專利名稱：一種參附注射制劑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥注射制劑的質量控制方法，特別是涉及一種參附注射制劑的質量控制方法。
背景技術：
參附湯是古代的驗方，更是中醫急癥治療中的經典配方。在現有技術中已經將傳統的湯劑改進制成了參附注射液，參附注射液因其在治療缺血性休克、心腦血管疾病當中療效確切、起效迅速而成為急癥科必備藥物。進一步開發質量穩定、可控、有效成分含量更高的參附注射制劑不僅是醫療實踐的需要，也是中藥藥學發展的需要。
發明內容
本發明目的在于提供一種參附注射制劑的質量控制方法本發明目的是通過如下技術方案實現的本發明質量控制方法包括下述鑒別和/或含量測定，其中含量測定包括下述人參皂苷Re和/或烏頭類生物堿的含量測定。
烏頭堿鑒別取制備好的參附注射制劑5ml，用氨試液調PH至8-11；用氯仿提取2-3次，每次用氯仿10-20ml，揮干氯仿；用甲醇溶解成1ml為供試品溶液；另稱取對照品烏頭堿，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl和對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G板上，以11-13∶6-8∶1-3的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇為展開劑，用氨試液飽和8-15分鐘，展開10-14cm，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液，稍后，再噴以5％亞硝酸鈉乙醇液；供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上出現的斑點應小于對照品或者不出現斑點；含量測定人參總皂苷，對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.08-0.1，0.1-0.3，0.3-0.5，0.5-0.7，0.7-0.9，0.9-1.1ml，分置8-12ml量瓶中，揮干溶劑，放冷，精密加入1-3∶6-9的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液2.0ml，搖勻，置50-70℃水浴中加熱10-20分鐘，取出，置冰水浴中冷卻，加冰醋酸至刻度，搖勻，以相應試劑同法操作為空白，照分光光度法，立即在545nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇振搖使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液0.4ml，置10ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干溶劑”起，依法測定，計算，即得；被檢測參附注射劑每ml含人參總皂苷以人參皂苷Re(C48H82O18)計，不得少于2.4mg；烏頭類生物堿，對照品溶液的制備，精密稱取烏頭堿對照品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.8、0.8-1.2、1.2-1.6、1.6-2.0ml，分別置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L鹽酸溶液1.6-1.8、1.2-1.6、0.8-1.2、0.4-0.8、0.2-0.4、0.1-0.2ml，各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液8-12ml，溴甲酚綠液1-3ml，氯仿8-12ml，振搖2-4分鐘，靜置，分取氯仿液，用氯仿浸泡處理過的脫脂棉濾過，取續濾液，以0.01mol/L鹽酸溶液1-3.0ml同法操作為空白，照分光光度法，在416nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射劑內容物0.15g，精密稱定，加氯化鈉飽和溶液15ml溶解，用氨試液調節pH值10～11，用氯仿提取3-5次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并轉入25ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照標準曲線制備項下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測定，計算，即得；制備好的參附注射制劑每ml含烏頭類生物堿以烏頭堿(C24H47NO11)計，應為0.3～0.6mg。
本發明參附注射制劑的質量控制方法中所述的醋酸-醋酸鈉緩沖液的制備取0.1-0.3mol/L醋酸溶液，用0.1-0.3mol/L醋酸鈉溶液調pH值至2-4；本發明參附注射制劑的質量控制方法中所述的溴甲酚綠液的制備取溴甲酚綠，加0.03-0.06mol/L氫氧化鈉液研磨使溶解，加水至溴甲酚綠50mg/100ml，用氯仿提取2-4次，每次20-40ml，棄去氯仿液，即得。
本發明質量控制方法中烏頭堿的限量以標準品作為對照，直接比較斑點的大小，使操作更為簡便、直觀；對人參、附子均作含量測定，使質量更加穩定，檢測更為科學；原參附注射液在測定人參含量其對照品為Rb1，現參附注射劑在測定人參含量時其對照品為Re。
符合本發明質量標準的參附注射制劑具有如下藥效一、強心作用1.對離體蛙心的影響注射用參附(凍干)各劑量組(2.5、5.0、10.0、15.0、20.0mg)對蛙心心率無顯著性影響；2.5、5.0mg能顯著地促進心肌收縮力(P＜0.05～0.01)。
2.對家兔在體心臟的影響注射用參附(凍干)各劑量組(n＝4，0.5、1.0、2.0g/kg)，結果，2.0g/kg能顯著增加心肌收縮力，振幅幅度明顯加大(P＜0.05～0.01)，并能顯著性的對抗烏頭堿所致心肌衰竭(P＜0.01)。
