合物和方法的實施方案在體內產生了阿侖膦酸和膽鈣化固醇的藥學上有效的水平(后者通過與本發明組合物和方法中維生素D化合物的推薦的每日量的比較證明)。
在一個實施方案中，本發明包括施用包含阿侖膦酸和膽鈣化固醇的藥物組合物后測量人血清中膽鈣化固醇的方法，該方法包括(1)向人施用包括阿侖膦酸和膽鈣化固醇的組合物；(2)從人中獲得血漿樣本；(3)從血漿樣本中提取膽鈣化固醇以形成第一溶液；(4)將第一溶液中的膽鈣化固醇與親雙烯體反應以形成膽鈣化固醇的一個或多個狄耳斯-阿德耳加成產物；(5)使用高效液相層析(HPLC)層析分離法分離膽鈣化固醇的狄耳斯-阿德耳加成產物；和(6)使用質譜檢測樣本中膽鈣化固醇的量。在該方法的實施方案中，親雙烯體包括4-苯基-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮(P-TADO或PTAD)。同樣地，可使用熱的噴霧器探測器在陽性電離模型中進行檢測步驟，并可進一步包括向每個人類血漿樣本中添加氘化的內標準膽鈣化固醇，以及提取、反應、分離和沿著樣本膽鈣化固醇檢測氘化的內標準膽鈣化固醇。當測量1mL血漿時，該方法具有小于約0.5ng/mL膽鈣化固醇的膽鈣化固醇的定量限度(LOQ)。本發明的一個實施方案是維生素D/二膦酸組合物，其中施用組合物后120小時哺乳動物的血清濃度的圖產生至少下列之一膽鈣化固醇的最小平方(LS)均值AUC(0-120小時)約296.4ng.h/mL，其中不考慮基線膽鈣化固醇血清濃度測量藥代動力學參數；最小平方(LS)均值AUC(0-120小時)約297.5ng.h/mL，其中通過考慮基線膽鈣化固醇血清濃度測量藥代動力學參數，使用服藥前0小時血清膽鈣化固醇濃度作為協變量(covariate)；以及最小平方(LS)均值AUC(0-120小時)約143.1ng.h/mL，其中通過考慮基線膽鈣化固醇血清濃度測量藥代動力學參數，使用120小時期間估計的基線膽鈣化固醇的減法。在另一個實施方案中，組合物包括二膦酸和膽鈣化固醇，其中施用組合物后120小時哺乳動物血漿濃度的圖產生下列之一120小時的穩態最大血漿濃度(Cmax)的最小平方(LS)均值約5.9ng/mL，其中不考慮基線膽鈣化固醇血清濃度測量藥代動力學參數；120小時的穩態最大血漿濃度(Cmax)的最小平方(LS)均值約5.9ng/mL，其中通過考慮基線膽鈣化固醇血清濃度測量藥代動力學參數，使用服藥前0小時血清膽鈣化固醇血清濃度作為協變量；以及穩態最大血漿濃度(Cmax)的最小平方(LS)均值約4.0ng/mL，其中通過考慮基線膽鈣化固醇血清濃度測量藥代動力學參數，使用120小時期間估計的基線膽鈣化固醇的減法。
本發明也包括一種組合物，其中施用組合物后120小時哺乳動物的膽鈣化固醇的血漿濃度的圖產生在約12小時發生Cmax的算術均值時間(Tmax)時膽鈣化固醇的穩態最大血漿濃度(Cmax)，其中不考慮基線膽鈣化固醇血清濃度測量藥代動力學參數。在另一個實施方案中，組合物具有在哺乳動物中為約23.8小時的組合物的膽鈣化固醇的血漿濃度中間表觀半衰期(t1/2)，并且通過考慮基線膽鈣化固醇血清濃度測量藥代動力學參數，使用估計的基線膽鈣化固醇步驟的減法。
為了測定本發明組合物的藥代動力學特征，在236名年齡在18-65歲的健康非懷孕婦女和男性中進行公開標記、隨機的、2部分的、2期交叉研究的抽樣研究。在該研究中，在下面的實施例7中詳細描述，研究以70-mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑施用的維生素D3相對于2800IU維生素D3片劑的藥代動力學參數(AUC0-120小時、Cmax、Tmax、和血清濃度中位表觀半衰期(t1/2))。另外，研究組合片劑中阿侖膦酸的尿排泄與FOSAMAX_的每周一次70mg片劑的關系。概括起來，(1)證明根據本發明的70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑在阿侖膦酸生物利用率方面與70mg阿侖膦酸片劑生物等效；(2)證明70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和含有2800IU維生素D3的片劑(無阿侖膦酸)中維生素D3的生物利用率相似，以及(3)證明根據本發明的70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑普遍很好地耐受。因此，預計，例如，用本發明的二膦酸/維生素D化合物的每周一次給藥將在與二膦酸/維生素D化合物的每周一次給藥相同的時期，提供與推薦的每日劑量的維生素D，如每日400IU維生素D的維生素D血液水平和/或治療效應相當的維生素D3血液水平和/或治療效應。
在下列非限制性的實例中進一步解釋本發明的這些和其它實施方案。
實施例下列實施例進一步描述和舉例說明本發明范圍內的實施方案。由于其許多變化可能不偏離本發明的精神和范圍，因此給出的實施例僅用于舉例說明的目的，不應當被解釋為本發明的限制。
實施例1二膦酸和維生素D片劑成品藥物產物是含有阿侖膦酸鈉(約70mg無水游離酸等同物)和維生素D3(約2800I.U.(約70μg))的組合片劑，具有在表1-1中所確定的成分。所有賦形劑都是大綱級并選擇用于達到最大物理和化學穩定性。
表1-1片劑組合物
使用所得的片劑根據本發明的方法用于預防、抑制、減少或治療例如骨質疏松。類似地，根據阿侖膦酸活性，制備包括其它相應重量的阿侖膦酸的片劑，包括，但不限于，每個片劑約2.5mg、5mg、8.75mg、17.5mg、70mg、140mg、280mg、560mg或1120mg。類似地，制備包括每單位劑量其它相應重量的維生素D3的片劑，包括，但不限于，每個片劑約1,400、2,800、5,600、7,000IU、8,400IU、14,000IU、28,000或36,000IU。可在從每周一次到每兩月一次的時間間隔施用這種片劑。
實施例2二膦酸和維生素D組合物可使用如本說明書中所述的混合和制劑技術制備包括二膦酸和維生素D的組合物。可使用下列相應重量的成分制備含有根據阿侖膦酸活性，約35mg阿侖膦酸，和約5,600IU維生素D3的組合物。
*每克顆粒含有大約100000IU；因此56mg顆粒等于約5600IU。
