專利名稱：γ－谷氨酰轉肽酶同工酶Ⅱ檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及醫學技術，是一種醫用檢測中使用的試劑盒，具體地說，是一種用來檢測和診斷肝癌的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒。
背景技術：
γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II(GGT-II)是一個重要的肝癌標志物，對于AFP≤400μg/L的肝癌的診斷有重要臨床價值，現已被定為我國肝癌臨床診斷的重要指標之一。然而，目前檢測GGT II的方法繁瑣，技術要求高，迄今為止國內僅有很少幾家大醫院能開展此項檢測。
發明內容
本實用新型的目的是提供一種檢測操作過程簡化，檢測結果有良好的質控，方法簡便、技術要求低、重復性好的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒。
本實用新型的技術解決方案是一種γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是有盒體，盒體中裝有電泳膠板及電泳緩沖液劑容器，還裝有底物及底物液容器和呈色液容器、示蹤劑容器、對照劑容器及醋酸纖維膜。
本實用新型中所述的電泳膠板上有上樣孔。電泳膠板凝膠按聚丙烯酰胺濃度自上而下分為四層。電泳緩沖液劑容器包括陰極緩沖液粉劑袋和陽極緩沖液粉劑袋。陰極緩沖液粉劑袋為袋裝Tris 1.37g、硼酸2.7g粉。陽極緩沖液粉劑袋為袋裝Tris 2.27g粉。底物及底物液容器包括底物9.6mg的γ-L-谷氨酰對硝基苯胺鹽酸容器兩支；底物液0.1mmol/L Tris-雙甘肽溶液容器。醋酸纖維膜的尺寸為10×10cm。
本實用新型的有益效果為大大簡化了檢測操作過程，并能保證檢測結果有良好的質控。運用本實用新型進行測定，方法簡便、技術要求低、重復性好，因此在臨床有廣泛的應用前景。
附圖為本實用新型的一種γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒。
以下結合附圖和實施例對本實用新型作進一步說明具體實施方式
附圖描述了本實用新型的一個實施例，在該例中，有盒體1，盒體1中裝有電泳膠板2及電泳緩沖液劑容器3、4，還裝有底物及底物液容器5、6和呈色液容器7、示蹤劑容器8、對照劑容器9及醋酸纖維膜10。所述的電泳膠板2上有上樣孔11。電泳膠板2的凝膠按聚丙烯酰胺濃度自上而下分為四層。電泳緩沖液劑容器包括陰極緩沖液粉劑袋3和陽極緩沖液粉劑袋4。陰極緩沖液粉劑袋3為袋裝Tris 1.37g、硼酸2.7g粉。陽極緩沖液粉劑袋4為袋裝Tris 2.27g粉。底物及底物液容器包括底物59.6mg的γ-L-谷氨酰對硝基苯胺鹽酸容器兩支；底物液60.1mmol/L Tris-雙甘肽溶液容器。醋酸纖維膜10的尺寸為10×10cm。
本實用新型所成功建立的GGT II電泳檢測試劑盒，省略了常規電泳必須進行的制膠、電泳緩沖液、基質緩沖液、基質反應液和呈色液的配制。不但大大簡化了操作過程，同時由于試劑盒制備過程的標準化而保證檢測結果有良好的質控。運用該檢測試劑盒進行測定，方法簡便、技術要求低、重復性好。
試劑盒組成一、電泳膠板主要由30.8％的聚丙烯酰胺、0.57mol/L的Tris-HCl分離膠緩沖液、0.41mol/L的Tris-HCl濃縮膠緩沖液及0.14％過硫酸銨配制。凝膠分為四層，聚丙烯酰胺濃度自上而下分別為4.6％，7.7％，11.6％和15.4％。
二、電泳緩沖液粉劑1、陰極緩沖液粉劑袋裝Tris 1.37g、硼酸2.7g粉(臨用前以蒸餾水溶解至300ml)。
2、陽極緩沖液粉劑袋裝Tris 2.27g粉(臨用前以蒸餾水溶解，并加1N HCL 15ml，最后加水至300ml)。
