用α7受體結(jié)合類膽堿激動劑抑制炎癥的制作方法

專利名稱：：用α7受體結(jié)合類膽堿激動劑抑制炎癥的制作方法相關(guān)申請本申請要求2002年12月6日提交的美國臨時申請序列號60/431,650的權(quán)利。在此引入上述申請的全文作為參考。政府資助本發(fā)明的全部或部分受到國家衛(wèi)生研究院的資助，許可號GM57226。政府對于本發(fā)明具有一定的權(quán)利。
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及減少炎癥的方法。特別是，本發(fā)明涉及用α7受體結(jié)合的類膽堿激動劑減少炎癥的方法。脊椎動物在感染或者損傷期間可以通過平衡促炎性和抗炎性途徑獲得體內(nèi)動態(tài)平衡。但是，在許多疾病狀況下，這種體內(nèi)動態(tài)平衡會變得不平衡。例如，所有革蘭氏陰性細菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素(脂多糖，LPS)可以激活巨噬細胞釋放可能是致命的細胞因子(Traceyetal.，1986；Wangetal.，1999；Nathan，1987；Dinarello，1994)。炎癥和其它有害的情況(例如由內(nèi)毒素引起的膿毒性休克)通常是由促炎性細胞因子，例如腫瘤壞死因子(TNF；也稱為TNFα或惡病質(zhì)素)，白介素(IL)-1α，IL-1β，IL-6，IL-8，IL-18，干擾素γ，血小板激活因子(PAF)，巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)，和其它化合物誘導(dǎo)的(Thompson，1998)。某些其它化合物，例如高遷移率族蛋白1(HMG-1)，是在不同的情況例如膿毒癥中被誘導(dǎo)的，也可作為促炎性細胞因子(PCT公開號WO00/47104)。這些促炎性細胞因子是由幾種不同的細胞類型產(chǎn)生的，最重要的是免疫細胞(例如單核細胞，巨噬細胞和嗜中性粒細胞)，也包括非免疫細胞例如成纖維細胞，成骨細胞，平滑肌細胞，上皮細胞，和神經(jīng)細胞(ZhangandTracey，1998)。促炎性細胞因子通過在炎性細胞因子級聯(lián)中的釋放可導(dǎo)致各種疾病，特別是膿毒癥。炎性細胞因子級聯(lián)可導(dǎo)致有害的癥狀，包括多種疾病的炎癥和細胞凋亡(Pulkki，1997)。所包括的具有局部和系統(tǒng)反應(yīng)的疾病包括但不限于涉及胃腸道以及相關(guān)組織的疾病(例如闌尾炎，消化器官，胃和十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，潰瘍性結(jié)腸炎，偽膜性腸炎，急性和缺血性結(jié)腸炎，憩室炎，會厭炎，弛緩不能，膽管炎，乳糜泄，膽囊炎，肝炎，克羅恩氏病，腸炎，和惠普爾病)；系統(tǒng)或局部炎性疾病和狀況(例如哮喘，變態(tài)反應(yīng)，過敏性休克，免疫復(fù)合體疾病，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒癥，敗血病，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，高燒，嗜伊紅細胞肉芽腫，肉芽腫，和肉樣瘤)；涉及泌尿生殖系統(tǒng)和相關(guān)組織的疾病(例如膿毒性流產(chǎn)，附睪炎，陰道炎，前列腺炎和尿道炎)；涉及呼吸系統(tǒng)和相關(guān)組織的疾病(例如支氣管炎，肺氣腫，鼻炎，囊腫性纖維化，成人呼吸窘迫綜合癥，肺炎，黑肺病(pneumoultramicroscopicsilicovolcanoconiosis)，alvealitis，細支氣管炎，咽炎，胸膜炎，和竇炎)；各種病毒(例如流行性感冒，呼吸道合胞病毒，HIV，乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒，皰疹)，細菌(例如散播菌血癥，登革熱)，真菌(例如念珠菌病)和原生動物和多細胞寄生蟲(例如瘧疾，絲蟲病，阿米巴病，和水泡囊)感染引起的疾??；皮膚病和皮膚狀況(例如燒傷，皮炎，皮肌炎，曬斑，風(fēng)疹疣，和水皰)；涉及心血管系統(tǒng)和相關(guān)組織的疾病(例如angiitis，血管炎，心內(nèi)膜炎，動脈炎，動脈硬化癥，血栓性靜脈炎，心包炎，心肌炎，心肌缺血，充血性心力衰竭，動脈周炎，和風(fēng)濕熱)；涉及中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)和相關(guān)組織的疾病(例如阿爾茨海默病，腦膜炎，腦炎，多發(fā)性硬化，大腦梗塞，大腦栓塞，guillame-barre綜合癥，神經(jīng)炎，神經(jīng)痛，脊髓損傷，癱瘓，和葡萄膜炎)；骨骼，關(guān)節(jié)，肌肉和結(jié)締組織疾病(例如各種關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)痛，骨髓炎，筋膜炎，佩吉特式病，痛風(fēng)，牙周疾病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，和滑膜炎)；其它自體免疫和炎性失調(diào)(例如重癥肌無力，甲狀腺炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，古德帕斯丘綜合征，白塞氏綜合癥，和同種異體移植物排斥，移植物抗宿主癥，I型糖尿病，僵直性脊椎炎，Berger病，I型糖尿病，僵直性脊椎炎，Berger病，和瑞特綜合癥)；以及各種癌癥，腫瘤和增殖性失調(diào)(例如何杰金氏病)；以及對任何原發(fā)性疾病的任何炎性或免疫宿主反應(yīng)(Gattornoetal.，2000；YehandSchuster，1999；McGuinnessetal.，2000；Hsuetal.，1999；PrystowskyandRege，1997；Kimmingsetal.，2000；Hirano，1999；Leeetal.，1995；Wasermanetal.，2000；Katagirietal.，1997；BumgardnerandOrosz，1999；Dibbsetal.，1999；BlumandMiller，1998；BlackwellandChristman，1996；Fox，2000；Carteron，2000；HommesandvanDeventer，2000；Gracieetal.，1999；Kanaietal.，2001；JanderandStoll，2001；Watanabeetal.，1997；Rayneretal.，2000；Amranietal.，2000)。哺乳動物對由炎性細胞因子級聯(lián)引起的炎癥的反應(yīng)部分通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控。這種反應(yīng)具體涉及對內(nèi)毒素的炎性反應(yīng)過程中的體液反應(yīng)機制(Besedovskyetal.，1986；Woiciechowskyetal.，1998；Huetal.，1991；LiptonandCatania，1997)。在反應(yīng)的一開始，傳入迷走神經(jīng)纖維被內(nèi)毒素或細胞因子激活，通過糖皮質(zhì)激素的釋放刺激體液抗炎性反應(yīng)(WatkinsandMaier，1999；Sternberg，1997；Scheinmanetal.，1995)。早先的研究闡述了迷走神經(jīng)信號傳導(dǎo)作為輸入環(huán)中的重要組成調(diào)節(jié)對于系統(tǒng)性內(nèi)毒素血癥和細胞因子血癥的促腎上腺皮質(zhì)激素和發(fā)熱反應(yīng)(Gaykemaetal.，1995；Fleshneretal.，1998；Watkinsetal.，1995；Romanovskyetal.，1997)另一系列反應(yīng)是通過傳出迷走神經(jīng)信號傳導(dǎo)，稱為“類膽堿抗炎性途徑”(Borovikovaetal.，2000)。傳出迷走神經(jīng)的刺激減少了系統(tǒng)炎性反應(yīng)并抑制TNF的釋放(Id.；Berniketal.，2002；Traceyetal.，2001；美國專利申請序列號09/855,446)。乙酰膽堿，迷走神經(jīng)的主要神經(jīng)遞質(zhì)，能夠通過α-銀環(huán)蛇毒素-敏感的煙堿乙酰膽堿受體的信號傳導(dǎo)減少巨噬細胞細胞因子的合成，但是還未識別出基本的巨噬細胞受體。煙酸乙酰膽堿受體是一類配體門控的五聚離子通道家族。在人中，已識別了16個不同的亞基(α1-7，α9-10，β1-4，δ，ε，和γ)，形成具有不同結(jié)構(gòu)和藥學(xué)性質(zhì)的大量的同五聚或異五聚受體(Lindstrom，1995；LeonardandBertrand，2001；LeNovereandChangeux，1995)。這個受體家族的主要的已知功能是在神經(jīng)肌肉連接處以及中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中傳遞信號給神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿(Lindstrom，1995；LeonardandBertrand，2001；LeNovereandChangeux，1995；MarubioandChangeux，2000；Steinlein，1998)。我們先前的工作表明在初級人巨噬細胞中存在α-銀環(huán)蛇毒素-敏感的煙堿受體(Borovikovaetal.，2000)，但是還未識別出特異的受體亞基。對能夠抑制炎癥的特定煙堿受體的認識有助于識別能夠抑制炎癥的受體的特異性激動劑。這種激動劑與目前已鑒別的相對非特異性的激動劑相比可能具有較小的副作用。也更容易鑒別抗炎性受體的其它生理學(xué)效果。相關(guān)技術(shù)描述引用的參考文獻Amrany，Y.etal.Respir.Res.149-53(2000).Bernik，T.R.etal.Pharmacologicalstimulationofthecholinergicanti-inflammatorypathway.J.Exp.Med.195781-788(2002).Besedovsky，H.etal.Science233652-54(1986).Bianchi，M.etal.Aninhibitorofmacrophageargininetransportandnitricoxideproduction(CNI-1493)preventsacuteinflammationandendotoxinlethality.Mol.Med.1254-266(1995).Blackwell，T.S.andChristman，J.W.Br.J.Anaesth.77110-17(1996).Blum，A.andMiller，H.Am.HeartJ.135181-86(1998).Borovikova，L.V.，Ivanova，S.，Zhang，M.，Yang，H.，Botchkina，G.I.，Watkins，L.R.，Wang，H.，Abumrad，N.，Eaton，J.W.&Tracey，K.J.Vagusnervestimulationattenuatesthesystemicinflammatoryresponsetoendotoxin.Nature405458-462(2000).Bumgardner，G.L.andOrosz，C.G.Semin.LiverDis.19189-204(1999).Carteron，N.L.Mol.Med.Today6315-23(2000).Cohen，P.S.etal.Thecriticalroleofp38MAPkinaseinTcellHIV-1replication.MolecularMedicine3339-346(1997).Dibbs，Z.etal.Proc.Assoc.Am.Physicians111423-28(1999).Dinarello，C.A.FASEBJ.81314-25(1994).Drisdel，R.C.andGreen，W.N.Neuronala-bungarotoxinreceptorsarea7subunithomomers.J.Neurosci.20133-139(2000).Feng，G，Steinbach，J.H.andSanes，J.R.Rapsynclustersneuronalacetylcholinereceptorsbutisinessentialforformationofaninterneuronalcholinergicsynapse.J.Neurosci.184166-4176(1998).Fleshner，M.etal.J.Neuroimmunol.86134-41(1998).Fox，D.A.A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ié)合的類膽堿激動劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子，并確定所述化合物是否是可與至少一種非α7的煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑。在這些方法中，能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子，但是并不是可與至少一種非α7的煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑的化合物是對α7煙堿受體具有選擇性的類膽堿激動劑。