使用所得的劑型根據本發明的方法用于預防、抑制、減少或治療例如，骨質疏松。類似地，根據阿侖膦酸活性，制備包括其它相應重量的阿侖膦酸的劑型，包括，但不限于，每片約2.5mg、5mg、8.75mg、17.5mg、70mg、140mg、280mg、560mg或1120mg。類似地，制備包括每單位劑量其它相應重量的維生素D3的劑型，包括，但不限于，每單位劑型約1,400、2,800、5,600、7,000IU、8,400IU、14,000IU、28,000或36,000IU。可在從每周一次到每兩月一次范圍的時間間隔施用這種劑型。這些劑型可以是，例如，片劑或膠囊。
實施例3阿侖膦酸和維生素D片劑使用這里所公開的方法，使用下列成分的相應重量，制備含有根據阿侖膦酸活性，70mg阿侖膦酸，和2800IU維生素D3的片劑。
表3-1
使用所得的片劑根據本發明的方法用于預防、抑制、減少或治療例如骨質疏松。類似地，根據阿侖膦酸活性，制備包括其它相應重量的阿侖膦酸的片劑，包括，但不限于每片約2.5mg、5mg、8.75mg、17.5mg、70mg、140mg、280mg、560mg或1120mg。
類似地，制備包括每單位劑量其它相應重量的維生素D3片劑，包括，但不限于每片約1,400、2,800、5,600、7,000IU、8,400IU、14,000IU、28,000或36,000IU。可在每周一次到每兩月一次的時間間隔施用這種片劑。
實施例4維生素D3(粉劑)對阿侖膦酸吸收的影響為了檢查當以單劑量施用時粉劑的維生素D3(膽鈣化固醇)對阿侖膦酸的相互作用，在14名年齡在18-85歲健康的，非懷孕的婦女和男性中進行兩期、交叉研究。受試者在每個時期接受一片阿侖膦酸70-mg片劑。根據計算機所產生的患者分配表，在兩個時期之一將單劑量的維生素D35600IU與阿侖膦酸片劑共同服用。當維生素D3與阿侖膦酸共同施用時，將維生素D3粉劑在60mL普通自來水中重構并與阿侖膦酸片劑一起施用給受試者(治療A)。清洗維生素D3瓶并用60mL普通自來水填滿3次，然后每次施用給受試者。因此，將240mL總體積的普通自來水與維生素D3一同施用。當單獨施用阿侖膦酸時，將240mL體積的普通自來水與該劑量一同施用(治療B)。每個時期至少間隔14天沖失。治療示意圖和分配在表4-1。
表4-1治療示意圖和分配
在每個治療前夜將受試者在研究單位隔離。過夜禁食(除了水)后，受試者施用各自的治療。受試者在藥物服用后繼續禁食直到服藥后2小時食用成分明確的飯。
臨床供應信息在表4-2。在該研究中所用的阿侖膦酸片劑和維生素D3的組合物和分析結果列于表4-3和4-4。
表4-2臨床供應
表4-3阿侖膦酸片劑特征
表4-4維生素D3顆粒粉劑特征
過夜禁食(除了水)后施用所有劑量。受試者服用一片阿侖膦酸70-mg片劑和240mL普通自來水。當受試者將5600IU的維生素D3劑量與阿侖膦酸一起服用時，要求受試者重懸(resuspend)并將阿侖膦酸70-mg片劑和維生素D3劑量(以顆粒型提供并在研究地點在水中重構)共同服用。與每個阿侖膦酸劑量一起服用的液體的總體積是240mL。在研究藥物施用后受試者再保持禁食狀態2小時，隨后食用成分確定的飯。在藥物施用和成分確定飯之間受試者保持直立2小時。通過至少14天的時間間隔隔離每個劑量周期。
在下列時間間隔收集用于阿侖膦酸分析的尿樣本，用于藥代動力學分析服藥前2-0小時、服藥后0-8小時、服藥后8-24小時以及服藥后24-36小時。恰在研究藥物施用前2小時期間所獲得的尿收集提供基線阿侖膦酸測定。將所有尿樣本收集到預先稱重的聚丙烯容器中。對于服藥后0-到8-、8-到24-、和24-到36小時尿收集，向容器中添加12.5克硼酸作為定時時間間隔開始時的防腐劑。在每個定時收集時間間隔的終點，稱量整個尿收集，測量比重以及測定凈體積。在原位將尿樣本酸化。每200mL尿添加5mL 6.0N鹽酸(HCl)以使尿樣本pH≤2.0。酸化后，攪拌尿樣本并將樣本等分到聚丙烯容器內冷凍貯藏(-20℃)直到完成高效液相層析(HPLC)分析。使用每個時期的總的尿體積，包括硼酸和HCl的體積，測定特定時間間隔的阿侖膦酸的尿排泄。
測定人尿中阿侖膦酸的分析方法包括3個不同的操作(1)從尿中分離分析物和內標準(帕米膦酸鈉(pamidronate))，(2)強熒光衍生物的形成，和(3)所得衍生物的HPLC分離和熒光檢測。通過添加氯化鈣和氫氧化鈉，尿中的阿侖膦酸和內標準與天然存在的磷酸鹽共沉淀。將通過離心分離的沉淀在1M鹽酸中重構并應用到在pH 4的乙酸緩沖的溶液中的陰離子交換二乙胺(DEA)柱體。通過0.20M檸檬酸鈉和0.20M二元磷酸鈉的溶液(調整到pH 9)從DEA柱體中洗脫阿侖膦酸。在室溫在存在N-乙酰-D-青霉胺時，用2，3-萘二羧基醛衍生阿侖膦酸。然后將衍生物應用到由苯乙烯和二乙烯苯的共聚物所組成的非二氧化硅基礎的聚合柱。流動相最初由85％ 0.025M檸檬酸鈉、0.025M二元磷酸鈉(pH 6.95)和15％乙腈組成，流速為1mL/分鐘。通過將乙腈提高到50％除去后來洗脫的尿的內源性成分。試驗在5ng/mL和125ng/mL之間的人類尿液中得到證實，變異系數低于10％。需要5-mL尿樣本以獲得1-ng/mL的檢測限度。
通過將所分析等分試樣中的阿侖膦酸的濃度乘以時間間隔的總的尿體積(包括硼酸和鹽酸)，測定特定時間間隔(-2-0、0-8、8-24、24-36小時)的阿侖膦酸的總的尿排泄。
使用適于2期、交叉設計的方差(ANOVA)模型的分析，進行70-mg阿侖膦酸片劑加5600IU維生素D3與單獨70-mg阿侖膦酸片劑的總尿排泄的比較。ANOVA模型含有順序、受試者(順序)、時期和治療的因素。將總尿排泄進行log轉換。用于正態性的Shapiro-Wilk檢驗的結果，連同模型的剩余的圖，不提示ANOVA模型的假設的任何偏離。為了估計70-mg阿侖膦酸片劑加維生素D3對單獨70-mg阿侖膦酸片劑的相對生物利用率，根據總尿排泄的GMR的t分布，計算95％CI。另外，也計算真GMR高于臨床上重要的0.50邊界的后驗概率。
從上述分析中去掉一個受試者，因為該特殊受試者所有3個收集間隔(0-8、8-24和24-36小時)的尿阿侖膦酸濃度均低于兩種治療的定量限度。由于治療程序次序的輕微不平衡，報告總的尿排泄的最小平方均數。從分析中除去該受試者的數據。