二、對失血性休克動物的治療作用1.對失血性休克大鼠的影響在給藥10min內，注射用參附(凍干)各劑量組對大鼠血壓的影響與對照組一致，未見明顯影響，20min后，注射用參附(凍干)大、中劑量組表現出顯著的升壓作用，表明升壓作用比較緩和，小劑量也有一定的升壓作用，但無顯著性；中劑量在60min時能顯著性拮抗心率的降低，其余劑量組無顯著性差異，表明對心率的復蘇并無明顯影響。
2.對失血性休克貓血壓的影響注射用參附(凍干)(0.25、0.5、1.0、2.0g/kg)輸入后有輕微的降壓作用，再注入0.5g/kg、1.0g/kg或2.0g/kg時均出現不同的升壓作用，可明顯升高收縮壓(1.0g/kg)、平均壓(0.5g/kg和1.0g/kg)、舒張壓(0.5g/kg和2.0g/kg)，具有較明顯的抗休克作用。
三、對創傷性休克小鼠生存率的影響結果表明，注射用參附(凍干)(n＝20，1.25、2.5、5.0g/kg)對肢體缺血再灌注損傷引起的創傷性休克小鼠具有顯著性的防治作用(P＜0.05～0.01)。
四、抗心率失常作用1.對氯仿所致小鼠心律失常的影響注射用參附(凍干)(n＝20，1.25、2.5、5.0g/kg)，對氯仿誘發小鼠心律失常有非常顯著性的對抗作用(P＜0.05～0.001)。
2.對烏頭堿所致大鼠心律失常的影響注射用參附(凍干)(n＝10，0.25、0.5、1.0g/kg)，大、中劑量能顯著性的推遲烏頭堿所致大鼠心律失常的出現時間(min)(P＜0.05～0.01)。
3.對哇巴因所致豚鼠心律失常的影響注射用參附(凍干)(0.5、1.0、2.0g/kg)，對哇巴因所致豚鼠心律失常有不同程度的對抗作用，大、中、小劑量使VP(室早)、VT(室速)出現的時間推遲，與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)；大、中劑量對VF(室顫)、CA(心肌停搏)出現時間顯著推遲(P＜0.05～0.01)。
五、對動物耐缺氧和急性心肌缺血的影響1.對小鼠常壓耐缺氧的影響注射用參附(凍干)(1.25、2.5、5.0g/kg)能明顯提高小鼠耐缺氧的能力，使生存時間顯著延長(P＜0.05～0.01)。
2.對異丙腎上腺素負荷小鼠耐缺氧生存時間的影響注射用參附(凍干)(n＝12，1.25、2.5、5.0g/kg)各劑量組均顯著性延長小鼠生存時間(P＜0.05～0.01)。
3.對大鼠心肌缺血的影響結果表明，注射用參附(凍干)(0.5、1.0、2.0g/kg)對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血有一定改善作用。
實施例烏頭堿限量取制備好的參附注射制劑5ml，用氨試液調PH至10左右；用氯仿提取3次，用氯仿20、20、10ml，揮干氯仿；用甲醇溶解成1ml為供試品溶溶液；另稱取對照品烏頭堿，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl和對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G板上，以12.8∶7.2∶2的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇為展開劑，用氨試液飽和10分鐘，展開12cm，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液，稍后，再噴以5％亞硝酸鈉乙醇液；供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上出現的斑點應小于對照品或者不出現斑點。
含量測定人參總皂苷，對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，揮干溶劑，放冷，精密加入2∶8的5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸的混合溶液2.0ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，置冰水浴中冷卻，加冰醋酸至刻度，搖勻，以相應試劑同法操作為空白，照分光光度法，立即在545nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇振搖使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液0.4ml，置10ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干溶劑”起，依法測定，計算，即得；被檢測參附注射劑每ml含人參總皂苷以人參皂苷Re(C48H82O18)計，不得少于2.4mg；烏頭類生物堿，對照品溶液的制備精密稱取烏頭堿對照品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分別置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L鹽酸溶液1.8、1.6、1.2、0.8、0.4、0.2ml，各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml，溴甲酚綠液2ml，氯仿10ml，振搖3分鐘，靜置，分取氯仿液，用氯仿浸泡處理過的脫脂棉濾過，取續濾液，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照分光光度法，在416nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.15g，精密稱定，加氯化鈉飽和溶液15ml溶解，用氨試液調節pH值10～11，用氯仿提取4次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并轉入25ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照標準曲線制備項下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測定，計算，即得；制備好的參附注射劑每ml含烏頭類生物堿以烏頭堿(C24H47NO11)計，應為0.3～0.6mg。
