專利名稱：測定12－去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗生素藥物含量的測定方法，尤其是指一種測定12-去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法。
背景技術：
12-去羥基阿奇霉素及其制劑系一種新的抗菌物質，其化學結構式為 屬于廣譜抗菌化合物，它的抗菌特點對大多數革蘭氏細菌以及細胞內病原菌、支原體和衣原體等有較好的抗菌活性，對革蘭氏陽性細菌也有一定的抗菌活性，目前用高效色譜法測定12-去羥基阿奇霉素的含量的方法較多，用抗生素微生物檢定法測定該藥物及其制劑的含量還未見有申請行政保護的報道。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種準確度高、方便的測定12-去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法。
本發明解決上述技術問題采用的技術方案為測定12-去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法，該測定方法步驟如下第一步選取檢定菌、培養液、培養基并配制滅菌緩沖液檢定菌為短小芽孢桿菌[CMCC]63202，菌液濃度為0.3％～0.7％；培養基為I號pH7.8～8.0的抗生素檢定用培養基，滅菌緩沖液為pH7.8～8.0的磷酸鹽緩沖液，其配制方法為取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，濾過，在115℃滅菌30分鐘，備用；
第二步制備標準品溶液精密稱取阿奇霉素標準品10mg，置500ml容量瓶中，用5ml乙醇溶解后，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為標準品高劑量溶液；精密量取標準品高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，用滅菌緩沖液稀釋至刻度，作為低劑量溶液；第三步制備供試品溶液精密稱取12-去羥基阿奇紅霉素10mg，分別置500ml容量瓶中，按1ml∶2mg加乙醇溶解后，加滅菌緩沖液至刻度，搖勻，作為供試品的高劑量溶液；精密量取供試品的高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品的低劑量溶液；第四步測定取每一個供試液平底雙碟8塊，分別注入加熱融化的培養基20ml，使在碟底內均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層；另取培養基適量加熱融化后，放冷至60℃，加入短小菌懸液1.2ml，搖勻，在每一雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層，放置水平臺上冷卻后，在每一雙碟中以等距離均勻安置不透鋼小管4個，用陶瓦蓋覆蓋備用；在每一雙碟中對角的2個不銹鋼小管中，分別滴裝高濃度及低濃度的標準品溶液，其余2個小管中分別滴裝相應的高低兩種濃度的供試品溶液，37℃培養15～18小時后，取出，在抑菌圈電腦測量分析儀上測量并計算結果即可。
本發明取得的技術進步是本測定方法能有效、準確地檢測出12-去羥基阿奇霉素及其制劑的含量，在該藥品及其制劑的生產和質量控制中具有較強的實用性。
具體實施例方式
實施例一測定12-去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法，12-去羥基阿奇霉素的化學結構為
該測定方法步驟如下第一步選取檢定菌、培養液、培養基并配制滅菌緩沖液檢定菌為短小芽孢桿菌[CMCC]63202，菌液濃度為0.3％；培養基為I號pH7.8的抗生素檢定用培養基，滅菌緩沖液為pH7.8的磷酸鹽緩沖液，其配制方法為取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，濾過，在115℃滅菌30分鐘，備用；第二步制備標準品溶液精密稱取中國藥品生物制品檢定所提供的阿奇霉素標準品10mg，置500ml容量瓶中，用5ml乙醇溶解后，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為標準品高劑量溶液；精密量取標準品高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，用滅菌緩沖液稀釋至刻度，作為低劑量溶液；第三步制備供試品溶液精密稱取12-去羥基阿奇紅霉素10mg，分別置500ml容量瓶中，按1ml∶2mg加乙醇溶解后，加滅菌緩沖液至刻度，搖勻，作為供試品的高劑量溶液；精密量取供試品的高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品的低劑量溶液；第四步測定取每一個供試液平底雙碟8塊，分別注入加熱融化的培養基20ml，使在碟底內均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層；另取培養基適量加熱融化后，放冷至60℃，加入短小菌懸液1.2ml，搖勻，在每一雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層，放置水平臺上冷卻后，在每一雙碟中以等距離均勻安置不透鋼小管4個，用陶瓦蓋覆蓋備用；在每一雙碟中對角的2個不銹鋼小管中，分別滴裝高濃度及低濃度的標準品溶液，其余2個小管中分別滴裝相應的高低兩種濃度的供試品溶液，37℃培養15小時后，取出，在抑菌圈電腦測量分析儀上測量并計算結果即可。
實施例二測定12-去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法，12-去羥基阿奇霉素的化學結構為