通過ANOVA模型的后轉化獲得最小平方均數。所有p值在報告前四舍五入到3位小數。認為報告p≤0.050的結果有顯著意義。
表4-5顯示每名受試者的70-mg阿侖膦酸片劑加維生素D3和70-mg阿侖膦酸片劑的阿侖膦酸鈉的總尿排泄。在表4-6中是阿侖膦酸的總尿排泄的總結性統計數值和GMR，具有其對應的95％CI。
70-mg阿侖膦酸片劑加5600IU維生素D3的總尿排泄的最小平方幾何均值是183.61，單獨的70-mg阿侖膦酸片劑是157.97μg。相對于單獨的阿侖膦酸，70-mg阿侖膦酸+維生素D3的GMR和其對應的95％CI是1.16(0.74，1.83)。GMR可能高于臨床上重要的0.50邊界的后驗概率是0.999。
表4-5施用單劑量70mg阿侖膦酸片劑加5600IU維生素D3和單獨施用的70mg阿侖膦酸后36小時，個人阿侖膦酸的總的尿排泄(μg)
表4-6施用70mg阿侖膦酸加維生素D3和單獨的70mg阿侖膦酸的單劑量后36小時的阿侖膦酸的總尿排泄(μg)的總結性統計數值和具有相應的95％CI的幾何均值比
實施例5維生素D3(阿侖膦酸/維生素D片劑中所含有的)對阿侖膦酸吸收的影響為了檢查阿侖膦酸和口服施用的維生素D3之間相互作用的可能性，14名健康的成年受試者(6男，8女，年齡在33-61歲)服用一片無維生素D3的70-mg阿侖膦酸，以及連同懸于240mL水中的維生素D3粉劑(5600IU)。該研究是開放的，隨機的，交叉的雙向設計。該研究的目的是獲得與維生素D3一同服用70-mg片劑后，相對于不與維生素D3一同服用的阿侖膦酸，阿侖膦酸的相對生物利用率的初步估計。
在兩個時期的每一時期中，口服施用70-mg片劑阿侖膦酸。在一個時期中，將片劑與在普通自來水中重構的維生素D3粉劑一同施用，在另一個時期中將片劑連同普通自來水一起服用。收集阿侖膦酸的每個劑量前2小時和后36小時的尿液用于所排泄的阿侖膦酸的分析測定。根據服藥后36小時的阿侖膦酸的總的尿回收，估計相對的生物利用率。
無維生素D3的70-mg阿侖膦酸的劑量后，阿侖膦酸的尿回收是202μg，具有90％CI(126μg，279μg)，連同維生素D3一起施用70-mg劑量后，回收平均為238μg，具有90％CI(159μg，316μg)。估計幾何均值比(90％CI)為1.18(0.80，1.74)。該研究顯示，口服維生素D3連同口服劑量的阿侖膦酸對不影響阿侖膦酸的生物利用率最小。
實施例6維生素D3和阿侖膦酸的穩定研究已研究了含有阿侖膦酸鈉(70mg無水游離酸等同物)和維生素D3(2800I.U./70μg)的組合片劑形式的本發明組合物的穩定性。
表6-1含有阿侖膦酸/維生素D組合片劑的實施方案的片劑組合物。所有賦形劑是大綱級并且選擇用以達到最大的物理和化學穩定性。
表6-1片劑組合物
*26.67克Dry維生素D3100顆粒含有105,000IU/g維生素D3阿侖膦酸試驗和溶解方法可使用具有前柱9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)衍生化的反相HPLC，與已報道的FOSAMAX_片劑的方法類似。維生素D3試驗和降解法也可以是能分辨并定量維生素D3以及維生素D3的多個可能的降解產物的反相梯度HPLC法(RP-HPLC)。維生素D3含量均勻性和溶解試驗也使用反相HPLC。由于維生素D3的不良的水溶解度，溶解方法可使用表面活性劑介質(1％SDS)。由于組合片劑的低維生素D3效能(70μg)，可在500mL基質中使用三片以獲得適當的信號。
下面提供在30℃/65％RH和40℃/75％RH貯藏的一批組合物片劑的52周的試驗和降解產物數據(見表6-2和6-3)。盡管產生的數據的確表明維生素D3有輕微降解，但是這些數據證明本發明組合物的實施方案的可接受的穩定性。在更高的溫度時在鋁泡眼和無干燥劑的HDPE瓶中發現更多的降解。
表6-2維生素D3穩定性試驗結果的總結阿侖膦酸鈉70mg/維生素D32800I.U.組合片劑
表6-3維生素D3降解穩定性結果的總結阿侖膦酸鈉70mg/維生素D3 2800I.U.組合片劑，箔對箔鋁泡眼
維生素D3降解穩定性結果的總結阿侖膦酸鈉70mg/維生素D32800I.U.組合片劑，75cc HDPE瓶，每瓶4片，和一個1克干燥劑
實施例7維生素D3和阿侖膦酸的藥代動力學在236名年齡在18-65歲的健康非懷孕婦女和男性中進行開放標記、隨機、兩部分、兩期、交叉研究。該研究在兩個部分(部分I和II)中進行，每個部分由一個兩期、交叉設計構成。每個受試者僅參加研究中的一個部分(即，每個受試者僅在部分I或僅在部分II中)。在研究的每個部分內受試者按順序進入研究，在研究的每個部分內在治療間之間具有至少12天的沖失(washout)期。部分I包括治療A和B，部分II包括治療A和C。治療由下列方案構成治療A-根據下面的表7-3，70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑的單劑量；治療B-根據下面表7-2，70mg阿侖膦酸的單劑量；治療C-根據下面表7-4，2800IU維生素D3片劑(含有取代阿侖膦酸的安慰劑賦形劑)的單劑量。
在部分I中，每個時期在服用劑量前2小時開始，和之后36小時收集尿，用于測定阿侖膦酸的總的尿排泄。在部分II中，每個時期在服藥前24、18、12和6小時、在0小時(恰在服藥前)、和在服藥后120小時中所選擇的時間收集血液樣本用于血清維生素D3測定。
研究的部分I評估根據下面表7-3的70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和根據下面表7-2的70mg阿侖膦酸片劑中阿侖膦酸的生物等效性。研究的部分II評估服用70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑后所獲得的維生素D3的血清藥代動力學(AUC0-120小時，Cmax)。2800IU維生素D3片劑含有2800IU維生素D3和阿侖膦酸/維生素D3組合片劑中的無活性的賦形劑。
部分I中的主要藥代動力學參數是服用口服劑量后0-36小時的阿侖膦酸的總的尿排泄。由于口服后血漿濃度低并且很難檢測，因此阿侖膦酸的總尿排泄的測定與以前的通過尿排泄表征阿侖膦酸的口服生物利用率的研究一致。
