一種抗體芯片、其制備技術及其檢測方法

專利名稱：一種抗體芯片、其制備技術及其檢測方法
技術領域：
本發明涉及生物醫學研究領域，進一步涉及一種抗體芯片、其制備技術及其檢測方法。
疾病的診斷和治療均與組織細胞在不同生長時期所產生的各種基因和蛋白質分子的結構和數量變化有著密切的聯系，只有當這些分子變化具有普遍性時才具有臨床價值。然而目前的各種臨床檢驗方法只能進行單個的、散在的、偶然的、孤立的試驗研究。若要對一個分子標志進行正確的評價則需要同時對數百例甚至數千例不同病人以及不同發展時期的、不同病理類型的、甚至包括對不同治療方法的各種體液標本進行檢測才能得出正確的結論，該過程十分漫長和復雜，且則需花費大量的人力、物力和財力。
為實現上述目的，本發明的技術解決方案是一種抗體芯片，其特殊之處在于在固相載體的點樣面積上至少點有一個抗體點陣，每一個抗體點陣的點樣數目從幾個到數千個不等，每一個抗體點一種抗體芯片，其特殊之處在于在固相載體的點樣面積上至少點有一個抗體點陣，每一個抗體點陣的點樣數目從幾個到數千個不等，每一個抗體點陣可以包含一種或一種以上的特異性抗體，可用于檢測各種體液中一種或兩種以上以上相關的抗原分子的含量或水平的變化。
上述固相載體的點樣面積上至少點有兩個以上的抗體點陣。
上述固相載體是25mm×75mm×1mm的載玻片、5mm～55mm×5mm～75mm的硝酸纖維膜或尼龍膜。其上點樣面積為3mm～30mm×3mm～50mm。
上述單個抗體點陣的數目為6個～5100個樣點。
用于點樣的抗體濃度為0.01μg/ml～1mg/ml，點樣直徑為0.01mm～1.5mm，相鄰點的點樣間距為0.01mm～2.0mm，每個點的點樣量為1nl～500nl，每一種抗體重復點樣3點到6點。
用于點樣的抗體可以是單克隆抗體，也可以是多克隆抗體，可以是針對一種標志物的抗體，也可以是針對多種標志物的多種抗體，可以是針對一種疾病的多種抗體，也可以是針對多種疾病的多種抗體。
一種抗體芯片的制備方法，其特殊之處在于依序包括下述步驟，①、按照每種疾病標志物在體液中的不同濃度所表達的特定的臨床信息，將標志物相應的抗體配制成合適的濃度，濃度范圍在0.01μg/ml～1mg/ml為宜；②、將已知的各種不同的抗體樣品按不同的臨床需要和科研需要進行特定的設計、組合、排序，然后用機器人點樣系統將這些疾病標志物點在一張固相載體上，每種已知的抗體均重復點3點～6點。制成點樣數目、點樣種類、點陣大小、點陣多少均不同的系列化的各種各樣的不同用途的抗體芯片。
制備抗體芯片所需要的材料有①各種抗原物質包括各種惡性腫瘤、各種良性腫瘤、各種癌前病變、各種炎癥性疾病、各種自身免疫性疾病、各種其他疾病、各種正常組織、各種胚胎組織、各種血液和造血組織、各種胸水、腹水、尿液、痰液、滲出液中捕獲的具有重要研究價值的腫瘤標志物、細胞因子、受體、酶、可溶性膜表面標記物、各種核酸、基因(DNA和RNA)和基因片斷、各種蛋白質、多肽、多糖、激素、各種微生物(包括細菌、病毒、真菌及其他微生物和寄生蟲)的各種抗原以及其他生物大分子或其他生物活性物質等等。②針對上述各種抗原性物質所制備的各種各樣的單克隆或多克隆抗體包括來源于鼠、兔、羊、牛、馬或其他動物。③點樣系統包括點樣用儀器和設備及其相關耗材如點樣板等等。④固相載體包括特殊處理的載玻片、硝酸纖維膜、尼龍膜等等。⑤其他包括硝酸纖維膜、尼龍膜等的支撐材料以及抗體芯片的相關包裝材料等等。
一種抗體芯片的應用方法，其特殊之處在于依序包括下述步驟，①在抗體芯片上加足量待測血清或其他體液，反應后洗滌；②加抗體芯片上所排列的各種抗體的混合性抗體，反應后洗滌；③加化學發光物質或熒光物質或金、銀或其他金屬或放射性同位素標記的異種單克隆抗抗體，反應后洗滌；④用普通光學顯微鏡或特殊的顯色捕獲分析系統進行自動分析，也可直接用化學發光捕獲分析系統、熒光捕獲分析系統、金屬顯色灰度捕獲分析系統以及放射線捕獲分析系統進行自動閱讀和分析。⑤根據光信號、金屬顯色灰度或放射線強度的不同和變化，來反映待測樣本中各種抗原性物質的含量。
上述應用方法的第①步中，抗體芯片上加足量待測血清或其他體液，若37℃反應則需10分鐘～2小時，若4℃反應則需保濕過夜，若室溫反應則需保濕30分鐘～3小時后洗滌；第②步中加抗體芯片上所排列的各種抗體的混合性抗體，若4℃反應則需保濕過夜，室溫反應則需保濕30分鐘～3小時，若37℃反應則需保濕10分鐘～2小時后洗滌；第③步加化學發光物質或熒光物質或金、銀或其他金屬或放射性同位素標記的異種單克隆抗體，若4℃反應則需保濕過夜，若室溫反應則需保濕30分鐘～3小時，若37℃保濕10分鐘～2小時后洗滌。
也可在第②步中直接加與抗體芯片上所排列抗體的特異性完全相同的用化學發光物質或熒光物質或金、銀或其他金屬或放射性同位素標記的異種單克隆抗體，4℃保濕過夜或室溫保濕30分鐘～3小時或37℃保濕10分鐘～2小時后洗滌。即在第①步完成后，將第②步中加的抗體芯片上所排列的各種抗體的混合性抗體和第③步中所加的與抗體芯片上所排列抗體的特異性完全相同的、用化學發光物質或熒光物質或金、銀或其他金屬或放射性同位素標記的異種單克隆抗體一起加入，然后4℃保濕過夜或室溫保濕30分鐘～3小時或37℃保濕10分鐘～2小時后洗滌。將上述方案中第②步與第③步合為一步。
