生物傳感器及測定方法

專利名稱：生物傳感器及測定方法
技術領域：
本發(fā)明是涉及生物傳感器及測定方法，特別是涉及利用了色譜的生物傳感器以及使用它的測定方法。
作為免疫色譜傳感器的一般例子是由設有加入被檢查溶液的加入部分、多個展開層而構成，在上述展開層的局部將抗體進行固定化。另外，在比上述抗體固定化部分還上游處被標記的抗體以通過被檢查溶液可以洗提的干燥狀態(tài)保持。如果在加入部分加入必要量的被檢查溶液，則浸透上述展開層、測定開始。測定結果通過與上述抗體固定化部分結合的標記抗體進行檢測。作為標記物的一般例子有金膠體粒子，上述固定化部分的結合通過金膠體粒子可以目測，通過目測得到測定結果。這說明了把抗原抗體反應的夾層反應作為測定原理的情況，除此之外，即使把競爭反應作為測定原理，同樣也會在固定化部分中以標記試劑的結合狀態(tài)得到測定結果。而且，本發(fā)明說明書中的免疫色譜和免疫層析指的是相同的含義，使用由可以潤濕的多孔質材料產(chǎn)生的反應層，通過測定使固定化試劑和標記試劑的復合體形成的物質的免疫測定法是利用了抗原抗體反應的測定體系，在通常免疫測定法中，相對于必要的B/F分離等洗滌操作，在被檢查溶液浸透反應層即色譜載體的過程中進行B/F分離的測定體系。通常所有的試劑以干燥狀態(tài)存在，在測定時被檢查溶液潤濕。作為標記物，一般使用金膠體、膠乳，但是也使用磁性粒子、酶、金膠體以外的金屬膠體等。標記物是酶等時，使用者在測定操作方面包括加入酶基質和反應停止試劑的操作。另外，所謂一步免疫色譜指即使在上述免疫色譜中，使用者只通過加入被檢查溶液的操作進行測定的測定法，因為使用者的基本測定操作只是加入被檢查溶液的操作，所以叫做一步免疫色譜。另外，上述例子敘述了需要通過目測定性判定的情況，但是所需要的測定結果為半定量或者需要比其還高精度的判定時，有特開平10-274624號公報中所示的使用光學讀取裝置，利用透過方式讀取的方法，以及特開平10-274653號公報中所示的利用照相機等畫像進行讀取、演算處理的方法。
另外，另一方面，作為不需要使用目測的直接檢測出傳感器的信號的測定器的傳感器裝置本身就具有可以定量的功能的例子，有特許第3005303號中的發(fā)明，以及特開平7-159398號公開特許、特開平8-278305號公開特許等。這些發(fā)明具有通過使用多個固定化試劑、在多個試劑固定化部分中使用標記試劑結合的部位的數(shù)量具有定量性的功能，以及通過使試劑固定化區(qū)域中的濃度變化而具有半定量的功能，以及在多個固定化區(qū)域中可以同時測定其它的測定項目。
近幾年，在醫(yī)療診斷現(xiàn)場，POCT(ポイント·オブ·ケア·テステイング護理檢測之要點)正在迅速普及。在POCT中，特別希望可以迅速、簡便、正確的測定的裝置。其中使用的基本原理具有使測定對象物適應寬范圍的便利性，不但在臨床領域，而且在食品衛(wèi)生關連領域、環(huán)境檢測領域等各種領域中都有所發(fā)展。另一方面，在局部被限制的測定項目中，也具有定量性的，但是大部分只是定性或者半定量程度的精度，一般把更加迅速、簡便、而且高精度的、以及在廣泛領域都可以應用的技術作為課題。但是，在上述記載的方法中，根據(jù)在傳感器部分中在試劑固定化部分中檢測出標記試劑成分結合量，目的是進行測定對象物的測定，但是在試劑固定化部分中在標記試劑的結合方面有限度。首先，在利用夾層反應時，結果限制了測定抗原濃度領域。特別如果是抗原抗體反應，通常直線結合量進行增加的領域為約1位-2位。即使再多的測定對象抗原存在，也以一定的結合量飽和，不能結合再多的抗原。另外，測定對象抗原再增加時，就會產(chǎn)生前界現(xiàn)象(プロゾ—ン現(xiàn)象)。為此，測定對象抗原的濃度高時，有必要事前進行稀釋。為了進行稀釋、而且實施高精度的定量，理所當然的也要求稀釋精度，需要稀釋時使用的儀器，而且，稀釋操作變?yōu)楸仨毜摹Ｏ♂尣僮鲗τ谕ǔ；瘜W的實驗經(jīng)驗缺乏的不熟練的人來說是非常煩雜的，為此，存在不得不選擇使用者的情況。另外，不要求這些操作精度時，可以使用一般的吸液玻璃管等進行比較簡單的稀釋操作，但是存在所謂精度差的問題。另外，在測定操作中附加必須的稀釋操作，存在所謂需要時間的問題，在POCT中需要更加迅速的測定時，只能使用精度更低的定性或者半定量。另外，前界現(xiàn)象的大問題是實際的被測定溶液中的測定對象物是高濃度，但獲得的是看上去相當于低濃度的結果。例如，在臨床檢查中測定時，由于根據(jù)檢查結果選擇對患者的處方，所以極端的情況下，也存在關于生命的持續(xù)性的情況，看到由前界現(xiàn)象產(chǎn)生的偽陰性，對于該測定來說就變成最致命的課題。
接著，在利用競爭反應時，隨著測定對象抗原濃度的增加，在上述試劑固定化部分中，上述標記試劑結合量減少，上述測定對象抗原濃度在一定濃度以上時，就不結合。即使在這樣的競爭反應中，在上述固定化試劑成分中使用抗體和抗原時，結合的性質、結果也限制了測定對象抗原濃度區(qū)域，與上述夾層反應相同，在測定對象抗原濃度高時稀釋操作變?yōu)楸仨毜?，為了進行稀釋、而且實施高精度的定量，理所當然的也要求稀釋精度，需要稀釋時使用的儀器，而且，稀釋操作變?yōu)楸仨毜?。稀釋操作對于通?；瘜W的實驗經(jīng)驗缺乏的不熟練的人來說是非常煩雜的，為此，存在不得不選擇使用者的情況。另外，不要求這些操作精度時，可以使用一般的吸液玻璃管等進行比較簡單的稀釋操作，但是存在所謂精度差的問題。另外，在測定操作中增加必須的稀釋操作，存在所謂需要時間的問題，在POCT中需要更加迅速的測定時，只能使用精度更低的定性或者半定量。而且，存在只能選擇測定對象抗原濃度變化少的對象物等問題。另外，在對具有寬范圍的濃度區(qū)域的測定對象物不進行稀釋操作就進行測定時，只能使用多個傳感器裝置，多個使用時，由于測定者也使用測定對象物未知濃度的被檢查溶液，所以有必要進行兩次測定，操作性也煩雜，而且存在所謂成本高的問題。
如上所述，本發(fā)明即為解決上述問題，由于即使在被檢查溶液中測定對象物濃度為高濃度的情況下，上述試劑固定化部分相對于上述測定對象物或者上述標記試劑的親和力也不相同，所以本發(fā)明目的是檢測前界現(xiàn)象，另外，由于這些多個試劑固定化部分具有各不相同的親和力，所以本發(fā)明目的是既可以測定更廣范圍的測定對象物濃度，又由此提供了可以寬范圍地選擇測定對象物的生物傳感器。
本發(fā)明權利要求第1項記載的發(fā)明是生物傳感器，其設有展開被檢查溶液的展開層，含有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分的生物傳感器，存在多個上述試劑固定化部分，上述多個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同為特征的生物傳感器，是以設置多個上述試劑固定化部分，而且各個試劑相對于上述被檢查溶液中上述測定對象物或者上述標記試劑的親和力不相同為特征的。
本發(fā)明權利要求第2項記載的發(fā)明是生物傳感器，其設有展開被檢查溶液的展開層，含有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，是以加入上述被檢查溶液的加入部分、標記試劑部分、試劑固定化部分的順序設置的裝置，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分的生物傳感器，上述試劑固定化部分多個存在，上述多個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同為特征的生物傳感器，是以順序設置上述加入部分、標記試劑部分、試劑固定化部分的裝置，另外，存在多個上述試劑固定化部分，而且各個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中上述測定對象物或者上述標記試劑的親和性不相同為特征的。
本發(fā)明權利要求第3項記載的發(fā)明是在權利要求第1項記載的或者權利要求第2項記載的生物傳感器中，特征在于，在上述多個的試劑固定化部分中被固定化試劑是抗體，被檢查溶液中的測定對象物是抗原，對于加入上述被檢查溶液的部分，越是上游越可將相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力高的抗體固定，也即是在權利要求第1項或者權利要求第2項記載的生物傳感器中，特征在于，上述試劑固定化部分是抗體，被檢查溶液中的上述測定對象物是抗原，而且，對于加入上述被檢查溶液的部分，檢測體的浸透展開方向是上游，也就是，加入的被檢查溶液展開開始后，使上述標記物一邊洗提一邊進行展開，但是其展開混合液越是首先接觸的部分，對于上述抗原的親和力越高。換句話說，是以加入上述被檢查溶液后，越是后接觸的上述試劑固定化部分，相對于上述抗原的親和力越低為特征的。
本發(fā)明權利要求第4項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第3項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，在上述多個試劑固定化部分中試劑是單克隆抗體，即在從權利要求第1項到權利要求第3項任一項記載的生物傳感器中，是以上述多個試劑固定化部分的試劑分別是單克隆抗體為特征的。
本發(fā)明權利要求第5項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第4項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，將上述被檢查溶液中的測定對象物進行定量，即在從權利要求第1項到權利要求第4項任一項記載的生物傳感器中，是以通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，測定上述被檢查溶液中的上述測定對象物為特征的。
本發(fā)明權利要求第6項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第5項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，檢測前界現(xiàn)象，即在從權利要求第1項到權利要求第5項任一項記載的生物傳感器中，是以通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合情況，在其測定中檢測是否存在前界區(qū)域為特征的。對于前界現(xiàn)象如上所述，在本說明書中，所謂前界現(xiàn)象指在抗原抗體反應中，例如，在測定抗原時，指抗原過剩區(qū)域和后地帶區(qū)域，上述免疫色譜傳感器中的夾層反應為例進行敘述的，根據(jù)被檢查溶液中的測定對象物濃度，在上述固定化試劑部分中，產(chǎn)生固定化試劑-測定對象物-標記試劑復合體，但是該復合體形成量隨著被檢查溶液中測定對象物濃度的提高而增加。但是，到達一定的狀態(tài)時，上述復合體形成量飽和。還有，測定對象物濃度比它還高時，復合體形成量減少。另外過剩時，到達幾乎沒有形成復合體的區(qū)域。由于包括上述復合體形成量減少的區(qū)域、或者也與測定對象物高濃度存在無關的、幾乎不能形成復合體的區(qū)域，所以通常所謂的地帶區(qū)域或者地帶現(xiàn)象的部分稱為前界區(qū)域。這說到底是以免疫色譜傳感器中的夾層反應為例進行表示的，但是不用說，即使在所謂以相同的形式使復合體形成的夾層反應體系中，測定對象物是抗體時，以及其它同樣地，在應用結合反應的反應體系中，也會產(chǎn)生這樣的現(xiàn)象。
本發(fā)明權利要求第7項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第6項任一項記載的生物傳感器中，通過測定上述多個試劑固定化部分相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，測定被檢查溶液中的測定對象物的生物傳感器，特征在于，也進行其它試劑固定化部分的標記試劑結合量的測定，根據(jù)其各自的測定結果，進行上述最上游的試劑固定化部分中標記試劑結合量測定值的前界判定，即在從權利要求第1項到權利要求第6項任一項記載的生物傳感器中，是以通過在上述多個的試劑固定化部分中，測定上述標記試劑結合量，測定被檢查溶液中的上述測定對象物，但是其實，為了進行被檢查溶液的測定，在上述多個的試劑固定化部分中，從上述被檢查溶液加入部分看出，利用最上游位置的部分，進行測定，通過對其它的試劑固定化部分中的標記試劑結合進行前界判定，可在上述最上游的試劑固定化部分中，上述標記試劑的結合判定是否存在前界區(qū)域為特征的。