部分II中主要藥代動力學參數是維生素D3的AUC0-120小時和Cmax。在每個時期的下列時間點收集血液用于血清維生素D3濃度的測定服藥前-24、-18、-12和-6小時、0小時(恰在服藥前)、和在服藥后2、3、5、7、16、24、36、48、72、96和120小時。
收集研究藥物施用前24小時的血清維生素D3濃度以提供在控制的環境中24小時后維生素D3的內源性水平的行為的指示。由于在皮膚中通過暴露于紫外線光合成維生素D3，因此使受試者住在研究單位并且在采集藥代動力學樣本時間期間(例如，144小時，從服藥前24小時直到服藥后120小時)不暴露于直接的陽光。要求受試者擦防曬霜(SPF 45)并在整個研究中限制陽光照射，包括沖失期間。也限制受試者食用已知高維生素D3的食物(例如，鮭魚、青魚、鯖、鱈魚、金槍魚、箭魚、牡蠣和沙丁魚)以及已知補充維生素D3的食物(例如，某些谷類食品、強化奶和一些酸乳酪)。
部分I中的每名受試者以隨機、交叉方式接受70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑的一個口服劑量和70mg阿侖膦酸的一個口服劑量。部分II的受試者以隨機、交叉方式接受70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑的一個口服劑量和2800IU維生素D3片劑的一個口服劑量。在服藥前夜2100小時開始的過夜禁食(除了水)后，將劑量與240mL普通自來水一起服用。要求受試者在服藥和成分確定的飲食之間不能躺下并且保持直立(至少45度角、坐著或站立)。受試者禁食直到標準的飲食，其在服藥后2小時給予。服用阿侖膦酸/維生素D3組合片劑的過程與服用阿侖膦酸的那些過程相同。
在下面的表7-1至7-4中闡述研究中所服用的組合物。
表7-1臨床供應
表7-270mg阿侖膦酸片劑
表7-370mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑
表7-42800IU維生素D3片劑
通過對最后樣本收集的梯形法，使用未調整的維生素D3的濃度(Ct)計算服藥后0-120小時的血清對時間曲線下的面積(AUC0-120小時)。為了計算目的，將濃度比定量試驗限度(LOQ)更低的樣本指定為零。通過檢查所測量的血清中維生素D3的濃度和樣本收集的實際記錄時間，獲得所觀察到的最大濃度(Cmax)和Cmax的時間(Tmax)。也以三個不同方法測量血清中維生素D3的濃度分布圖，其中的兩個以下面所討論的方式說明基線維生素D3血清濃度。以相同的方式計算AUC0-120小時、Cmax和Tmax。
使用阿侖膦酸/維生素D3組合片劑對單獨的阿侖膦酸片劑的阿侖膦酸的總尿排泄的GMR，估計70mg阿侖膦酸片劑/2800IU維生素D3組合片劑相對于單獨的70mg阿侖膦酸片劑的生物利用率。使用AUC0-120小時和Cmax的GMR(阿侖膦酸加維生素D3/單獨的維生素D3)，估計70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑對單獨的2800IU維生素D3片劑的相對生物利用率。
使用三種不同的方法，比較服用70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑后維生素D3單劑量藥代動力學。在第一種方法中，服用兩種治療后比較內源性維生素D3血清濃度的維生素D3藥代動力學。
使用該方法，使用對2期、交叉設計的適當的ANOVA模型比較服用70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑后，內源性維生素D3血清濃度的維生素D3單劑量藥代動力學(AUC0-120小時和Cmax)。在藥代動力學參數上使用適當的轉化(即，對AUC0-120小時、Cmax的log轉化，對Tmax的排列，以及對表觀t1/2的倒轉)。報道后轉化的總結性統計數值和推論性結果。檢驗ANOVA模型假設的正態性。對于AUC0-120小時和Cmax通常滿足正態性假設。
為了估計70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑中的維生素D3相對于2800IU維生素D3片劑中的生物利用率，90％CI，根據t-分布，計算AUC0-120小時和Cmax的GMR(70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑/2800IU維生素D3片劑)并然后與預先指定的生物等效性范圍(0.80，1.25)比較。也提供維生素D3的Tmax的總結性統計數值和治療之間的比較。
作為測量藥代動力學參數的另一種方法，血漿中服藥前維生素D3的考慮明確地導致發展用于觀察試驗期間維生素D3濃度變化的模型。該模型考慮從基線維生素D3血漿濃度中減去貢獻并能估計只由該化合物的口服施用引起的藥代動力學參數。該模型基于下列假設(1)當沒有施用外源性維生素D3時，作為時間的函數(Ct＝Ci+Cm·t，其中Ci和Cm是直線的截距和斜率，t是相對于劑量服用的小時數)，背景濃度以大約線性方式改變；(2)內源性的和攝取的維生素D3的藥代動力學行為相互之間是獨立的，就是說，身體以相同的方式處理內源性可獲得的維生素D3。無論添加的劑量是否是攝入的(在該研究的上下文中是治療的和未治療的)，在劑量施用前在體內存在可變量的該化合物時，也同樣地處理攝入的維生素D3；(3)以與當施用內源性化合物(大部分藥物產物)時所觀察到的類似的藥物動力學方式服用劑量后，濃度分布圖回到基線，(即，回到基線的末期相將是log線性)。
根據這些假設，通過最小平方最小化法描述該方式的基線的總和的函數Ct＝Ci+Cm·t和兩室模型(見下面等式)適合個體Ct對t分布圖(-24到服藥后120小時)，使用在微軟EXCEL(Solver Routine)中所進行的普遍減少的梯度非線性優化法。強制該適合以產生近似接近基線log線性行為的終末相。然后使用每個分布圖的最適系數以在服藥后0-120小時的范圍內插入基線值并且從每個分布圖中減去所插入的基線。