三、底物1、底物9.6mg的γ-L-谷氨酰對硝基苯胺鹽酸容器(兩支)；2、底物液B0.1mmol/L Tris-雙甘肽溶液(含N-萘乙烯二胺鹽酸鹽)。
四、呈色液10％三氯醋酸100ml，甘油2500ml，NaNO21g，加水配至1000ml。
五、示蹤劑40％的蔗糖溴酚蘭溶液。
六、對照劑陽性對照。
七、醋酸纖維膜大小為10×10cm。
檢測方法1、將電泳膠板插入電泳槽，短的玻璃面相對，壓緊膠板，分別加入稀釋好的陰、陽極電泳緩沖液。
2、以微量加樣器分別取示蹤劑5微升及待測血清20微升，混勻，加入電泳膠板的上樣孔內。同時做陽性、弱陽性、及陰性對照，取示蹤劑5微升分別與20微升陽性、弱陽性、及陰性對照劑混勻上樣。
3、加好樣后，接上電極，以恒壓60V電泳50分鐘后，改恒壓100V電泳4小時，結束電泳。
4、從電泳槽中取出電泳膠板，短玻璃面向上平放于操作臺面，以小鑷子從右下角輕輕撬起短玻璃板，取去短玻璃板，將長玻璃板連同凝膠一起放入直徑15cm的玻璃培養皿中。
5.將底物用0.2ml 1N HCL溶解后倒入另一直徑16cm的玻璃培養皿，再加底物液2ml，混勻后，以此液打濕一張醋酸纖維膜。
6、將以底物液打濕的醋酸纖維膜敷于凝膠上，注意兩者間不能留有氣泡，將直徑16cm的玻璃培養皿蓋于15cm的玻璃培養皿上，37℃卵育1小時。
7、取一干凈培養皿，加入呈色液10ml，取出醋酸纖維膜浸于其中，必須完全浸人，1分鐘后取出醋酸纖維膜，觀察膜上呈色結果。
權利要求1.一種γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是有盒體，盒體中裝有電泳膠板及電泳緩沖液劑容器，還裝有底物及底物液容器和呈色液容器、示蹤劑容器、對照劑容器及醋酸纖維膜。
2.根據權利要求1所述的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是電泳膠板上有上樣孔。
3.根據權利要求1或2所述的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是電泳膠板凝膠按聚丙烯酰胺濃度自上而下分為四層。
4.根據權利要求1或2所述的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是電泳緩沖液劑容器包括陰極緩沖液粉劑袋和陽極緩沖液粉劑袋。
5.根據權利要求4所述的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是陰極緩沖液粉劑袋為袋裝Tris 1.37g、硼酸2.7g粉。
6.根據權利要求4所述的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是陽極緩沖液粉劑袋為袋裝Tris 2.27g粉。
7.根據權利要求1或2所述的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是底物及底物液容器包括底物9.6mg的γ-L-谷氨酰對硝基苯胺鹽酸容器兩支；底物液0.1mmol/L Tris-雙甘肽溶液容器。
8.根據權利要求1或2所述的γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是醋酸纖維膜的尺寸為10×10cm。
專利摘要本實用新型公開了一種γ一谷氨酰轉肽酶同工酶II檢測試劑盒，其特征是有盒體，盒體中裝有電泳膠板及電泳緩沖液劑容器，還裝有底物及底物液容器和呈色液容器、示蹤劑容器、對照劑容器及醋酸纖維膜。其有益效果為大大簡化了檢測操作過程，并能保證檢測結果有良好的質控。運用本實用新型進行測定，方法簡便、技術要求低、重復性好，因此在臨床有廣泛的應用前景。
文檔編號G01N33/68GK2758765SQ200420078660
公開日2006年2月15日 申請日期2004年8月10日 優先權日2004年8月10日
發明者錢坤艷, 倪潤洲, 肖明兵 申請人:錢坤艷, 倪潤洲, 肖明兵