本發(fā)明權利要求第8項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第7項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，由于上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以各個固定化部分中上述被檢查溶液中的測定對象物濃度測定動態(tài)范圍不相同，即在從權利要求第1項到權利要求第7項任一項記載的生物傳感器中，是以由于上述多個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力不相同，所以相對于上述被檢查溶液中的上述測定對象物的動態(tài)范圍不同為特征的。其中所述的動態(tài)范圍，如上所述，指不加以稀釋等，原樣使用被檢查溶液時的純粹的可以測定的測定對象物濃度范圍。對于此，也是以完全干燥系統(tǒng)即免疫色譜傳感器為例進行說明，現(xiàn)在一般在臨床現(xiàn)場，或者家庭中使用的，有以尿作為檢測體的妊娠診斷藥。這時，使用者通過使尿滴入傳感器裝置中，結束對于測定的操作，之后只是確認測定結果，即，如果是這種情況，則把原樣滴下尿時實際可以測定的范圍叫做測定對象物動態(tài)范圍。這是一個例子，即使對于其它的測定對象物、測定檢測體、反應形式也相同。另外，即使測定時稀釋等操作是必須的情況下，也把相對于其同一被檢查溶液和同一被測定對象的檢測靈敏度區(qū)域定義為動態(tài)范圍。
本發(fā)明權利要求第9項記載的發(fā)明是在權利要求第8項記載的生物傳感器中，特征在于，由于上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以使上述被檢查溶液中的測定對象物濃度測定動態(tài)范圍變寬，即在權利要求第8項記載的生物傳感器中，是以通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，測定被檢查溶液中的上述測定對象物，但是上述多個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的上述測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以分別以相對于不同的上述被檢查溶液中的測定對象物濃度的靈敏度表示，傳感器裝置的上述測定對象物動態(tài)范圍寬為特征的。
本發(fā)明權利要求第10項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第9項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，上述多個試劑固定化部分各自識別相同的表位，即在從權利要求第1項到權利要求第9項任一項記載的生物傳感器中，是以上述多個試劑固定化部分中的試劑各自相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者標記試劑的親和性不同，但是識別相同的表位為特征的。所謂識別相同的表位指其中上述多個試劑固定化部分親和性各不相同，但是相對于相同的結合部位進行結合。
本發(fā)明權利要求第11項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第10項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，上述試劑固定化部分為2個地方，即在從權利要求第1項到權利要求第10項任一項記載的生物傳感器中，是以上述多個試劑固定化部分為2個地方為特征的。
本發(fā)明權利要求第12項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第11項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，上述多個試劑固定化部分分別接觸，即在從權利要求第1項到權利要求第11項任一項記載的生物傳感器中，是以上述多個試劑固定化部分相互接觸為特征的。
本發(fā)明權利要求第13項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第12項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，上述展開層是橫向流動方式，上述多個試劑固定化部分在對于上述被檢查溶液的展開方向的垂直方向上以線狀被固定，該線寬是0.5mm～2.0mm，另外，多個試劑固定化部分之間的線間距離是1.0mm以上，即在從權利要求第1項到權利要求第12項任一項記載的生物傳感器中，是以上述展開層是橫向流動方式，上述多個試劑固定化部分在對于上述被檢查溶液的展開方向的垂直方向上以線狀被固定，該線寬是0.5mm～2.0mm，另外，各上述試劑固定化部分的上述線間相隔是1.0mm以上為特征的。
本發(fā)明權利要求第14項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第13項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，含有上述標記試劑成分、固定化試劑成分的所有的試劑以干燥狀態(tài)存在，即在從權利要求第1項到權利要求第13項任一項記載的生物傳感器中，是以含有上述標記試劑和固定化試劑的所有的試劑以干燥狀態(tài)存在為特征的。
本發(fā)明權利要求第15項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第14項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，上述被檢查溶液是尿、唾液、血液，即在從權利要求第1項到權利要求第14項任一項記載的生物傳感器中，是以上述被檢查溶液是尿、唾液、血液為特征的。其中所謂血液包括含有血細胞等有形成分的全血、以及除去有形成分的血清、血漿。
本發(fā)明權利要求第16項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第15項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，生物傳感器是免疫色譜，即以從權利要求第1項到權利要求第15項任一項記載的生物傳感器是免疫色譜為特征的。
本發(fā)明權利要求第17項記載的發(fā)明是利用從權利要求第1項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器的測定方法，特征在于，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，將被檢查溶液中的測定成分定性或者定量的測定方法，即利用從權利要求第1項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器的測定方法，是以該測定是在上述多個試劑固定化部分中，通過上述標記試劑的結合進行的方法為特征的。
本發(fā)明權利要求第18項記載的發(fā)明是利用包括設有展開被檢查溶液的展開層，含有相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和在標記的上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分的生物傳感器，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分的測定方法，特征在于，利用包括設有展開被檢查溶液的展開層，含有相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，在上述展開層的局部被固定化的多個試劑部分，和以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分的生物傳感器，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分。其中所謂定性，指在陽性、陰性判定中代表的2個階段判定，所謂定量包括數(shù)值化的情況，以及也包括將階段設為3個階段以上的半定量。
本發(fā)明權利要求第19項記載的發(fā)明是在權利要求第17項或者權利要求第18項記載的測定方法中，特征在于，測定上述多個試劑固定化部分中標記試劑的結合量的方法是使用電磁放射線，即在權利要求第17項或者權利要求第18項記載的測定方法中，是以在上述多個試劑固定化部分中在標記試劑的結合量的測定方法中使用電磁放射線為特征的。
本發(fā)明權利要求第20項記載的發(fā)明是在權利要求第17項或者權利要求第19項記載的測定方法中，特征在于，測定上述多個試劑固定化部分中標記試劑的結合量的方法是測定電磁放射線反射的擴散電磁放射線，即在權利要求第17項或者權利要求第19項記載的測定方法中，是以在上述多個試劑固定化部分中，上述標記試劑的結合量的測定方法是照射電磁放射線時，測定反射的擴散電磁放射線為特征的。
本發(fā)明權利要求第21項記載的發(fā)明是在從權利要求第17項到權利要求第20項任一項記載的測定方法中，特征在于，通過相對于上述生物傳感器掃描在上述測定中使用的電磁放射線源，或者，通過相對于上述電磁放射線源掃描上述生物傳感器，測定上述試劑固定化部分的上述標記試劑結合量，即在從權利要求第17項到權利要求第20項任一項記載的測定方法中，是以在上述多個試劑固定化部分中對上述標記試劑結合量進行檢測時，掃描上述電磁放射線源，或者，掃描上述生物傳感器為特征的。
本發(fā)明權利要求第22項記載的發(fā)明是在從權利要求第17項到權利要求第21項任一項記載的測定方法中，特征在于，該測定方法是反射吸光度測定，光源隨著上述多個試劑固定化部分變?yōu)榫€狀而變?yōu)榫€狀，光源的線狀寬度是1.0mm以下，即在從權利要求第17項到權利要求第21項任一項記載的測定方法中，是以在上述多個試劑部分中，檢測上述標記試劑結合量的方法是測定反射吸光度為特征的。這時，電磁放射線是光，優(yōu)選可見光，另外，在上述試劑固定化部分中，檢測上述標記試劑結合量的方法是照射上述可見光時被反射的擴散光。
本發(fā)明權利要求第23項記載的發(fā)明是在從權利要求第17項到權利要求第22項任一項記載的測定方法中，特征在于，分別測定上述多個試劑固定化部分中的結合量，并進行前界判定，即在從權利要求第17項到權利要求第22項任一項記載的測定方法中，是以在上述多個試劑固定化部分中，分別檢測上述標記試劑的結合量后，由任意一個或者多個的檢測結果判定前界區(qū)域為特征的。
本發(fā)明權利要求第24項記載的發(fā)明是在從權利要求第17項到權利要求第23項任一項記載的測定方法中，特征在于，在上述多個試劑固定化部分中，測定相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，同時也進行其它的試劑固定化部分的測定，由其各自的測定結果，進行在上述最上游的試劑固定化部分中的標記試劑結合量測定值的前界判定，即在從權利要求第17項到權利要求第23項任一項記載的測定方法中，是以從上述被檢查溶液加入部分看出，把上述多個試劑固定化部分的最上游位置的上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量作為上述被檢查溶液中的測定對象物進行測定，同時在其它的上述多個試劑固定化部分中，由上述標記試劑結合量判定在上述最上游部分中的測定是否存在前界區(qū)域為特征的。
本發(fā)明權利要求第25項記載的發(fā)明是在從權利要求第17項到權利要求第24項任一項記載的測定方法中，特征在于，在上述多個試劑固定化部分中，測定相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，同時也進行其它的試劑固定化部分的標記試劑結合量的測定，由其各自的測定結果，通過演算處理判定上述最上游的試劑固定化部分中標記試劑結合量測定范圍、或者其它的試劑固定化部分中標記試劑結合量測定范圍，在測定結果中使用任何一個標記試劑結合量，即在從權利要求第17項到權利要求第24項任一項記載的測定方法中，是以在上述多個試劑固定化部分中，通過檢測上述標記試劑結合量，作為測定上述被檢查溶液中上述測定對象物的方法的同時，另外，從加入被檢查溶液的部分看出，通過上述標記物的結合量，測定最上游中上述固定化部分的被檢查溶液中的測定對象物，但是這時，也檢測其它的試劑固定化部分中上述標記試劑結合量，包括上述最上游，在各自的試劑固定化部分中，由上述標記試劑結合量，通過演算處理判定上述多個試劑固定化部分，也包括位于最上游的上述試劑固定化部分，無論在哪個試劑固定化部分中，上述被檢查溶液中的上述測定對象物濃度測定中應該使用的結合的上述標記試劑量，通過在任何一個地方的上述試劑固定化部分中的結合量，測定上述被檢查溶液中的測定對象物為特征的。