在相關(guān)的實施方案中，本發(fā)明涉及確定化合物是否是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿拮抗劑的方法。這些方法包括確定所述化合物是否能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力。在這些方法中，能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的化合物是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿拮抗劑。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及確定檢測化合物是否具有抑制炎癥的能力的方法。這些方法包括確定所述檢測化合物是否是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑。其它確定檢測化合物是否具有抑制炎癥的能力的方法也是本發(fā)明的一部分。這些方法包括確定所述檢測化合物是否能抑制拮抗劑與α7煙堿受體的結(jié)合。本發(fā)明還涉及能抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露于類膽堿激動劑的時候其中脂多糖誘導(dǎo)的TNF的釋放的減少的寡核苷酸或其模擬物。所述寡核苷酸或其模擬物基本上由大于5個核苷酸長的與α7受體的mRNA互補的序列組成。此外，本發(fā)明涉及抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露于類膽堿激動劑的時候其中TNF釋放的減少的方法。這些方法包括用上述寡核苷酸或模擬物處理巨噬細胞。附圖簡述本發(fā)明的前述和其它目的，特征和優(yōu)點可以從下述更具體的對本發(fā)明優(yōu)選實施方案的描述中明顯看出，如下述附圖所示，其中相同的參考標(biāo)記在不同的部分表示相同的意義。附圖不必需按比例繪制，其重點在于舉例說明本發(fā)明的原理。圖1是熒光圖，表明α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合的煙堿受體在巨噬細胞表面成簇分布。初級人巨噬細胞用FITC標(biāo)記的α-銀環(huán)蛇毒素(α-bgt，1.5μg/ml)染色，然后用熒光共焦顯微鏡觀察。1a和b顯示了較低放大倍數(shù)的顯微圖。a.細胞單獨用α-銀環(huán)蛇毒素染色。b.在加入α-銀環(huán)蛇毒素之前加入500μM煙堿。1c和1d顯示了較高放大倍數(shù)的顯微圖，顯示出受體簇。c.聚焦面在靠近細胞中間(三簇較下面的細胞)或靠近細胞表面(上面的細胞)的內(nèi)層上。d.聚焦面在細胞的上表面上。圖2是在初級人巨噬細胞中α7和α1煙堿受體的mRNA和蛋白表達的凝膠和westernblot的照片。a是α7特異性引物的RT-PCR結(jié)果，產(chǎn)生一個843bp的α7條帶。PCR產(chǎn)物通過測序驗證(數(shù)據(jù)未顯示)。MAC1和MAC2來自兩個無關(guān)供體的巨噬細胞。b顯示了westernblot的結(jié)果。將PC12細胞或人巨噬細胞(MAC)的細胞溶解物與對照Sepharose珠或與α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合的Sepharose珠培育。然后用α7特異的多克隆和單克隆抗體分析結(jié)合蛋白。圖3顯示了煙堿乙酰膽堿受體的α7亞基的反義寡核苷酸抑制煙堿對于TNF釋放的作用的圖和顯微圖。a-c是用不同煙堿受體亞基的反義寡核苷酸預(yù)處理的初級人巨噬細胞中LPS刺激的TNF釋放的圖。煙堿(Nic，1μM)在LPS誘導(dǎo)(100ng/ml)之前5-10分鐘加入。細胞培養(yǎng)基中的TNF水平用L929檢測來測定。CT對照(未刺激的)巨噬細胞培養(yǎng)物。ASα7，ASα1和ASα10分別是α7，α1和α10亞基的反義寡核苷酸。d和e是用α7反義寡核苷酸(ASα7)處理的(e)或未處理的(d)初級人巨噬細胞用FITC-α-銀環(huán)蛇毒素染色并用熒光共焦顯微鏡觀察的熒光顯微圖。圖4是實驗總結(jié)圖，證明了α7缺陷的小鼠在內(nèi)毒素血癥期間細胞因子的產(chǎn)生增加。向α7亞基缺陷的小鼠(-/-)或年齡和性別匹配的野生型小鼠(+/+)中注射LPS(0.1mg/kg，i.p.)。LPS刺激后1小時(對于TNF)或4小時(對于IL-1β和IL-6)獲取血液和器官。血清或器官中TNF，IL-1β和IL-6的水平用ELISA測定。a血清中TNF水平。每組n＝10。b肝中TNF水平。每組n＝6。c脾中TNF水平。每組n＝6。d血清中IL-1β水平。每組n＝8。e血清中IL-6水平。每組n＝9。*＝P＜0.05，相對于野生型對照。圖5顯示了迷走神經(jīng)刺激不能抑制煙堿乙酰膽堿受體α7亞基缺陷型小鼠中的TNF。α7亞基缺陷的小鼠(-/-)或年齡和性別匹配的野生型小鼠(+/+)進行假手術(shù)(SHAM)或迷走神經(jīng)刺激(VNS，左迷走神經(jīng)，1伏，2ms，1Hz)；給予LPS后2小時收集血液。用ELISA測定血清TNF水平。n＝10(SHAMα7+/+).n＝11(VNSα7+/+，SHAMα7-/-，VNSα7-/-).*＝P＜0.05vsSHAMα7+/+。圖6顯示了用盲腸結(jié)扎和穿刺模型誘導(dǎo)膿毒癥之后進行化合物(V)或化合物(VI)給藥的過程中小鼠的死亡率(存活百分率)。圖7是用遞增濃度的化合物(V)或煙堿處理的鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導(dǎo)的TNF-α釋放的測定量隨這些化合物濃度變化的比較圖。圖8A顯示了用遞增濃度的化合物(VI)處理的鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導(dǎo)的TNF-α釋放的抑制百分率隨預(yù)培育時間的變化圖。圖8B顯示了用遞增濃度的化合物(VI)處理的鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導(dǎo)的TNF-α釋放的抑制百分率隨化合物(VI)濃度的變化圖。圖9是給預(yù)先給予了化合物(VI)的小鼠給予LPS后檢測的血管中TNF-α濃度的條形圖。圖10是用右旋糖苷硫酸鈉誘導(dǎo)結(jié)腸炎后給予化合物(VI)的小鼠的結(jié)腸重量(A)和結(jié)腸長度(B)的條形圖的比較圖。圖11是用遞增量的化合物(VII)預(yù)培育后LPS刺激的鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中釋放的TNF-α的檢測濃度的條形圖。發(fā)明詳述下面是對本發(fā)明優(yōu)選實施方案的描述。取代基的定義這里所說的術(shù)語“烷基”，除非另外指出，包括具有直鏈或枝鏈部分的飽和的單價烴基，典型地是C1-C10，優(yōu)選是C1-C6。烷基基團的實例包括但不限于甲基，乙基，丙基，異丙基，和t-丁基。這里所說的術(shù)語“烯基”，除非另外指出，包括具有至少一個碳-碳雙鍵的烷基部分，其中烷基如上所定義。烯基的實例包括但不限于乙烯基和丙烯基。這里所說的術(shù)語“炔基”，除非另外指出，包括具有至少一個碳-碳三鍵的烷基部分，其中烷基如上所定義。炔基基團的實例包括但不限于乙炔基和2-丙炔基。這里所說的術(shù)語“烷氧基”是指“烷基-O-”基團，其中烷基如上所定義。這里所說的術(shù)語“環(huán)烷基”，除非另外指出，包括非芳香族的飽和環(huán)狀烷基部分，其中烷基如上所定義。環(huán)烷基的實例包括但不限于環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，和環(huán)庚基?！半p環(huán)烷基”基團是非芳香族的具有兩個環(huán)的飽和碳環(huán)基團。雙環(huán)烷基的實例包括但不限于，雙環(huán)-[2.2.2]-辛基和降莰烷基。術(shù)語“環(huán)烯基”和“雙環(huán)烯基”是指如上所述的非芳香族的碳環(huán)環(huán)烷基和雙環(huán)烷基分子，除了含有一個或多個連接碳環(huán)成分的碳-碳雙鍵(“內(nèi)環(huán)”雙鍵)和/或一個或多個連接碳環(huán)成分和相鄰的非環(huán)碳的碳-碳雙鍵(“外環(huán)”雙鍵)。環(huán)烯基的實例包括但不限于環(huán)戊烯基和環(huán)己烯基。雙環(huán)烯基基團的一個非限制性實例是降莰烯基。環(huán)烷基，環(huán)烯基，雙環(huán)烷基，和雙環(huán)烯基基團還包括與上述每個類別相似的，但是被一個或多個氧取代的基團。這些具有氧的基團的實例包括但不限于氧代環(huán)戊基，氧代環(huán)丁基，氧代環(huán)戊烯基和降莰酰基。這里所說的術(shù)語“環(huán)烷氧基”，除非另外指出，包括“環(huán)烷基-O-”基團，其中環(huán)烷基如上定義。這里所說的術(shù)語“芳基”指碳環(huán)基團。芳基基團的實例包括但不限于苯基和萘基。這里所說的術(shù)語“雜芳基”指含有一個或多個雜原子(O，S，或N)的芳香基團。雜芳基可以是單環(huán)的或是雙環(huán)的。本發(fā)明的雜芳基還可以包括被一個或多個氧分子取代的環(huán)系統(tǒng)。雜芳基基團的實例包括但不限于吡啶基，噠嗪基，咪唑基，吡啶基，吡唑基，三唑基，吡嗪基，喹啉基，異喹啉基，四唑基，呋喃基，噻吩基，異惡唑基，噻唑基，惡唑基，異噻唑基，吡咯基，喹啉基，異喹啉基，吲哚基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，噲啉基，吲唑基，氮茚基，酞嗪基，噠嗪基，三嗪基，異氮雜茚基，嘌呤基，惡二唑基，噻唑基，噻二唑基，呋咱基，苯并呋咱基，苯并噻吩基，苯并三唑，苯并噻唑基，苯并惡唑基，喹唑啉基，喹喔啉基，萘啶基，二氫喹啉基，四氫喹啉基，二氫異喹啉基，四氫異喹啉基，苯并呋喃基，呋喃并吡啶基，pyrolopyrimidinyl，和氮雜吲哚基。上述雜芳基基團可以是C連接或是N連接的(如果可能的話)。例如吡咯的基團可以是吡咯-1-基(N連接的)或是吡咯-3-基(C連接的)。在本發(fā)明中，雙環(huán)碳環(huán)化合物是其中碳僅作為環(huán)原子的雙環(huán)化合物。環(huán)結(jié)構(gòu)特別可是芳香族的，飽和的，或部分飽和的。這種化合物的實例包括但不限于，茚滿基，萘基，甘菊環(huán)基。在本發(fā)明中，氨基基團可以是基本的(-NH2)，二級的(-NHRa)，或三級的(-NRaRb)，其中Ra和Rb可以是烷基，烯基，炔基，烷氧基，環(huán)烷基，環(huán)烷氧基，芳基，雜芳基，和雙環(huán)碳環(huán)基團中的任一種。本發(fā)明可以使用，除非另外指出，傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)，分子生物學(xué)，微生物，細胞生物學(xué)，和免疫學(xué)技術(shù)，這些都是本領(lǐng)于技術(shù)人員公知的。這些技術(shù)在文獻中已有詳細描述。參見，例如Sambrooketal.，1989，″MolecularCloningALaboratoryManual″，ColdSpringHarborLaboratoryPress；Ausubeletal.(1995)，″ShortProtocolsinMolecularBiology″，JohnWileyandSons；MethodsinEnzymology(幾卷)；MethodsinCellBiology(幾卷)，和MethodsinMolecularBiology(幾卷)。本文公開的化合物的藥學(xué)可接收的鹽可以用于實施本發(fā)明。這里所說的所公開的化合物的“藥學(xué)可接收的鹽”是將本發(fā)明的化合物與酸或堿反應(yīng)形成的含有離子鍵的產(chǎn)物，適合于給受試體施用。例如含有氨基或其它堿性基團的化合物的酸式鹽可以通過使所述化合物與適當(dāng)?shù)挠袡C或無機酸，例如氯化氫，溴化氫，乙酸，過氯酸等反應(yīng)獲得。這種鹽的其它實例包括鹽酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，甲基磺酸鹽，硝酸鹽，馬來酸鹽，醋酸鹽，檸檬酸鹽，延胡索酸鹽，酒石酸鹽(例如(+)-酒石酸鹽，(-)-酒石酸鹽或其含有外消旋混合物的混合物)，琥珀酸鹽，安息香酸鹽以及氨基酸例如谷氨酸鹽。當(dāng)所述化合物含有酸性功能基團如-COOH或-SO3H的時候可以與適當(dāng)?shù)挠袡C堿形成鹽。適合于與本發(fā)明的化合物形成藥學(xué)可接收的堿加成鹽的堿包括無毒的并且足以和酸性功能基團反應(yīng)的有機堿。這種有機堿是本領(lǐng)域公知的，包括氨基酸例如精氨酸和賴氨酸，單-，二-，和三乙醇胺，膽堿，單-，二-和三烷基胺，例如甲胺，二甲胺，和三甲胺，胍，N-苯甲基苯乙基氨基，N-甲基葡糖胺，N-甲基哌嗪，嗎啉，乙烯二胺，三(羥甲基)氨基甲烷等。這里所說的“藥物組合物”是含有本文公開的化合物和藥學(xué)可接收的稀釋劑或載體的制劑，制備成適合于給受試體施用的形式。所述藥物組合物可以是散裝的或者制成單位劑量形式。單位劑量形式可以是任何不同的形式，包括，例如，膠囊，IV袋，片劑，噴霧劑中的單向泵，或小瓶。單位劑量的組合物中的活性成分(即所公開的化合物或其鹽的制劑)的量是有效量，根據(jù)特定的治療可以不同。應(yīng)當(dāng)認識到有必要根據(jù)受試體的年齡和情況對劑量進行常規(guī)的變化。劑量還取決于給藥的方式。預(yù)期的不同方式包括局部，口服，肺部，直腸，陰道，腸胃外，包括經(jīng)皮，皮下，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，腹膜內(nèi)和鼻內(nèi)。