本方法中所述的醋酸-醋酸鈉緩沖液的制備取0.2mol/L醋酸溶液，用0.2mol/L醋酸鈉溶液調pH值至3.1；本方法中所述的溴甲酚綠液的制備取溴甲酚綠50mg，加0.05mol/L氫氧化鈉液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿提取3次，每次30ml，棄去氯仿液，即得。
權利要求
1.一種參附注射制劑的質量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法為取制備好的參附注射制劑5ml，用氨試液調PH至8-11；用氯仿提取2-3次，每次用氯仿10-20ml，揮干氯仿；用甲醇溶解成1ml為供試品溶液；另稱取對照品烏頭堿，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl和對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G板上，以11-13∶6-8∶1-3的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇為展開劑，用氨試液飽和8-15分鐘，展開10-14cm，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液，稍后，再噴以5％亞硝酸鈉乙醇液；供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上出現的斑點應小于對照品或者不出現斑點。
2.如權利要求1所述的質量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法為取制備好的參附注射制劑5ml，用氨試液調PH至10左右；用氯仿提取3次，用氯仿20、20、10ml，揮干氯仿；用甲醇溶解成1ml為供試品溶溶液；另稱取對照品烏頭堿，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl和對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G板上，以12.8∶7.2∶2的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇為展開劑，用氨試液飽和10分鐘，展開12cm，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液，稍后，再噴以5％亞硝酸鈉乙醇液；供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上出現的斑點應小于對照品或者不出現斑點。
3.一種參附注射制劑的質量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定方法選自如下方法中的一種或幾種人參總皂苷，對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.08-0.1，0.1-0.3，0.3-0.5，0.5-0.7，0.7-0.9，0.9-1.1ml，分置8-12ml量瓶中，揮干溶劑，放冷，精密加入1-3∶6-9的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液2.0ml，搖勻，置50-70℃水浴中加熱10-20分鐘，取出，置冰水浴中冷卻，加冰醋酸至刻度，搖勻，以相應試劑同法操作為空白，照分光光度法，立即在545nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇振搖使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液0.4ml，置10ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干溶劑”起，依法測定，計算，即得；被檢測參附注射劑每ml含人參總皂苷以人參皂苷Re計，不得少于2.4mg；烏頭類生物堿，對照品溶液的制備，精密稱取烏頭堿對照品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.8、0.8-1.2、1.2-1.6、1.6-2.0ml，分別置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L鹽酸溶液1.6-1.8、1.2-1.6、0.8-1.2、0.4-0.8、0.2-0.4、0.1-0.2ml，各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液8-12ml，溴甲酚綠液1-3ml，氯仿8-12ml，振搖2-4分鐘，靜置，分取氯仿液，用氯仿浸泡處理過的脫脂棉濾過，取續濾液，以0.01mol/L鹽酸溶液1-3.0ml同法操作為空白，照分光光度法，在416nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射劑內容物0.15g，精密稱定，加氯化鈉飽和溶液15ml溶解，用氨試液調節pH值10～11，用氯仿提取3-5次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并轉入25ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照標準曲線制備項下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測定，計算，即得；制備好的參附注射制劑每ml含烏頭類生物堿以烏頭堿計，應為0.3～0.6mg。
