專利名稱：淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備，屬于酶學領域。
近年來，酶學在臨床診斷與治療中的應用發展非常迅速，現已分別發展為醫學中的兩個新領域，即診斷酶學和治療酶學。目前已有上百種酶試驗可用于臨床診斷。臨床酶學的這一發展，部分是由于測定技術的發展，使許多酶的測定已日益精確和簡便，可用于常規測定。部分是由于認識到某些疾病發展過程中酶活力必然發生改變這一客觀事實，特別是在疾病的早期，用X光片、CT還未能發現病灶時，而體內的酶活性已開始發生變化。如果能定期查體，可做到對疾病的早期發現。值得一提的是，目前臨床上診斷酶學的應用多數是對酶的總活性的測定，并且市場上已有相應試劑盒銷售，其缺點是缺乏器官特異性。目前有關酶活性測定的試劑盒約有20～30種，同工酶檢測試劑盒約有3～5種，但多數用的是化學抑制法或免疫抑制法。而同工酶是指酶蛋白結構不同而具有相同的催化特性的一類酶，不同的同工酶來自不同的組織和細胞。當某一組織或器官發生病變時，由于組織受損或細胞膜通透性的變化，引起細胞內酶大量釋入血液而引起血清酶活性的改變。通過同工酶的檢測可確定患病部位，從而提高酶學診斷的特異性和敏感性，還可判斷預后。目前由于自行配制酶顯示液，因所用試劑品種繁多，規格不一，致使酶顯示結果不穩定，結果判定不統一，且同工酶檢測操作較繁瑣，費時等等，特別是大型生化分析儀的應用，使臨床生化檢測的操作更簡便，省時、省力，但其是對總酶活性的測定，缺乏組織特異性，相比較，同工酶的檢測使病變早期定性和定位就精確的多了。
本發明的目的在于提供一種質量優良、性能穩定、重復性能好，同時大大簡化了檢測的操作過程且使用該試劑盒可使同工酶的檢測操作規范化，從而使酶活性的檢測及質量控制達到統一標準的淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備。
本發明的目的由如下技術方案實施做醋纖膜電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.02～0.2mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)、配制濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液，分裝安瓿A；(3)、將碘液做為顯色液，分裝安瓿C；(4)內裝冰乙酸做為固定液，分裝安瓿D；(5)配制底物顯色板將瓊脂糖或瓊脂和做為底物的淀粉、緩沖液分裝安瓿B，所述緩沖液的濃度為0.05～0.2mol/L，按重量百分比，其中所述淀粉和瓊脂糖或瓊脂分別為9.1％～70.6％，29.4％～91.0％，加入80～120ml緩沖液，加熱溶解，分裝安瓿B。所述安瓿B內的緩沖液為磷酸緩沖液，也可用Tris系列的緩沖液或順丁烯二酸-NaoH緩沖液。
做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)配制濃度為0.02～0.2mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)將碘液做為顯色液，分裝安瓿C；(3)內裝冰乙酸做為固定液，分裝安瓿D；(4)將淀粉、瓊脂糖或瓊脂按重量百分比，分別為9.1％～70.6％∶29.4％～91.0％，再加入80～120ml濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜的緩沖液中，加熱溶解，制備為安瓿A。所述安瓿A中還可加入蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮，按重量百分比，蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、瓊脂糖或瓊脂分別為1.3％～31.6％，6.0％～31.2％，41.7％～89.5％，1.2％～18.7％，加入80～120ml濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜的緩沖液中，加熱溶解，趁熱分裝為安瓿A。所述電極液可以用巴比妥緩沖液，也可以用巴比妥-HCL緩沖液，也可用硼酸-NaoH緩沖液或陰極槽電極液用巴比妥緩沖液，陽極槽電極液用Tris-EDTA-硼酸緩沖液。所述泡醋纖膜緩沖液可以為二氨基二甲基1.3丙二醇-HCL緩沖液，也可以為三羥甲基氨基甲烷系列的緩沖液。
淀粉酶同工酶(Amy EC 3.2.11)。Amy分為胰型(P型)和唾液型(S型)兩種同工酶。P型主要存在于胰腺，S型來自腮腺、唾液腺、水解食物中的淀粉。當急性胰腺炎時，P型淀粉酶活性增高；肺癌、卵巢癌時，S型Amy增強，可用于上述疾病的診斷和鑒別診斷。本發明的優點是將試劑分裝于安瓿內，便于保存，性能穩定，重復性好，減輕了勞動強度，改變了傳統的人工配制試劑的繁瑣。并由此而引起的操作過程中個體間存在的差異，從而使操作規范化，使酶的檢測及質量控制達到統一的標準，同時使用試劑盒簡化了操作過程，省時、快速、便于推廣。尤其是當做大量樣品檢測時試劑盒更方便適用，為臨床疾病的診斷和鑒別診斷提供依據。