這里所說的所述組合物，和其藥學(xué)可接收的鹽可以與藥學(xué)可接收的載體或稀釋劑一起用于制備藥物制劑。合適的藥學(xué)可接收的載體包括惰性固體填充劑或稀釋劑以及無菌水溶液或有機溶劑。所述化合物在這種藥物組合物中的量足以提供本文所述范圍內(nèi)的所需劑量。本發(fā)明的所述化合物的制備方法和給藥方法如RerziragtontlaeScienceandPracticeofPlaarmacy，19thedition，MackPublishingCo.，Easton，PA(1995)所述。這里所說的“受試體”包括哺乳動物，例如人，伴侶動物(例如狗，貓，鳥等)，畜養(yǎng)動物(例如牛，羊，豬，馬，家禽等)和實驗室動物(例如大鼠，小鼠，豚鼠等)。在本發(fā)明的方法的優(yōu)選實施方案中，所述受試體是人。本文所述的本發(fā)明的化合物的“治療有效量”是指當(dāng)給予需要治療的受試體的時候，可以促進受試體的預(yù)后，例如延遲與真菌感染有關(guān)的一種或多種受試體癥狀的發(fā)作和/或降低其嚴重性的量。給予受試體的所述化合物的量取決于特定的疾病，給藥的模式，受試體的特征，例如一般健康狀況，其它疾病，年齡，性別，基因型，體重和藥物耐受性。技術(shù)人員可以根據(jù)這些因素和其它因素確定合適的劑量。所述化合物的有效量典型地在每天大約0.1mg/kg體重到每天大約1000mg/kg體重之間，優(yōu)選在每天大約1mg/kg體重到每天大約100mg/kg體重之間。本發(fā)明是基于發(fā)現(xiàn)了α-銀環(huán)蛇毒素敏感的受體，當(dāng)它暴露于該受體的激動劑的時候，可以抑制巨噬細胞釋放促炎性細胞因子，否則所述巨噬細胞受到刺激會釋放炎性細胞因子。具有這種抑制作用的受體是α7受體。因此，如果巨噬細胞受到例如細菌脂多糖(LPS)的刺激可以釋放促炎性細胞因子，那么用α7受體的激動劑處理巨噬細胞可以抑制巨噬細胞釋放促炎性細胞因子，特別是TNF。相應(yīng)地，在一些實施方案中，本發(fā)明涉及抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的方法。所述方法包括用足量的能減少所述細胞釋放的促炎性細胞因子的量的類膽堿激動劑處理細胞，其中所述類膽堿激動劑對α7煙堿受體是選擇性的。這里所說的細胞因子是一種由哺乳動物細胞天然產(chǎn)生的可溶性蛋白或肽，其在體內(nèi)可以微摩爾到皮摩爾量級作為體液調(diào)節(jié)劑。細胞因子在正常情況或病理情況下可以調(diào)節(jié)單個細胞或組織的功能活性。促炎性細胞因子是一種能引起任何下述與炎癥有關(guān)的生理反應(yīng)的細胞因子血管舒張，充血，脈管滲透性增加并伴隨水腫，粒細胞與單核吞噬細胞的積聚，或者纖維蛋白沉淀。在一些情況下，所述促炎性細胞因子還可引起細胞凋亡，例如慢性心力衰竭，其中TNF刺激了心肌細胞的凋亡(Pulkki，1997；Tsutsuietal.，2000)。促炎性細胞因子的非限制性實例是腫瘤壞死因子(TNF)，白介素(IL)-1α，IL-1β，IL-6，IL-8，IL-18，干擾素γ，HMG-1，血小板激活因子(PAF)，和巨噬細胞移動抑制因子(MIF)。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述能通過類膽堿激動劑處理受到抑制的促炎性細胞因子是TNF，IL-1，IL-6，IL-18，這是由于這些細胞因子是由巨噬細胞產(chǎn)生的并介導(dǎo)多種重要疾病的有害狀況，所述疾病例如內(nèi)毒素性休克，哮喘，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎性膽囊疾病，心力衰竭，和同種異體移植物排斥。在最優(yōu)選的實施方案中，所述促炎性細胞因子是TNF。促炎性細胞因子與抗炎性細胞因子如IL-4，IL-10，和IL-13不同，后者不能介導(dǎo)炎癥。在優(yōu)選的實施方案中，抗炎性細胞因子的釋放不受到類膽堿激動劑的抑制。在一些例子中，在炎性細胞因子級聯(lián)中產(chǎn)生促炎性細胞因子，在本文中稱為在哺乳動物體內(nèi)釋放至少一種促炎性細胞因子，其中所述細胞因子的釋放影響所述哺乳動物的生理狀況。因此，在本發(fā)明的實施方案中，在促炎性細胞因子的釋放引起嚴重的生理狀況的情況下，炎性細胞因子級聯(lián)被抑制。任何能產(chǎn)生促炎性細胞因子的哺乳動物細胞都可用于本發(fā)明。非限制性實例是單核細胞，巨噬細胞，肥大細胞，嗜中性粒細胞，上皮細胞，成骨細胞，成纖維細胞，平滑肌細胞，和神經(jīng)細胞。在優(yōu)選的實施方案中，所述細胞是巨噬細胞。這里所說的“α7類膽堿受體”是含有α7亞基的受體。所述受體可以只含有α7亞基；或者所述受體可以含有α7亞基和其它類膽堿受體亞型的亞基。在一個實施方案中，所述受體是同五聚體。在另一個實施方案中，所述受體是異五聚體。這里所說的“α7類膽堿受體激動劑”是一種能與含有α7亞基的受體在體內(nèi)或體外結(jié)合的化合物，其能誘導(dǎo)所述受體行使其生理學(xué)功能。在一個實施方案中，類膽堿受體激動劑抑制能表達含有α7亞基的類膽堿受體的細胞釋放促炎性細胞因子，否則所述細胞受到刺激可釋放所述促炎性細胞因子。技術(shù)人員可以用任何公知的方法確定任何特定的化合物是否是α7受體激動劑，例如下述實施例1中所提供的方法。在意指類膽堿激動劑對于促炎性細胞因子的釋放或炎性細胞因子劑量的作用，或者迷走神經(jīng)刺激對于炎性細胞因子級聯(lián)的作用的時候，使用術(shù)語“抑制”或“減少”包括至少少量但是可檢測到的促炎性細胞因子釋放的減少。在優(yōu)選的實施方案中，所述促炎性細胞因子的釋放與未處理的對照相比被抑制至少20％；在更優(yōu)選的實施方案中，所述抑制至少是50％；在更優(yōu)選的實施方案中，所述抑制至少是70％，在最優(yōu)選的實施方案中，所述抑制至少是80％。在體內(nèi)實施方案中，這種促炎性細胞因子釋放的減少能夠減少炎性細胞因子劑量的有害作用。任何α7激動劑，現(xiàn)在已知的或是以后發(fā)現(xiàn)的，應(yīng)當(dāng)能夠抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子。在優(yōu)選的實施方案中，所述類膽堿激動劑在可用濃度對細胞沒有毒性。在更優(yōu)選的實施方案中，所述類膽堿激動劑在體內(nèi)用于治療，或者由哺乳動物細胞天然產(chǎn)生。非限制性實例包括乙酰膽堿，蕈毒堿，煙堿，3-2，4-二甲氧基苯亞甲基anabaseine(DMXB-A，也稱為GTS-21)(Kemetal.，1997；Simoskyetal.，2001)，膽堿，甲碘化可卡因(Francisetal.，2001)。在最優(yōu)選的實施方案中，所述類膽堿激動劑是對α7選擇性或特異性的激動劑，這種激動劑對于正在進行炎癥治療的受試體來說比非特異性的類膽堿激動劑(例如煙堿)引起的副作用較小。如這里所說的，如果該激動劑是一種比激活至少一種其它煙堿受體更大程度地激活α7的激動劑，那么該激動劑是對α7選擇性的。這種激活上的差別可以通過比較用任何已知方法對各種受體的激活來檢測，例如用體外受體結(jié)合檢測，例如由NovaScreenBiosciencesCorporation(Hanover，MD)生產(chǎn)的，或者用WO02/44176(α4β2檢測)，美國專利序列號6,407,095(所述神經(jīng)節(jié)受體的外周煙堿受體)，美國專利申請序列號2002/0086871(標(biāo)記配體與由所述受體轉(zhuǎn)染的GH4Cl細胞制備而得的膜結(jié)合)，美國專利申請序列號2002/0086871(α1和α4)，和WO97/30998中所述的方法。確定對α7受體選擇性的激動劑的方法見參考文獻美國專利5,977,144(表1)，WO02/057275(p41-42)和Holladayetal.(1997)。在此引入其全文作為參考。其它煙堿受體的檢測是所述領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在優(yōu)選的方法中，在給予激動劑以后表達α7受體亞型或另一種受體亞型(例如α4β2)的爪蟾卵母細胞的結(jié)合或活性(電流反應(yīng))。能導(dǎo)致更強激活α7受體亞型的激動劑確定為α7選擇性激動劑。用任何上述方法或等同的方法，優(yōu)選所述選擇性α7激動劑激活α7受體比至少一種其它煙堿受體強至少兩倍，更優(yōu)選至少五倍，更優(yōu)選至少10倍，最優(yōu)選至少50倍。如果激動劑對α7受體的激活與任何其它煙堿受體相比達到最大程度(即至少10倍，優(yōu)選至少20倍，更優(yōu)選至少50倍)，那么該激動劑是對α7特異性的。最優(yōu)選地，所述特異性激動劑不以任何可檢測到的程度(即在良好控制的對照種相對于未處理的受體顯著性為P＝0.05)激活另一種煙堿受體。特異性α7激動劑的非限制性實例是DMXB-A(化合物(V)和甲碘化可卡因)。在一些實施方案中，所述煙堿類膽堿激動劑是一種具有通式I的化合物其中R代表氫或甲基，n代表0或1；或其藥學(xué)可接收的鹽。在特別優(yōu)選的實施方案中所述煙堿類膽堿激動劑是(-)-螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，5′-惡唑啉-2′-酮](化合物(VII))。通式I的化合物的制備方法如美國專利序列號5,902,814中所述，在此引入其全文作為參考。在其它實施方案中所述煙堿類膽堿激動劑是通式II的化合物其中m是1或2；n是0或1；Y是CH，N或NO；X是氧或硫；W是氧，H2或F2；A是N或C(R2)；G是N或C(R3)；D是N或C(R4)；條件是A，G和D中不超過一個是氮，但是Y，A，G和D中至少一個是氮或NO；R1是氫或C1-C4烷基；R2，R3和R4獨立地是氫，鹵素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3，或者R2和R3，R3和R4分別一起形成另一個六元芳香環(huán)或者共同具有A和G，或G和D，分別含有零到兩個氮原子，并被一種或兩種下述取代基取代的雜芳環(huán)獨立地氫，鹵素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3；R5和R6獨立地是氫，C1-C4烷基，C(O)R7，C(O)NHR8，C(O)OR9，SO2R10或一起構(gòu)成(CH2)jQ(CH2)k，其中Q是O，S，NR11，或一個鍵；j是2到7；k是0到2；R7，R8，R9，R10，R11獨立地是C1-C4烷基，芳基，或雜芳基，或其對映異構(gòu)體?；蚱渌帉W(xué)可接收的鹽。在優(yōu)選的實施方案中，類膽堿激動劑是一種具有通式II的化合物，其中m是1；n是0；p是0；x是氧；A是C(R2)；G是C(R3)；D是C(R4)。在特別優(yōu)選的實施方案中，所述煙堿類膽堿激動劑是(R)-(-)-5′-苯基螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，2′-(3′H)-呋喃并[2，3-b]吡啶]。通式II的化合物的制備方法如美國專利序列號6,110,914所述，在此引入其全文作為參考。在另外的實施方案中所述煙堿類膽堿激動劑是通式III的化合物其中R1，R6和R7是氫或C1-C4烷基；R2選自下組和其中R3，R4和R5選自氫，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C4烷基，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C6烷氧基，在烷氧基上具有1到4個碳的烷氧羰基，氨基，在酰基上具有1到4個碳的酰氨基，氰基，和在每個烷基上具有1到4個碳的二烷基氨基，鹵素，羥基或硝基。在優(yōu)選的實施方案中，激動劑是通式III的化合物，其中R2與四氫吡啶環(huán)的3-位置相連，進一步其中與苯環(huán)的4-或2-位置相連的R3選自下組氨基，羥基，氯，氰，二甲基氨基，甲基，甲氧基，乙酰氨基，乙酰氧基，和硝基。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是羥基，其中R1，R4和R5是氫。在另一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是乙酰氨基，其中R1，R4和R5是氫。在另一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是乙酰氧基，其中R1，R4和R5是氫。在另一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是甲氧基，其中R1，R4和R5是氫。在另一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是甲氧基，其中R1和R4是氫，進一步其中R3與苯環(huán)的2-位置相連，與苯環(huán)的4-位置相連的R5是甲氧基或羥基。在特別優(yōu)選的實施方案中，所述煙堿類膽堿激動劑選自3-2，4-二甲氧基苯亞甲基anabaseine(DMXB-A，化合物(V))，3-(4-羥基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-甲氧基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-氨基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-羥基-2-甲氧基苯亞甲基)anabaseine(化合物(VI))，3-(4-甲氧基-2-羥基苯亞甲基)anabaseine，反-3-亞肉桂基anabaseine，反-3-(2-甲氧基-亞肉桂基)anabaseine和反-3-(4-甲氧基亞肉桂基)anabaseine。