本發(fā)明權利要求第26項記載的發(fā)明是在從權利要求第17項到權利要求第25項任一項記載的測定方法中，特征在于，上述測定是由上述被檢查溶液的加入操作開始的一步免疫色譜，即以從權利要求第17項到權利要求第25項任一項記載的測定方法使用通過加入被檢查溶液的操作而開始測定的一步免疫色譜即生物傳感器為特征的。
本發(fā)明權利要求第27項記載的發(fā)明是在從權利要求第1項到權利要求第10項、從權利要求第12項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器中，特征在于，上述試劑固定化部分為3個地方，即在從權利要求第1項到權利要求第10項、從權利要求第12項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器中，是以上述試劑固定化部分為3個地方為特征的。
本發(fā)明權利要求第28項記載的發(fā)明是在權利要求第27項記載的生物傳感器中，特征在于，相對于加入上述被檢查溶液的部分，最上游位置的上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物、或者上述標記試劑的親和力最高，而且，位于第2和第3的試劑固定化部分的親和力相同，即在權利要求第27項記載的生物傳感器中，是以相對于加入上述被檢查溶液的部分，最上游位置的上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物、或者上述標記試劑的親和力最高，而且，位于第2和第3的試劑固定化部分的親和力相同為特征的。
本發(fā)明權利要求第29項記載的發(fā)明是在從權利要求第17項到權利要求第26項任一項記載的測定方法中，特征在于，上述試劑固定化部分為3個地方，即在從權利要求第17項到權利要求第26項任一項記載的測定方法中，是以上述試劑固定化部分為3個地方為特征的。
本發(fā)明權利要求第30項記載的發(fā)明是在使用權利要求第28項記載的生物傳感器的測定方法中，特征在于，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分的測定方法，即在使用權利要求第28項記載的生物傳感器的測定方法中，是以通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分為特征的。
本發(fā)明權利要求第31項記載的發(fā)明是在權利要求第30項記載的測定方法中，特征在于，上述3個地方的試劑固定化部分中，通過測定相對于加入上述被檢查溶液部分的下游2個地方的固定化部分中上述標記試劑的結合量，檢測前界區(qū)域，即在權利要求第30項記載的測定方法中，是以上述3個地方的試劑固定化部分中，通過測定相對于加入上述被檢查溶液部分的下游2個地方的固定化部分中上述標記試劑的結合量，檢測前界區(qū)域為特征的。
根據(jù)權利要求第1項記載的生物傳感器，則其設有展開被檢查溶液的展開層，含有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分的生物傳感器，存在多個上述試劑固定化部分，上述多個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，對被檢查溶液中的測定，即使測定對象物是高濃度，也不需要稀釋操作等，獲得了可以提供簡易且迅速的生物傳感器的效果，還有，可以檢測前界區(qū)域，簡易且迅速，同時具有獲得準確性高的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第2項記載的生物傳感器，則其設有展開被檢查溶液的展開層，含有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，順序設置加入上述被檢查溶液的加入部分、標記試劑部分、試劑固定化部分的裝置，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分，存在多個上述試劑固定化部分，上述多個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以相對于上述被檢查溶液中上述測定對象物濃度，可以提供具有寬范圍的動態(tài)范圍的生物傳感器，還有，也可以檢測前界現(xiàn)象，簡易、迅速，而且具有獲得準確性、通用性高的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第3項記載的生物傳感器，則在權利要求第1項或者權利要求第2項記載的生物傳感器中，在上述多個的試劑固定化部分中被固定化試劑是抗體，被檢查溶液中的測定對象物是抗原，對于加入上述被檢查溶液的部分，越是上游越可將相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力高的抗體固定，所以在測定抗原時，通過將在上述多個試劑固定化部分中，具有相對于測定對象物或者上述標記試劑的多個不同的親和性的抗體固定化，可以充分廣泛地具有上述抗原濃度動態(tài)范圍，另外，把加入上述被檢查溶液的部分作為最上游，由于越是上游親和性越高，所以可以在最上游的上述試劑固定化部分中，提供更高精度的生物傳感器，在其它的上述試劑固定化部分中，可以檢測前界，并獲得可以提供更高精度且準確性高的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第4項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第3項任一項記載的生物傳感器中，由于在上述多個試劑固定化部分中試劑是單克隆抗體，所以即使在進行大量生產(chǎn)時，即使需要多個具有相同性能的的生物傳感器時，由于單克隆抗體具有均勻的性質，生物傳感器也可以兼具高生產(chǎn)效率和制備穩(wěn)定性，迅速且準確性高，而且具有可以多個或者大量制備表現(xiàn)出均勻性能的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第5項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第4項任一項記載的生物傳感器中，通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，將上述被檢查溶液中的測定對象物進行定量，所以上述多個試劑固定化部分各自的試劑相對于上述測定對象物或者上述標記試劑的親和性不同，不是目測判定的含糊判定其上述標記試劑結合量，使測定結果數(shù)值化，簡便且迅速，另外具有準確性，而且具有獲得高精度的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第6項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第5項任一項記載的生物傳感器中，通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，檢測前界現(xiàn)象，所以在其測定中，試劑固定化部分的上述標記試劑的結合量可以判定前界區(qū)域，進而具有獲得準確性高的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第7項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第6項任一項記載的生物傳感器中，通過測定上述多個試劑固定化部分相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，測定被檢查溶液中的測定對象物的生物傳感器，也進行其它試劑固定化部分的標記試劑結合量的測定，根據(jù)其各自的測定結果，進行上述最上游的上述試劑固定化部分中標記試劑結合量測定值的前界判定，所以把被檢查溶液加入部分作為最上游時，可測定上述多個試劑固定化部分中最上游位置的試劑固定化部分中標記試劑的結合量，可以定量精度高的測定，在上述試劑固定化部分以外的部分中相對于試劑固定化部分測定上述標記試劑結合量，可進行前界判定，而且準確性高，還有，具有得到簡易、迅速、高精度的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第8項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第7項任一項記載的生物傳感器中，由于上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以各個固定化部分中上述被檢查溶液中的測定對象物濃度測定動態(tài)范圍不相同，所以在上述多個試劑固定化部分中，每個被檢查溶液具有不同的被檢查溶液濃度動態(tài)范圍，具有獲得可以測定多個測定對象物動態(tài)范圍的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第9項記載的生物傳感器，則在權利要求第8項記載的生物傳感器中，由于上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，使上述被檢查溶液中的測定對象物濃度測定動態(tài)范圍變寬，所以在上述多個試劑固定化部分中，通過標記試劑結合量的測定進行測定，但是通過分別合并多個試劑固定化部分的上述測定對象物濃度動態(tài)范圍，可以更廣范圍的測定。由此，不需要稀釋等煩雜的操作，而且具有獲得在一次的測定中可以測定廣范圍的測定對象物濃度的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第10項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第9項任一項記載的生物傳感器中，上述多個試劑固定化部分各自識別相同的表位，所以在上述多個試劑固定化部分中，即使反應形式為標記試劑-固定化試劑、標記試劑、測定對象物-固定化試劑的哪一個，在分子水平上關于反應的立體障礙都小，更穩(wěn)定，而且具有獲得簡易、正確、迅速的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第11項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第10項任一項記載的生物傳感器中，上述試劑固定化部分為2個地方，所以上述測定對象物濃度動態(tài)范圍廣，而且可以使檢測前界的最小限度的試劑組成成為可能，而且，具有獲得廉價的、迅速、簡易、準確性高的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第12項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第11項任一項記載的生物傳感器中，上述多個試劑固定化部分分別接觸，所以一般地，試劑固定化部分中上述展開溶液的展開變得不均勻，但是上述多個試劑固定化部分看上去變?yōu)橐粋€地方，以更加均勻的狀態(tài)保持展開上述展開層的展開溶液的浸透，具有高精度的、且寬廣的測定對象物動態(tài)范圍，而且，具有獲得可以檢測前界的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第13項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第12項任一項記載的生物傳感器中，上述展開層是橫向流動方式，上述多個試劑固定化部分在對于上述被檢查溶液的展開方向的垂直方向上以線狀被固定，該線寬是0.5mm～2.0mm，另外，多個試劑固定化部分之間的線間距離是1.0mm以上，所以在上述多個試劑固定化部分的上述展開層展開上述被檢查溶液時，展開很容易變得不均勻，但是變?yōu)?.5mm～2.0mm，所以抑制了其不良影響，同時可以目測，另外，各自的試劑固定化部分之間是1.0mm以上，可以通過目測識別，更加簡易迅速，獲得了高精度且準確性優(yōu)良的、而且目測性優(yōu)良的生物傳感器。另外，這對使用光學的測定儀的上述生物傳感器也是有效的。
