專利名稱：可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針。
本發明還涉及該化學發光探針的制備方法。
背景技術：
化學發光探針主要應用于檢測自由基，兩者之間的反應是瞬時的，劇烈的，所以目前現有的化學發光探針在體探測生物組織化學發光時，很難做到在體的實時檢測，因而導致一些反應現象不能觀察到，造成了實驗假象。
發明內容
本發明的目的在于提供一種可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針，解決單純的化學發光試劑MCLA與氧自由基(1O2，O2-)之間的反應是瞬時的、短暫的，很難做到實時的長時間觀測的問題。
本發明的目的還在于提供上述可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針的制備方法。
本發明可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針是在化學發光試劑表面包被可溶性蛋白，其粒徑小于150nm。這樣，可以延緩化學發光試劑MCLA的釋放速度，可以做到較長時間的在體實時監測。同時，制作過程中所采用的包被MCLA的試劑為可溶性蛋白，它在生物體內可被自然降解。
所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白其中一種或一種以上混合物。
所述化學發光試劑包括MCLA、魯米諾、或光澤精。
可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針的制備方法所需原料包括可溶性蛋白、化學發光試劑、植物油、水、非離子型表面活性劑；部分原料用量比例如下可溶性蛋白化學發光試劑植物油水＝5-50(單位mg)10-100(單位umol/L)2-8(單位ml)1-4(單位ml)；非離子型表面活性劑濃度為0.2-2％重量。
其中，V水∶V油≤26∶74所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白其中一種或一種以上混合物。
所述化學發光試劑包括MCLA、魯米諾、或光澤精。
所述植物油包括花生油和/或棉籽油。
所述非離子型表面活性劑可以是Tween 80、司本80、蔗糖酯、或單甘酯。
其制備方法包括以下步驟(1)避光條件下，將可溶性蛋白溶液與化學發光試劑溶液混和，再向其中加入植物油，在0-4℃的條件下，用超聲波處理，超聲強度介于80-220W之間，處理時間為2-5min，并向其中加入非離子型表面活性劑，混合物呈現均勻的乳白色。
(2)將所制得的乳狀液分裝，離心，將乳狀液析出的油除去。
(3)把離心后所制得的白色乳液加熱固化，加熱溫度為50-80℃，固化時間為6-20min，在低于4℃的溫度條件下保存。
制作過程中，超聲處理可使人血清白蛋白分散形成微小顆粒，并使MCLA水溶液，人血清白蛋白溶液與植物油均勻混和；向其中加入非離子型表面活性劑主要是為了降低界面張力，促進乳化并維持乳液的穩定。本發明與現有技術相比具有如下優點1、依據本發明中所提出方法而制備的化學發光探針，粒徑小于150nm，該尺寸大小保證探針可在毛細血管內均勻輸運，從而形成組織中探針的均勻分布；2、依據本發明中所提出方法而制備的化學發光探針，可根據探針在體內輸運時間來調整探針尺寸，從而調整探針的最佳延時反應時間，最終達到提高檢測靈敏度的目的；3、依據本發明中所提出方法而制備的化學發光探針，探針包被物在生物體內可自然將降解；經裸鼠在體實驗使用，實驗動物未發生過敏及栓塞現象，證明了該制作方法的安全，無毒性；4、依據本發明中所提出方法而制備的化學發光探針，具有制作方法簡便，實驗效果明顯等特點。
圖1是依據本發明中所提出方法制作的納米級化學發光探針用透射電鏡所拍攝的照片。
圖2是體外實驗中，經蛋白包裹的化學發光探針(B)和未被蛋白包裹的化學發光探針(A)在反應延時方面比較的檢測結果圖。
圖3是圖2中經蛋白包裹的化學發光探針(B)和未被蛋白包裹的化學發光探針(A)發光強度衰減的對比圖。
具體實施例方式
實施例1(1)人血清白蛋白10mg，化學發光探針MCLA濃度為20umol/L，菜籽油4m1，三蒸水2ml，非離子型表面活性劑Tween 80的濃度為1％。
(2)避光的條件下，將人血清白蛋白溶液與已稀釋到使用濃度的化學發光試劑MCLA溶液混和，再向其中加入菜籽油，在0℃的條件下，用150W的超聲處理1min；向其中加入濃度為1％的非離子型表面活性劑Tween 80后，繼續用超聲處理2min，混合物呈現均勻的乳白色。
(3)將所制得的乳狀液分裝，4℃的條件下，2000g/min，離心10min。離心后，輕輕將乳狀液析出的油除去。此步驟重復幾次，直至離心所析出的油被基本除凈。
(4)把離心后所制得的白色乳液在80℃的環境中加熱固化10min，避光保存于4℃冰箱待用。