制備通式III的化合物的方法如美國專利序列號5,977,144所述，在此引入其全文作為參考。在另一個實施方案中，所述激動劑是通式IV的化合物其中X是O或S；并且R選自H，OR1，NHC(O)R1，和鹵素，其中R1是氫或C1-C4烷基。在特別優(yōu)選的實施方案中所述煙堿類膽堿激動劑選自N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羥苯氧基)苯甲酰胺，N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-乙酰氨基苯氧基)苯甲酰胺，N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(苯基硫烷基)苯甲酰胺，和N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(3-氯苯基磺酰基)苯甲酰胺。制備通式IV的化合物的方法如PCT專利申請公開號WO01/85727所述，在此引入其全文作為參考。在另一個實施方案中，所述激動劑是(1-氮雜-雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基)-氨基甲酸1-(2-氟苯)-乙酯。制備該化合物的方法如美國專利申請公開號2002/0040035中所述，在此引入其全文作為參考。在另一個實施方案中，α7激動劑是α7煙堿受體的選擇性激動劑(更優(yōu)選是特異性激動劑)的抗體。所述抗體可以是多克隆或單克??；可以來自人，非人的真核生物，細胞，真菌或細菌；可以是由基因組或載體編碼序列編碼；可以在使用或不使用佐劑的情況下結(jié)合天然的或重組的α7或其片段，可通過本領(lǐng)域熟知的各種方法和工藝產(chǎn)生和生產(chǎn)抗體?？捎每贵w的其它實例包括但不限于嵌合的，單鏈的，和各種人的或人化的抗體，以及它們的片段例如Fab片段和由專門的表達系統(tǒng)產(chǎn)生的片段。本發(fā)明還涉及抗體，其是α7激動劑，如上所述。產(chǎn)生α7煙堿受體的抗體的方法的一個非限制性的實例是用α7受體或其片段免疫合適的實驗室動物，通過與α7結(jié)合的免疫作用分離釋放出的抗體。免疫和分離步驟是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。作為激動劑的抗體可以用本文公開的方法鑒別，例如使分離的抗體與已受到刺激釋放促炎性細胞因子的巨噬細胞混和，或者通過能評價α7受體活性的任何其它適當(dāng)?shù)姆椒ㄨb別。對細胞因子釋放的抑制表示具有激動劑活性。對α7的選擇性可以通過檢測對至少一種其它煙堿或類膽堿受體的活性來評價，如前所述。已確定是α7受體的選擇性激動劑的抗體可以進一步評價其治療一種或多種本文所述的炎性疾病的功效，例如在動物模型中另外進行體外檢測或體內(nèi)檢測。本發(fā)明還包括用此方法鑒別的α7選擇性抗體激動劑。本發(fā)明可用于研究培養(yǎng)的細胞，例如研究炎性細胞因子釋放對于巨噬細胞生物學(xué)的作用，或者檢測化合物的類膽堿激動劑活性。但是體內(nèi)的應(yīng)用具有許多優(yōu)選的實施方案。在那些實施方案中，細胞是患有由炎性細胞因子級聯(lián)介導(dǎo)的疾病或具有其患病危險的受試體中的細胞。這里所說的受試體可以是任何哺乳動物。但是，在優(yōu)選的實施方案中，所述受試體是人。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明涉及在受試體中抑制炎性細胞因子級聯(lián)的方法。所述方法包括用足量的能抑制炎性細胞因子級聯(lián)的類膽堿激動劑治療所述受試體，其中所述受試體患有由炎性細胞因子級聯(lián)介導(dǎo)的疾病或具有其患病危險。優(yōu)選地，所述類膽堿激動劑對α7煙堿受體是選擇性的。對任何由炎性細胞因子級聯(lián)介導(dǎo)的疾病的治療都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在優(yōu)選的實施方案中，所述疾病是其中炎性細胞因子級聯(lián)受到巨噬細胞釋放促炎性細胞因子的影響的疾病。所述疾病可以是其中炎性細胞因子級聯(lián)引起系統(tǒng)性反應(yīng)，例如膿毒性休克的疾病。另外，所述疾病可以由局部炎性細胞因子級聯(lián)介導(dǎo)，例如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。可用本發(fā)明治療的疾病的非限制性實例包括那些在說明書的
背景技術(shù)：
部分列舉的疾病。優(yōu)選地，所述疾病是闌尾炎，消化器官，胃和十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，急性或缺血性腸炎，憩室炎，會厭炎，弛緩不能，膽管炎，膽囊炎，肝炎，克羅恩氏病，腸炎，惠普爾病，哮喘，變態(tài)反應(yīng)，過敏性休克，免疫復(fù)合體疾病，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒癥，敗血病，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，高燒，嗜伊紅細胞肉芽腫，肉芽腫病，肉樣瘤，膿毒性流產(chǎn)，附睪炎，陰道炎，前列腺炎，尿道炎，支氣管炎，肺氣腫，鼻炎，囊腫性纖維化，局限性肺炎，黑肺病(pneumoultramicroscopicsilicovolcanoconiosis)，alvealitis，細支氣管炎，咽炎，胸膜炎，竇炎，流行性感冒，呼吸道合胞病毒，皰疹，散播菌血癥，登革熱，念珠菌病，瘧疾，絲蟲病，阿米巴病，水泡囊，燒傷，皮炎，皮肌炎，曬斑，風(fēng)疹，疣，水皰，血管炎，angiitis，心內(nèi)膜炎，動脈炎，動脈硬化癥，血栓性靜脈炎，心包炎，心肌炎，心肌缺血，動脈周炎，風(fēng)濕熱，阿爾茨海默病，乳靡泄，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合癥，腦膜炎，腦炎，多發(fā)性硬化，大腦梗塞，大腦栓塞，guillame-barre綜合癥，神經(jīng)炎，神經(jīng)痛，脊髓損傷，癱瘓，葡萄膜炎，關(guān)節(jié)炎，關(guān)節(jié)痛，骨髓炎，筋膜炎，佩吉特式病，痛風(fēng)，牙周疾病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，滑膜炎，重癥肌無力，甲狀腺炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，古德帕斯丘綜合征，白塞氏綜合癥，同種異體移植物排斥，移植物抗宿主癥，I型糖尿病，僵直性脊椎炎，Berger病，II型糖尿病，僵直性脊椎炎，Berger病，和瑞特綜合癥，或何杰金氏病。在另外的實施方案中，所述疾病是上述列舉的任何疾病，條件是該疾病不是潰瘍性結(jié)腸炎，中風(fēng)，II型糖尿病，克羅恩氏病，阿爾茨海默病或炎性皮膚疾病。在一個實施方案中，所述疾病是闌尾炎，消化器官，胃或十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，肝炎，克羅恩氏病，哮喘，變態(tài)反應(yīng)，過敏性休克，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒癥，敗血病，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，膿毒性流產(chǎn)，散播菌血癥，燒傷，阿爾茨海默病，乳靡泄，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合癥，大腦梗塞，大腦栓塞，脊髓損傷，癱瘓，同種異體移植物排斥或移植物抗宿主癥。在一個實施方案中，所述疾病是膿毒癥。在另一個實施方案中，所述疾病是闌尾炎，消化器官，胃或十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，肝炎，哮喘，變態(tài)反應(yīng)，過敏性休克，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒癥，敗血病，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，膿毒性流產(chǎn)，散播菌血癥，燒傷，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合癥，大腦梗塞，大腦栓塞，脊髓損傷，癱瘓，同種異體移植物排斥或移植物抗宿主病。在一個實施方案中，所述疾病是膿毒癥。在另一個實施方案中，所述疾病選自腹膜炎，胰腺炎，器官缺血，再灌注損傷，膿毒癥，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，燒傷，成人呼吸窘迫綜合癥，慢性阻塞性肺病，牛皮癬，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，心肌缺血，和同種異體移植物排斥。在另一個實施方案中，所述疾病選自腹膜炎，胰腺炎，膿毒癥，內(nèi)毒素性休克，成人呼吸窘迫綜合癥，慢性阻塞性肺病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，心肌缺血，同種異體移植物排斥，哮喘，移植物抗宿主病，充血性心力衰竭和囊腫性纖維化。這些疾病優(yōu)選用化合物I-VII中的任何一種或其藥學(xué)可接收的鹽治療。類膽堿激動劑的給藥方式取決于要治療的疾病。例如靜脈注射優(yōu)選用于治療系統(tǒng)性疾病例如膿毒性休克，口服給藥優(yōu)選用于治療胃腸疾病例如胃潰瘍。給藥的方式和所給予類膽堿激動劑的劑量可由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員用標(biāo)準的劑量-反應(yīng)研究確定，而無需過度的實驗。進行確定的時候要考慮有關(guān)的環(huán)境，包括要治療的疾病，給藥組合物的選擇，受試體個體的年齡，體重和反應(yīng)，以及受試體癥狀的嚴重程度。因此，依賴于所述疾病，類膽堿激動劑可以口服，腸胃外，鼻內(nèi)，陰道，直腸，向舌，舌下，臉頰，臉頰內(nèi)和經(jīng)皮膚給藥給受試體。相應(yīng)地，設(shè)計用于口腔，向舌，舌下，臉頰，臉頰內(nèi)給藥的類膽堿激動劑組合物可以用本領(lǐng)域公知的方法制備而無需過度的試驗，例如用惰性稀釋劑或用可食用載體。所述組合物可以包裹在明膠膠囊中或壓縮成片劑。為口服治療給藥的目的，本發(fā)明的藥物組合物可以與賦形劑混合，制成片劑，錠劑，膠囊，酏劑，懸浮液，糖漿，薄膜，口香糖等。片劑，丸劑，膠囊，錠劑等還可以含有粘合劑，賦形劑，崩解劑，潤滑劑，甜味劑，調(diào)味劑。粘合劑的一些實例包括維晶纖維素，黃蓍膠或明膠。賦形劑的實例包括淀粉或乳糖。崩解劑的實例包括褐藻酸，玉米淀粉等。潤滑劑的實例包括硬脂酸鎂或硬脂酸鉀。助流劑的一個實例是膠體二氧化硅。甜味劑的一些實例包括蔗糖，糖精等。調(diào)味劑的一些實例包括薄荷，甲基水楊酸鹽，橙調(diào)味料等。用于制備這些不同的組合物的物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是藥物純的，并且所使用的量應(yīng)當(dāng)是無毒的。本發(fā)明的類膽堿激動劑組合物可以容易地通過腸胃外給藥，例如靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，脊髓內(nèi)或皮下注射。腸胃外給藥可以將本發(fā)明的類膽堿激動劑組合物制成溶液或懸液進行。這種溶液或懸液還可以包含無菌稀釋劑例如注射水，鹽溶液，不揮發(fā)性油，聚乙二醇，丙三醇，丙二醇或其它合成溶劑。腸胃外制劑還可以包括抗細菌劑例如苯甲醇或苯甲酸甲酯，抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉和鰲合試劑例如EDTA。還可以加入緩沖液例如乙酸鹽，檸檬酸鹽或磷酸鹽，以調(diào)整滲透壓，如氯化鈉或右旋糖。腸胃外制劑可以放入玻璃或塑料制作的安瓿瓶，一次性注射器或多劑量小瓶中。直腸給藥包括將藥物組合物給入到直腸或大腸中。這可以用栓劑或灌腸劑實現(xiàn)。栓劑制劑可以容易地用本領(lǐng)域公知的方法制備。例如栓劑制劑的制備可以通過將丙三醇加熱至大約120℃，將類膽堿激動劑溶解于丙三醇中，加入純凈水后攪拌加熱的丙三醇，將熱的混合物注入到栓劑模具中。經(jīng)皮膚給藥包括類膽堿激動劑通過皮膚吸收。經(jīng)皮制劑包括貼劑(例如公知的尼古丁貼片)，油膏，乳劑，凝膠，軟膏等。本發(fā)明包括經(jīng)鼻給予哺乳動物治療有效量的類膽堿激動劑。這里所說的經(jīng)鼻給藥或鼻內(nèi)給藥包括將類膽堿激動劑給予到受試體鼻腔通道或鼻腔的粘膜上。這里所說的鼻內(nèi)給予類膽堿激動劑的藥物組合物包括用公知的方法制備的適于以鼻噴霧劑，滴鼻劑，懸液，凝膠，油膏，乳劑或粉末的形式給藥的治療有效量的該激動劑。類膽堿激動劑的給藥也可以通過鼻塞或鼻用棉球?qū)崿F(xiàn)。如前所述，這些方法中優(yōu)選的類膽堿激動劑對α7受體是選擇性的或是特異性的，包括例如DMXB-A(化合物(V))，甲碘化可卡因。本發(fā)明還涉及確定一種化合物是否是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子。在這些方法中，能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的化合物是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑。這些方法優(yōu)選包括用所述化合物和能刺激促炎性細胞因子級聯(lián)的試劑處理哺乳動物細胞。優(yōu)選試劑是細菌脂多糖(LPS)。所述化合物可以在所述試劑之前，與所述試劑同時，或在所述試劑之后給予哺乳動物細胞。優(yōu)選地，所述化合物在所述試劑之前給藥。參見，例如美國專利申請序列號09/855,446。在優(yōu)選的實施方案中，確定為α7激動劑的化合物可進一步檢測其激活至少一種其它煙堿受體亞型的能力，以確定所述α7激動劑是否是選擇性的或特異性的。能選擇性或特異性激活α7亞型的檢測化合物可以進一步進行更進一步的檢測，例如進一步在動物模型中進行體外檢測或體內(nèi)檢測以進一步評價所述化合物用于治療患有炎性疾病的受試體的適宜性。這些方法不僅僅限于任何要檢測的特定化合物。雖然大部分類膽堿激動劑已知是小分子，α7激動劑活性也可能存在于蛋白質(zhì)(例如抗體，如前所述)，寡核苷酸或其類似物(例如適配體)或任何其它化合物中。這些方法適用于檢測任何可能的α7激動劑。在這些方法中，所述細胞可以是任何可被誘導(dǎo)產(chǎn)生促炎性細胞因子的細胞。在優(yōu)選的實施方案中，所述細胞是免疫細胞，例如巨噬細胞，單核細胞，或嗜中性粒細胞。在最優(yōu)選的實施方案中，所述細胞是巨噬細胞。用于測量其受到抑制的促炎性細胞因子可以是任何能被誘導(dǎo)從細胞中釋放的促炎性細胞因子。在優(yōu)選的實施方案中，所述細胞因子是TNF。可以用任何已知的方法評價細胞因子產(chǎn)生的抑制，包括細胞因子的定量測定(例如用ELISA)，或者通過生物檢測，(例如測定促炎性細胞因子活性是否降低)，或者通過測量促炎性細胞因子mRNA。技術(shù)人員可以使用這些檢測方法而無需過度的實驗，參見美國專利申請序列號09/855,446中幾種可用于這方面的檢測。這些方法可以在體內(nèi)進行，其中動物，例如大鼠用所述化合物和能刺激促炎性細胞因子級聯(lián)的試劑一起處理，通過例如檢測血清TNF水平來檢測所述試劑對促炎性細胞因子級聯(lián)的誘導(dǎo)作用。但是，由于用細胞培養(yǎng)物進行這些類型的檢測比用完整的動物更容易，所述方法優(yōu)選在體外進行，例如使用巨噬細胞培養(yǎng)物。在相關(guān)的實施方案中，本發(fā)明涉及確定一種化合物是否是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿拮抗劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否降低了類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力。在這些實施方案中，能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的化合物是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿拮抗劑。這些方法優(yōu)選包括用所述化合物和α7激動劑以及能刺激促炎性細胞因子級聯(lián)的試劑一起處理哺乳動物細胞。因此這些方法基本上類似于上述的方法，除了前述檢測中的化合物是能抑制受到所述試劑誘導(dǎo)的細胞釋放促炎性細胞因子的α7激動劑。對檢測化合物進行評價，確定其是否能阻止α7激動劑抑制由所述試劑(例如LPS)引起的促炎性細胞因子級聯(lián)。所述細胞和試劑如前述方法中所述；所述α7激動劑可以是任何非特異性的，選擇性的，或特異性的α7激動劑，例如煙堿或DMXB-A。同樣與前述方法相同，這些方法可以在體內(nèi)進行，但是優(yōu)選在體外進行。與前述方法相同，所述用于檢測α7拮抗劑活性的化合物不限于小分子化合物，可以包括任何化合物，包括蛋白質(zhì)，寡肽，或寡肽類似物。同樣與前述方法相同，通過檢測細胞因子產(chǎn)生的抑制評價所述檢測化合物的功效，可以用任何已知的方法，包括細胞因子的定量測定(例如用ELISA)，或者通過生物檢測，(例如測定促炎性細胞因子活性是否降低)，或者通過測量促炎性細胞因子mRNA。技術(shù)人員可以使用這些檢測方法而無需過度的實驗。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及確定檢測化合物是否具有抑制炎癥的能力的方法。在一些方面，這些方法包括確定所述檢測化合物是否是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑。優(yōu)選所述方法進一步包括通過檢測所述檢測化合物激活至少一種其它煙堿受體的能力來確定所述檢測化合物對α7是否是選擇性的。這些測定可以如前所述進行，例如通過測定所述化合物是否能抑制哺乳動物細胞，優(yōu)選巨噬細胞釋放促炎性細胞因子。在其它方面，所述測定檢測化合物是否具有抑制炎癥的能力的方法包括測定所述檢測化合物是否能抑制拮抗劑與α7煙堿受體的結(jié)合，例如通過測定所述檢測化合物是否能抑制巨噬細胞中FITC-α-銀環(huán)蛇毒素的結(jié)合。參見實施例1，在一些實施方案中所述方法可使用α-銀環(huán)蛇毒素染色和共焦顯微鏡方法，除了加入所述檢測化合物以測定所述化合物是否能抑制α-銀環(huán)蛇毒素與巨噬細胞的結(jié)合。在一些情況下希望能夠限制哺乳動物細胞的抑制促炎性細胞因子釋放的能力。這種情況的實例是當(dāng)希望促炎性細胞因子能夠防止癌癥或者抵抗癌癥的時候，或者當(dāng)研究α7受體的生理作用的時候。因此本發(fā)明還涉及抑制哺乳動物細胞在所述細胞暴露于類膽堿激動劑的時候其中促炎性細胞因子的釋放的減少的方法。所述方法包括用能抑制類膽堿激動劑與α7受體的結(jié)合的試劑處理所述細胞。與前述方法相同，這些方法中優(yōu)選的細胞是巨噬細胞。技術(shù)人員能夠預(yù)見有幾種使類膽堿激動劑與細胞上的α7受體結(jié)合的途徑可受到抑制。其實例包括用α7拮抗劑處理所述細胞；用能與α7受體結(jié)合的抗體或適配體處理所述細胞，防止類膽堿激動劑與所述受體的結(jié)合；或者，優(yōu)選地，用能與α7mRNA互補的并能抑制該mRNA翻譯成α7受體的反義寡核苷酸或其模擬物處理細胞。參見實施例1可以證明這種反義模擬物的效果。這里所說的模擬物是一種寡核苷酸類似物，其在化學(xué)上與天然的寡核苷酸不同，但是能以類似于寡核苷酸的方式與互補的核苷酸序列非共價結(jié)合。參見，例如美國專利6,436,909，其中有關(guān)于可用的模擬物的討論。在優(yōu)選的實施方案中，所述試劑是硫代磷酸酯寡核苷酸模擬物，與相關(guān)的α7基因互補。在Pengetal.，1994中給出了α7基因。有效的反義序列的實例是5′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′(參見實施例1)或類似的序列，優(yōu)選是人α7亞基基因翻譯起始密碼子周圍的序列。因此，本發(fā)明還涉及能抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露于類膽堿激動劑的時候其中脂多糖誘導(dǎo)的TNF釋放的減少的寡核苷酸或其模擬物。所述寡核苷酸或其模擬物包括大于5個核苷酸長的與α7受體的mRNA互補的序列。優(yōu)選地，所述寡核苷酸或模擬物與α7mRNA的轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域互補。最優(yōu)選地，所述寡核苷酸或模擬物包括序列5′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′。本發(fā)明的優(yōu)選實施方案將在下述實施例中描述。根據(jù)說明書的描述或本發(fā)明的實踐，權(quán)利要求保護范圍內(nèi)的其它實施方案對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。應(yīng)當(dāng)理解說明書，以及實施例僅僅是在由實施例后面的權(quán)利要求所表示的本發(fā)明的范圍和精神范圍內(nèi)的示例性描述。實施例1.α7煙堿受體作為神經(jīng)免疫突觸的分子底物實施例概述這里我們發(fā)現(xiàn)了乙酰膽堿對巨噬細胞TNF釋放的抑制需要有煙堿受體α7亞基。α-銀環(huán)蛇毒素與初級人巨噬細胞表面表達的不連續(xù)的受體簇相結(jié)合。與α7特異性抗體的免疫雜交證明了通過α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合的珠子的粘附分離的蛋白質(zhì)中α7亞基的同一性。將巨噬細胞暴露于α7反義寡核苷酸會減少α-銀環(huán)蛇毒素的結(jié)合并且在存在煙堿的條件下能恢復(fù)TNF的釋放。缺少煙堿受體α7亞基的小鼠與野生型小鼠相比，在內(nèi)毒素血癥期間產(chǎn)生顯著更多的TNF，IL-1β和IL-6。從α7剔除小鼠中分離的巨噬細胞對類膽堿激動劑沒有反應(yīng)，繼續(xù)產(chǎn)生TNF。結(jié)果，用在野生型小鼠中能抑制TNF釋放的方法對迷走神經(jīng)進行電刺激不能抑制α7缺陷型小鼠中的TNF釋放。因此，煙堿乙酰膽堿受體α7亞基對于促炎性細胞因子的類膽堿抑制是必需的。結(jié)果和討論在促炎性細胞因子釋放的抑制中鑒別巨噬細胞受體的第一步是用FITC-α-銀環(huán)蛇毒素，一種能結(jié)合類膽堿受體子集的肽拮抗劑對初級人巨噬細胞進行標(biāo)記(Lindstrom，1995；Leonard&Bertrand，2001)。觀察到α-銀環(huán)蛇毒素在巨噬細胞表面的強烈結(jié)合(圖1a)。進行煙堿預(yù)處理顯著降低了結(jié)合的強度(圖1b)。在神經(jīng)肌肉連接處和神經(jīng)元突觸處，煙堿受體形成受體聚合體或受體簇，促進了快速信號傳遞(Linetal.，2001；Fengetal.，1998；Shoopetal.，2000)。在更高的放大倍數(shù)下在巨噬細胞表面可以清楚觀察到不連續(xù)的α-銀環(huán)蛇毒素簇的結(jié)合，特別是集中在細胞體表面(圖1c，d)。到目前為止，α1，α7和α9是已知的人細胞中α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合的煙堿受體亞基(Lindstrom，1995；LeonardandBertrand，2001)。α1和β1，δ以及ε(成人)或γ(胎兒)亞基一起形成異五聚體的煙堿受體，調(diào)節(jié)肌肉收縮；α7和α9每個形成同五聚體的煙堿受體(Lindstrom，1995；LeonardandBertrand，2001)。為了確定這些受體亞基是否在巨噬細胞中表達，我們從外周血單核細胞(PBMC)體外分化得到的初級人巨噬細胞中分離RNA并進行RT-PCR分析。為了增加實驗的靈敏度和特異性，我們用對每個亞基特異的巢式引物在逆轉(zhuǎn)錄后進行了兩輪PCR。通過測序驗證PCR產(chǎn)物的同一性。在來自不相干血液供體的人巨噬細胞中檢測到α1，α10(數(shù)據(jù)未顯示)和α7(圖2a)mRNA的表達。用同樣的RT-PCR策略在巨噬細胞中沒有檢測到α9亞基mRNA的表達(數(shù)據(jù)未顯示)。接下來用westernblotting檢測α1和α7亞基的蛋白表達。在兩個分化的初級巨噬細胞和未分化的PBMC中用α7特異性抗體都識別出一個清晰的條帶，其分子量大約是55kD(與已公開的α7蛋白的分子量類似[Pengetal.，1994；DrisdelandGreen，2000])(數(shù)據(jù)未顯示)。在PBMC體外分化成巨噬細胞的過程中，α1受到負調(diào)控至檢測不到的水平(數(shù)據(jù)未顯示)。δ亞基，一種α1異五聚體煙堿乙酰膽堿受體所必需的組分用這種巢式RT-PCR策略檢測不到(數(shù)據(jù)未顯示)。為了驗證巨噬細胞中的陽性信號是代表與α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合的α7煙堿受體，我們用α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合珠粘附由人巨噬細胞或PC12細胞(大鼠嗜鉻細胞瘤細胞，已知能表達α7同五聚體[DrisdelandGreen，2000])制備而得的蛋白。用westernblotting用能識別人和大鼠α7蛋白的多克隆或單克隆α7特異性抗體(人和大鼠的α7蛋白含有相同數(shù)目的氨基酸，具有94％的相同性[Pengetal.，1994；Seguelaetal.，1993])分析保留的蛋白。從結(jié)果明顯看出人巨噬細胞表達α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合的α7蛋白，其分子量與PC12細胞的α7亞基類似(圖2b)。用RT-PCR方法克隆全長的巨噬細胞表達的α7以驗證巨噬細胞α7亞基的同一性。巨噬細胞中的全長煙堿乙酰膽堿α7亞基包括外顯子1到10，與神經(jīng)元中表達的煙堿乙酰膽堿α7亞基相同(Gaultetal.，1998)。總的來說，這些數(shù)據(jù)確定了煙堿乙酰膽堿α7亞基就是人巨噬細胞表面表達的α-銀環(huán)蛇毒素結(jié)合的受體。為了研究α7受體是否是TNF釋放的類膽堿抑制所必需的，我們合成了人α7亞基基因的翻譯起始密碼子周圍的硫代磷酸酯反義寡核苷酸。合成α1和α10亞基基因的類似區(qū)域的反義寡核苷酸作為對照。暴露于α7特異的反義寡核苷酸(ASα7)中的巨噬細胞對煙堿的TNF抑制作用的反應(yīng)顯著地減小(圖3a)。在存在煙堿的條件下煙堿乙酰膽堿α7亞基的反義寡核苷酸恢復(fù)了巨噬細胞TNF的釋放。在缺乏LPS和煙堿的條件下，巨噬細胞暴露于ASα7中不能刺激TNF的合成。