Ct=Ci+Cmt+Ae-kd(t-tlog)+Be-ke1(t-tlog)-(A+B)e-ka(t-tlog)]]>其中t＝相對于劑量服用的時間Ct＝預測的血清中維生素D3的濃度Ci＝預測的在t＝0時的基線值
Cn＝預測的基線的斜率以及A、B、Kd、Ke1和Ka是具有第一順序吸收的兩室模型的參數，tlag是口服維生素D3后的個體吸收延遲。
以與上述使用第一測量法相同的方式計算使用該模型所測量的藥代動力學參數(AUC0-120小時、Cmax、Tmax)。在下面的表7-5中表示36小時后阿侖膦酸的總尿排泄的總結性的統計數值。之后，對于70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和單獨的70mg阿侖膦酸，單劑量、阿侖膦酸的總尿排泄的LS均值分別是197.5和191.9μg。阿侖膦酸(70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑對單獨的70mg阿侖膦酸片劑)的總的尿排泄的GMR和相應的90％CI是1.03(0.91，1.17)。90％CI落入預先確定的生物等效性范圍(0.80，1.25)內。
表7-5服用單劑量的70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑或單獨的70mg阿侖膦酸片劑后，阿侖膦酸(μg)總的尿排泄的總結性統計數值和具有相應的90％置信區間的GMR
關于血漿測量值，對于70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑，維生素D3AUC0-120小時(不考慮內源性維生素D3血清濃度)的LS均值分別是296.4和337.9ng·h/mL(表7-6)。AUC0-120小時GMR(阿侖膦酸加維生素D3組合片劑/維生素D3片劑)是0.88，具有90％CI(0.81，0.95)。
表7-6服用70mg阿侖膦酸加2800IU維生素D3組合片劑或單獨的2800IU維生素D3片劑的單劑量后，不考慮內源性維生素D3血清濃度的維生素D3AUC0-120小時(ng.hr/ml)的總結性統計數值和具有相應的90％置信區間的GMR
對于70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑，維生素D3Cmax的LS均值，不考慮內源性維生素D3血清濃度，分別是5.9和6.6ng/mL(表7-7)。Cmax的GMR(阿侖膦酸加維生素D3組合片劑/維生素D3片劑)是0.89，具有90％CI(0.84，0.95)。AUC0-120小時的90％CI和不考慮維生素D3血清濃度的CmaxGMR，落入預先確定的生物等效性范圍(0.80，1.25)內。
表7-7服用70mg阿侖膦酸加2800IU維生素D3組合片劑或單獨的2800IU維生素D3片劑的單劑量后，不考慮內源性維生素D3血清濃度的維生素D3Cmax(ng/mL)的總結性的統計學數值和具有相應的90％置信區間的GMR
表7-8顯示不考慮內源性維生素D3Tmax血清濃度，從血清分布圖中獲得的維生素D3的統計分析的結果。具有和不具有阿侖膦酸的維生素D3的中間Tmax分別是12.0和9.0小時。觀察到治療之間沒有顯著差異(p值＞0.200)。
表7-8服用70mg阿侖膦酸加2800IU維生素D3組合片劑或單獨的2800IU維生素D3片劑的單劑量后，不考慮內源性維生素D3血清濃度，從血清分布圖中獲得的維生素D3Tmax(小時)的總結性統計數值
對于70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑，維生素D3AUC0-120小時的LS均值分別是297.5和336.7ng·h/mL(表7-9)。AUC0-120小時GMR(阿侖膦酸加維生素D，組合片劑/維生素D3片劑)是0.88，具有90％CI(0.82，0.95)。
表7-9服用70mg阿侖膦酸加2800IU維生素D3組合片劑或單獨的2800IU維生素D3片劑的單劑量后，以時間＝0時服藥前維生素D3濃度作為Covariate，維生素D3AUC0-120小時(ng·h/ml)的總結性統計數值和具有相應的90％置信區間的GMR
對于70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑，維生素D3的LS均值Cmax分別是5.9和6.6ng/mL，如下面的表7-10所示。CmaxGMR(70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑/2800IU維生素D3片劑)是0.90，具有90％CI(0.85，0.95)。AUC0-120 小時和具有在時間＝0時的服藥前維生素D3濃度作為covariate的CmaxGMR的90％CI，落入預先指定的生物等效性范圍(0.80，1.25)內。
表7-10服用70mg阿侖膦酸加2800IU維生素D3組合片劑或單獨的2800IU維生素D3片劑后，具有在時間＝0時的服藥前維生素D3濃度作為Covariate的維生素D3Cmax(ng/ml)的總結性統計數值和具有相應的90％置信區間的GMR
在表7-11中總結使用基于模型的維生素D3基線濃度所測量的維生素D3的AUC0-120小時的數據分析的結果。對于70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑，使用基于模型的維生素D3基線濃度所測量的維生素D3AUC0-120小時的LS均值分別是143.1和169.lng·h/mL。AUC0-120小時GMR(阿侖膦酸加維生素D3組合片劑/維生素D3片劑)是0.85，具有90％CI(0.76，0.94)。90％CI的更低限度恰好落入預先指定的更低的0.80范圍下面。
表7-11服用70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑的單劑量后，使用基于模型的維生素D3基線濃度測量的維生素D3AUC0-120小時(ng.hr/ml)的總結性統計數值和具有相應的90％置信區間的GMR