根據(jù)權利要求第14項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第13項任一項記載的生物傳感器中，含有上述標記試劑成分、固定化試劑成分的所有的試劑以干燥狀態(tài)存在，所以上述多個試劑固定化部分與上述測定對象物或者上述標記試劑的親和性不同，上述測定對象物濃度動態(tài)范圍非常寬，另外，具有檢測前界區(qū)域的功能，而且，由于是完全干燥，所以保存穩(wěn)定性能優(yōu)良，還有，獲得了攜帶自由的生物傳感器。
根據(jù)權利要求第15項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第14項任一項記載的生物傳感器中，上述被檢查溶液是尿、唾液、血液，迅速的對應是必須的，在臨床檢查領域中，準確性高，而且獲得了可以提供簡便、迅速的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第16項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第15項任一項記載的生物傳感器中，是免疫色譜，在簡易免疫測定法即市場上正在普及的免疫色譜中，使用者不會錯誤判定，準確性高，而且獲得了可以實現(xiàn)現(xiàn)有的免疫色譜具有的簡易操作的效果。
根據(jù)權利要求第17項記載的測定方法，則作為利用從權利要求第1項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器的測定方法，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，將被檢查溶液中的測定成分定性或者定量，在被檢查溶液的測定中，測定對象物即使是高濃度，也不需要稀釋操作等，獲得了可以簡易且迅速的測定的測定方法，同時可以檢測前界區(qū)域，簡易且迅速，同時獲得了使準確性高的測定成為可能的效果。
根據(jù)權利要求第18項的測定方法，則利用包括設有展開被檢查溶液的展開層，含有相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和在標記的上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分的生物傳感器，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分，在被檢查溶液的測定中，測定對象物即使是高濃度，也不需要稀釋操作等，獲得了可以簡易且迅速的測定的效果，另外可以檢測前界區(qū)域，簡易且迅速，同時獲得了使準確性高的測定成為可能的效果。
根據(jù)權利要求第19項記載的測定方法，則在權利要求第17項或者權利要求第18項記載的測定方法中，測定上述多個試劑固定化部分中標記試劑的結合量的方法是使用電磁放射線，所以上述測定對象物濃度動態(tài)范圍寬，而且可以檢測前界，還有，不是根據(jù)目測判斷，獲得了數(shù)值化的、能夠更加準確的判斷的測定效果。
根據(jù)權利要求第20項記載的測定方法，則在權利要求第17項或者權利要求第19項記載的測定方法中，測定上述多個試劑固定化部分中標記試劑的結合量的方法是測定電磁放射線反射的擴散電磁放射線，所以在相同方向配置光源、受光部分，使用可以更加小型化的手法，而且，上述測定對象物濃度動態(tài)范圍寬，可以檢測前界，另外，不是根據(jù)目測判斷，獲得了數(shù)值化的能夠更加準確的判斷的測定效果。
根據(jù)權利要求第21項記載的測定方法，則在從權利要求第17項到權利要求第20項任一項記載的測定方法中，通過相對于上述生物傳感器掃描在上述測定中使用的電磁放射線源，或者通過相對于上述電磁放射線源掃描上述生物傳感器，測定上述試劑固定化部分的上述標記試劑結合量，所以在上述試劑固定化部分中，通過把上述標記試劑的檢測作為相對于上述多個試劑固定化部分以外的展開層的信號進行檢測，排除了不由上述測定對象物濃度起因的因素的影響，另外，可以準確地檢測上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑結合量，具有提供更加準確且精度高的測定方法的效果。
根據(jù)權利要求第22項記載的測定方法，則從權利要求第17項到權利要求第21項任一項記載的測定方法是反射吸光度測定，光源隨著上述多個試劑固定化部分變?yōu)榫€狀而變?yōu)榫€狀，光源的線狀寬度是1.0mm以下，所以上述測定對象物濃度動態(tài)范圍寬，而且可以檢測前界，另外，由于光源為1.0mm以下，所以消費能量變小，同時在上述多個試劑固定化部分的上述標記試劑結合量中，噪音的影響變小，可以準確且高精度的測定，優(yōu)選在上述記載的生物傳感器中，是與上述多個試劑固定化部分相等的寬度，而且，也是比上述多個試劑固定化部分間的距離小的值。
根據(jù)權利要求第23項的測定方法，則在從權利要求第17項到權利要求第22項任一項記載的測定方法中，分別測定上述多個試劑固定化部分中的結合量，并進行前界判定，所以，在上述多個試劑固定化部分中的上述標記試劑結合量的測定中，通過在各自的試劑固定化部分中測定上述結合量，獲得可以判別上述測定是否在前界區(qū)域內(nèi)的測定效果。
根據(jù)權利要求第24項記載的測定方法，則在從權利要求第17項到權利要求第23項任一項記載的測定方法中，在上述多個試劑固定化部分中，測定相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，同時也進行其它的試劑固定化部分的測定，由其各自的測定結果，進行在上述最上游的試劑固定化部分中的標記試劑結合量測定值的前界判定，所以把被檢查溶液加入部分作為最上游時，通過測定上述多個試劑固定化部分中位于最上游的試劑固定化部分中的標記試劑的結合量，可以高定量精度的測定，通過測定相對于上述試劑固定化部分以外的部分中的試劑固定化部分的上述標記試劑結合量，進行前界判定，而且準確性高，另外，獲得了可以簡易、迅速、高精度的測定效果。
根據(jù)權利要求第25項記載的測定方法，則在從權利要求第17項到權利要求第24項任一項記載的測定方法中，在上述多個試劑固定化部分中，測定相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，同時也進行其它的試劑固定化部分的測定，由其各自的測定結果，通過演算處理判定上述最上游的試劑固定化部分中標記試劑結合量測定范圍、或者其它的試劑固定化部分中標記試劑結合量測定范圍，在測定結果中使用任何一個標記試劑結合量，所以在上述多個試劑固定化部分中，各個被檢查溶液具有不同的被檢查溶液濃度動態(tài)范圍，具有可以測定多個測定對象物動態(tài)范圍的效果。
根據(jù)權利要求第26項記載的測定方法，則在從權利要求第17項到權利要求第25項任一項記載的測定方法中，上述測定方法是由上述被檢查溶液的加入操作開始的一步免疫色譜，雖是免疫測定法，同時不需要洗滌操作，除了保持了簡易迅速的一步免疫色譜的優(yōu)點，而且，可以檢測前界，能夠提供更加準確性高的測定方法，同時只通過同樣的測定操作，就獲得了可以提供能夠更寬范圍的測定測定對象物濃度范圍測定的測定方法的效果。
根據(jù)權利要求第27項記載的生物傳感器，則在從權利要求第1項到權利要求第10項、從權利要求第12項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器中，上述試劑固定化部分為3個地方，所以具有準確性、可靠性高的測定對象物濃度動態(tài)范圍，而且可以前界檢測的試劑組成變?yōu)榭赡埽哂蝎@得更加迅速、簡易、且準確性、可靠性高的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第28項記載的生物傳感器，則在權利要求第27項記載的生物傳感器中，相對于加入上述被檢查溶液的部分，最上游位置的上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物、或者上述標記試劑的親和力最高，而且，位于第2和第3的試劑固定化部分的親和力相同，所以具有準確性、可靠性高的測定對象物濃度動態(tài)范圍，而且可以前界檢測的試劑組成變?yōu)榭赡?，上述試劑固定化部分?個地方，同時由兩種固定化試劑構成，由于更少的試劑組成，廉價的且3個地方的試劑固定化部分，所以具有獲得準確性、可靠性高的生物傳感器的效果。
根據(jù)權利要求第29項記載的測定方法，則在從權利要求第17項到權利要求第26項任一項記載的測定方法中，由于從上述試劑固定化部分的3個地方獲得信號，所以具有可以準確性、可靠性且迅速、簡易性高的測定效果。
根據(jù)權利要求第30項記載的測定方法，則在使用權利要求第28項記載的生物傳感器的測定方法中，試劑固定化部分為3個地方，同時由兩種固定化試劑構成，由于更少的試劑組成，廉價的且3個地方的試劑固定化部分，所以具有能夠準確性、可靠性的測定效果。
根據(jù)權利要求第31項記載的測定方法，則在權利要求第30項記載的測定方法中，上述3個地方的試劑固定化部分中，通過測定相對于加入上述被檢查溶液部分的下游2個地方的固定化部分中上述標記試劑的結合量，檢測前界區(qū)域，具有可以準確性、可靠性且迅速、簡易性高的測定效果。
第2圖是本發(fā)明實施方式1中的測定圖。
第3圖是本發(fā)明實施方式1中的測定波形圖。
第4圖是本發(fā)明實施方式1中的多濃度測定結果圖。
第5圖是本發(fā)明實施方式1中的測定動態(tài)范圍概略圖(第5(a)圖)，本發(fā)明實施方式1中的前界判定概略圖(第5(b)圖)。
第6圖表示本發(fā)明的試劑固定化部分為3個地方的形式即實施方式2的生物傳感器的分解圖(第6(a)圖)，表示本發(fā)明實施方式2中生物傳感器的斜視圖(第6(b)圖)。
第7圖是本發(fā)明實施方式2中的測定波形圖。
第8圖是本發(fā)明實施方式2中的多濃度測定結果圖。
第9圖是本發(fā)明實施方式2中的測定結果概略圖。
為實施發(fā)明的最佳方式(實施方式1)下面，參照第1圖說明本發(fā)明的實施方式1。第1(a)圖是表示本發(fā)明一個實施方式的生物傳感器的分解圖，第1(b)圖表示本發(fā)明一個實施方式中的生物傳感器的斜視圖。在第1圖中，2表示展開層，由硝化纖維素構成。如果這些在展開層中使用的材料是可以由被檢查溶液濕潤的材料，則可以由濾紙、無紡布、薄膜、布、玻璃纖維等多孔質的任意材料構成。另外，4表示標記試劑，是以干燥狀態(tài)、由被檢查溶液可以洗提的狀態(tài)、相對于被檢查溶液中的測定對象物保持金膠體標記抗體。5，9表示試劑固定化部分I、和試劑固定化部分II，是對于被檢查溶液中的測定對象物的抗體，而且，哪個抗體與上述標記試劑以不同的表位結合，都以干燥狀態(tài)被固定化，以便被檢查溶液中的測定對象物和上述標記試劑形成復合體。另外，試劑固定化部分I(5)中使用的抗體和試劑固定化部分II(9)中使用的抗體都由相對于被檢查溶液中的測定對象物的親和性不同的抗體構成。另外，從加入被檢查溶液的部分來看，越是上游越會迅速的與被檢查溶液和被測定對象物接觸，所以優(yōu)選使用相對于上述測定對象物的親和性高的抗體。另外，在試劑固定化部分I和試劑固定化部分II中使用的抗體可與上述標記試劑、測定對象物形成3元復合體即可，因此，相對于測定對象物的表位，既可以相同，也可以不同。另外，圖以上述多個試劑固定化部分是2個地方的例子表示的，但是不必2個地方，如果是2個地方以上，則可以根據(jù)其目的自由選擇，即使在展開層上的形狀方面，并不是必須是線狀，可以自由選擇點狀、或者字符形狀、鍵型形狀等。在第1圖中的上述試劑固定化部分5，9在空間上是分離的，但是即使對于此，并不是必須分離，也可以以看上去為一體的線狀的樣子接觸。另外，其中所述的標記方法，選擇的是把上述試劑固定化部分中的結合作為檢測手段，并且金膠體只不過是一個例子，使用者可以根據(jù)需要任意選擇酶、蛋白質、色素、熒光色素、乳液等著色粒子。6表示不透過液體的薄板材料，在此，由透明PET帶構成。具有與微細空間1連接的部分，以及除去上述被檢查溶液到達的終端，粘著覆蓋展開層的結構。由于使其覆蓋了，所以隔斷保護了向被檢查溶液的加入部分以外的點樣，同時具有防止來自外部的污染的作用。其中所謂的來自外部的污染指不小心的接觸被檢查溶液以及實驗者的手等直接接觸展開層等。覆蓋時，優(yōu)選使用透明的材料，由于覆蓋試劑固定化部分5的部分是確認測定結果的部分，所以至少優(yōu)選具有可以透過的狀態(tài)。另外，需要更高精度測定的情況，是展開層的上部，特別是含有并粘著密閉的上述標記試劑部分、以及上述固定化部分，而且，可以采取以相同方式使相對于被檢查溶液的浸透方向的平行側面粘著密閉的結構。3表示展開層中的開放部分，7表示保持展開層的底板，其中由白色PET薄膜構成。底板7具有加固展開層的作用，同時在被檢查溶液中使用血液、唾液、尿等感染危險性的某種溶液時，也具有將其隔斷的作用。另外，由于展開層潤濕時具有透光性的情況等，所以也可以具有隔斷光的效果。8表示微細空間形成材料，具有形成被檢查溶液依靠毛細管現(xiàn)象流入的空間的作用，并由使透明PET薄膜疊層來構成。另外，微細空間形成材料8在被檢查溶液加入后，使用生物傳感器時，對被檢查溶液也具有防護外部污染的作用。其中所謂的防護表示不小心被檢測溶液的粘著和飛濺。微細空間形成材料8可以使用ABS、聚苯乙烯、聚氯乙稀等、其它的合成樹脂材料、金屬、玻璃等不透過溶液的材料，另外，優(yōu)選透明或者半透明，但是不透明的有顏色的，即使是不透明的材料也可以由任意的材料構成。1表示微細空間，微細空間1由上述微細空間形成材料8形成，依靠毛細管現(xiàn)象流入檢測體。另外，微細空間1與上述展開層2連接，通過被檢查溶液向上述微細空間的流入，開始向展開層2的浸透。