4.如權利要求3所述的的質量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定方法選自如下方法中的一種或幾種人參總皂苷，對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，揮干溶劑，放冷，精密加入2∶8的5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸的混合溶液2.0ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，置冰水浴中冷卻，加冰醋酸至刻度，搖勻，以相應試劑同法操作為空白，照分光光度法，立即在545nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇振搖使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液0.4ml，置10ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干溶劑”起，依法測定，計算，即得；被檢測參附注射劑每ml含人參總皂苷以人參皂苷Re計，不得少于2.4mg；烏頭類生物堿，對照品溶液的制備精密稱取烏頭堿對照品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分別置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L鹽酸溶液1.8、1.6、1.2、0.8、0.4、0.2ml，各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml，溴甲酚綠液2ml，氯仿10ml，振搖3分鐘，靜置，分取氯仿液，用氯仿浸泡處理過的脫脂棉濾過，取續濾液，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照分光光度法，在416nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.15g，精密稱定，加氯化鈉飽和溶液15ml溶解，用氨試液調節pH值10～11，用氯仿提取4次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并轉入25ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照標準曲線制備項下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測定，計算，即得；制備好的參附注射劑每ml含烏頭類生物堿以烏頭堿計，應為0.3～0.6mg。
5.一種參附注射制劑的質量控制方法，其特征在于該方法包括下述鑒別和含量測定取制備好的參附注射制劑5ml，用氨試液調PH至8-11；用氯仿提取2-3次，每次用氯仿10-20ml，揮干氯仿；用甲醇溶解成1ml為供試品溶液；另稱取對照品烏頭堿，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl和對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G板上，以11-13∶6-8∶1-3的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇為展開劑，用氨試液飽和8-15分鐘，展開10-14cm，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液，稍后，再噴以5％亞硝酸鈉乙醇液；供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上出現的斑點應小于對照品或者不出現斑點；人參總皂苷，對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.08-0.1，0.1-0.3，0.3-0.5，0.5-0.7，0.7-0.9，0.9-1.1ml，分置8-12ml量瓶中，揮干溶劑，放冷，精密加入1-3∶6-9的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液2.0ml，搖勻，置50-70℃水浴中加熱10-20分鐘，取出，置冰水浴中冷卻，加冰醋酸至刻度，搖勻，以相應試劑同法操作為空白，照分光光度法，立即在545nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇振搖使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液0.4ml，置10ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干溶劑”起，依法測定，計算，即得；被檢測參附注射劑每ml含人參總皂苷以人參皂苷Re計，不得少于2.4mg；烏頭類生物堿，對照品溶液的制備，精密稱取烏頭堿對照品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.8、0.8-1.2、1.2-1.6、1.6-2.0ml，分別置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L鹽酸溶液1.6-1.8、1.2-1.6、0.8-1.2、0.4-0.8、0.2-0.4、0.1-0.2ml，各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液8-12ml，溴甲酚綠液1-3ml，氯仿8-12ml，振搖2-4分鐘，靜置，分取氯仿液，用氯仿浸泡處理過的脫脂棉濾過，取續濾液，以0.01mol/L鹽酸溶液1-3.0ml同法操作為空白，照分光光度法，在416nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射劑內容物0.15g，精密稱定，加氯化鈉飽和溶液15ml溶解，用氨試液調節pH值10～11，用氯仿提取3-5次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并轉入25ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照標準曲線制備項下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測定，計算，即得；制備好的參附注射制劑每ml含烏頭類生物堿以烏頭堿計，應為0.3～0.6mg。