α1(ASα1)和α10(ASα10)亞基的反義寡核苷酸，在相似條件下，不能顯著改變煙堿對于LPS誘導(dǎo)的TNF釋放的作用(圖3b，c)，表明煙堿對于TNF的抑制作用是對煙堿乙酰膽堿受體α7亞基特異性的。其它α7，α1和α10的反義寡核苷酸也具有類似的效果(數(shù)據(jù)未給出)。向巨噬細胞培養(yǎng)基中加入煙堿乙酰膽堿α7亞基反義寡核苷酸可以減少FITC-標(biāo)記的α-銀環(huán)蛇毒素的表面結(jié)合(圖3d，e)。綜合這些數(shù)據(jù)表明煙堿乙酰膽堿受體α7亞基煙堿受體對于巨噬細胞中依賴于類膽堿抗炎性途徑的TNF釋放的抑制來說是必需的。巨噬細胞是在體內(nèi)對細菌內(nèi)毒素反應(yīng)時產(chǎn)生的TNF的主要來源(Bianchietal.，1995；Kuminsetal.，1996)。為了研究煙堿乙酰膽堿受體α7亞基對于體內(nèi)的類膽堿抗炎性途徑是否是必需的，我們檢測了通過基因剔除技術(shù)產(chǎn)生的α7基因缺陷型的小鼠中產(chǎn)生的TNF(Orr-Urtregeretal.，1997)。缺少α7受體亞基的小鼠發(fā)育正常，總體上沒有表現(xiàn)出解剖學(xué)缺陷(Id.；Franceschinietal.，2000)。暴露于內(nèi)毒素的α7亞基缺陷型小鼠中的血清TNF水平比野生型對照小鼠高5倍(野生型血清TNF＝2.3±0.3ngml-1，α7易除小鼠的血清TNF＝12.2±4.7ngml-1，p＜0.05(雙尾t檢驗))(圖4a)。剔除小鼠的肝和脾中產(chǎn)生的TNF也較高(圖4b，c)，表明煙堿乙酰膽堿受體α7亞基對于體內(nèi)炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)具有重要作用。內(nèi)毒素血癥的α7亞基缺陷型的小鼠與野生型小鼠相比也產(chǎn)生顯著更高水平的IL-1β(圖4d)和IL-6(圖4e)。來自α7亞基剔除的小鼠的巨噬細胞能抵抗類膽堿激動劑，在存在煙堿或乙酰膽堿的時候也能正常產(chǎn)生TNF(表1)。因此煙堿乙酰膽堿受體α7亞基在巨噬細胞中的表達對于TNF的類膽堿調(diào)節(jié)是必需的。表1.野生型和α7-缺陷型腹膜巨噬細胞的TNF產(chǎn)生處理TNF-ngml-1野生型α7剔除從硫乙醇酸鹽誘導(dǎo)的野生型小鼠或煙堿乙酰膽堿受體α7亞基剔除小鼠分離的腹膜巨噬細胞用LPS(100ng/ml)在培養(yǎng)基中刺激4小時。對照未刺激的巨噬細胞培養(yǎng)基。需要指出，煙堿或乙酰膽堿(Ach)在LPS之前5-10分鐘加入。用ELISA檢測TNF水平；數(shù)據(jù)顯示為平均值±s.e.m.每組n＝8。*＝與LPS具有顯著性差異，p＜0.05，雙尾t檢驗結(jié)果。為了確定煙堿乙酰膽堿受體α7亞基是否是系統(tǒng)性TNF的迷走神經(jīng)抑制所必需的，我們對內(nèi)毒素血癥的野生型或α7亞基缺陷型小鼠的迷走神經(jīng)進行電刺激(Borovikovaetal.，2000)。對迷走神經(jīng)的電刺激在野生型小鼠中顯著減少了內(nèi)毒素誘導(dǎo)的血清TNF水平(圖5)。但是，在煙堿乙酰膽堿受體α7亞基缺陷型小鼠中用這種方法進行迷走神經(jīng)的刺激并不減少內(nèi)毒素血癥期間的血清TNF水平(圖5)。因此，在體內(nèi)對迷走神經(jīng)刺激的功能反應(yīng)需要煙堿乙酰膽堿受體α7亞基來抑制TNF釋放。這些結(jié)果暗示對于炎癥和TNF釋放的調(diào)控可以有幾種理解，也可以設(shè)計幾種治療方案。以前的數(shù)據(jù)表明煙堿乙酰膽堿受體α7亞基形成參與細胞間快速化學(xué)信號傳導(dǎo)的同五聚體受體(Lindstrom，1995；Leonard&Bertrand，2001；LeNovere&Changeux，1995)。神經(jīng)元煙堿乙酰膽堿α7受體對于鈣是高度滲透的(Vijayaraghavanetal.，1992；Shoopetal.，2001)，我們已經(jīng)觀察到煙堿在巨噬細胞中可誘導(dǎo)暫時的鈣流量(數(shù)據(jù)未顯示)。這種增加的鈣流量的作用和抑制TNF釋放的細胞內(nèi)機制還需要進一步研究。破壞煙堿乙酰膽堿受體α7亞基在體內(nèi)的表達顯著增加內(nèi)毒素誘導(dǎo)的TNF釋放，使迷走神經(jīng)刺激劑無效，這可作為抑制TNF釋放的方法。這表明煙堿乙酰膽堿受體α7亞基的產(chǎn)物對于內(nèi)毒素血癥的系統(tǒng)性炎性反應(yīng)期間的急性TNF釋放的迷走神經(jīng)調(diào)節(jié)是必需的。迷走神經(jīng)末梢釋放的，或者其它來源(例如淋巴細胞或者上皮細胞)的乙酰膽堿特別可抑制巨噬細胞的激活。有可能研究類膽堿激動劑，將煙堿乙酰膽堿受體α7亞基靶定于外周免疫細胞，作為抗炎性試劑抑制TNF釋放。還有可能研究具有抗炎性活性的迷走神經(jīng)刺激劑；類似的物質(zhì)在臨床上是安全的，可用于治療一些疾病發(fā)作的受試體，因此關(guān)注能靶定煙堿乙酰膽堿受體α7亞基的TNF抑制策略是合情合理的。方法α-銀環(huán)蛇毒素染色和共焦顯微鏡方法人巨噬細胞的分離和培養(yǎng)如前所述(Borovikovaetal.，2000)。細胞在完全培養(yǎng)基(具有10％熱滅活的人血清的RPMI1640)中在存在MCSF(2ng/ml)的條件下分化七天。分化的巨噬細胞與1.5μgml-1的FITC標(biāo)記的α-銀環(huán)蛇毒素(SIGMA)一起在細胞培養(yǎng)基中在4℃培育15分鐘。在加入α-銀環(huán)蛇毒素之前加入煙堿使其終濃度為500μM。用RPMI培養(yǎng)基(GIBCO)洗滌細胞三次，然后在4％的多聚甲醛-PBS溶液(pH7.2)中室溫固定15分鐘。固定之后用PBS洗滌細胞一次，用熒光共焦顯微鏡觀察計數(shù)。RT-PCR.用TRIzol試劑從體外分化的人巨噬細胞中提取總RNA。用TitanOneTubeRT-PCR試劑盒(RocheMolecularBiochemicals)進行逆轉(zhuǎn)錄和第一輪PCR，根據(jù)制造商的手冊操作。用Promega2xPCRmastermix進行第二輪巢式PCR。巢式PCR的PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進行電泳，用GeneCleanIII試劑盒(Biolab)回收并進行測序以驗證結(jié)果。逆轉(zhuǎn)錄和第一輪PCR所用的引物是α1有義引物5′-CCAGACCTGAGCAACTTCATGG-3′5′-AATGAGTCGACCTGCAAACACG-3′；α有義引物5′-GACTGTTCGTTTCCCAGATGG-3′，反義引物5′-ACGAAGTTGGGAGCCGACATCA-3′；α9有義引物5′-CGAGATCAGTACGATGGCCTAG-3′，反義引物5′-TCTGTGACTAATCCGCTCTTGC-3′。巢式PCR的引物是α1有義引物5′-ATCACCTACCACTTCGTCATGC-3′，反義引物5′-GTATGTGGTCCATCACCATTGC-3′；α7有義引物5′-CCCGGCAAGAGGAGTGAAAGGT-3′，反義引物5′-TGCAGATGATGGTGAAGACC-3′；α有義引物5′-AGAGCCTGTGAACACCAATGTGG-3′，反義引物5′-ATGACTTTCGCCACCTTCTTCC-3′。要克隆全長α7cDNA，使用下述引物5′AGGTGCCTCTGTGGCCGCA3′和5′GACTACTCAG-TGGCCCTG3′；5′CGACACGGAGACGTGGAG3′和5′GGTACGGATG-TGCCAAGGAGT3′；5′CAAGGATCCGGACTCAACATGCGCTGCTCG3′和5′CGGCTCGAGTCACCAGTGTGGTTACGCAAAGTC3′。Westernblotting和α-銀環(huán)蛇毒素pull-dowr檢測.將PC12或初級人巨噬細胞與裂解緩沖液(150mMNaCl，5mMEDTA，50mMTrispH7.4，0.02％疊氮鈉，1％TritonX-100和蛋白酶抑制劑混合物)在冰上共培育90分鐘制備得到細胞溶解物。在SDSPAGE凝膠上將等量的總蛋白與α7特異性抗體(SantaCruzsc-1447)或α1單克隆抗體(Oncogene)進行westernblotting。在α-銀環(huán)蛇毒素pull-down檢測中，α-銀環(huán)蛇毒素(SIGMA)與CNBr-活化的Sepharose珠(Pharmacia)結(jié)合，然后與細胞溶液物在4℃培育過夜。將珠子和結(jié)合蛋白用裂解緩沖液洗滌四次，用α7特異性抗體(多克隆SantaCruzH-302，單克隆SigmaM-220)進行westernblotting進行分析。反義寡核苷酸實驗.合成硫代磷酸酯反義寡核苷酸并用Genosys純化。寡核苷酸序列是ASα75′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′；ASα15′-gggctccatgggctaccgga-3′；ASα105′-ccccatggccctggcactgc-3′。這些序列覆蓋了α7，α1和α10基因的不同的翻譯起始區(qū)域。這些反義寡核苷酸的遞送如Cohenetal.(1997)所述，寡核苷酸濃度為1μM，時間為24小時。在細胞培養(yǎng)實驗中，用所述寡核苷酸預(yù)處理的巨噬細胞培養(yǎng)物用新鮮培養(yǎng)基洗滌并用100ngml-1LPS和煙堿(1μM，在LPS之前5-10分鐘加入)進行刺激，或者不用煙堿。LPS刺激后用L929檢測測定釋放的TNF的量，然后用TNFELISA進行驗證。在α-銀環(huán)蛇毒素染色中，洗滌預(yù)處理的細胞并進行處理，如上所述地進行FITC-α-銀環(huán)蛇毒素染色。煙堿和其它煙堿乙酰膽堿受體α7亞基激動劑也能顯著抑制鼠巨噬細胞樣細胞系RAW264.7中LPS誘導(dǎo)的TNF釋放(數(shù)據(jù)未顯示)。α7煙堿受體缺陷型小鼠.α7煙堿受體缺陷型小鼠(C57BL/6背景)和野生型同窩出生仔鼠購自TheJacksonLaboratory(B6.1297-Chrna7mtmlBay，#003232)。繁殖純合體剔除小鼠或野生型小鼠得到其后代。用大約8到12周齡的雌性和雄性小鼠(年齡和性別都與野生型對照相匹配)進行內(nèi)毒素實驗。將小鼠逐個稱重，相應(yīng)地給予0.1mgkg-1LPS(i.p.)。在TNF實驗中，在給予LPS一小時后收集血液，肝和脾。在IL-1β和IL-6實驗中，在給予LPS四小時后收集血液樣品。用ELISA檢測TNF，IL-1β和IL-6。用基因組PCR策略驗證小鼠的基因型。從大約8周齡(每組n＝8)的硫乙醇酸鹽誘導(dǎo)的(48小時)α7剔除和野生型雄性和雌性小鼠中分離腹膜巨噬細胞。每組收集巨噬細胞并培養(yǎng)過夜。在加入LPS(100ngml-1)之前5-10分鐘加入煙堿和乙酰膽堿。與乙酰膽堿一起加入溴化3-二甲氨基甲酰氧基-1-甲基吡啶(100μM)。LPS誘導(dǎo)后四個小時，用ELISA檢測TNF水平。迷走神經(jīng)刺激.α7煙堿受體缺陷型小鼠(C57BL/6背景)和年齡和性別相匹配的野生型C57BL/6小鼠用克他命(100mgkg-1，肌肉內(nèi))和甲苯噻嗪(100mgkg-1，肌肉內(nèi))進行麻醉。對小鼠施以假手術(shù)或用電刺激組件(STM100A，HarvardApparatus)對迷走神經(jīng)進行刺激(左迷走神經(jīng)，1伏，2ms，1Hz)。刺激進行20分鐘(給予LPS之前10分鐘，之后10分鐘)。給予致命量的LPS(75mgkg-1，腹膜腔內(nèi))。給予LPS之后2小時收集血液。用ELISA檢測TNF水平。統(tǒng)計學(xué)分析.用雙尾t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析；P＜0.05則認為具有顯著性。實驗重復(fù)兩次或三次；在體內(nèi)實驗或離體實驗中，“n”指每種條件下動物的數(shù)目。實施例2化合物(V)和(VI)左盲腸結(jié)扎和穿孔鼠模型的膿毒癥中起保護作用式(V)和(VI)的化合物在治療盲腸結(jié)扎和穿孔鼠模型的膿毒癥中特別有效。3-(2，4-二甲氧基苯亞甲基)anabaseine(V)3-(4-羥基-2-甲氧基-苯亞甲基)anabaseine(VI)如FinkandHeard，J.ofSurg.Res.49186-196(1990)，Wichmanetal.，Crit.CareMed.262078-2086(1998)和Remicketal.，Shock489-95(1995)所述進行盲腸結(jié)扎和穿孔(CLP)。簡短來說，肌肉內(nèi)施用75mg/kg克他命(FortDodge，F(xiàn)ortDodge，Iowa)和20mg/kg甲苯噻嗪(BohringerIngelheim，St.Joseph，MO)進行麻醉。進行中線切割并分離盲腸。在距離遠離回盲瓣的盲腸末端5.0mm的位置處進行6-0聚丙烯紡織纖維縫合結(jié)扎。用22標(biāo)準尺寸針對結(jié)扎的盲腸參與部分進行一次穿孔，不直接擠出糞便。然后將盲腸放回其在腹部內(nèi)的正常位置。然后用6-0聚丙烯紡織纖維進行兩層縫合封閉腹腔，即分別對腹膜和肌膜縫合以防止體液外瀉。以20ml/kg體重給所有動物皮下給予生理鹽水使其復(fù)蘇。手術(shù)后給每只小鼠皮下注射imipenem(0.5mg/小鼠)(Primaxin，Merck&Co.，Inc.，WestPoint，PA)30分鐘。然后使動物復(fù)蘇。小鼠用4mg/kg的3-2，4-二甲氧基苯亞甲基anabaseine(化合物(V))或者4mg/kg的3-(4-羥基-2-甲氧基-苯亞甲基anabaseine(化合物(VI))以及載體對照處理。