下面，使用第1(b)圖對它的測定進行說明。如果使被檢查溶液在微細空間1接觸，依靠毛細管現(xiàn)象則不需要機械操作，被檢查溶液自然地流入上述微細空間中。被檢查溶液的流入量是否充足，可以透過微細空間形成材料來確認。另外，也有限制被檢查溶液加入量的情況，如果是需要一定量，則由于把上述微細空間的體積看作上述一定體積，所以可以精度高地限制加入量，另外，在需要上述被檢查溶液為一定量以上的情況下，由于可以使其保持一定量以上的體積，所以可以根據(jù)需要調節(jié)。在上述微細空間內(nèi)，保持細胞收縮試劑10，而且其中使用氯化鉀。細胞收縮試劑10是在上述被檢查溶液中含有細胞成分時應該設置的試劑，使用不含細胞成分的被檢查溶液時并不特別必要。另外細胞收縮試劑(細胞成分收縮劑)10如果具有收縮細胞的效果，則即使是上述氯化鉀以外的無機鹽、包括氯化鈉、磷酸鈉鹽等的無機化合物以及、甘氨酸、谷氨酸等氨基酸；脯氨酸等亞胺酸；葡萄糖、蔗糖、海藻糖等糖類；山梨醇等糖醇，也同樣可以進行。含有這樣的細胞收縮試劑(細胞成分收縮劑)10的體系，特別是把全血作為被檢查溶液使用時特別有效。流入上述微細空間的被檢查溶液由上述微細空間和展開層的接觸部分向展開層浸透。被檢查溶液到達標記試劑部分4時，標記部分4開始溶出。之后，被檢查溶液中存在測定對象物時，上述金膠體標記抗體一邊反應，一邊進行浸透，被檢查溶液到達試劑固定化部分I(5)，在上述測定對象物存在時，根據(jù)其量，形成固定化抗體I-測定對象物-標記抗體的復合體。接著，被檢查溶液到達試劑固定化部分II(9)，在上述測定對象物存在時，根據(jù)其量，在上述試劑固定化部分5沒有結合的標記試劑部分4，形成固定化抗體II-測定對象物-標記抗體的復合體。在上述試劑固定化部分中，標記抗體的結合不存在測定對象物，或在檢測靈敏度以下的量時，標記抗體的大半不結合就通過。而且，此被檢查用液到達展開層中的開放部分3。開放部分3由于沒有上述不透過薄板而被開放，所以上述被檢查溶液到達后或者到達的同時揮發(fā)或者蒸發(fā)，而且，在開放部分被檢查溶液滲出，且只在開放部分中的展開層的上部，上述被檢查溶液與在上述微細空間內(nèi)的展開層上部的被檢查溶液達到相同的高度，或者達到規(guī)定高度。由于這些效果，所以上述展開層的被檢查溶液的浸透和浸透方向不需要吸水用的材料，測定中被控制一定方向。一般地，往往設計吸水部分代替開放部分。其相對于在展開層的反應部分中使用的材料，可使用保水效果、吸水效果更高的多孔質材料，進而吸水和吸引被檢查溶液，進一步在展開層上，具有使上述被檢查溶液通過的作用和可以縮短測定時間的作用。上述開放部分3具有與這些相同的效果，特別是使用上述微細空間或者上述開放部分的手法，特別適合被檢查溶液為微量的情況，即，由指尖的穿刺得到的血液和被檢查溶液為極微量時，特別適合。接著通過確認上述試劑固定化部分I(5)中的標記試劑的結合狀態(tài)和試劑固定化部分II(9)得到測定結果。需要定性判定時也可以根據(jù)目測判定。另外需要精度高的測定時，通過使用液體不透過性材料使相對于上述展開層的被檢查溶液浸透方向的平行側面和展開層上面粘著密閉，使上述被檢查溶液的浸透整流，而且，根據(jù)被檢查溶液中的上述測定對象物的量形成均勻量的復合體，使用含有反射吸光度的擴散電磁放射線的反射光或者透過光等，通過測定標記物的結合量，得到定量的結果。其中電磁放射線優(yōu)選可見光區(qū)或者近可見光區(qū)，作為電磁放射線源，可以根據(jù)使用者的需要選擇LED(Light Emitting Diode；發(fā)光二極管)、LD(Laser Diode；激光二極管)等。另外，在被檢查溶液中的測定對象物濃度檢測中使用上述試劑固定化部分I部分，通過使用親和性低的抗體，也可以在前界檢測時使用試劑固定化部分II(9)中的上述標記試劑結合量。另外，上述反應例敘述的是關于抗原抗體反應中的夾層反應，但是根據(jù)選擇的試劑，使用和被檢查溶液中的測定對象物進行競爭反應的試劑時，也可以為競爭反應。另外在抗原抗體反應以外，利用特殊的結合時，可以由形成任意的結合反應體系的試劑成分構成。
(實施方式2)下面，參照第6圖說明本發(fā)明的實施方式2。第6(a)圖是表示本發(fā)明實施方式2的生物傳感器的分解圖，第6(b)圖是表示本發(fā)明實施方式2中的生物傳感器的斜視圖。在第6圖中，2表示展開層，由硝化纖維素構成。如果這些在展開層中使用的材料是可以由被檢查溶液濕潤的材料，則可以由濾紙、無紡布、薄膜、布、玻璃纖維等多孔質的任意材料構成。另外，4表示標記試劑，是以干燥狀態(tài)、由被檢查溶液可以洗提的狀態(tài)、相對于被檢查溶液中的測定對象物保持金膠體標記抗體。5，9，14表示試劑固定化部分I、和試劑固定化部分II、試劑固定化部分III，是對于被檢查溶液中的測定對象物的抗體，而且，以干燥狀態(tài)被固定化，以便被檢查溶液中的測定對象物和上述標記試劑形成復合體。另外，試劑固定化部分I(5)中使用的抗體和試劑固定化部分II(9)和試劑固定化部分III(14)中使用的抗體都由相對于被檢查溶液中的測定對象物的親和性不同的抗體構成。另外，從加入被檢查溶液的部分來看，越是上游越會迅速的與被檢查溶液和被測定對象物接觸，所以優(yōu)選使用相對于上述測定對象物的親和性高的抗體。另外，在試劑固定化部分I和試劑固定化部分II、試劑固定化部分III中使用的抗體可與上述標記試劑、測定對象物形成3元復合體即可，因此，相對于測定對象物的表位，既可以相同，也可以不同。另外，圖以上述多個試劑固定化部分是3個地方的例子表示的，但是這是在上述實施方式1中所示的2個地方的情況下，對擴大測定動態(tài)范圍的情況特別有效，擴大后可以檢測前界，另外，也可以進一步擴大測定動態(tài)范圍。在上述2個的情況下已經(jīng)敘述了，但是求出更寬的測定動態(tài)范圍的情況和、在各自的試劑固定化部分中需要狹窄的測定動態(tài)范圍，而且通過使上述試劑固定化部分的親和力變化而保持測定動態(tài)范圍的情況等，并不是必須3個地方，如果是3個地方以上，則可以根據(jù)其目的自由選擇。另外，在3個地方以上使用的情況下，也可以是3個地方以上的各自的試劑固定化部分全部是不同的親和力的情況和由兩種親和力不同的固定化試劑構成的情況。另外，這時，試劑固定化部分可以自由組合，也不用說可以根據(jù)使用者的目的選擇。即使在展開層上的形狀方面，并不是必須是線狀，可以自由選擇點狀、或者字符形狀、鍵型形狀等。在第6圖中的上述試劑固定化部分在空間上是分離的，但是即使對于此，并不是必須分離，也可以以看上去為一體的線狀的樣子接觸。另外，其中所述的標記方法，選擇的是把上述試劑固定化部分中的結合作為檢測手段，并且金膠體只不過是一個例子，使用者可以根據(jù)需要任意選擇酶、蛋白質、色素、熒光色素、乳液等著色粒子。6表示不透過液體的薄板材料，在此，由透明PET帶構成。具有與微細空間1連接的部分，以及除去上述被檢查溶液到達的終端，粘著覆蓋展開層的結構，由于使其覆蓋了，所以隔斷保護了向被檢查溶液的加入部分以外的點樣，同時具有防止來自外部的污染的作用。其中所謂的來自外部的污染指不小心的接觸被檢查溶液以及實驗者的手等直接接觸展開層等。覆蓋時，優(yōu)選使用透明的材料，由于覆蓋試劑固定化部分I(5)、試劑固定化部分II(9)、試劑固定化部分III(14)的部分是確認測定結果的部分，所以至少優(yōu)選具有可以透過的狀態(tài)。另外，需要更高精度測定的情況，是展開層的上部，特別是含有并粘著密閉的上述標記試劑部分以及上述固定化部分，而且，可以采取以相同方式使相對于被檢查溶液的浸透方向的平行側面粘著密閉的結構。3表示展開層中的開放部分，7表示保持展開層的底板，其中由白色PET薄膜構成。底板7具有加固展開層的作用，同時在被檢查溶液中使用血液、唾液、尿等感染危險性的某種溶液時，也具有將其隔斷的作用。另外，由于展開層潤濕時具有透光性的情況等，所以也可以具有隔斷光的效果。8表示微細空間形成材料，具有形成被檢查溶液依靠毛細管現(xiàn)象流入的空間的作用，并由使透明PET薄膜疊層來構成。另外，微細空間形成材料8在被檢查溶液加入后，使用生物傳感器時，對被檢查溶液也具有防護外部污染的作用。其中所謂的防護表示不小心被檢查溶液的粘著和飛濺。微細空間形成材料8可以使用ABS、聚苯乙烯、聚氯乙稀等、其它的合成樹脂材料、金屬、玻璃等不透過溶液的材料，另外，優(yōu)選透明或者半透明，但是不透明的有顏色的，即使是不透明的材料也可以由任意的材料組成。1表示微細空間，微細空間1由上述微細空間形成材料8形成，依靠毛細管現(xiàn)象流入檢測體。另外，微細空間與上述展開層2連接，通過被檢查溶液向上述微細空間的流入，開始向展開層2的浸透。
下面，使用第6(b)圖對它的測定進行說明。如果使被檢查溶液在微細空間1接觸，依靠毛細管現(xiàn)象則不需要機械操作，被檢查溶液自然地流入上述微細空間中。被檢查溶液的流入量是否充足，可以透過微細空間形成材料來確認。另外，也有限制被檢查溶液加入量的情況，如果是需要一定量，則由于把上述微細空間的體積看作上述一定體積，所以可以精度高地限制加入量，另外，在需要上述被檢查溶液為一定量以上的情況下，由于可以使其保持一定量以上的體積，所以可以根據(jù)需要調節(jié)。在上述微細空間內(nèi)，保持細胞收縮試劑10，而且其中使用氯化鉀。細胞收縮試劑10是在上述被檢查溶液中含有細胞成分時應該設置的試劑，使用不含細胞成分的被檢查溶液時并不特別必要。另外細胞收縮試劑(細胞成分收縮劑)10如果具有收縮細胞的效果，則即使是上述氯化鉀以外的無機鹽、包括氯化鈉、磷酸鈉鹽等的無機化合物以及、甘氨酸、谷氨酸等氨基酸；脯氨酸等亞胺酸；葡萄糖、蔗糖、海藻糖等糖類；山梨醇等糖醇，也同樣可以進行。含有這樣的細胞收縮試劑(細胞成分收縮劑)10的體系，特別是把全血作為被檢查溶液使用時特別有效。流入上述微細空間的被檢查溶液由上述微細空間和展開層的接觸部分向展開層浸透。被檢查溶液到達標記試劑部分(4)時，標記部分4開始溶出。之后，被檢查溶液中存在測定對象物時，上述金膠體標記抗體一邊反應，一邊進行浸透，被檢查溶液到達試劑固定化部分I(5)，在上述測定對象物存在時，根據(jù)其量，形成固定化抗體I-測定對象物-標記抗體的復合體。接著，被檢查溶液到達試劑固定化部分II(9)，在上述測定對象物存在時，根據(jù)其量，對于在上述試劑固定化部分(5)沒有結合的標記試劑部分(4)，形成固定化抗體II-測定對象物-標記抗體的復合體。另外，被檢查溶液到達試劑固定化部分III(14)，在上述測定對象物存在時，根據(jù)其量，對于在上述試劑固定化部分(5)和試劑固定化部分(9)沒有結合的標記試劑部分(4)，形成固定化抗體III-測定對象物-標記抗體的復合體。在上述試劑固定化部分中，標記抗體的結合不存在測定對象物，或在檢測靈敏度以下的量時，標記抗體的大半不結合就通過。而且，此被檢查用液到達展開層中的開放部分3。開放部分3由于沒有上述不透過薄板而被開放，所以上述被檢查溶液到達后或者到達的同時揮發(fā)或者蒸發(fā)。