其特征在于該測定方法步驟如下第一步選取檢定菌、培養液、培養基并配制滅菌緩沖液檢定菌為短小芽孢桿菌[CMCC]63202，菌液濃度為0.5％；培養基為I號pH7.9的抗生素檢定用培養基，滅菌緩沖液為pH7.9的磷酸鹽緩沖液，其配制方法為取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，濾過，在115℃滅菌30分鐘，備用；第二步制備標準品溶液精密稱取中國藥品生物制品檢定所提供的阿奇霉素標準品10mg，置500ml容量瓶中，用5ml乙醇溶解后，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為標準品高劑量溶液；精密量取標準品高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，用滅菌緩沖液稀釋至刻度，作為低劑量溶液；第三步制備供試品溶液精密稱取12-去羥基阿奇紅霉素10mg，分別置500ml容量瓶中，按1ml∶2mg加乙醇溶解后，加滅菌緩沖液至刻度，搖勻，作為供試品的高劑量溶液；精密量取供試品的高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品的低劑量溶液；第四步測定取每一個供試液平底雙碟8塊，分別注入加熱融化的培養基20ml，使在碟底內均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層；另取培養基適量加熱融化后，放冷至60℃，加入短小菌懸液1.2ml，搖勻，在每一雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層，放置水平臺上冷卻后，在每一雙碟中以等距離均勻安置不透鋼小管4個，用陶瓦蓋覆蓋備用；在每一雙碟中對角的2個不銹鋼小管中，分別滴裝高濃度及低濃度的標準品溶液，其余2個小管中分別滴裝相應的高低兩種濃度的供試品溶液，37℃培養17小時后，取出，在抑菌圈電腦測量分析儀上測量并計算結果即可。
實施例三測定12-去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法，12-去羥基阿奇霉素的化學結構為
該測定方法步驟如下第一步選取檢定菌、培養液、培養基并配制滅菌緩沖液檢定菌為短小芽孢桿菌[CMCC]63202，菌液濃度為0.7％；培養基為I號pH8.0的抗生素檢定用培養基，滅菌緩沖液為pH8.0的磷酸鹽緩沖液，其配制方法為取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，濾過，在115℃滅菌30分鐘，備用；第二步制備標準品溶液精密稱取中國藥品生物制品檢定所提供的阿奇霉素標準品10mg，置500ml容量瓶中，用5ml乙醇溶解后，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為標準品高劑量溶液；精密量取標準品高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，用滅菌緩沖液稀釋至刻度，作為低劑量溶液；第三步制備供試品溶液精密稱取12-去羥基阿奇紅霉素10mg，分別置500ml容量瓶中，按1ml∶2mg加乙醇溶解后，加滅菌緩沖液至刻度，搖勻，作為供試品的高劑量溶液；精密量取供試品的高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品的低劑量溶液；第四步測定取每一個供試液平底雙碟8塊，分別注入加熱融化的培養基20ml，使在碟底內均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層；另取培養基適量加熱融化后，放冷至60℃，加入短小菌懸液1.2ml，搖勻，在每一雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層，放置水平臺上冷卻后，在每一雙碟中以等距離均勻安置不透鋼小管4個，用陶瓦蓋覆蓋備用；在每一雙碟中對角的2個不銹鋼小管中，分別滴裝高濃度及低濃度的標準品溶液，其余2個小管中分別滴裝相應的高低兩種濃度的供試品溶液，37℃培養15～18小時后，取出，在抑菌圈電腦測量分析儀上測量并計算結果即可。
權利要求
1.測定12-去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法，12-去羥基阿奇霉素的化學結構為 其特征在于該測定方法步驟如下第一步選取檢定菌、培養液、培養基并配制滅菌緩沖液檢定菌為短小芽孢桿菌[CMCC]63202，菌液濃度為0.3％～0.7％；培養基為I號pH7.8～8.0的抗生素檢定用培養基，滅菌緩沖液為pH7.8～8.0的磷酸鹽緩沖液，其配制方法為取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，濾過，在115℃滅菌30分鐘，備用；第二步制備標準品溶液精密稱取阿奇霉素標準品10mg，置500ml容量瓶中，用5ml乙醇溶解后，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為標準品高劑量溶液；精密量取標準品高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，用滅菌緩沖液稀釋至刻度，作為低劑量溶液；第三步制備供試品溶液精密稱取12-去羥基阿奇紅霉素10mg，分別置500ml容量瓶中，按1ml∶2mg加乙醇溶解后，加滅菌緩沖液至刻度，搖勻，作為供試品的高劑量溶液；精密量取供試品的高劑量溶液25ml，置50ml容量瓶中，加滅菌緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品的低劑量溶液；第四步測定取每一個供試液平底雙碟8塊，分別注入加熱融化的培養基20ml，使在碟底內均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層；另取培養基適量加熱融化后，放冷至60℃，加入短小菌懸液1.2ml，搖勻，在每一雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層，放置水平臺上冷卻后，在每一雙碟中以等距離均勻安置不透鋼小管4個，用陶瓦蓋覆蓋備用；在每一雙碟中對角的2個不銹鋼小管中，分別滴裝高濃度及低濃度的標準品溶液，其余2個小管中分別滴裝相應的高低兩種濃度的供試品溶液，37℃培養15～18小時后，取出，在抑菌圈電腦測量分析儀上測量并計算結果即可。
全文摘要
本發明公開了一種測定12－去羥基阿奇霉素及其制劑的含量的抗生素微生物檢定法，該測定方法通過選取檢定菌、培養液、培養基并配制滅菌緩沖液、制備標準品溶液、制備供試品溶液及測定步驟來完成，具有測定準確率高、方便等優點。
文檔編號G01N33/50GK1598584SQ200410012450
公開日2005年3月23日 申請日期2004年7月29日 優先權日2004年7月29日
發明者張西如, 高燕霞, 姜建國, 劉云 申請人:張西如