與現有技術相比，本發明的優點是為生物醫學研究目的提供了一種高容量，大樣本的可溶性生物活性物質的檢測方法，可同時對大量特定的抗原性物質進行含量測定和相關性分析；也可用于大量基因組表達產物的分析、定性和定量研究。可同時檢測體液中多種相關的各種可溶性抗原的水平和含量，再通過其水平或含量的不同或變化來反映體內某種疾病的有無、發展、變化、轉歸、預后、機體的免疫狀態、以及某種疾病與多種相關的可溶性抗原的相關關系等。
本發明中抗體芯片的抗體點陣的排列順序是預先設定的，并可進行多種組合排列，每張抗體芯片上可放置一個或數十個抗體陣列，進行多種不同的生物學分析，同時比較和分析數十個乃至數千個同一類型或不同類型的不同個體的相關分子的異同、變化及其相互關系和臨床意義；1)單一疾病抗體芯片(1)單一腫瘤性疾病抗體芯片①肺癌標志物抗體芯片將針對所有肺癌標志物相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含有54個點的抗體芯片，其中每3個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗MDR1-mRNA、mRP-mRNA、MDR1產物、P-gp、P53蛋白、nm23蛋白、CD44v6、神經元特異性烯醇化酶、細胞角蛋白19可溶性片段、組織多肽抗原、細胞角蛋白18可溶性片段M3抗原決定簇、癌胚抗原、表皮生長因子、表皮生長因子受體、肌酸激酶同功酶、總唾液蛋白、降鈣素、ACTH抗體。
應用時，首先在抗體芯片上加50μl待測血清，37℃反應1小時，待反應完全后用PBS洗滌2次，加入與抗體芯片上所排列的抗體特異性相同的化學發光物質標記的鼠單克隆抗體50μl，37℃保濕1小時后使用PBS洗滌2次，用普通光學顯微鏡進行自動分析，根據光信號的強弱計算出待測樣品中相關的各種抗原的含量，②肝癌標志物抗體芯片將針對各種肝癌標志物相應的羊多克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含84個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗甲胎蛋白、γ-谷胺酰轉移酶、異常凝血酶原、α-L-巖澡糖苷酶、堿性磷酸酶、AKP、醛縮酶、β2-微球蛋白、5｀-核苷酸酶、丙酮酸激酶、胎盤型谷胱苷肽S轉移酶、α1-抗胰蛋白酶、鐵蛋白抗體。
應用時，加待測血清100μl，37℃保濕30分鐘后使用PBS洗滌2次，加與抗體芯片上所排列的抗體特異性相同的鼠單克隆抗體，37℃保濕30分鐘后使用PBS洗滌2次，加熒光物質標記的羊抗鼠多克隆抗體100μl，37℃保濕30分鐘后使用PBS洗滌2次，用特殊的顯色捕獲分析系統進行自動分析，根據熒光信號的強弱計算出待測樣品中相關的各種抗原的含量。
③胃癌標志物抗體芯片將不同胃癌標志物相應的鼠的單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含72個點的抗體芯片，其中每6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗MUC2mRNA、胃蛋白酶原、延酸化Tn抗原、甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶、巨分子肌酸激酶、胃泌素、組織多肽抗原、AFU、CEA、CA50、CA19-9、CA72-4抗體。具體實驗方法可參照肺癌或肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
④乳腺癌標志物抗體芯片即將針對各種乳腺癌標志物的相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含108個點的抗體芯片，其中每6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗CD15mRNA、P16蛋白、nm23H1mRNA、nm23-H1、MUC1、CerbB-2、組織蛋白酶D、bc1-2、表皮生長因子、CA15-3、CEA、鐵蛋白、乳清蛋白、唾液酸轉移酶、CD44蛋白、P53蛋白、CA549、HCG抗體等。具體實驗方法可參照肺癌或肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