這些化合物和載體對照給予到腹腔內(nèi)(i.p.)，在第1天和第2天(分別是手術(shù)后24小時和48小時)一天兩次，在第3天給予一次。每天監(jiān)測其死亡率直至手術(shù)后14天。結(jié)果如圖6所示，其中顯示了用化合物(V)，化合物(VI)或載體對照處理后存活動物的百分數(shù)。在第14天，有91％(p＜0.01)的用化合物(V)處理的小鼠和82％(p＜0.02)的用化合物(VI)處理的小鼠存活，而只有30％的用載體對照處理的小鼠存活。這些結(jié)果證明化合物(V)和化合物(VI)能顯著提高膿毒癥的鼠CLP模型中的存活率。實施例3化合物(V)和煙堿抑制鼠RAW2647巨噬細胞樣細胞中LPS誘導(dǎo)的TNF-α釋放鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞(美國典型組織培養(yǎng)物保藏中心，Rockville，Md.，USA)在加入10％胎牛血清，青霉素和鏈霉素的DMEM中培養(yǎng)。將細胞接種于24孔的組織培養(yǎng)板中的Opti-MEM1培養(yǎng)基中，90％匯合。細胞用0.001，0.01，0.1，1，10或100μM的化合物(V)或煙堿(Sigma)處理。加入化合物(V)或煙堿后五分鐘，將細胞用LPS(500ng/ml)處理。4小時后收集上清，用ELISA(R&DSystemsInc.，Minneapolis，MN的鼠ELISA試劑盒)檢測TNF-α。結(jié)果如圖7所示，證明化合物(V)與煙堿一樣以劑量依賴的方式抑制RAW264.7細胞的TNF-α釋放。實施例4化合物(VI)抑制鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導(dǎo)的TNF-α釋放鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞(美國典型組織培養(yǎng)物保藏中心，Rockville，Md.，USA)在加入10％胎牛血清，青霉素和鏈霉素的DMEM中培養(yǎng)。將細胞接種于24孔的組織培養(yǎng)板中的Opti-MEM1培養(yǎng)基中，90％匯合。在圖8A中，用0.1，1和10μM的化合物(VI)處理細胞。在與化合物(VI)預(yù)培育0.1，4或24小時后，用LPS(500ng/ml)處理細胞。4小時后收集上清，用ELISA(R&DSystemsInc.，Minneapolis，MN的鼠ELISA試劑盒)檢測TNF-α。結(jié)果如圖8A所示，顯示為TNF-α抑制的百分數(shù)。化合物(VI)以劑量依賴的方式抑制TNF-α。圖8B顯示了圖8A中預(yù)培育0小時的結(jié)果，顯示為TNF-α抑制的百分數(shù)?；衔?VI)的估計IC50為0.9μM。實施例5在LPS刺激之前的化合物(VI)處理抑制小鼠中的循環(huán)TNF將C57B/6小鼠用4mg/kg化合物(VI)或載體對照進行腹膜腔內(nèi)處理(i.p.)。用化合物(VI)或載體處理后5分鐘，給小鼠i.p.注射100μgLPS。LPS處理后2小時處死小鼠，收集血液樣品檢測TNF-α。如上所述用ELISA檢測TNF-α。如圖9所示，在LPS刺激之前用化合物(VI)處理使循環(huán)TNF-α水平與用載體對照處理的小鼠相比降低了大約50％。實施例6化合物(VI)在鼠DSS結(jié)腸炎中減少了結(jié)腸炎癥右旋硫酸鈉誘導(dǎo)的(DSS)結(jié)腸炎的操作如Hoveetal.，Dig.Dis，Sci.47(9)2056-2063(2002)所述。C57B/6小鼠在其飲用水中給予3％(w/v)DSS(分子量40kDa；TdBConsultancy，Uppsala，Sweden)，持續(xù)7天。開始給予DSS后12小時，給小鼠i.p.注射4mg/kg化合物(VI)一天兩次，持續(xù)7天。第7天處死小鼠。小鼠死亡后收集結(jié)腸，通過中線切割摘除。測量結(jié)腸總長度，結(jié)果如圖10(B)所示。結(jié)腸縮短表示結(jié)腸炎更加嚴重。用化合物(VI)處理的小鼠結(jié)腸比對照小鼠的結(jié)腸長度略長(p＝0.07)，表明化合物(VI)處理的小鼠的結(jié)腸炎較輕。另一個表示疾病嚴重程度的特征，結(jié)腸重量也進行了測量。記錄結(jié)腸濕重作為炎癥水腫的指標(biāo)。結(jié)果如圖10(A)所示。用化合物(VI)處理的小鼠的結(jié)腸與對照條件的小鼠相比重量減輕。這些結(jié)果表明化合物(VI)在鼠DSS結(jié)腸炎中減少了結(jié)腸炎癥實施例7化合物(VII)抑制鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導(dǎo)的TNF-α釋放化合物(VII)在抑制TNF-α釋放上顯示出顯著的效果。(-)-螺-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，5′-惡唑烷-2′-酮(VII)鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞(美國典型組織培養(yǎng)物保藏中心，Rockville，Md.，USA)如實施例3所述進行培養(yǎng)。將細胞用0.001，0.01，0.1，1，10或100μM的(-)-螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，5′-惡唑烷-2′-酮](化合物(VII))。加入化合物(VII)后5分鐘，用LPS(500ng/ml)處理細胞。如上所述用ELISA檢測TNF-α。結(jié)果如圖11所示，其中證明了較高濃度的化合物(VII)抑制RAW264.7細胞的TNF-α釋放。用100μM的化合物(VII)處理的細胞中的TNF-α釋放與對照細胞降低了四倍多。綜上所述，可以看到本發(fā)明具有幾個優(yōu)點，也具有其它優(yōu)點。可以對上述方法和組合物進行各種改變而不背離本發(fā)明的范圍，上述說明書中所包含的所有內(nèi)容以及附圖中所顯示的內(nèi)容都是舉例說明而不具有限制作用。說明書中所有引用的參考文獻都在此引入作為參考。本文中對參考文獻的討論僅僅是作者的觀點，而不應(yīng)當(dāng)將任何參考文獻作為現(xiàn)有技術(shù)。申請人保留置疑所引用的參考文獻的準確性和相關(guān)性的權(quán)利。本發(fā)明特別給出了優(yōu)選的實施方案，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解可以對其形式和細節(jié)上進行各種變化而不背離由權(quán)利要求包括的本發(fā)明的范圍。權(quán)利要求1.一種治療患有由促炎性細胞因子的釋放介導(dǎo)的疾病的受試體的方法，包括用足量的能減少巨噬細胞中促炎性細胞因子釋放的量的對α7煙堿受體選擇性的類膽堿激動劑治療受試體其中所述疾病選自闌尾炎，消化器官，胃和十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，會厭炎，弛緩不能，膽管炎，膽囊炎，肝炎，惠普爾病，哮喘，變態(tài)反應(yīng)，過敏性休克，免疫復(fù)合體疾病，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒癥，敗血病，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，高燒，嗜伊紅細胞肉芽腫，肉芽腫病，肉樣瘤，膿毒性流產(chǎn)，附睪炎，陰道炎，前列腺炎，尿道炎，支氣管炎，肺氣腫，鼻炎，囊腫性纖維化，局限性肺炎，黑肺病(pneumoultramicroscopicsilicovolcanoconiosis)，alvealitis，細支氣管炎，咽炎，胸膜炎，竇炎，流行性感冒，呼吸道合胞病毒，皰疹感染，HIV感染，乙型肝炎病毒感染，丙型肝炎病毒感染，散播菌血癥，登革熱，念珠菌病，瘧疾，絲蟲病，阿米巴病，水泡囊，燒傷，血管炎，angiitis，心內(nèi)膜炎，動脈炎，動脈硬化癥，血栓性靜脈炎，心包炎，心肌炎，心肌缺血，動脈周炎，風(fēng)濕熱，乳靡泄，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合癥，阻塞性肺病，腦膜炎，腦炎，神經(jīng)炎，神經(jīng)痛，脊髓損傷，癱瘓，葡萄膜炎，關(guān)節(jié)炎，關(guān)節(jié)痛，骨髓炎，筋膜炎，佩吉特式病，痛風(fēng)，牙周疾病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，滑膜炎，重癥肌無力，甲狀腺炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，古德帕斯丘綜合征，白塞氏綜合癥，同種異體移植物排斥，移植物抗宿主癥，僵直性脊椎炎，Berger病，僵直性脊椎炎，Berger病，瑞特綜合癥和何杰金氏病。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述促炎性細胞因子選自腫瘤壞死因子(TNF)，白介素(IL)-1β，IL-6，IL-18和HMG-1。3.權(quán)利要求1的方法，其中所述促炎性細胞因子是TNF。4.權(quán)利要求1的方法，其中所述類膽堿激動劑選自可卡因的四元類似物；(1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基)-氨基甲酸1-(2-氟苯基)-乙酯；式I的化合物其中，R代表氫或甲基，n代表0或1；式I的化合物的藥學(xué)可接收的鹽；式II的化合物其中m是1或2；n是0或1；Y是CH，N或NO；X是氧或硫；W是氧，H2或F2；A是N或C(R2)；G是N或C(R3)；D是N或C(R4)；條件是A，G和D中不超過一個是氮，但是Y，A，G和D中至少一個是氮或NO；R1是氫或C1-C4烷基；R2，R3和R4獨立地是氫，鹵素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3，或者R2和R3，R3和R4分別一起形成另一個六元芳香環(huán)或者共同具有A和G，或G和D，分別含有零到兩個氮原子，并被一種或兩種下述取代基取代的雜芳環(huán)獨立地氫，鹵素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3；R5和R6獨立地是氫，C1-C4烷基，C(O)R7，C(O)NHR8，C(O)OR9，SO2R10或一起構(gòu)成(CH2)jQ(CH2)k，其中Q是O，S，NR11，或一個鍵；j是2到7；k是0到2；R7，R8，R9，R10，R11獨立地是C1-C4烷基，芳基，或雜芳基，或其對映異構(gòu)體?；蚱渌帉W(xué)可接收的鹽；式II的化合物的藥學(xué)可接收的鹽；式III的化合物其中R1，R6和R7是氫或C1-C4烷基；R2選自下組和其中R3，R4和R5選自氫，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C4烷基，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C6烷氧基，在烷氧基上具有1到4個碳的烷氧羰基，氨基，在?；暇哂?到4個碳的酰氨基，氰基，和在每個烷基上具有1到4個碳的二烷基氨基，鹵素，羥基或硝基；以及式IV的化合物其中X是O或S；并且R選自H，OR1，NHC(O)R1，和鹵素，其中R1是C1-C4烷基。5.權(quán)利要求1的方法，其中所述類膽堿激動劑是式I的化合物R代表氫或甲基，n代表0或1；或其藥學(xué)可接收的鹽。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述類膽堿激動劑是(-)-螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，5′-惡唑啉-2′-酮]7.權(quán)利要求1的方法，其中所述類膽堿激動劑是式II的化合物其中m是1或2；n是0或1；Y是CH，N或NO；X是氧或硫；W是氧，H2或F2；A是N或C(R2)；G是N或C(R3)；D是N或C(R4)；條件是A，G和D中不超過一個是氮，但是Y，A，G和D中至少一個是氮或NO；R1是氫或C1-C4烷基；R2，R3和R4獨立地是氫，鹵素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3，或者R2和R3，R3和R4分別一起形成另一個六元芳香環(huán)或者共同具有A和G，或G和D，分別含有零到兩個氮原子，并被一種或兩種下述取代基取代的雜芳環(huán)獨立地氫，鹵素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3；R5和R6獨立地是氫，C1-C4烷基，C(O)R7，C(O)NHR8，C(O)OR9，SO2R10或一起構(gòu)成(CH2)jQ(CH2)k，其中Q是O，S，NR11，或一個鍵；j是2到7；k是0到2；R7，R8，R9，R10，R11獨立地是C1-C4烷基，芳基，或雜芳基，或其對映異構(gòu)體，或其藥學(xué)可接收的鹽。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述類膽堿激動劑是式II的化合物，其中m是1；n是0；p是0；x是氧；A是C(R2)；G是C(R3)；D是C(R4)。9.權(quán)利要求7的方法，其中所述類膽堿激動劑是5′-苯基螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，2′-(3′H)-呋喃并[2，3-b]吡啶]。10.