專利名稱：全血尿酸濃度檢測試紙條的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種利用顯色反應檢測全血中尿酸濃度的試紙條，用于定量快速測量血液尿酸水平。
背景技術：
尿酸是嘌呤堿的氧化分解產物，在人體中無生理功能。人體嘌呤的主要來源主要有飲食、組織分解及從頭合成三條途徑。尿酸是人類嘌呤代謝的終末產物。正常情況下，主要由腎臟排泄，約占2/3其余經腸道、皮膚、頭發等排出體外。細胞和組織壞死(抗惡性腫瘤治療)、高脂血癥、腎病、痛風、惡性血液病、白血病、紅細胞增多癥、牛皮癬、單核細胞增多癥等均會在臨床上反應出尿酸升高，而腎病、黃嘌呤氧化酶活力降低、威爾遜氏病、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶缺乏癥，代謝性氨基酸尿和何杰金氏病等會在臨床上反應出尿酸降低。所以檢測血液中尿酸的含量對臨床診斷具有非常重要的意義。
以往，血液尿酸主要在大型血液生化分析儀上進行測試。但該方法存在的問題是需要使用特殊裝置，測定所需血量較多、時間較長，價格昂貴，適合在大型醫院中能夠進行。本發明的目的在于為病人家庭和小型診所提供一種能夠方便快速測量血液尿酸含量的試紙，這種試紙與微型儀器聯用可以快速方便地測試全血中的尿酸濃度，無需依賴大型血液生化分析儀。該發明只需微量血液便可在一分鐘內測出血液尿酸的含量。
技術內容本發明的目的在于提供一種能夠在各種場所方便快速測量血液尿酸含量的試紙條。并且本發明只需微量血液便可在短時間內測出血液尿酸的含量。
本發明的全血尿酸濃度檢測試紙條，包括用于做試紙條支架的疏水基底，疏水基底上開有通孔，通孔內放有相同形狀、大小的血細胞阻隔膜，通孔外一側對應位置覆有酶膜。通孔的大小為允許所加血液樣本從該通孔流入血細胞阻隔膜和酶膜內。
所述的酶膜包括基材，基材上固定有尿酸酶和過氧化物酶、顯色劑。基材為具有一定孔徑的尼龍膜、醋酸纖維素膜、纖維素膜、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜等，優選為尼龍膜。尿酸酶的含量為每平方厘米0.01-200μ活性單位，優選為每平方厘米0.5-10μ活性單位；過氧化物酶的含量為每平方厘米0.01-200μ活性單位，優選為每平方厘米0.2-15μ活性單位。顯色劑可以是單一組分的顯色劑或雙組分的顯色劑，其中單一組分的顯劑包括芳香醇、芳香胺、聯苯胺等，如鄰-聯(二)茴香胺；雙組分的顯色劑典型的有3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽(MBTH-DMAB)、3，5-二氯-2-羧基苯磺酸(DCHBS)和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽(MBTH)等，優選為3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽(MBTH-DMAB)。
所述的疏水基底為聚氯乙烯材料。所述的血細胞阻隔膜由高分子材料制成，有一定的過濾孔徑，可以將血液中的血細胞與血漿有效分離，保證全血樣品經過血細胞阻隔膜后，帶有顏色的血細胞被截留在細胞阻隔膜之上，只有血漿到達酶膜，參與反應。
這樣，當酶膜上的試劑與血液樣品發生反應時，生成的顏色物質在590nm處被檢測時，不會受到血細胞顏色的干擾。
在本發明中，制作該檢測試紙條的方法包括以下步驟(1)準備一個尼龍膜，該尼龍膜的帶電性可以根據溶液pH的改變而改變；(2)配置包含顯色劑3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽的溶液，將尼龍膜浸漬在配好的上述溶液中一段時間，取出干燥；(3)配置包含尿酸酶和過氧化物酶的酶液，將(2)干燥好的尼龍膜再浸入酶液中一段時間，取出干燥；(4)將制好的酶膜粘貼在一個疏水基底的開口處；(5)將裁好的與疏水基底開口同樣大小的血細胞阻隔膜放入開口，與酶膜相接觸；(6)依照上述方法制好檢測試紙條后，將血液樣品滴在試紙條的開口處，樣品中的待測物尿酸通過血細胞阻隔膜后到達酶膜，與酶膜上的試劑反應，生成顏色物質，顏色物質滲透到酶膜的背面，形成顏色區；(7)用波長為590nm的光源照射顏色區，用光電轉換器接收來自顏色區的反射光，反射光的強度與顏色的深淺成反比，而顏色的深淺反應被測血液樣品中尿酸的濃度。
本發明所描述的構建試紙條的方法并不限于本發明，該方法除可用于本發明外，還可用于構建用于測量其它血液參數的試紙條，例如葡萄糖、乳酸、血酮、膽固醇等。
圖1為本發明的縱向剖面結構示意圖；圖2為本發明的一平面結構示意圖；圖3為本發明的另一平面結構示意圖；圖4為本發明一實施例測量的尿酸試紙條吸光度-濃度曲線圖。