對于70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑和2800IU維生素D3片劑，使用基于模型的維生素D3基線濃度所測量的維生素D3的LS均值Cmax分別是4.0和4.6ng/mL，如表7-12所示。CmaxGMR(70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑/2800IU維生素D3片劑)是0.88，具有90％CI(0.83，0.93)。使用基于模型的維生素D3基線濃度所測量的CmaxGMR的90％CI落入預先指定的生物等效性范圍(0.80，1.25)內。
表7-12服用70mg阿侖膦酸加2800IU維生素D3組合片劑或單獨的2800IU維生素D3片劑的單劑量后，使用基于模型的維生素D3基線濃度所測量的維生素D3Cmax的總結性統計數值和具有相應的90％置信區間的GMR
表7-13顯示從使用基于模型的基線維生素D3Tmax濃度所測量的分布圖中獲得的維生素D3的統計分析的結果。具有或沒有阿侖膦酸的維生素D3的中位數Tmax分別是12.0和9.0小時。觀察到治療之間沒有顯著差異(p值＞0.200)。
表7-13服用70mg阿侖膦酸加2800IU維生素D3組合片劑或單獨的2800IU維生素D3片劑的單劑量后，從使用基于模型的基線維生素D3濃度測量的分布圖中獲得的維生素D3Tmax(小時)的總結性統計數值
在表7-14中總結了使用基于模型的維生素D3背景濃度所測量的維生素D3的t1/2的數據分析的結果。具有和不具有阿侖膦酸的維生素D3的調和平均表觀t1/2分別是24.0和25.5小時觀察到治療之間沒有顯著差異(p值＞0.200)。
表7-14服用70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3組合片劑或單獨的2800IU維生素D3片劑的單劑量后，使用基于模型的維生素D3基線濃度所測量的維生素D3的表觀t1/2(小時)的總結性統計數值
實施例8降解檢測法已發展了用于阿侖膦酸/維生素D3組合片劑(70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3)中維生素D3的組合物分析的方法。從溶于約50mL 5％水/95％甲醇稀釋液的15個片劑中提取維生素D3。將溶液攪拌10分鐘，超聲處理30分鐘，以及再攪拌3小時。將樣本離心并將100μL的上清液注射到用于反相HPLC分析的Phenomenex Phenosphere 80_ODS(1)柱(150×4.6mm，3μm)上。該方法是具有265nm檢測波長的65分鐘梯度法。定量前維生素D3和維生素D3峰并合計以計算樣本中維生素D3的總量。證實該方法達到滿意的特異性、線性、回收、精確、再現性、溶解穩定性、靈敏度和強大。
下面列出示例性的層析條件
梯度時間表
組合片劑的制劑組合物(70mg阿侖膦酸/2800IU維生素D3)
*26.7克Dry維生素D3100顆粒含有105,000IU/g維生素D3在表8-1中呈現關于維生素D3的賦形劑峰和具有它們的典型的保留時間和相對的保留時間(RRT)的降解物。如圖5所示，維生素D3的主要降解途徑是光異構化、熱異構化以及酯基轉移。
表8-1用于組合片劑的峰鑒別的總結
通過注射不同濃度的維生素D3溶液并選擇具有信號-噪音比高于10的最低濃度，測定定量的限度(LOQ)。測定LOQ是約9ng/mL(注射體積100μL)，其是對于10次重復測定具有平均信號-噪音比為11.1的該方法濃度的0.04％。
實施例9每周一次服藥方案可制備含有根據阿侖膦酸活性，約70mg阿侖膦酸和約5,600IU維生素D的阿侖膦酸和維生素D片劑或其它固體制劑。(見實施例1、2和3)。可向受試者每周一次口服施用該片劑或其它固體劑型，即，優選地約每7天一次(例如，每個星期天)，至少一年的周期。預計該施用方法在提供維生素D營養的時候可用于和便于治療或預防骨質疏松。也預計該方法可用于改善受試者接受和順從性，并且確保所有服用二膦酸的受試者接受足夠的維生素D營養。
可選擇地，可制備含有根據阿侖膦酸活性，約70mg阿侖膦酸和約2,800IU維生素D的阿侖膦酸和維生素D片劑或其它固體制劑。(見，例如，實施例1和3)。可向受試者每周一次口服施用該片劑或其它固體劑型，即，優選地約每7天一次(例如，每個星期天)，至少一年的周期。預計該施用方法在提供維生素D營養的時候可用于和便于治療或預防骨質疏松。也預計該方法可用于改善受試者接受和順從性，并且確保所有服用二膦酸的受試者接受足夠的維生素D營養。
可選擇地，可制備含有根據阿侖膦酸活性，約35mg-約70mg阿侖膦酸和約2,800IU維生素D的阿侖膦酸和維生素D片劑或其它固體制劑。(見，例如，實施例3)。可向受試者每周一次口服施用該片劑或其它固體劑型，即，優選地約每7天一次(例如，每個星期天)，至少一年的周期。預計該施用方法在提供維生素D營養的時候可用于和便于治療或預防骨質疏松。也預計該方法可用于改善受試者接受和順從性，并且確保所有服用二膦酸的受試者接受足夠的維生素D營養。
可制備含有根據阿侖膦酸活性，約280mg阿侖膦酸和約5,600IU維生素D的阿侖膦酸和維生素D片劑或其它固體制劑。(見，例如，實施例2和3)。可向受試者每周一次口服施用該片劑或其它固體劑型，即，優選地約每7天一次(例如，每個星期天)，至少1-6個月的周期。預計該施用方法在提供維生素D營養的時候可用于和便于治療Paget病。也預計該方法可用于改善受試者接受和順從性，并且確保所有服用二膦酸的受試者接受足夠的維生素D營養。
可選擇地，可制備含有根據阿侖膦酸活性，約280mg阿侖膦酸和約2,800IU維生素D的阿侖膦酸和維生素D片劑或其它固體制劑。(見，例如，實施例3)。可向受試者每周一次口服施用該片劑或其它固體劑型，即，優選地約每7天一次(例如，每個星期天)，至少1-6個月的周期。預計該施用方法在提供維生素D營養的時候可用于和便于治療Paget病。也預計該方法可用于改善受試者接受和順從性，并且確保所有服用二膦酸的受試者接受足夠的維生素D營養。
可制備含有根據阿侖膦酸活性，約280mg阿侖膦酸和5,600IU或2,800IU維生素D的阿侖膦酸和維生素D片劑或其它固體制劑。(見，例如，實施例1、2和3)。可向受試者每周一次口服施用該片劑或其它固體劑型，即，優選地約每7天一次(例如，每個星期天)。預計該施用方法在提供維生素D營養的時候可用于和便于治療轉移性骨病。也預計該方法可用于改善受試者接受和順從性，并且確保所有服用二膦酸的受試者接受足夠的維生素D營養。