實施例實施例1、做醋纖膜電泳，其包括有(1)、配制的電極液濃度為0.2mol/L的巴比妥緩沖液，pH為8.6；(2)、配制濃度為0.05mol/L二氨基二甲基1.3丙二醇-HCL緩沖液做為泡醋纖膜緩沖液，分裝安瓿A；(3)、配制1N的碘液做為顯色液，分裝安瓿C；(4)、將冰乙酸做為固定液分裝安瓿D；
(5)、將1g淀粉、0.5g瓊脂糖，加入100ml濃度為0.1mol/L磷酸緩沖液，加熱助溶，分裝安瓿B。
應用首先泡膜打開安瓿A加水至20ml，將醋纖膜泡在該液內20分鐘。然后將醋纖膜取出，夾在濾紙中間吸去多余水份，膜條無光澤面朝上。用點樣片醮血清點在距膜一端2cm處。將配制好的電極緩沖液倒入電泳槽內，使槽內電極緩沖液處于同一水平。在電泳槽的陰、陽極槽內分別用合適尺寸的濾紙折疊4層搭在槽的兩側，做為鹽橋。將點樣的膜條點樣面朝下，點樣處朝向陰極端搭在鹽橋上，膜條需與鹽橋貼緊，繃展。接通電源，調節電壓100～260v，10～30分鐘后，關閉電源。然后進行同工酶顯色取一玻璃板，將安瓿B加熱溶解，趁熱均勻倒在玻璃板上，冷卻后即為顯色膠板。將電泳后的醋纖膜點樣面貼在顯色膠板上，注意不要有氣泡，然后放入37℃溫育40分鐘，取出。打開安瓿C，加水至10ml，將膠板放入該液內一分鐘后，取出膠板，即可見同工酶區帶。打開安瓿D加水100ml，在該液中固定5～10分鐘。
結果電泳分離淀粉酶同工酶，由陰極至陽極依次為P1、P2、P3、S1、S2、S3等同工酶，正常人以S1和P2為主帶。胰腺疾患時P型淀粉酶同工酶活性增強，出現P3，是急性胰腺炎的特異帶。肺癌、卵巢癌時，S型淀粉酶增強。實施例2、做醋纖膜電泳，其包括有(1)、配制的電極液陰極槽電極液，濃度為0.03mol/L的巴比妥緩沖液，pH為8.4；陽極槽電極液濃度為0.26mol/LTEB，pH為8.4；(2)、配制濃度為0.1mol/L三羥甲基氨基甲烷緩沖液做為泡醋纖膜緩沖液，分裝安瓿A；(3)、配制0.5N的碘液做為顯色液，分裝安瓿C；(4)、冰乙酸做為固定液分裝安瓿D(5)、將0.6g淀粉，1g瓊脂糖，加入100ml濃度為0.06mol/L順丁烯二酸-NaoH緩沖液，加熱助溶，分裝安瓿B。
其應用方法如實施例1所述，結果也相同。
實施例3、做醋纖膜電泳，其包括有(1)、配制的電極液是濃度為0.06mol/L巴比妥-HCL緩沖液，PH為8.0；(2)、配制濃度為0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷緩沖液做為泡醋纖膜緩沖液，分裝安瓿A；(3)、配制0.5N的碘液做為顯色液，分裝安瓿C；(4)、冰乙酸做為固定液分裝安瓿D；(5)、將0.2g淀粉，0.5g瓊脂糖，加入80ml濃度為0.15mol/L順丁烯二酸-NaoH緩沖液，加熱助溶，分裝安裝瓿B。其應用方法如實施例1所述，結果也相同。
實施例4、做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)、配制的電極液是濃度為0.07mol/L的巴比妥沖液，PH為8.6；(2)、配制1N的碘液做為顯色液，分裝安瓿C；(3)、冰乙酸做為固定液分裝安瓿D；(4)、將1g淀粉、0.8g瓊脂再加入100ml濃度為0.08mol/L二氨基二甲基1.3丙二醇-HCL緩沖液中，加熱溶解，趁熱分裝為安瓿A。
應用將安瓿A隔水加熱溶解，趁熱澆在一玻璃板上，冷卻后在距膜一端約2cm處放0.3×1cm的濾紙。約10分鐘后取下濾紙，在該處加樣8微升，放置5分鐘。然后將凝膠板放在加好電極液的電泳槽架上，兩端用4層紗布搭橋，電壓100v，電泳30分鐘，關閉電源。將膠板取出放在37℃溫箱里溫育40分鐘，打開安瓿C，加水至100ml。將膠板在該液內放置1分鐘后取出即可見同工酶顯色帶。
結果電泳分離淀粉酶同工酶，由陰極至陽極依次為P1、P2、P3、S1、S2、S3等同功酶，正常人以S1和P2為主帶。胰腺疾患時P型淀粉酶同工酶活性增強，出現P3，是急性胰腺炎的特異帶。肺癌、卵巢癌時，S型淀粉酶增強。
實施例5、做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)、配制的電極液是濃度為0.03mol/L的巴比妥-HCL緩沖液，PH為8.6；(2)、配制1N的碘液做為顯色液，分裝安瓿C；(3)、冰乙酸做為固定液分裝安瓿D；(4)、將0.7g淀粉、0.6g瓊脂加入80ml濃度為0.08mol/L順丁烯二酸-NaoH緩沖液中，加熱溶解，趁熱分裝為安瓿A。
應用同實施例4所述，結果也與實施例4相同。