而且，在開放部分被檢查溶液滲出，且只在開放部分中的展開層的上部，上述被檢查溶液與在上述微細空間內(nèi)的展開層上部的被檢查溶液達到相同的高度，或者達到規(guī)定高度。由于這些效果，所以上述展開層的被檢查溶液的浸透和浸透方向不需要吸水用的材料，測定中被控制一定方向。一般地，往往設計吸水部分代替開放部分。其相對于在展開層的反應部分中使用的材料，可使用保水效果、吸水效果更高的多孔質材料，進而吸水和吸引被檢查溶液，進一步在展開層上，具有使上述被檢查溶液通過的作用和可以縮短測定時間的作用。上述開放部分3具有與這些相同的效果，特別是使用上述微細空間或者上述開放部分的手法，特別適合被檢查溶液為微量的情況，即，由指尖的穿刺得到的血液和被檢查溶液為極微量時，特別適合。接著通過確認上述試劑固定化部分I(5)中的標記試劑的結合狀態(tài)和試劑固定化部分II(9)、試劑固定化部分III(14)得到測定結果。需要定性判定時也可以根據(jù)目測判定。另外需要精度高的測定時，通過使用液體不透過性材料使相對于上述展開層的被檢查溶液浸透方向的平行側面和展開層上面粘著密閉，使上述被檢查溶液的浸透整流，而且，根據(jù)被檢查溶液中的上述測定對象物的量形成均勻量的復合體，使用含有反射吸光度的擴散電磁放射線的反射光或者透過光等，通過測定標記物的結合量，得到定量的結果。其中電磁放射線優(yōu)選可見光區(qū)或者近可見光區(qū)，作為電磁放射線源，可以根據(jù)使用者的需要選擇LED(Light Emitting Diode；發(fā)光二極管)、LD(Laser Diode；激光二極管)等。另外，在被檢查溶液中的測定對象物濃度檢測中使用上述試劑固定化部分I(5)，通過使用親和性低的抗體，也可以在前界檢測時使用試劑固定化部分II(9)、試劑固定化部分III(14)中的上述標記試劑結合量。另外，上述反應例敘述的是關于抗原抗體反應中的夾層反應，但是根據(jù)選擇的試劑，使用和被檢查溶液中的測定對象物進行競爭反應的試劑時，也可以為競爭反應。另外在抗原抗體反應以外，利用特殊的結合時，可以由形成任意的結合反應體系的試劑成分構成。
a)免疫色譜試片的調制準備使用磷酸緩沖溶液進行稀釋而進行濃度調節(jié)的抗CRP抗體A溶液。使用溶液輸出裝置將該抗體溶液涂覆在硝化纖維素膜上。由此，在硝化纖維素膜上獲得試劑固定化部分即抗體固定化線I。接著同樣在離開被檢查溶液導入部分下游2mm的部分，涂覆比在上述抗體固定化線I中使用的抗體親和力還低的抗CRP抗體B。將該硝化纖維素膜干燥后，在含有1％脫脂乳的Tris-HCl緩沖溶液中浸漬，緩慢振蕩30分鐘。30分鐘后，將膜移動到Tris-HCl緩沖溶液槽中，緩慢振蕩10分鐘后，在另一個Tris-HCl緩沖溶液槽中再緩慢振蕩10分鐘，進行膜的洗滌。進行2次洗滌后，從液槽中取出膜，并在室溫干燥。
向0.01％氯金酸的回流中的100℃溶液中加入1％檸檬酸溶液調制金膠體。連續(xù)不斷地回流30分鐘后，室溫放置并冷卻。在使用0.2M的碳酸鉀溶液、并調節(jié)到pH9的上述金膠體溶液中，加入抗CRP抗體C并攪拌數(shù)分鐘后，通過加入pH9的10％BSA(牛血清蛋白質)溶液并使最終加入量為1％，并進行攪拌，從而調制了檢測物質即抗體-金膠體復合體(標記抗體)。通過將上述標記抗體溶液在4℃、20000G下進行50分鐘離心分離，分離標記抗體，將其懸浮于洗滌緩沖液(1％BSA·磷酸緩沖液)中后，進行上述離心分離，洗滌分離標記抗體。將該標記抗體懸浮于洗滌緩沖液中，使用0.8μm的過濾器過濾后，調節(jié)到當初的金膠體溶液量的十分之一量，并在4℃下貯藏。將上述金膠體標記抗體溶液安置在溶液輸出裝置上，涂敷，從抗CRP抗體固定化A和抗CRP抗體固定化B干燥膜上的固定化線I、以及固定化線II分開，由被檢查溶液加入開始方向依次為標記抗體、固定化線I、固定化線II的位置關系，之后使膜真空冷凍干燥。由此，在固定化膜上獲得具有標記試劑的反應層載體。
接著，在由厚度0.5mm的白色PET構成的底板上粘著含有調制的標記試劑的反應層載體，并裁剪為5.0mm的寬度。裁剪后，將各片從標記抗體保持部分到終端部分，卷起厚度為100μm的透明帶。在沒有卷起的透明帶的始端部分中央，粘著通過疊層厚度100μm的透明PET而制備的空間形成材料，進而形成間隙部分(寬5.0mm×長12.0mm×高0.5mm)。上述空間形成材料是如下制成的點樣預先調制為1.5M的氯化鉀水溶液后，使用液體氮直接冷凍，進行冷凍干燥，由此，制備了具有以干燥狀態(tài)保持氯化鉀的收縮劑保持部分的空間形成材料。如此制備免疫色譜試片。
b)試樣的調制將加入了抗凝固劑即EDTA·2K的人的血液調制為血細胞比容值為45％。通過向該血液中加入已知濃度的CRP溶液，調制各種含有已知濃度的CRP血液。
c)試片上的顯色程度的測定在生物傳感器中，向試樣導入部分加入約50μl的含有CRP的全血，通過向吸水部分方向展開處理，使其進行抗原抗體反應，從而在抗體固定化部分進行顯色反應。向該生物傳感器加入試樣5分鐘后，使用反射吸光度測定儀測定其顯色狀況，將其示于第2圖中。第2圖表示本發(fā)明的一個實施方式中的測定圖，在第2圖中的11表示光源，是635nm的半導體激光，另外，檢測側12受光元件由光電二極管構成。另外，掃描生物傳感器10側，從上述展開層的反射擴散光演算處理試劑固定化部分I(5)和試劑固定化部分II(9)中的上述標記試劑結合量，獲得作為吸光度的結果。其一測定結果示于第3圖。第3圖表示本發(fā)明的一個實施方式中的測定波形圖，上述多個試劑固定化部分是2個地方，相對于上述加入被檢查溶液的展開部分而在上游使用親和力高的抗體時，且抗原濃度為某一定濃度時，獲得第3圖樣式的波形。這是固定光源和受光元件，并掃描傳感器側。從通過這樣獲得的波形，讀取波峰值(反射吸光度)。為了獲得這樣的波形，也可以操縱光源側。
接著，將作為血清濃度含有0.1 mg/dl、0.3mg/dl、1.0mg/dl、3.0 mg/dl、7.0 mg/dl、17.0 mg/dl、37.0 mg/dl、80.0mg/dl的CRP全血加入到生物傳感器中進行展開處理。對于各CRP濃度的血液的生物傳感器上的試劑固定化部分的顯色狀況利用反射吸光度測定儀測定。測定635nm的吸光度，根據(jù)各CRP濃度作圖。將該圖示于第4圖中。第4圖表示本發(fā)明的一個實施方式中的多濃度測定結果圖，第4圖中的橫軸表示預先分別注入測定中使用的被檢查溶液，通過使用市售測定裝置測定的CRP濃度。其中，作為市售裝置，使用膠乳免疫凝集法的試劑和裝置。第4圖的縱軸表示得到的吸光度。白色曲線是由上述試劑固定化部分I(5)獲得的吸光度，黑色曲線是上述試劑固定化部分II(9)獲得的吸光度。由圖上的兩者顯然可知，對于CRP的靈敏度不同。接著，使用第5(a)圖和第5(b)圖進行說明。第5(a)圖表示本發(fā)明的一個實施方式中的測定動態(tài)范圍概略圖，第5(b)圖表示本發(fā)明的一個實施方式中的前界判定概略圖。第5(a)圖是上述第4圖中所示的結果的概略圖。如果看第5(a)圖可知，為表示試劑固定化部分I和試劑固定化部分II中不同的CRP靈敏度，上述被檢查溶液中的CRP測定范圍不同。即，根據(jù)該圖的CRP，吸光度增加的區(qū)域動態(tài)范圍1是試劑固定化部分I中的測定區(qū)域，另外，動態(tài)范圍2變?yōu)樵噭┕潭ɑ糠?中的可以測定CRP的區(qū)域。通過利用這些試劑固定化部分I、和試劑固定化部分2的各自的結果，可以實現(xiàn)動態(tài)范圍3的測定動態(tài)范圍。例如，獲得在試劑固定化部分的A1或者A4的吸光度時，試劑固定化部分II的吸光度如果是表示B1時，那就是A1的CRP濃度，如果是表示B4時，就是A4中的CRP濃度。這樣在一個試片上，而且在一次測定中可以測定寬范圍的測定動態(tài)范圍。下面使用第5(b)圖對前界現(xiàn)象檢測進行說明。第5(b)圖也與剛才說明的第5(a)圖相同，是標準地表示第4圖中的測定結果圖。如果看第5(b)圖可知，為表示試劑固定化部分I和試劑固定化部分II中不同的CRP靈敏度，上述被檢查溶液中的CRP測定范圍不同。利用該性質，檢測前界現(xiàn)象。在該圖中，用黑三角曲線表示的B-point表示在該免疫色譜試片中，前界判定臨界值。所謂前界判定臨界值是在例如試劑固定化部分I中的吸光度是A1和A4時，試劑固定化部分II中的吸光度相對于A1為B1，是剛才前界判定臨界值以下的值。這時，通過代入試劑固定化部分I中的標準曲線，可知該被檢查溶液的CRP濃度是A1但是，試劑固定化部分中的吸光度是B4時，其為剛才的CRP濃度是B-point地點以上的值。為此，可以判斷上述試劑固定化部分I的標準曲線以外的部分。這樣，通過把某一定的臨界值以上的、或者以下的作為基準，可以判定是否為前界區(qū)域。其中所述的標準曲線是指在相對于CRP濃度上升而吸光度上升的區(qū)域，通常預先利用已知濃度的被檢查溶液進行計算，然后測定未知的被檢查溶液時，從獲得的吸光度計算該未知被檢查溶液中的CRP濃度的計算式。(全血CRP的定量2)制備含有在硝化纖維素膜上固定化抗CRP抗體D的試劑固定化部分I、以及固定化抗CRP抗體E的試劑固定化部分II、以及試劑固定化部分III、還有保持抗CRP抗體F和金膠體的復合體的標記試劑的免疫色譜試片。該免疫色譜試片示于第6圖中。圖中，免疫色譜試片包括固定化抗體的試劑固定化部分I(5)、試劑固定化部分II(9)、試劑固定化部分III(14)，和在比其在加入被檢查溶液的展開開始點還近的部分的、含有抗CRP抗體F和金膠體的復合體的區(qū)域即標記試劑4，和被檢查溶液導入部分1。該免疫色譜試片如下進行制備。a)免疫色譜試片的調制準備使用磷酸緩沖溶液進行稀釋而進行濃度調節(jié)的抗CRP抗體D溶液。使用溶液輸出裝置將該抗體溶液涂覆在硝化纖維素膜上。由此，在硝化纖維素膜上獲得試劑固定化部分即抗體固定化線I。接著同樣在離開被檢查溶液導入部分下游2mm的部分以及再離開2mm的部分，涂覆比在上述抗體固定化線I中使用的抗體親和力還低的抗CRP抗體E。由此，得到試劑固定化線II、和試劑固定化線III。將該硝化纖維素膜干燥后，在含有1％脫脂乳的Tris-HCl緩沖溶液中浸漬，緩慢振蕩30分鐘。30分鐘后，將膜移動到Tris-HCl緩沖溶液槽中，緩慢振蕩10分鐘后，在另一個Tris-HCl緩沖溶液槽中再緩慢振蕩10分鐘，進行膜的洗滌。進行2次洗滌后，從液槽中取出膜，并在室溫干燥。
向0.01％氯金酸的回流中的100℃溶液中加入1％檸檬酸溶液調制金膠體。連續(xù)不斷地回流30分鐘后，室溫放置并冷卻。在使用0.2M的碳酸鉀溶液、并調節(jié)到pH9的上述金膠體溶液中，加入抗CRP抗體F并攪拌數(shù)分鐘后，通過加入pH9的10％BSA(牛血清蛋白質)溶液并使最終加入量為1％，并進行攪拌，從而調制了檢測物質即抗體-金膠體復合體(標記抗體)。通過將上述標記抗體溶液在4℃、20000G下進行50分鐘離心分離，分離標記抗體，將其懸浮于洗滌緩沖液(1％BSA·磷酸緩沖液)中后，進行上述離心分離，洗滌分離標記抗體。將該標記抗體懸浮于洗滌緩沖液中，使用0.8μm的過濾器過濾后，調節(jié)到當初的金膠體溶液量的十分之一量，并在4℃下貯藏。將上述金膠體標記抗體溶液安置在溶液輸出裝置上，涂敷，從抗CRP抗體固定化D和抗CRP抗體固定化E干燥膜上的固定化線I以及固定化線II、固定化線III分開，由被檢查溶液加入開始方向依次為標記抗體、固定化線I、固定化線II、固定化線III的位置關系，之后使膜真空冷凍干燥。由此，在固定化膜上獲得具有標記試劑的反應層載體。
接著，在由厚度0.5mm的白色PET構成的底板上粘著含有調制的標記試劑的反應層載體，并裁剪為5.0mm的寬度。裁剪后，將各片從標記抗體保持部分到終端部分，卷起厚度為100μm的透明帶。在沒有卷起的透明帶的始端部分中央，粘著通過疊層厚度100μm的透明PET而制備的空間形成材料，進而形成間隙部分(寬5.0mm×長12.0mm×高0.5mm)。上述空間形成材料是如下制成的點樣預先調制為1.5M的氯化鉀水溶液后，使用液體氮直接冷凍，進行冷凍干燥，由此，制備了具有以干燥狀態(tài)保持氯化鉀的收縮劑保持部分的空間形成材料。如此制備免疫色譜試片。b)試樣的調制將加入了抗凝固劑即EDTA·2K的人的血液調制為血細胞比容值為45％。通過向該血液中加入已知濃度的CRP溶液，調制各種含有已知濃度的CRP血液。c)試片上的顯色程度的測定在生物傳感器中，向試樣導入部分加入約50μl的含有CRP的全血，通過向吸水部分方向展開處理，使其進行抗原抗體反應，從而在抗體固定化部分進行顯色反應。與在實施例(全血CRP的定量1)中說明的第2圖相同的方式，測定向該生物傳感器加入試樣5分鐘后的顯色情況。該一測定結果示于第7圖中。
