液體樣品中活菌總數的快速檢測方法

液體樣品中活菌總數的快速檢測方法  文檔序號：5906887 導航： X技術> 最新專利>測量裝置的制造及其應用技術 專利名稱：液體樣品中活菌總數的快速檢測方法 技術領域： 食品衛生檢驗——細菌學方法背景情況介紹菌落總數指每克或每毫升樣品中含有的活細菌總數。菌落總數檢測是食品、化妝品、藥品、環境衛生等各領域樣品衛生檢驗的基本指標之一。該指標指示產品生產過程的一般衛生狀況和產品的衛生質量，并可在生產各環節中監測各工序的產品衛生質量的變化情況。  原國家標準規定的檢測方法是平板菌落計數法，對不同樣品培養1～2天后計數形成的菌落數，即代表樣品中的活菌數。該方法得到計數結果至少需要2天時間。要實現樣品的快速檢測，必須擺脫培養的方法。  本發明采用區分死活細胞的染色方法實現樣品中活細菌數的快速檢測。  本方法的工作原理不同染料對細胞著色的機理不盡相同，有的染料如美藍在對生活力不同的細胞染色時，使死亡細胞和生活細胞呈現不同的顏色或不同的著色效果，可用于區分死活細胞。因此可以利用這樣的染料進行樣品的活菌計數。采用掃描和計算機圖象處理技術，分辨樣品標本片上的細胞圖象進行統計處理，得出計數結果，即可實現樣品中活細菌數量的快速檢測。本方法適用于含菌量較高的液體樣品。如發酵液、污水等。對于含菌量低的樣品可以采用過濾、濃縮等方法提高其含菌量，然后計數。  美蘭的染色原理是美藍是一種氧化還原指示劑，氧化態美蘭呈藍色，而還原態美藍無色。因此當用美藍對細菌細胞染色時，活的細胞中含有大量還原性輔酶，使美蘭呈還原態，細胞無色，而死亡細胞則失去還原力，不能將美藍還原，細胞呈藍色。  檢測操作步驟1.(樣品均質處理)2.樣品中添加染色劑→涂片掃描計數→得到N1；3.對樣品加熱殺菌→再次涂片計數，得到N2；4.樣品中的活菌數的計算。  各步驟具體說明1.樣品處理樣品經均質處理，使成團的細胞分散；適當稀釋使樣品稀釋液中的含菌量處于適當范圍，使之便于計數；2.染色向樣品稀釋液中加入適量染液，混勻后取樣涂片，為涂片1；將染色的樣品稀釋液加熱殺菌，取樣涂片，為涂片2；3.掃描和計數將涂片1置于顯微鏡下掃描計數100個視野，求出視野平均數得到N1；再將涂片2置于顯微鏡下掃描計數100個視野，求出視野平均數得到N2；4.計算N＝N2-N1樣品中的含菌量＝N·(標本片面積/視野面積)·稀釋倍數/涂片體積 權利要求 1.本發明是對樣品中的細胞進行染色，使死亡細胞著色與活細胞著色呈現差別，從而可以區分死活細胞，達到只對活細胞進行計數的目的。 2.在權利要求1中的可用于區分死活細胞的染料如美藍及熒光染色劑等，凡是對細胞染色后可使同一種生物的活細胞與死亡細胞表現出顏色的差異，這種差異可以在顯微鏡下直接觀察到或通過拍攝照片、掃描等手段獲得圖象后經電子計算機軟件辨認出來。 3.在權利要求1中的樣品需要經過處理。這些處理包括樣品中的細胞分散處理，背景著色顆粒性雜質的去除，殺菌，涂片、染色等環節。 全文摘要  本發明采用美藍染色法實現活菌數的快速檢測，檢測操作步驟樣品預處理，添加美藍染色劑，涂片掃描計數，得到N 文檔編號G01N33/02GK1605631SQ20031010012 公開日2005年4月13日 申請日期2003年10月10日 優先權日2003年10月10日 發明者張彩, 計宏偉, 龐廣昌, 陳慶森, 胡志和, 閻亞麗 申請人:天津商學院  就看到上面的幾個字

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