實施例6、做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)、配制的電極液是濃度為0.08mol/L的巴比妥-Hcl沖液，PH為8.6；(2)、配制1N的碘液做為顯色液，分裝安瓿C；(3)、冰乙酸做為固定液分裝安瓿D；(4)、將0.3g淀粉、0.5g瓊脂糖、0.5g聚乙烯吡咯烷酮、2g蔗糖加入90ml濃度為0.08mol/L順丁烯二酸-NaoH緩沖液中，加熱溶解，趁熱分裝為安瓿A。
應用同實施例4所述，結果也與實施例4相同。
權利要求
1.一種淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備，做醋纖膜電泳，其包括有(1)、配制濃度為0.02～0.2mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)、配制濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液；(3)、將碘液做為顯色液；(4)內裝冰乙酸做為固定液，其特征在于如(2)所述泡醋纖膜緩沖液分裝安瓿A；如(3)所述顯色液分裝安瓿C；如(4)所述固定液分裝安瓿D；(5)配制底物顯色板將瓊脂糖或瓊脂和做為底物的淀粉、緩沖液分裝安瓿B，所述緩沖液的濃度為0.05～0.2mol/L，按重量百分比，其中所述淀粉和瓊脂糖或瓊脂分別為9.1％～70.6％，29.4％～91.0％，加入80～120ml緩沖液，加熱溶解，分裝安瓿B。
2.一種淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備，做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有(1)配制濃度為0.02～0.2mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)將碘液做為顯色液；(3)內裝冰乙酸做為固定液，其特征在于如(2)所述的顯色液分裝安瓿C；如(3)所述的固定液分裝安瓿D；(4)將淀粉、瓊脂糖或瓊脂按重量百分比，分別為9.1％～70.6％∶29.4％～91.0％，再加入60～100ml濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜的緩沖液中，加熱溶解，制備為安瓿A。
3.根據權利要求(2)所述的一種淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述安瓿A中還可加入蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮，按重量百分比，蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、瓊脂糖或瓊脂分別為1.3％～31.6％，6.0％～31.2％，41.7％～89.5％，1.2％～18.7％，加入60～100ml濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜的緩沖液中，加熱溶解，趁熱分裝為安瓿A。
4.根據權利要求(1)或(2)所述的一種淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述電極液可以用巴比妥緩沖液，也可以用巴比妥-HCL緩沖液，也可用硼酸-NaoH緩沖液或陰極槽電極液用巴比妥緩沖液，陽極槽電極液用Tris-EDTA-硼酸緩沖液。
5.根據權利要求(1)或(2)所述的一種淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述泡醋纖膜緩沖液可以為二氨基二甲基1.3丙二醇-HCL緩沖液，也可以為三羥甲基氨基甲烷系列的緩沖液。
6.根據權利要求(1)所述的一種淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述安瓿B內的緩沖液為磷酸緩沖液，也可用Tris系列的緩沖液或順丁烯二酸-NaoH緩沖液。
全文摘要
本發明公開了一種淀粉酶同工酶診斷試劑盒的制備,屬于酶學領域。其是將配制試劑分裝于安瓿內,便于保存,性能穩定,重復性好,減輕了勞動強度,改變了傳統的人工配制試劑的繁瑣。并由此而引起的操作過程中個體間存在的差異,從而使操作規范化,使酶的檢測及質量控制達到統一的標準,同時使用試劑盒簡化了操作過程,省時、快速、便于推廣。尤其是當做大量樣品檢測時試劑盒更方便使用,為臨床疾病的診斷和鑒別診斷提供依據。
文檔編號G01N33/531GK1381728SQ01110759
公開日2002年11月27日 申請日期2001年4月20日 優先權日2001年4月20日
發明者舍英, 陳必珍, 閻美容, 侯金鳳 申請人:呼和浩特同日試劑有限公司