實施例2人血清白蛋白5mg，化學發光探針MCLA濃度為10umol/L，菜籽油2ml，三蒸水1ml，均勻混和；0℃的條件下，80W超聲處理2min，加入濃度為0.2％的非離子型表面活性劑Tween 80后，繼續用超聲處理3min。將所制得的乳液分裝，離心，吸去多余的油分，50℃的條件下，加熱固化20min，然后，避光保存于4℃冰箱。
實施例3牛血清白蛋白50mg，化學發光探針MCLA濃度為20umol/L，菜籽油4ml，三蒸水2ml，均勻混和；0℃的條件下，220W超聲處理1min，加入濃度為0.2％的非離子型表面活性劑Tween 80后，繼續用超聲處理1min。將所制得的乳液分裝，離心，吸去多余的油分，80℃的條件下，加熱固化10min，然后，避光保存于4℃冰箱。
其中，實施例1所采用的原料、用量及條件是3個實例中最佳的。
如圖所示，圖1是依據本發明中所提出方法制作的納米級化學發光探針在用日本H-300透射電鏡觀察時拍攝的照片。為實施例1所對應的結果，顆粒粒徑大小為50-150nm。放大倍數50k。
圖2是體外實驗中，經人血清白蛋白包裹的化學發光探針(B)和未被包裹的化學發光探針(A)在反應延時方面的檢測結果圖。該實驗中，納米級化學發光探針的制作采用的是發明內容例1中所介紹的方法。
圖3是圖2中經人血清白蛋白包裹的化學發光探針(B)和未被包裹的化學發光探針(A)發光強度衰減對比圖。可以看出，未被包裹的化學發光探針發光衰減快，13min就基本衰減到本底；而經人血清白蛋白包裹的化學發光探針衰減緩慢，測量20min仍有微弱的發光。根據該實驗結果，可見經蛋白包裹的化學發光探針比未被包裹的探針有較明顯的發光延時。
權利要求
1.一種可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針，其特征在于在化學發光試劑表面包被可溶性蛋白，其粒徑小于150nm。
2.根據權利要求1所述的可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針，其特征在于所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白其中一種或一種以上混合物。
3.根據權利要求1或2所述的可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針，其特征在于述化學發光試劑包括MCLA、魯米諾、或光澤精。
4.權利要求1所述的可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針的制備方法，其特征在于所需原料包括可溶性蛋白、化學發光試劑、植物油、水、非離子型表面活性劑；部分原料用量比例如下可溶性蛋白化學發光試劑植物油水＝5-50(單位mg)10-100(單位umol/L)2-8(單位ml)1-4(單位ml)；非離子型表面活性劑濃度為0.2-2％重量；所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白，其中一種或一種以上混合物；所述化學發光試劑包括MCLA、魯米諾、或光澤精；其中，V水∶V油≤26∶74，其制備方法包括以下步驟(1)避光條件下，將可溶性蛋白溶液與化學發光試劑溶液混和，再向其中加入植物油，在0-4℃的條件下，用超聲波處理，超聲強度介于80-220W之間，處理時間為2-5min，并向其中加入非離子型表面活性劑，混合物呈現均勻的乳白色；(2)將所制得的乳狀液分裝，離心，將乳狀液析出的油除去；(3)把離心后所制得的白色乳液加熱固化，加熱溫度為50-80℃，固化時間為6-20min，在低于4℃的溫度條件下保存。
5.根據權利要求4所述的一種可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針的制備方法，其特征在于所述植物油包括花生油和/或棉籽油。
6.根據權利要求4所述的一種可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針的制備方法，其特征在于所述非離子型表面活性劑是Tween 80、司本80、蔗糖酯、或單甘酯。
全文摘要
一種可在生物體內自然降解的納米級化學發光探針,其特征在于在化學發光試劑表面包被可溶性蛋白,其粒徑小于150nm；其制備方法包括避光條件下,將可溶性蛋白溶液與化學發光試劑溶液混和,再向其中加入植物油,在0－4℃的條件下,用超聲波處理,超聲強度介于80－220W之間,處理時間為2－5min,并向其中加入非離子型表面活性劑,混合物呈現均勻的乳白色；(2)將所制得的乳狀液分裝,離心,將乳狀液析出的油除去；(3)把離心后所制得的白色乳液加熱固化,加熱溫度為50－80℃,固化時間為6－20min,在低于4℃的溫度條件下保存；本發明解決單純的化學發光試劑MCLA與氧自由基(
文檔編號G01N21/76GK1423119SQ02149799
公開日2003年6月11日 申請日期2002年12月31日 優先權日2002年12月31日
發明者邢達, 郝敏 申請人:華南師范大學