⑤卵巢癌標志物抗體芯片即將針對各種卵巢癌標志物的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含48個點的抗體芯片，其中每6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗CA125、CEA、卵巢囊腺癌抗原、卵巢癌抗原、NB/70K、HCG、SIEX、CA19-9抗體。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
⑥白血病標志物抗體芯片即將針對各種白血病標志物的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含48個點的抗體芯片，其中每3個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗CD44，HLA-DR，CD37，CD19，CD20，CD5，CD52，CD45RA，CD22，CD24，CD45，CD23，CD21，CD71，CD11c和CD9的相應抗體等。具體實驗方法可參照肺癌抗體芯片的相關內容。
(2)單一炎癥性疾病抗體芯片①潰瘍性結腸炎的特異性抗原的抗體芯片即將針對各種潰瘍性結腸炎的特異性抗原的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含54個點的抗體芯片，其中每6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗HLA-DR2，Nd，Inos，PANCA，PAF，12-HETE，TGFβ，氧自由基，IL-1的相應抗體。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
②克隆病性結腸炎的特異性抗原的抗體芯片即將針對各種克隆病性結腸炎的特異性抗原的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含42個點的抗體芯片，其中每6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗HLA-DR1，PANCA，PAF，12-HETE，TGFβ，氧自由基，IL-1的相應抗體等。具體實驗方法可參照肺癌抗體芯片的相關內容。
(3)單一自身免疫性疾病抗體芯片①類風濕性關節炎特異性抗原的抗體芯片即將針對各種類風濕性關節炎的特異性抗原的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含66個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗類風濕因子、IL-12、TNF、粘附分子、熱休克蛋白、IL-4、轉化生長因子(TGF)-□、可溶性白細胞介素2受體(sIL-2R)、可溶性Fas(sFas)、血管細胞粘附分子1(vascular cell adhesionmolecules 1，VCAM-1)、可溶性E-選擇素的相應抗體等。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
②銀屑病特異性抗原的抗體芯片即將針對各種銀屑病特異性抗原的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含27個點的抗體芯片，其中每3個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗銀屑病蛋白、CD34、酪氨酸蛋白激酶(TPK)、降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)、P物質(substanceP，SP)、神經肽Y(neuropeptide Y)、血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)、神經激肽、生長抑素的相應抗體等。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
(4)單一其他疾病抗體芯片即將針對某種疾病各種特異性抗原的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。然后按照相應的實驗方法進行判定。
2)多種疾病抗體芯片(1)多種腫瘤性疾病抗體芯片將針對各種腫瘤標志物的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。再參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容進行相關的實驗。
(2)多種炎癥性疾病標志物抗體芯片即將針對各種相關炎癥性疾病標志物的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。再參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容進行相關的實驗。