第7圖表示本發(fā)明的一個實施方式中的測定波形圖，上述多個試劑固定化部分是3個地方，相對于上述加入被檢查溶液的展開部分而在上游使用親和力高的抗體，在上述試劑固定化部分II和試劑固定化部分III中使用同一抗體時，且抗原濃度為某一定濃度時，獲得第7圖樣式的波形。這是固定光源和受光元件，并掃描傳感器側。從通過這樣獲得的波形，讀取波峰值(反射吸光度)。為了獲得這樣的波形，也可以操縱光源側。
接著，將作為血清濃度含有0.1 mg/dl、0.3mg/dl、0.6mg/dl、1.0mg/dl、3.0mg/dl、6.0mg/dl、10.0mg/dl、15.0mg/dl、20.0mg/dl、30.0mg/dl的CRP全血加入到生物傳感器中進行展開處理。對于各CRP濃度的血液的生物傳感器上的試劑固定化部分的顯色狀況利用反射吸光度測定儀測定。測定635nm的吸光度，根據(jù)各CRP濃度作圖。將該圖示于第8圖中。
第8圖表示本發(fā)明的一個實施方式中的多濃度測定結果圖，第8圖中的橫軸表示預先分別注入測定中使用的被檢查溶液，通過使用市售測定裝置測定的CRP濃度。其中，作為市售裝置，使用膠乳免疫凝集法的試劑和裝置。第8圖的縱軸表示得到的吸光度。圓形白色曲線是由上述試劑固定化部分I(5)獲得的吸光度，圓形黑色曲線是從上述試劑固定化部分II(9)獲得的吸光度，三角形白色曲線是從上述試劑固定化部分III(14)獲得的吸光度。由圖上的各試劑固定化部分顯然可知，對于CRP的靈敏度不同。接著，使用第9圖進行說明。
第9圖表示本發(fā)明的一個實施方式中的測定結果概略圖，而且第9圖是上述第8圖中所示的結果的概略圖。如果看第9圖可知，為表示試劑固定化部分I和試劑固定化部分II、試劑固定化部分III中不同的CRP靈敏度，上述被檢查溶液中的CRP測定范圍不同。另外，可知即使在親和力相等的試劑固定化部分II和試劑固定化部分III中，相對于CRP的靈敏度也不同。圖中CRP濃度A時，獲得的信號只是試劑固定化部分I(A1)，而且可知濃度A時，通過使用試劑固定化部分I可以進行CRP測定。圖中B時，信號從試劑固定化部分I(B1)和試劑固定化部分III(B3)獲得。但是在該濃度區(qū)域內(nèi)，沒有來自試劑固定化部分II的信號。由這些關系可知，這時，由試劑固定化部分I獲得的信號不是試劑固定化部分I中的前界區(qū)域，而是可以線性回歸的區(qū)域。接著，圖中CRP濃度C和CRP濃度D、CRP濃度E時，從C1～C3、D1～D3、E1～E3、3個地方所有的試劑固定化部分獲得信號。這時可知，試劑固定化部分I(C1、D1、E1)已經(jīng)在前界區(qū)域，但是有來自試劑固定化部分II(C2、D2、E2)、試劑固定化部分III(C3、D3、E3)的信號。下面，對CRP濃度C和CRP濃度D、CRP濃度E進行敘述。在CRP濃度C中，有來自3個地方所有的信號，而且在試劑固定化部分II(C2)和試劑固定化部分III(C3)中，其信號有相當?shù)牟睢＿@時，使用試劑固定化部分III可以酸出CRP濃度。CRP濃度D、CRP濃度E中，試劑固定化部分II(D2、E2)和試劑固定化部分III(D3、E3)的信號從CRP濃度D向CRP濃度E接近。由于該接近部分的關系，如果想廣泛使用測定動態(tài)范圍時，假設到CRP濃度C，使用試劑固定化部分III、在越過CRP濃度C時，可以使用試劑固定化部分II求出CRP濃度。這看起來只可能是來自試劑固定化部分II的信號，但是在不在本圖中的非常高濃度的抗原CRP的情況下，在相同的信號下存在降低的情況。可以準確地判斷可以測定區(qū)域(在本圖中根據(jù)CRP濃度線性變化的部分)、或抗原過剩區(qū)域，另外CRP濃度E以上的情況，所有的信號相當接近，并可以判斷本測定體系的前界區(qū)域。由此，測定對象物是未知濃度的被檢查溶液的測定，上述試劑固定化部分是3個地方，另外使用的固定化用試劑是2種時，出人意料地，不僅可以使用一個生物傳感器測定更寬的測定動態(tài)范圍，而且可以更正確的測定前界區(qū)域檢測等。這是以在3個地方的固定化的實施例表示的，但是不用說，使用者當然可以根據(jù)需要改變固定化部分的多數(shù)化，還可以根據(jù)需要改變根據(jù)使用抗體的親和力的各試劑固定化部分的關系。其中所述的所謂信號，是在上述試劑固定化部分中，來自結合的上述標記試劑的信號，根據(jù)它的必要性，也可以通過目測判定，但是為了更準確地測定，優(yōu)選使用如本例中所示的檢測儀。
而且，作為在本發(fā)明實施方式中的生物裝置，通常使用硝化纖維素和玻璃纖維濾紙這樣的由任意的多孔質性載體構成的色譜法材料構成的生物傳感器。由這樣的材料構成的生物傳感器是利用了例如抗原抗體反應這樣的任意的測定原理，具有分析檢測某些特定物質，進行定性或者定量的功能。
另外，在本發(fā)明實施例中，使用在同一硝化纖維素膜上設有標記試劑和試劑固定化部分的生物傳感器，但是把在和硝化纖維素不同的材料例如無紡布類的多孔質性載體上載有標記試劑的作為標記試劑，即使放在支撐體上也沒有任何問題。作為構成標記試劑的標記物使用金膠體已有實例，但是也可以是著色物質、熒光物質、磷光物質、發(fā)光物質、氧化還原物質、酶、核酸、內(nèi)質網(wǎng)，只要是在反應前后產(chǎn)生某些變化的物質都可以使用。
另外，在本實施例中，是以標記試劑是一個地方，而試劑固定化部分是多個的例子表示的，但是標記試劑不一定是一個地方，也可以由多個試劑固定化部分和多個試劑的組合構成。例如在多個試劑固定化部分中在各試劑固定化部分的上游也可以采取布置各自標記試劑的構成，制造上的工序變得復雜，但是不用說可以在任意的位置上以任意的數(shù)量設置。
作為測定的試樣溶液，例如有水和水溶液、尿、血液、血漿、血清、唾液等體液，溶解了固體以及粉體和氣體的溶液等，其用途為例如尿檢查和妊娠檢查、水質檢查、便檢查、土壤分析、食品分析等。另外，作為被檢物質即C反應性蛋白質(CRP)已有實例敘述，但是還可以舉例的是抗體、免疫球蛋白、激素、酶以及肽等蛋白質以及蛋白質衍生物以及細菌、病毒、真菌類、支原體、寄生蟲以及這些的產(chǎn)物及其成分的感染性物質、治療藥以及亂用藥等藥物以及腫瘤標記。具體的講，即使是例如絨毛性性腺刺激激素(hCG)、黃體激素(LH)、甲狀腺刺激激素、濾胞形成激素、甲狀旁腺刺激激素、腎上腺皮質刺激激素、雌二醇、前列腺特異性抗原、B型肝炎表面抗原、肌紅蛋白、CRP、心肌肌蛋白、HbA1c、清蛋白等也沒有任何問題。根據(jù)上述的形式，簡便且迅速，高靈敏度、高性能的同時，實現(xiàn)了可以檢測前界區(qū)域的準確性高的測定。另外，簡便且迅速，高靈敏度、高性能的同時，可以實現(xiàn)在一次測定中，測定對象物動態(tài)范圍足夠大的測定。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性使用本發(fā)明中的免疫色譜的生物傳感器以及利用它的測定方法，并不限于在臨床領域等醫(yī)療診斷現(xiàn)場，還可在食品衛(wèi)生關連領域、環(huán)境檢測領域等各種領域中，作為進行簡易、準確而且迅速的測定來利用。
權利要求書(按照條約第19條的修改)1.生物傳感器，其設有展開被檢查溶液的展開層，含有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分，特征在于，存在多個上述試劑固定化部分，上述多個試劑固定化部分的試劑相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同。
2.生物傳感器，其設有展開被檢查溶液的展開層，含有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，是以加入上述被檢查溶液的加入部分、標記試劑部分、試劑固定化部分的順序設置的裝置，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分，特征在于，存在多個上述試劑固定化部分，上述多個試劑固定化部分的試劑相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同。
3.權利要求第1項記載的或者權利要求第2項記載的生物傳感器，特征在于，在上述多個的試劑固定化部分中被固定化試劑是抗體，被檢查溶液中的測定對象物是抗原，對于加入上述被檢查溶液的部分，越是上游越可將相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力高的抗體固定化。
4.權利要求第1項到權利要求第3項任一項記載的生物傳感器，特征在于，在上述多個試劑固定化部分中試劑是單克隆抗體。
5.權利要求第1項到權利要求第4項任一項記載的生物傳感器，特征在于，通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，將上述被檢查溶液中的測定對象物進行定量。
6.權利要求第1項到權利要求第5項任一項記載的生物傳感器，特征在于，通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，檢測前界現(xiàn)象。
7.權利要求第1項到權利要求第6項任一項記載的生物傳感器，通過測定上述多個試劑固定化部分相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，測定被檢查溶液中的測定對象物，特征在于，也進行其它試劑固定化部分的標記試劑結合量的測定，根據(jù)其各自的測定結果，進行上述最上游的上述試劑固定化部分中標記試劑結合量測定值的前界判定。
8.權利要求第1項到權利要求第7項任一項記載的生物傳感器，特征在于，由于上述試劑固定化部分的試劑相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以各個固定化部分中上述被檢查溶液中的測定對象物濃度測定動態(tài)范圍不相同。
9.權利要求第8項記載的生物傳感器，特征在于，由于上述試劑固定化部分的試劑相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以擴大了上述被檢查溶液中的測定對象物濃度測定動態(tài)范圍。
10.權利要求第1項到權利要求第9項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述多個試劑固定化部分的試劑各自識別相同的表位。
11.權利要求第1項到權利要求第10項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述試劑固定化部分是2個地方。
12.權利要求第1項到權利要求第11項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述多個試劑固定化部分分別接觸。
13.權利要求第1項到權利要求第12項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述展開層是橫向流動方式，上述多個試劑固定化部分在對于上述被檢查溶液的展開方向的垂直方向上以線狀被固定，該線寬是0.5mm-2.0mm，另外，多個試劑固定化部分之間的線間距離是1.0mm以上。
14.權利要求第1項到權利要求第13項任一項記載的生物傳感器，特征在于，含有上述標記試劑成分、固定化試劑成分，而且所有的試劑為干燥狀態(tài)。
15.權利要求第1項到權利要求第14項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述被檢查溶液是尿、唾液、血液。
16.權利要求第1項到權利要求第15項任一項記載的生物傳感器，特征在于，生物傳感器是免疫色譜。
17.測定方法，其是使用了權利要求第1項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器的測定方法，特征在于，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，將被檢查溶液中的測定成分定性或者定量。
18.測定方法，特征在于，其是利用包括設有展開被檢查溶液的展開層，相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者標記試劑的親和力各不相同的試劑，在上述展開層的局部被固定化的試劑部分和在標記的上述展開層的局部被保持，通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分的生物傳感器，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分。