權(quán)利要求1的方法，其中所述類膽堿激動劑是式III的化合物其中R1，R6和R7是氫或C1-C4烷基；R2選自下組和其中R3，R4和R5選自氫，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C4烷基，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C6烷氧基，在烷氧基上具有1到4個碳的烷氧羰基，氨基，在?；暇哂?到4個碳的酰氨基，氰基，和在每個烷基上具有1到4個碳的二烷基氨基，鹵素，羥基或硝基。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述類膽堿激動劑是式III的化合物，其中R2與四氫吡啶環(huán)的3-位置相連，進一步其中與苯環(huán)的4-或2-位置相連的R3選自下組氨基，羥基，氯，氰，二甲基氨基，甲基，甲氧基，乙酰氨基，乙酰氧基，和硝基。12.權(quán)利要求10的方法，其中所述類膽堿激動劑是選自下組的化合物通式III，其中R3是羥基，其中R1，R4和R5是氫；通式III，其中R3是乙酰氨基，其中R1，R4和R5是氫；通式III，其中R3是乙酰氧基，其中R1，R4和R5是氫；通式III，其中R3是甲氧基，其中R1，R4和R5是氫；通式III，其中R3是甲氧基，其中R1和R4是氫，進一步其中R3與苯環(huán)的2-位置相連，與苯環(huán)的4-位置相連的R5是甲氧基或羥基。13.權(quán)利要求10的方法，其中所述類膽堿激動劑選自3-2，4-二甲氧基苯亞甲基anabaseine(DMXB-A)，3-(4-羥基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-甲氧基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-氨基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-羥基-2-甲氧基苯亞甲基)anabaseine(化合物(VI))，3-(4-甲氧基-2-羥基苯亞甲基)anabaseine，反-3-亞肉桂基anabaseine，反-3-(2-甲氧基-亞肉桂基)anabaseine和反-3-(4-甲氧基亞肉桂基)anabaseine。14.權(quán)利要求10的方法，其中所述類膽堿激動劑是3-(4-羥基-2-甲氧基苯亞甲基)anabaseine15.權(quán)利要求10的方法，其中所述類膽堿激動劑是3-(2，4-二甲氧基苯亞甲基)anabaseine。16.權(quán)利要求1的方法，其中所述類膽堿激動劑是通式IV的化合物其中X是O或S；并且R選自H，OR1，NHC(O)R1，和鹵素，其中R1是C1-C4烷基。17.權(quán)利要求15的方法，其中所述的類膽堿激動劑選自N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羥苯氧基)苯甲酰胺，N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-乙酰氨基苯氧基)苯甲酰胺，N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(苯基硫烷基)苯甲酰胺，和N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(3-氯苯基磺酰基)苯甲酰胺。18.權(quán)利要求15的方法，其中所述類膽堿激動劑是N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羥苯氧基)苯甲酰胺。19.權(quán)利要求1的方法，其中所述類膽堿激動劑是甲碘化可卡因。20.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病選自闌尾炎，消化器官，胃或十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，肝炎，哮喘，變態(tài)反應(yīng)，過敏性休克，器官壞死，花粉熱，膿毒癥，敗血病，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，膿毒性流產(chǎn)，散播菌血癥，燒傷，乳靡泄，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合癥，慢性阻塞性肺病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，心肌缺血，脊髓損傷，癱瘓，同種異體移植物排斥或移植物抗宿主癥。21.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病選自闌尾炎，消化器官，胃或十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，肝炎，哮喘，變態(tài)反應(yīng)，過敏性休克，器官壞死，花粉熱，膿毒癥，敗血病，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，膿毒性流產(chǎn)，散播菌血癥，燒傷，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合癥，慢性阻塞性肺病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，心肌缺血，大腦梗塞，大腦栓塞，脊髓損傷，癱瘓，同種異體移植物排斥或移植物抗宿主病。22.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病選自腹膜炎，胰腺炎，膿毒癥，內(nèi)毒素性休克，成人呼吸窘迫綜合癥，慢性阻塞性肺病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，心肌缺血，同種異體移植物排斥，哮喘，移植物抗宿主病，充血性心力衰竭和囊腫性纖維化。23.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病選自腹膜炎，胰腺炎，內(nèi)毒素性休克，惡病體質(zhì)，成人呼吸窘迫綜合癥，慢性阻塞性肺病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，心肌缺血，和同種異體移植物排斥。24.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是膿毒癥。25.確定化合物是否是對α7煙堿受體具有選擇性的類膽堿激動劑的方法，所述方法包括確定化合物是否能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子，并且確定所述化合物是否是能與至少一個非α7的煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑，其中能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子，并且不是能與至少一個非α7的煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑的化合物是對α7煙堿受體具有選擇性的類膽堿激動劑。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述促炎性細胞因子選自腫瘤壞死因子(TNF)，白介素(IL)-1β，IL-6，IL-18和HMG-1。27.權(quán)利要求25的方法，其中所述促炎性細胞因子是TNF。28.權(quán)利要求25的方法，其中所述哺乳動物細胞是免疫細胞。29.權(quán)利要求25的方法，其中所述哺乳動物細胞是巨噬細胞。30.權(quán)利要求25的方法，進一步包括用能刺激促炎性細胞因子級聯(lián)的試劑處理所述哺乳動物細胞。31.權(quán)利要求30的方法，其中所述試劑是LPS。32.權(quán)利要求25的方法，其中促炎性細胞因子釋放的抑制的確定包括測定所述促炎性細胞因子的mRNA。33.權(quán)利要求25的方法，其中促炎性細胞因子釋放的抑制的確定包括測定所述促炎性細胞因子的蛋白。34.權(quán)利要求25的方法，其中促炎性細胞因子釋放的抑制的確定包括測定所述促炎性細胞因子的活性。35.確定化合物是否是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿拮抗劑的方法，所述方法包括確定化合物是否能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力，其中能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的化合物是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿拮抗劑。36.權(quán)利要求35的方法，其中所述促炎性細胞因子選自腫瘤壞死因子(TNF)，白介素(IL)-1β，IL-6，IL-18和HMG-1。37.權(quán)利要求35的方法，其中所述促炎性細胞因子是TNF。38.權(quán)利要求35的方法，其中所述哺乳動物細胞是免疫細胞。39.權(quán)利要求35的方法，其中所述哺乳動物細胞是巨噬細胞。40.權(quán)利要求35的方法，進一步包括用能刺激促炎性細胞因子級聯(lián)的試劑處理所述哺乳動物細胞。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述試劑是LPS。42.權(quán)利要求35的方法，其中對所述化合物是否能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的確定包括測定所述促炎性細胞因子的mRNA。43.權(quán)利要求35的方法，其中對所述化合物是否能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的確定包括測定所述促炎性細胞因子的蛋白。44.權(quán)利要求35的方法，其中對所述化合物是否能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的確定包括測定所述促炎性細胞因子的活性。45.確定檢測化合物是否具有抑制炎癥的能力的方法，所述方法包括確定檢測化合物是否是能與α7煙堿受體反應(yīng)的類膽堿激動劑。46.權(quán)利要求45的方法，其中所述受體是巨噬細胞。47.確定檢測化合物是否具有抑制炎癥的能力的方法，所述方法包括確定檢測化合物是否能抑制α7煙堿受體拮抗劑的結(jié)合。48.權(quán)利要求47的方法，其中所述α7受體拮抗劑是銀環(huán)蛇毒素。49.一種能抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露于類膽堿激動劑的時候其中脂多糖誘導(dǎo)的TNF釋放的減少的寡核苷酸或其模擬物，其中所述寡核苷酸或模擬物基本由大于5個核苷酸長的與α7受體mRNA互補的序列組成。50.權(quán)利要求49的寡核苷酸或模擬物，其中所述序列與所述mRNA的轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域互補。51.權(quán)利要求49的寡核苷酸，其中所述序列包括5′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′。52.權(quán)利要求49的寡核苷酸，其中所述序列基本由5′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′組成。53.一種抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露于類膽堿激動劑的時候其中TNF釋放的減少的方法，所述方法包括用權(quán)利要求49的寡核苷酸或模擬物處理巨噬細胞。54.權(quán)利要求53的方法，其中所述巨噬細胞是在哺乳動物體內(nèi)。55.權(quán)利要求54的方法，其中所述哺乳動物是人。全文摘要提供了一種抑制巨噬細胞釋放促炎性因子的方法。所述方法包括用足量的能減少巨噬細胞釋放的促炎性因子的量的類膽堿激動劑處理巨噬細胞。其中所述類膽堿激動劑對α7煙堿酸受體是選擇性的。還提供了一種在受試體中抑制炎性細胞因子級聯(lián)的方法。所述方法包括用足量的能抑制炎性細胞因子級聯(lián)的類膽堿激動劑治療受試體，其中所述類膽堿激動劑對α7煙堿酸受體是選擇性的。還提供了確定一種化合物是否是能與α7煙堿酸受體反應(yīng)的類膽堿激動劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子。此外，還提供了確定一種化合物是否是能與α7煙堿酸受體反應(yīng)的類膽堿拮抗劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否能降低類膽堿激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力。還提供了能抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露于類膽堿激動劑的時候其中脂多糖誘導(dǎo)的TNF釋放的減少的寡核苷酸或其模擬物。所述寡核苷酸或其模擬物基本上由大于5個核苷酸長的與α7受體mRNA互補的序列組成。此外，提供了抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露于類膽堿激動劑的時候其中TNF釋放的減少的方法。所述方法包括用上述的寡核苷酸和模擬物處理巨噬細胞。文檔編號G01N33/68GK1735414SQ200380108261公開日2006年2月15日申請日期2003年12月5日優(yōu)先權(quán)日2002年12月6日發(fā)明者凱文·J·翠西,王紅申請人:北岸長島猶太人研究學(xué)院