(3)多種自身免疫性疾病相關標志物的抗體芯片即將針對各種自身免疫性疾病相關標志物的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。再參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容進行相關的實驗。
4)多類型疾病抗體芯片即將針對各種不同類型疾病如乙型肝炎、肝硬化和肝癌等疾病的標志物的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含90個點的抗體芯片，其中每6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗AFP，AFU，LDL，VLDL，GGT，可溶性IL-6受體，可溶性gp130c-fos基因表達產物，CD54，血漿內皮素-1，HA，LN，HPCIII、CIV，轉化生長因子β1，血清轉化生長因子α抗體等。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
5)單一組織類型抗體芯片①腺癌標志物抗體芯片即根據研究需要可將針對腺癌的各種標志物的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含30個點的抗體芯片，其中每6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗CK/AE1，CK10，CK18，CK8，CK19抗體等。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
②鱗癌標志物抗體芯片即根據研究需要可將針對鱗癌各種標志物的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含24個點的抗體芯片，其中每6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗CK/AE3，CK10，CK13，CK14抗體等。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
6)多種組織類型抗體芯片，如腺癌和鱗癌標志物抗體芯片，即將針對腺癌和鱗癌的所有標志物的鼠單克隆抗體按照上述的腺癌標志物抗體芯片和鱗癌標志物抗體芯片的陣列組合排列在一張抗體芯片上。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
7)不同性質抗原的抗體芯片(1)腫瘤胚胎性抗原抗體芯片即將針對各種腫瘤性疾病的所有胚胎性抗原的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含42個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗腫瘤胚胎型抗原甲胎蛋白抗體、β-癌胚抗原抗體、癌胚鐵蛋白抗體、癌胚抗原抗體、胰癌胚抗原抗體、鱗狀細胞抗原抗體、組織多肽抗原抗體。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
(2)糖類抗原標志物抗體芯片即將針對各種腫瘤性疾病的所有糖類抗原的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。其中又分為三種a.糖類高分子粘蛋白抗原腫瘤標志物抗體芯片；b.血型類抗原腫瘤標志物抗體芯片；c.混合糖類抗原標志物抗體芯片。
①糖類高分子粘蛋白抗原腫瘤標志物抗體芯片即將針對不同腫瘤的糖類高分子粘蛋白抗原標志物相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含42個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗CA125抗體、CA15-3抗體、CA549抗體、CA27.29抗體、類粘蛋白抗體、腫瘤相關抗原抗體、DU-PAN-2抗體。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
②血型類抗原腫瘤標志物抗體芯片即將針對不同腫瘤的血型類抗原標志物相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含36個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗CA19-9抗體、CA19-5抗體、CA50抗體、CA72-4抗體、CA242抗體、鱗狀細胞抗原抗體。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