可在不偏離本發明或權利要求的范圍或精神，對本發明的方法和組合物進行各種修飾用于抑制骨吸收，這對于本領域的那些技術人員將會是顯而易見的。也打算本發明和所附的權利要求覆蓋發明和組合物的修飾、變化和等同物用于抑制本發明的骨吸收。
權利要求
1.一種藥物組合物，包含二膦酸、二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物；以及維生素D化合物。
2.權利要求1的藥物組合物，其中二膦酸具有化學式 其中，R1獨立地選自H、OH和Cl，R2獨立地選自CH3、Cl、CH2CH2NH2、(CH2)3NH2、CH2-3-吡啶基、CH2-S-苯基-Cl、CH2CH2N(CH3)(戊基)、CH2-咪唑、CH2-2-咪唑并-吡啶基、N-(環庚基)、CH2CH(CH3)2、(CH2)5NH2、和CH2-1-吡咯烷基，及其它們的組合。
3.權利要求1的藥物組合物，其中二膦酸包括阿侖膦酸或其藥學上可接受的鹽。
4.權利要求3的藥物組合物，其中阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽選自阿侖膦酸一鈉、阿侖膦酸一鈉一水合物和阿侖膦酸一鈉三水合物。
5.權利要求1的藥物組合物，其中該藥物組合物包含約100IU-約36,000IU的維生素D化合物。
6.權利要求5的藥物組合物，其中維生素D化合物是膽鈣化固醇。
7.權利要求1的藥物組合物，其中該藥物組合物包含約0.5mg-約1120mg二膦酸，或者二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物。
8.權利要求1的藥物組合物，其中該藥物組合物包含約2,800IU膽鈣化固醇和約70mg阿侖膦酸或阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物。
9.權利要求1的藥物組合物，其中該藥物組合物包含約5,600IU膽鈣化固醇和約70mg阿侖膦酸或阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物。
10.權利要求1的藥物組合物，進一步包含選自填充劑、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、助流劑或崩解劑中的一種或多種賦形劑。
11.權利要求1的藥物組合物，進一步包含選自無水乳糖、微晶纖維素、膠體二氧化硅、交聯羧甲基纖維素鈉或硬脂酸鎂中的一種或多種賦形劑。
12.權利要求11的藥物組合物，其中藥物組合物包含約0.5％-約90％重量的阿侖膦酸鈉、約1％-約70％重量的膽鈣化固醇顆粒(等于約0.0005％-約20％重量的膽鈣化固醇)、約10％-約80％重量的無水乳糖、約5％-約50％重量的微晶纖維素、約0.1％-約5％重量的膠體二氧化硅、約0.5％-約10％重量的交聯羧甲基纖維素鈉和約0.5％-約5％重量的硬脂酸鎂。
13.權利要求6的藥物組合物，其中膽鈣化固醇包括藥物級膽鈣化固醇。
14.權利要求13的藥物組合物，其中藥物組合物適于以每周一次、每兩周一次、每月一次、每月兩次和每兩月一次的時間間隔施用。
15.一種在哺乳動物中預防、抑制、減少或治療代謝性骨病的方法，包括向哺乳動物施用包含二膦酸，二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物，和維生素D化合物的藥物組合物。
16.權利要求15的方法，其中二膦酸包括阿侖膦酸或其藥學上可接受的鹽。
17.權利要求15的方法，其中維生素D化合物是膽鈣化固醇。
18.權利要求17的方法，其中維生素D化合物包括約100IU-約36,000IU膽鈣化固醇，其中二膦酸化合物包括約0.5mg-約1120mg阿侖膦酸，或者阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物。
19.權利要求15的方法，其中二膦酸包括阿侖膦酸一鈉三水合物，藥物組合物包含約2.5mg-約560mg阿侖膦酸一鈉三水合物。
20.權利要求18的方法，其中藥物組合物包含約2800IU膽鈣化固醇，以及約70mg阿侖膦酸或阿侖膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物。
21.權利要求15的方法，其中代謝性骨病選自骨質疏松、絕經后骨質疏松、類固醇誘導的骨質疏松、男性骨質疏松、其它疾病誘導的骨質疏松、原發性骨質疏松以及糖皮質激素誘導的骨質疏松。
22.權利要求15的方法，包括向患有維生素D缺乏或不足的哺乳動物施用包含二膦酸，二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物；和膽鈣化固醇的藥物組合物。
23.用于在哺乳動物中預防、抑制、減少或治療關節炎病癥的方法，包括向哺乳動物施用權利要求1的藥物組合物，該組合物包含二膦酸，二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物；和維生素D化合物。
24.用于在哺乳動物中預防、抑制、減少或治療骨吸收的方法，包括向哺乳動物口服施用權利要求1的藥物組合物，其中根據具有每周一次的服藥間隔的連續的給藥時間表，藥物組合物作為單位劑量施用。
25.用于在哺乳動物中預防、抑制、減少或治療骨質疏松的方法，包括向哺乳動物口服施用權利要求1的藥物組合物，其中根據具有每周一次的服藥間隔的連續的給藥時間表，藥物組合物作為單位劑量施用。
26.用于在哺乳動物中減少骨折風險的方法，包括向哺乳動物口服施用權利要求1的藥物組合物，其中根據具有每周一次的服藥間隔的連續的給藥時間表，藥物組合物作為單位劑量施用。
27.一種制備阿侖膦酸-膽鈣化固醇組合物的方法，包括制備包含阿侖膦酸的粉末混合物；將粉末混合物壓緊以形成阿侖膦酸混合物；碾磨并將阿侖膦酸混合物與膽鈣化固醇顆粒混合以形成終混合物；以及潤滑并壓縮終混合物。