具體實施例方式
一種用于測量全血中尿酸濃度的試紙條結構如圖1、圖2和圖3所示，包括用于做試紙條支架的疏水基底1，疏水基底上開有通孔，通孔內設有相同形狀、大小的血細胞阻隔膜3，通孔外一側對應位置覆有酶膜2。通孔的大小為允許所加血液樣本從該通孔流入血細胞阻隔膜和酶膜內。疏水基底1采用聚氯乙烯材料。血細胞阻隔膜3采用有一定過濾孔徑的高分子材料。酶膜2包括基材，基材采用具有一定孔徑的尼龍膜，上面固定有尿酸酶和過氧化物酶、顯色劑。
其中，顯色劑溶液的配置在10ml 50％的乙醇溶液中加入20mg3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽和60mg 3-二甲氨基苯甲酸，完全溶解；酶溶液的配置在1ml磷酸鹽緩沖液(pH為6.5)中加入10活性單位的尿酸酶、20活性單位的過氧化物酶和8mg的混合蛋白(主要是牛血清白蛋白)，溶解均勻。
將10cm2孔徑為的尼龍膜(孔徑0.5um)先浸漬在顯色劑溶液中，3分鐘后取出干燥，其次將干燥好的帶有顯色劑成分的尼龍膜再放入酶溶液中浸漬1分鐘，取出干燥。將最后干燥好的尼龍膜按一定的尺寸裁剪成小片粘貼到疏水基底支架上的開孔下方，然后將與疏水基底開孔大小一致的血細胞阻隔膜放入開口，與尼龍膜密切接觸，用于測試全血中尿酸濃度的基于顏色反應的試紙條即制作完成。
將濃度分別為3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、20mg/dL的全血6微升分別滴加在上述方法制成的試紙條開孔反應區中，50秒后在試紙條反應區的下方通過檢測儀器測試其590nm波長處的吸光度，結果圖4所示。由此，由吸光度的大小即可反映出尿酸濃度。
權利要求
1.全血尿酸濃度檢測試紙條，包括用于做試紙條支架的疏水基底(1)，其特征在于疏水基底(1)上開有通孔，通孔內放有相同形狀、大小的血細胞阻隔膜(3)，通孔外一側對應位置覆有酶膜(2)；所述的通孔的大小允許所加血液樣本從該通孔流入血細胞阻隔膜(3)和酶膜(2)內；所述的酶膜(2)包括基材，基材上固定有尿酸酶和過氧化物酶、顯色劑。
2.如權利要求1所述的全血尿酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的疏水基底(1)為聚氯乙烯材料。
3.如權利要求1所述的全血尿酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的血細胞阻隔膜(3)由高分子材料制成，有一定的過濾孔徑，可以將血液中的血細胞與血漿有效分離，保證全血樣品經過血細胞阻隔膜(3)后，帶有顏色的血細胞被截留在細胞阻隔膜(3)之上，只有血漿到達酶膜(2)，參與反應。
4.如權利要求1所述的全血尿酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的尿酸酶的含量為每平方厘米0.01-200μ活性單位，過氧化物酶的含量為每平方厘米0.01-200μ活性單位。
5.如權利要求1所述的全血尿酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的尿酸酶的含量為每平方厘米0.5-10μ活性單位，過氧化物酶的含量為每平方厘米0.2-15μ活性單位。
6.如權利要求1所述的全血尿酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的顯色劑為3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽(MBTH-DMAB)。
7.如權利要求1所述的全血尿酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的基材為具有一定孔徑的尼龍膜。
全文摘要
本發明涉及一種利用顯色反應檢測血液中尿酸濃度的試紙條，該試紙條包括疏水基底，疏水基底上開有通孔，通孔內放有相同形狀、大小的血細胞阻隔膜，通孔外一側對應位置覆有酶膜。疏水基底采用聚氯乙烯材料。血細胞阻隔膜采用有一定過濾孔徑的高分子材料。酶膜包括基材，上面固定有尿酸酶和過氧化物酶、顯色劑。本發明可以快速準確地測定全血中的尿酸濃度，并可有效去除血細胞顏色對檢測的干擾。本發明使用簡便，并且只需微量血液便可在短時間內測出血液尿酸的含量。
文檔編號G01N33/66GK1456892SQ0312909
公開日2003年11月19日 申請日期2003年6月6日 優先權日2003年6月6日
發明者管文軍, 李光, 潘敏, 陳裕泉 申請人:浙江大學