③混合糖類抗原標志物抗體芯片即將針對不同腫瘤的糖類抗原標志物相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含78個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含的抗體為抗CA125抗體、CA15-3抗體、CA549抗體、CA27.29抗體、類粘蛋白抗體、腫瘤相關抗原抗體、DU-PAN-2抗體、CA19-9抗體、CA19-5抗體、CA50抗體、CA72-4抗體、CA242抗體、鱗狀細胞抗原抗體。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
(3)酶類標志物抗體芯片即將針對各種酶類標志物相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含72個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗醛縮酶抗體、堿性磷酸酶抗體、淀粉酶抗體、谷胱甘肽轉移酶抗體、肌酸激酶抗體、γ-谷氨酰轉移酶抗體、乳酸脫氫酶抗體、神經元特異性烯醇化酶抗體、5-核苷酸酶抗體、α-L巖澡糖苷酶抗體、核糖核酸酶抗體、前列腺特異性抗原抗體等。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
(4)蛋白或多肽類激素抗體芯片即將針對各種蛋白或多肽類激素相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含60個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗抗利尿激素抗體、降鈣素抗體、生長激素抗體、人絨毛膜促性腺激素抗體、人胎盤催乳素抗體、甲狀旁腺素抗體、催乳素抗體、胰高糖素抗體、轉化生長因子抗體等。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
(5)其他蛋白質類標志物抗體芯片即將針對各種其他蛋白質類標志物相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含42個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含的抗體為抗β2-微球蛋白抗體、C多肽抗體、鐵蛋白抗體、本周蛋白抗體、免疫球蛋白抗體、銅藍蛋白抗體、甲狀腺球蛋白抗體等。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
8)細胞因子抗體芯片(1)白細胞介素抗體芯片即將針對各種白細胞介素的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含120個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20等抗體。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
(2)集落刺激因子抗體芯片即將針對各種集落刺激因子相應的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含48個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗粒細胞集落刺激因子抗體、巨噬細胞集落刺激因子抗體、粒細胞和巨噬細胞擊落刺激因子抗體、多集落刺激因子抗體、紅細胞生成素抗體、干細胞因子抗體、白血病抑制因子抗體、LIF抗體等。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
(3)干擾素、腫瘤壞死因子抗體芯片即將針對各種干擾素抗體、腫瘤壞死因子的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含30個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗IFN-□抗體、IFN-□抗體、IFN-□抗體、TNF-□抗體和TNF-□抗體等。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
(4)淋巴因子抗體芯片即將針對各種淋巴因子的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含84個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗淋巴細胞產生的各種細胞因子抗體，有抗IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13等以及抗TNF-□和IFN-□抗體等。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