28.一種制備阿侖膦酸-膽鈣化固醇固體劑型的方法，包括將阿侖膦酸、膠體二氧化硅、無水乳糖、微晶纖維素和交聯羥甲基纖維素鈉混合以形成預混合物；將預混合物和硬脂酸鎂混合以形成第一潤滑的混合物；滾筒壓緊第一潤滑的混合物以形成壓緊的帶狀物；碾磨壓緊的帶狀物以形成潤滑的混合物；將潤滑的混合物與膽鈣化顆粒混合以形成第二潤滑的混合物；以及將第二潤滑的混合物壓縮成固體劑型。
29.由權利要求28的方法所制備的藥物組合物。
30.由如下方法所制備的權利要求1的藥物組合物，包括將包括約0.5％-約90％重量的阿侖膦酸鈉、約0.1％-約5％重量的膠體二氧化硅、約10％-約80％重量的無水乳糖、約5％-約50％重量的微晶纖維素、約0.5％-約10％重量的交聯羧甲基纖維素鈉和約0.5％-約5％重量的硬脂酸鎂的成分混合以形成第一混合物；滾筒壓緊第一混合物以形成壓緊的帶狀物；碾磨壓緊的帶狀物以形成潤滑的混合物；將潤滑的混合物與約1％-約70％重量的膽鈣化固醇顆粒(等于約0.0005％-約20％重量的膽鈣化固醇)混合以形成第二混合物；和將第二混合物壓縮成固體劑型。
31.權利要求6的藥物組合物，其中配制組合物以便在約＜30℃和約＜30％相對濕度貯藏24月后包含膽鈣化固醇的每種異構體小于約1％重量。
32.權利要求6的藥物組合物，其中配制組合物以便在約＜30℃和約＜30％相對濕度貯藏24月后包含小于約5％重量的膽鈣化固醇的降解物。
33.一種藥物組合物，包含二膦酸，二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物；膽鈣化固醇；其中膽鈣化固醇的治療作用基本上類似于施用一周每天約400IU膽鈣化固醇的治療作用；其中藥物組合物適于每周一次服藥。
34.一種測量權利要求1的藥物組合物中膽鈣化固醇的方法，包括從藥物組合物中提取膽鈣化固醇到第一溶液中以形成第二溶液；從第二溶液中分離含有膽鈣化固醇的樣本；和檢測樣本中膽鈣化固醇的量；其中使用反相高效液相層析(HPLC)分離法進行檢測。
35.權利要求34的方法，其中進行檢測以檢測每個藥物組合物中約2800IU-約5600IU膽鈣化固醇。
36.權利要求34的方法，其中檢測具有小于約9ng/mL膽鈣化固醇的膽鈣化固醇定量限度(LOQ)。
37.權利要求34的方法，其中使用具有無末端加帽或部分末端加帽的反相HPLC柱進行檢測。
38.權利要求34的方法，其中使用具有碳負荷小于約10％碳的反相HPLC柱進行檢測。
39.在哺乳動物體內保持藥學上有效量的膽鈣化固醇的方法，包括每周一次施用權利要求1的藥物組合物，該組合物包含約70mg二膦酸，二膦酸的藥學上可接受的鹽、衍生物或水合物，或其混合物；和約2800IU膽鈣化固醇。
40.權利要求1的藥物組合物，其中二膦酸是阿侖膦酸鈉，施用組合物的哺乳動物之阿侖膦酸鈉血漿濃度的圖基本上類似在無膽鈣化固醇時施用70mg阿侖膦酸鈉的哺乳動物的血漿濃度的圖。
41.權利要求1的藥物組合物，其中二膦酸是阿侖膦酸鈉，施用組合物的哺乳動物之膽鈣化固醇血漿濃度的圖基本上類似在無阿侖膦酸時施用2800IU膽鈣化固醇的哺乳動物的血漿濃度的圖。
42.權利要求1的藥物組合物，其中施用組合物120小時后哺乳動物的血清濃度的圖產生至少下列之一膽鈣化固醇的最小平方(LS)均值AUC(0-120小時)是約296.4ng.h/mL，其中測量藥代動力學參數，不考慮基線膽鈣化固醇血清濃度；最小平方(LS)均值AUC(0-120小時)是約297.5ng.h/mL，其中考慮基線膽鈣化固醇血清濃度，使用服藥前0小時血清膽鈣化固醇濃度作為協變量，測量藥代動力學參數；和最小平方(LS)均值AUC(0-120小時)是約143.1ng.h/mL，其中考慮基線膽鈣化固醇血清濃度，減去120小時后估計的基線膽鈣化固醇，測量藥代動力學參數。
43.權利要求1的藥物組合物，其中施用組合物后120小時哺乳動物的血漿濃度的圖產生至少下列之一
120小時后穩態最大血漿濃度(Cmax)的最小平方(LS)均值是約5.9ng/mL，其中測量藥代動力學參數，不考慮基線膽鈣化固醇血清濃度；
120小時后穩態最大血漿濃度(Cmax)的最小平方(LS)均值是約5.9ng/mL，其中考慮基線膽鈣化固醇血清濃度，使用服用前0小時血清膽鈣化固醇濃度作為協變量，測量藥代動力學參數；和穩態最大血漿濃度(Cmax)的最小平方(LS)均值是約4.0ng/mL，其中考慮基線膽鈣化固醇血清濃度，減去120小時后估計的基線膽鈣化固醇，測量藥代動力學參數。
44.權利要求1的藥物組合物，其中施用用組合物120小時后，哺乳動物的膽鈣化固醇的血漿濃度的圖產生在約12小時發生Cmax的算術平均時間(Tmax)的膽鈣化固醇的穩態最大血漿濃度(Cmax)，其中不考慮基線膽鈣化固醇血清濃度，測量藥代動力學參數。
45.權利要求1的藥物組合物，其中哺乳動物中組合物的膽鈣化固醇的血漿濃度中位數表觀半衰期(t1/2)是約23.8小時，其中考慮基線膽鈣化固醇血清濃度，減去估計的基線膽鈣化固醇，測量藥代動力學參數。
46.測量哺乳動物血清中膽鈣化固醇的方法，包括向哺乳動物施用權利要求1的包含阿侖膦酸和膽鈣化固醇的組合物；從哺乳動物中獲得血漿樣本；從血漿樣本中提取膽鈣化固醇以形成第一溶液；將第一溶液中的膽鈣化固醇與親二烯體反應以形成膽鈣化固醇的一種或多種狄耳斯-阿德耳加成產物；使用高效液相層析(HPLC)分離法分離膽鈣化固醇的狄耳斯-阿德耳加成產物；和使用質譜檢測樣本中膽鈣化固醇的量。
47.權利要求46的方法，進一步包括向每個哺乳動物血漿樣本中添加氘化內標準膽鈣化固醇，提取、反應、分離和檢測氘化的內標準膽鈣化固醇和樣本膽鈣化固醇。
48.權利要求46的方法，其中當測量1mL血漿時檢測具有小于約0.5ng/mL膽鈣化固醇的膽鈣化固醇定量限度(LOQ)。
全文摘要
公開了在哺乳動物中用于預防、抑制、減少和治療與異常骨吸收有關的情況和疾病，包括例如骨質疏松的組合物和方法。本發明的組合物的實施方案包括適于每周一次給藥的藥學上有效量的阿侖膦酸和維生素D
文檔編號G01N33/82GK1993134SQ200480043618
公開日2007年7月4日 申請日期2004年5月19日 優先權日2004年5月19日
發明者A·G·戴弗提斯, A·登克爾, C·伊科達, B·K·馬圖斯澤夫斯基, S·馬澤爾, A·G·波拉斯, A·桑特拉, R·A·西伯格, L·朱, J·耶茨, J·D·基爾希 申請人:默克公司