19.權利要求第17項或者權利要求第18項記載的測定方法，特征在于，測定上述多個試劑固定化部分中標記試劑的結合量的方法是使用電磁放射線。
20.權利要求第17項或者權利要求第19項記載的測定方法，特征在于，測定上述多個試劑固定化部分中標記試劑的結合量的方法是測定電磁放射線反射的擴散電磁放射線。
21.權利要求第17項到權利要求第20項任一項記載的測定方法，特征在于，通過相對于上述生物傳感器掃描在上述測定中使用的電磁放射線源，或者，通過相對于上述電磁放射線源掃描上述生物傳感器，測定上述試劑固定化部分的上述標記試劑結合量。
22.權利要求第17項到權利要求第21項任一項記載的測定方法中，特征在于，該測定方法是反射吸光度測定，光源隨著上述多個試劑固定化部分變?yōu)榫€狀而變?yōu)榫€狀，光源的線狀寬度是1.0mm以下。
23.權利要求第17項到權利要求第22項任一項記載的測定方法，特征在于，分別測定上述多個試劑固定化部分中的結合量，并進行前界判定。
24.權利要求第17項到權利要求第23項任一項記載的測定方法，特征在于，在上述多個試劑固定化部分中，測定相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，同時也進行其它的試劑固定化部分的測定，由其各自的測定結果，進行在上述最上游的試劑固定化部分中的標記試劑結合量測定值的前界判定。
25.權利要求第17項到權利要求第24項任一項記載的測定方法，特征在于，在測定結果中使用任何一個標記試劑結合量。
26.權利要求第17項到權利要求第25項任一項記載的測定方法，特征在于，上述測定是由上述被檢查溶液的加入操作開始的一步免疫色譜。
27.權利要求第1項到權利要求第10項、從權利要求第12項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述試劑固定化部分是3個地方。
28.權利要求第27項記載的生物傳感器，特征在于，相對于加入上述被檢查溶液的部分，最上游位置的上述試劑固定化部分的試劑相對于上述被檢查溶液中的測定對象物、或者上述標記試劑的親和力最高，而且，位于2個連接部分和3個連接部分的試劑固定化部分的試劑的親和力相同。
29.權利要求第17項到權利要求第26項任一項記載的測定方法，特征在于，上述試劑固定化部分是3個地方。
30.使用權利要求第28項記載的生物傳感器的測定方法，特征在于，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分。
31.權利要求第30項記載的測定方法，特征在于，上述3個地方的試劑固定化部分中，通過測定相對于加入上述被檢查溶液部分的下游2個地方的固定化部分中上述標記試劑的結合量，檢測前界區(qū)域。
權利要求
1.生物傳感器，其設有展開被檢查溶液的展開層，含有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分的生物傳感器，特征在于，存在多個上述試劑固定化部分，上述多個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同。
2.生物傳感器，其設有展開被檢查溶液的展開層，含有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，是以加入上述被檢查溶液的加入部分、標記試劑部分、試劑固定化部分的順序設置的裝置，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分的生物傳感器，特征在于，存在多個上述試劑固定化部分，上述多個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同。
3.權利要求第1項記載的或者權利要求第2項記載的生物傳感器，特征在于，在上述多個的試劑固定化部分中被固定化試劑是抗體，被檢查溶液中的測定對象物是抗原，對于加入上述被檢查溶液的部分，越是上游越可將相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力高的抗體固定化。
4.權利要求第1項到權利要求第3項任一項記載的生物傳感器，特征在于，在上述多個試劑固定化部分中試劑是單克隆抗體。
5.權利要求第1項到權利要求第4項任一項記載的生物傳感器，特征在于，通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，將上述被檢查溶液中的測定對象物進行定量。
6.權利要求第1項到權利要求第5項任一項記載的生物傳感器，特征在于，通過在上述多個試劑固定化部分中測定上述標記試劑結合量，檢測前界現(xiàn)象。
7.權利要求第1項到權利要求第6項任一項記載的生物傳感器，通過測定上述多個試劑固定化部分相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，測定被檢查溶液中的測定對象物，特征在于，也進行其它試劑固定化部分的標記試劑結合量的測定，根據(jù)其各自的測定結果，進行上述最上游的上述試劑固定化部分中標記試劑結合量測定值的前界判定。
8.權利要求第1項到權利要求第7項任一項記載的生物傳感器，特征在于，由于上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以各個固定化部分中上述被檢查溶液中的測定對象物濃度測定動態(tài)范圍不相同。
9.權利要求第8項記載的生物傳感器，特征在于，由于上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，所以擴大了上述被檢查溶液中的測定對象物濃度測定動態(tài)范圍。
10.權利要求第1項到權利要求第9項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述多個試劑固定化部分各自識別相同的表位。
11.權利要求第1項到權利要求第10項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述試劑固定化部分是2個地方。
12.權利要求第1項到權利要求第11項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述多個試劑固定化部分分別接觸。
13.權利要求第1項到權利要求第12項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述展開層是橫向流動方式，上述多個試劑固定化部分在對于上述被檢查溶液的展開方向的垂直方向上以線狀被固定，該線寬是0.5mm～2.0mm，另外，多個試劑固定化部分之間的線間距離是1.0mm以上。
14.權利要求第1項到權利要求第13項任一項記載的生物傳感器，特征在于，含有上述標記試劑成分、固定化試劑成分的所有的試劑為干燥狀態(tài)。
15.權利要求第1項到權利要求第14項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述被檢查溶液是尿、唾液、血液。
16.權利要求第1項到權利要求第15項任一項記載的生物傳感器，特征在于，生物傳感器是免疫色譜。
17.測定方法，其是使用了權利要求第1項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器的測定方法，特征在于，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，將被檢查溶液中的測定成分定性或者定量。
18.測定方法，特征在于，其是利用包括設有展開被檢查溶液的展開層，含有相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和力各不相同，在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和在標記的上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分的生物傳感器，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分。
19.權利要求第17項或者權利要求第18項記載的測定方法，特征在于，測定上述多個試劑固定化部分中標記試劑的結合量的方法是使用電磁放射線。
20.權利要求第17項或者權利要求第19項記載的測定方法，特征在于，測定上述多個試劑固定化部分中標記試劑的結合量的方法是測定電磁放射線反射的擴散電磁放射線。
21.權利要求第17項到權利要求第20項任一項記載的測定方法，特征在于，通過相對于上述生物傳感器掃描在上述測定中使用的電磁放射線源，或者通過相對于上述電磁放射線源掃描上述生物傳感器，測定上述試劑固定化部分的上述標記試劑結合量。
22.權利要求第17項到權利要求第21項任一項記載的測定方法中，特征在于，該測定方法是反射吸光度測定，光源隨著上述多個試劑固定化部分變?yōu)榫€狀而變?yōu)榫€狀，光源的線狀寬度是1.0mm以下。
23.權利要求第17項到權利要求第22項任一項記載的測定方法，特征在于，分別測定上述多個試劑固定化部分中的結合量，并進行前界判定。
24.權利要求第17項到權利要求第23項任一項記載的測定方法，特征在于，在上述多個試劑固定化部分中，測定相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，同時也進行其它的試劑固定化部分的測定，由其各自的測定結果，進行在上述最上游的試劑固定化部分中的標記試劑結合量測定值的前界判定。
25.權利要求第17項到權利要求第24項任一項記載的測定方法，特征在于，在上述多個試劑固定化部分中，測定相對于加入上述被檢查溶液的部分的最上游位置的上述試劑固定化部分的標記試劑結合量，同時也進行其它的試劑固定化部分的標記試劑結合量的測定，由其各自的測定結果，通過演算處理判定上述最上游的試劑固定化部分中標記試劑結合量測定范圍、或者其它的試劑固定化部分中標記試劑結合量測定范圍，在測定結果中使用任何一個標記試劑結合量。
26.權利要求第17項到權利要求第25項任一項記載的測定方法，特征在于，上述測定是由上述被檢查溶液的加入操作開始的一步免疫色譜。
27.權利要求第1項到權利要求第10項、從權利要求第12項到權利要求第16項任一項記載的生物傳感器，特征在于，上述試劑固定化部分是3個地方。
28.權利要求第27項記載的生物傳感器，特征在于，相對于加入上述被檢查溶液的部分，最上游位置的上述試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物、或者上述標記試劑的親和力最高，而且，位于第2和第3的試劑固定化部分的親和力相同。
29.權利要求第17項到權利要求第26項任一項記載的測定方法，特征在于，上述試劑固定化部分是3個地方。
30.使用權利要求第28項記載的生物傳感器的測定方法，特征在于，通過測定上述多個試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分。
31.權利要求第30項記載的測定方法，特征在于，上述3個地方的試劑固定化部分中，通過測定相對于加入上述被檢查溶液部分的下游2個地方的固定化部分中上述標記試劑的結合量，檢測前界區(qū)域。
全文摘要
本發(fā)明的生物傳感器，設有展開被檢查溶液的展開層，具有在上述展開層的局部被固定化的試劑部分，和包括以標記的干燥狀態(tài)在上述展開層的局部被保持的、通過被檢查溶液展開而可以洗提的試劑部分，通過測定上述試劑固定化部分中上述標記試劑的結合量，定性或者定量被檢查溶液中的測定成分，上述試劑固定化部分多個存在，另外，各個試劑固定化部分相對于上述被檢查溶液中的測定對象物或者上述標記試劑的親和性各不相同，所以可以檢測前界現(xiàn)象。另外，提供了上述被檢查溶液中的上述測定對象物濃度動態(tài)范圍更大的測定準確性高的生物傳感器。由此，即使在被檢查溶液中的測定對象物濃度動態(tài)范圍寬時，也可以檢測前界現(xiàn)象，另外，提供了具有寬范圍的測定動態(tài)范圍的高精度且準確性高的生物傳感器。
文檔編號G01N33/558GK1473270SQ02802805
公開日2004年2月4日 申請日期2002年8月9日 優(yōu)先權日2001年8月9日
發(fā)明者灘岡正剛, 高橋三枝, 田中宏橋, 北脅文久, 久, 岡正剛, 枝, 橋 申請人:松下電器產(chǎn)業(yè)株式會社