(5)各種細胞因子抗體組合芯片即將各種細胞因子相應的鼠單克隆抗體按特定組合排列在一張抗體芯片上。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
9)可溶性細胞膜分子、受體抗體芯片(1)促有絲分裂原受體抗體芯片即將針對各種促有絲分裂原受體的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含30個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗刀豆素A、植物血凝素A和E、美洲商陸絲裂原、大豆凝集素(110)、大豆凝集素(120)等抗體。實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片以及技術方案中相關內容。具體實驗方法可參照肺癌抗體芯片的相關內容。
(2)IgFc受體抗體芯片即將針對各種IgFc受體的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含36個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗Fe□RI抗體、Fe□RII抗體、Fe□RIII抗體、Fc□R抗體、Fc□RI抗體、Fc□RII抗體等。具體實驗方法可參照肺癌抗體芯片的相關內容。
(3)細胞因子受體抗體芯片即將針對各種細胞因子受體的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含72個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗IL-1R抗體、IL-2R抗體、IL-3R抗體、IL-4R抗體、IL-6R抗體、IL-7R抗體、IL-8R抗體、IL-9R抗體、IL-12R抗體、TNF-□R、G-CSFR和TGF-□r抗體等。具體實驗方法可參照肺癌抗體芯片的相關內容。
(4)B細胞膜表面受體抗體芯片即將針對各種B細胞膜表面受體的鼠單克隆抗體排列在一張抗體芯片上。如含90個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗mIgM抗體、mIgD抗體、mIgG抗體、mIgA抗體、mIgE抗體、CD10抗體、CD19抗體、CD20抗體、CD21抗體、CD23抗體、CD80抗體、PC抗體、補體受體抗體、EB病毒受體抗體、致有絲分裂原受體抗體等。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
(5)各種細胞膜分子和受體的組合抗體芯片即將針對各種細胞膜分子和受體的鼠單克隆抗體按設計組合排列在一張抗體芯片上。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
10)各種病原微生物特異性抗原的抗體芯片(1)各種細菌特異性抗原的抗體芯片即將針對各種細細菌特異性抗原的鼠單克隆抗體按設計組合排列在一張抗體芯片上。如含138個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗內毒素(LPS)、金黃色葡萄球菌腸毒素A和B、A群鏈球菌M蛋白、大腸桿菌耐熱性腸毒素II、大腸桿菌細胞致死腫脹毒素、腸凝聚性大腸桿菌毒素、細菌蛋白毒素、沙門氏菌腸毒素、白喉毒素、綠膿桿菌外毒素A、破傷風毒素、魏氏梭菌腸毒素、敗血梭菌α-毒素、百日咳毒素、空腸彎曲菌細胞毒素、肉毒E型毒素、李斯特菌溶血素、幽門螺桿菌細胞毒素、Q熱立克次體內毒素、肺炎衣原體內毒素、串珠鐮刀毒素、腐馬素抗體等。具體實驗方法可參照肝癌標志物抗體芯片的相關內容。
(2)各種病毒特異性抗原的抗體芯片將針對各種病毒特異性抗原的鼠單克隆抗體按設計組合排列在一張抗體芯片上。如含108個點的抗體芯片，其中6個點為同一種抗體，所含有的抗體為抗LCM病毒的GP蛋白I型和II型、LCM病毒的NP蛋白、HSV-2病毒的gB蛋白、腺病毒的BIA蛋白、流感病毒的HA蛋白和NP蛋白、HIV-1病毒的No蛋白、HIV-2病毒的P2蛋白、EB病毒的EBNA蛋白、HBV病毒的HBC蛋白、乙型肝炎的HBsAg、HBeAg、anti-HBsAg、anti-HBeAg、anti-HBcAg、豆病毒p73k外膜蛋白、核蛋白4a和4b抗體等。具體實驗方法可參照肺癌抗體芯片的相關內容。
(3)各種病原微生物特異性抗原的抗體組合芯片將針對各種病原微生物特異性抗原的鼠單克隆抗體按需要設計，組合排列在一張抗體芯片上。具體實驗方法可參照肺癌標志物抗體芯片的相關內容。