6.如權利要求5所述的質量控制方法，其特征在于該方法包括下述鑒別和含量測定烏頭堿限量取制備好的參附注射制劑5ml，用氨試液調PH至10左右；用氯仿提取3次，用氯仿20、20、10ml，揮干氯仿；用甲醇溶解成1ml為供試品溶溶液；另稱取對照品烏頭堿，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl和對照品溶液5μ1，分別點于同一硅膠G板上，以12.8∶7.2∶2的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇為展開劑，用氨試液飽和10分鐘，展開12cm，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液，稍后，再噴以5％亞硝酸鈉乙醇液；供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上出現的斑點應小于對照品或者不出現斑點；含量測定人參總皂苷，對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，揮干溶劑，放冷，精密加入2∶8的5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸的混合溶液2.0ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，置冰水浴中冷卻，加冰醋酸至刻度，搖勻，以相應試劑同法操作為空白，照分光光度法，立即在545nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇振搖使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液0.4ml，置10ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干溶劑”起，依法測定，計算，即得；被檢測參附注射劑每ml含人參總皂苷以人參皂苷Re計，不得少于2.4mg；烏頭類生物堿，對照品溶液的制備 精密稱取烏頭堿對照品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分別置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L鹽酸溶液1.8、1.6、1.2、0.8、0.4、0.2ml，各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml，溴甲酚綠液2ml，氯仿10ml，振搖3分鐘，靜置，分取氯仿液，用氯仿浸泡處理過的脫脂棉濾過，取續濾液，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照分光光度法，在416nm波長處測定吸收度；以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，取裝量差異項下的制備好的參附注射制劑內容物0.15g，精密稱定，加氯化鈉飽和溶液15ml溶解，用氨試液調節pH值10～11，用氯仿提取4次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并轉入25ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L鹽酸溶液2.0ml同法操作為空白，照標準曲線制備項下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測定，計算，即得；制備好的參附注射劑每ml含烏頭類生物堿以烏頭堿計，應為0.3～0.6mg。
7.如權利要求3、4、5或6所述的質量控制方法，其特征在于該方法中的醋酸-醋酸鈉緩沖液是取0.1-0.3mol/L醋酸溶液，用0.1-0.3mol/L醋酸鈉溶液調pH值至2-4制成的；溴甲酚綠液是取溴甲酚綠，加0.03-0.06mol/L氫氧化鈉液研磨使溶解，加水至溴甲酚綠50mg/100ml，用氯仿提取2-4次，每次20-40ml，棄去氯仿液制成的。
8.如權利要求7所述的質量控制方法，其特征在于該方法中的醋酸-醋酸鈉緩沖液是取0.2mol/L醋酸溶液，用0.2mol/L醋酸鈉溶液調pH值至3.1制成的；溴甲酚綠液是取溴甲酚綠50mg，加0.05mol/L氫氧化鈉液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿提取3次，每次30ml，棄去氯仿液制成的。
全文摘要
本發明公開了一種參附注射制劑的質量控制方法，該質量控制方法包括鑒別和/或含量測定，其中鑒別指烏頭類堿的鑒別，含量測定包括人參皂苷Re和/或烏頭類生物堿的含量測定。本發明質量控制方法中烏頭堿的限量以標準品作為對照，直接比較斑點的大小，使操作更為簡便、直觀；對人參、附子均作含量測定，使質量更加穩定，檢測更為科學。
文檔編號G01N33/15GK1501079SQ02149369
公開日2004年6月2日 申請日期2002年11月13日 優先權日2002年11月13日
發明者曾曉春 申請人:雅安三九藥業有限公司