本發明的作用原理是高效價單克隆或多克隆的針對各種疾病標志物的特異性抗體被固定于固相載體上，芯片上的所有抗體即可以是購買的也可以是自己制備的，即可以是單克隆抗體也可以是多克隆抗體。按照每種抗原或抗體物質在體液中的不同濃度所表達的特定的臨床信息，將相應的特異性抗體配制成合適的濃度，然后將已知的各種不同的抗體或抗原樣品按不同的臨床需要和科研需要進行特定的設計、組合、排列，然后用機器人點樣系統將這些抗體或抗原點在一張固相載體如玻片、硝酸纖維膜或尼龍膜上，制成點樣數目、點樣種類、點陣大小、點陣多少均不同的系列化的各種各樣的不同用途的抗體或抗原芯片。以捕獲待測標本中的與其可起結合反應的特異性抗原或抗體，再用各種化學發光物質、熒光物質、金、銀或其他金屬、放射性同位素標記的具有相同特異性的抗體進行結合，也可以先用異種即不同種屬的特異性抗體進行結合反應，再用各種化學發光物質、熒光物質、金、銀或其他金屬、放射性同位素標記的抗此種抗體的抗抗體進行結合，然后用普通光學顯微鏡或特殊的顯色捕獲分析系統進行自動分析，從而得出結論；也可直接用化學發光捕獲分析系統、熒光捕獲分析系統、金屬顯色灰度捕獲分析系統以及放射線捕獲分析系統進行自動閱讀和分析并得出結論。
結果的判定可根據抗體相應的特異性抗原含量的不同和變化，輔助判斷體內特定疾病的有無，組織類型、病情的發展、變化、轉歸、預后、治療方式的選擇及治療效果的判定等。
權利要求
1.一種抗體芯片，其特征在于在固相載體的點樣面積上至少點有一個抗體點陣，每一個抗體點陣的點樣數目從幾個到數千個不等，每一個抗體點陣可以包含一種或兩種以上的特異性抗體，可用于檢測各種體液中一種或兩種以上以上相關的抗原分子的含量或水平的變化。
2.如權利要求1所述的一種抗體芯片，其特征在于所述固相載體的點樣面積上至少點有兩個以上的抗體點陣。
3.如權利要求1或2所述的一種抗體芯片，其特征在于所述固相載體是25mm×75mm×1mm的載玻片、5mm～55mm×5mm～75mm的硝酸纖維膜或尼龍膜。其上點樣面積為3mm～30mm×3mm～50mm。
4.如權利要求3所述的一種抗體芯片，其特征在于一個抗體點陣的數目為6個～5100個樣點。
5.如權利要求4所述的一種抗體芯片，其特征在于用于點樣的抗體濃度為0.01μg/ml～1mg/ml，點樣直徑為0.01mm～1.5mm，相鄰點的點樣間距為0.01mm～2.0mm，每個點的點樣量為1nl～500nl，每一種抗體重復點樣3點到6點。
6.如權利要求5所述的一種抗體芯片的制備方法，其特征在于用于點樣的抗體是單克隆抗體、多克隆抗體；一種標志物的抗體、多種標志物的多種抗體；一種疾病的多種抗體、多種疾病的多種抗體。
7.如權利要求1所述的一種抗體芯片的制備方法，其特征在于依序包括下述步驟，①、按照每種疾病標志物在體液中的不同濃度所表達的特定的臨床信息，將標志物相應的抗體配制成合適的濃度，濃度范圍在0.01μg/ml～1mg/ml為宜；②、將已知的各種不同的抗體樣品按不同的臨床需要和科研需要進行特定的設計、組合、排序，然后用機器人點樣系統將這些疾病標志物點在一張固相載體上，每種已知的抗體均重復點3點～6點。制成點樣數目、點樣種類、點陣大小、點陣多少均不同的系列化的各種各樣的不同用途的抗體芯片。
8.如權利要求1所述的一種抗體芯片的應用方法，其特征在于依序包括下述步驟，①在抗體芯片上加足量待測血清或其他體液，反應后洗滌；②加抗體芯片上所排列的各種抗體的混合性抗體，反應后洗滌；③加化學發光物質或熒光物質或金、銀或其他金屬或放射性同位素標記的異種單克隆抗抗體，反應后洗滌；④用普通光學顯微鏡或特殊的顯色捕獲分析系統進行自動分析，也可直接用化學發光捕獲分析系統、熒光捕獲分析系統、金屬顯色灰度捕獲分析系統以及放射線捕獲分析系統進行自動閱讀和分析。⑤根據光信號、金屬顯色灰度或放射線強度的不同和變化，來反映待測樣本中各種抗原性物質的含量。
9.如權利要求8所述的一種抗體芯片的應用方法，其特征在于第①步中，抗體芯片上加足量待測血清或其他體液，37℃反應10分鐘～2小時或4℃反應保濕過夜或室溫反應保濕30分鐘～3小時后洗滌；第②步中加抗體芯片上所排列的各種抗體的混合性抗體，若4℃反應保濕過夜或室溫反應保濕30分鐘～3小時或37℃反應保濕10分鐘～2小時后洗滌；第③步加化學發光物質或熒光物質或金、銀或其他金屬或放射性同位素標記的異種單克隆抗體，4℃保濕過夜或室溫保濕30分鐘～3小時或37℃保濕10分鐘～2小時后洗滌。
全文摘要
本發明涉及生物醫學研究領域,進一步涉及一種用于檢測體液中各種分子含量的抗體芯片、抗體芯片的制作方法及其應用。針對現有技術存在的不能同時提供、同時比較和分析數十個乃至數千個同一類型或不同類型的不同個體的相關分子的異同、變化及其相互關系的缺點。一種抗體芯片,其特征在于:在固相載體點樣面積上至少點有一個或兩個以上的抗體點陣,每一個抗體點陣的點樣數目是6個～5100個樣點,每一個抗體點陣可以包含一種或兩種以上的特異性抗體,可用于檢測各種體液中一種或一種以上的相關的抗原分子的含量或水平的變化。
文檔編號G01N33/577GK1374525SQ01145240
公開日2002年10月16日 申請日期2001年12月31日 優先權日2001年12月31日
發明者李軍, 步雪, 王偉華 申請人:陜西超英生物醫學研究開發有限公司